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大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒及其應(yīng)用方法與流程

文檔序號:12166588閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,包括第一試劑、第二試劑、第三試劑、第四試劑和第五試劑,

所述第一試劑中的有效成分包括絡(luò)合碘,其有效碘的質(zhì)量濃度為5000mg/L;

所述第二試劑中的有效成分及物質(zhì)的量濃度包括:EDTA,0.5mmol/L;NaCl,137mmol/L;KCl,2.7mmol/L;Na2HPO4·12H2O,10mmol/L;K2HPO4,1.76mmol/L

所述第三試劑中的有效成分包括NaClO,其質(zhì)量百分含量的取值范圍為8%~12%;

所述第四試劑中的有效成分及質(zhì)量濃度包括:膠原酶I,10mg/mL;膠原酶Ⅱ,10mg/mL;膠原酶IV,5mg/L;

所述第五試劑中的有效成分及含量包括:EGF,5μg;Y27632,1.6mg;氫化可的松,250μg;霍亂毒素,4.2μg;PBS溶液:5mL;

所述第一試劑、第二試劑、第三試劑、第四試劑、第五試劑分別單獨封裝,其中,所述第一試劑、第二試劑、第三試劑、第四試劑、第五試劑的體積份數(shù)比為200mL∶200mL∶20mL∶5mL∶5mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,所述第一試劑的保存條件包括常溫、避光;

作為優(yōu)選,所述第二試劑的保存條件包括常溫;

作為優(yōu)選,所述第三試劑的保存條件包括0℃~4℃溫度下保存0.5個月~1.5個月;

作為優(yōu)選,所述第四試劑的保存條件包括0℃~4℃溫度下保存0.5個月~1.5個月;

作為優(yōu)選,所述第五試劑的保存條件包括0℃~4℃溫度下保存0.5個月~1.5個月。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,還包括第一封裝容器、第二封裝容器、第三封裝容器、第四封裝容器、第五封裝容器和卡盤,

所述第一封裝容器用于封裝所述第一試劑,所述第二封裝容器用于封裝所述第二試劑,所述第三封裝容器用于封裝所述第三試劑,所述第四封裝容器用于封裝所述第四試劑,所述第五封裝容器用于封裝所述第五試劑;

所述卡盤包括卡盤本體,所述卡盤本體上至少設(shè)有第一通孔、第二通孔、第三通孔、第四通孔和第五通孔;

所述第一封裝容器能夠穿設(shè)于所述第一通孔中,所述第二封裝容器能夠穿設(shè)于所述第二通孔中,所述第三封裝容器能夠穿設(shè)于所述第三通孔中,所述第四封裝容器能夠穿設(shè)于所述第四通孔中,所述第五封裝容器能夠穿設(shè)于所述第五通孔中。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,

所述第一封裝容器與所述第一通孔間隙配合;和/或,

所述第二封裝容器與所述第二通孔間隙配合;和/或,

所述第三封裝容器與所述第三通孔間隙配合;和/或,

所述第四封裝容器與所述第四通孔間隙配合;和/或,

所述第五封裝容器與所述第五通孔間隙配合。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,所述第一封裝容器和/或第二封裝容器和/或第三封裝容器和/或第四封裝容器和/或第五封裝容器的底面呈圓弧狀過渡。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,還包括包裝盒,所述包裝盒包括盒體,所述盒體的橫截面形狀與所述卡盤的形狀相適配;

作為優(yōu)選,所述包裝盒還包括上蓋,所述上蓋能夠覆蓋住所述盒體;

作為優(yōu)選,所述上蓋與所述盒體為分體式結(jié)構(gòu);

作為優(yōu)選,所述上蓋與所述盒體之間鉸接;

作為優(yōu)選,所述盒體上設(shè)有一卡扣結(jié)構(gòu)的子端,所述上蓋上設(shè)有所述卡扣結(jié)構(gòu)的母端,所述子端與所述母端相適配。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒,其特征在于,所述卡盤的形狀選自矩形或者圓形。

8.權(quán)利要求1~7中任一所述的大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒的應(yīng)用方法,其特征在于,包括以下步驟:

取200mg~500mg大腸癌腫瘤組織,于超凈工作臺中將所述大腸癌腫瘤組織置入第一離心管并混勻,得到第一產(chǎn)物;

向所述第一產(chǎn)物中加入所述第一試劑,所述第一試劑的加入量的取值范圍為10mL~25mL,并混勻,得到第二產(chǎn)物;

于超凈工作臺吸凈所述第一離心管內(nèi)的第一試劑后,將處于所述第一離心管內(nèi)的大腸癌腫瘤組織置入第二離心管,得到第三產(chǎn)物;

向所述第三產(chǎn)物中加入所述第二試劑,所述第二試劑的加入量的取值范圍為10mL~25mL,并混勻,得到第四產(chǎn)物;

于超凈工作臺上配置所述第三試劑的PBS稀釋液,其中,在稀釋時,所述第三試劑與PBS溶液的體積比的取值范圍為1∶(6~12);

于超凈工作臺上取出所述第二離心管中的腫瘤組織置入到第三離心管中,并向所述第三離心管中加入10mL~25mL所述第三試劑的PBS稀釋液,混勻后得到第五產(chǎn)物;

于超凈工作臺上取出所述第三離心管中的大腸癌腫瘤組織置入到第四離心管中,向所述第四離心管中加入10mL~25mL無菌PBS緩沖液,混勻后取出,置入第五離心管,并重復(fù)此步驟,直至使得大腸癌腫瘤組織置入到第N離心管;

于超凈工作臺上吸凈所述第N離心管內(nèi)的PBS緩沖液后,將處于所述第N離心管內(nèi)的大腸癌腫瘤組織置入組織凍存管中,得到第六產(chǎn)物;

應(yīng)用無菌剪刀將所述第六產(chǎn)物剪碎,得到第七產(chǎn)物;

向所述第七產(chǎn)物中加入200μL~500μL所述第四試劑后將其置于37℃孵箱,第一次孵育1h以上,使得所述第七產(chǎn)物消化后,得到第八產(chǎn)物;

向300mL~600mL含有8%~15%(wt)胎牛血清及抗生素的RPMI-1640培養(yǎng)基中加入所述第五試劑并混勻,得到孵育培養(yǎng)基;

于超凈工作臺上將所述第八產(chǎn)物移入培養(yǎng)皿后,向所述培養(yǎng)皿內(nèi)加入所述孵育培養(yǎng)基,并于37℃條件下在孵箱中進行大腸癌原代細胞培養(yǎng)。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒的應(yīng)用方法,其特征在于,所述混勻的方法包括顛倒和/或應(yīng)用搖床。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的大腸癌原代細胞培養(yǎng)試劑盒的應(yīng)用方法,其特征在于,于超凈工作臺上將所述第八產(chǎn)物移入培養(yǎng)皿后,還包括靜置5min~10min的步驟;

作為優(yōu)選,應(yīng)用無菌剪刀將所述第六產(chǎn)物剪碎,得到第七產(chǎn)物過程中,所述第六產(chǎn)物被剪碎的標志是所述第六產(chǎn)物為糊狀,且其中無肉眼可見的團塊。

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