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金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204及其篩選方法和應(yīng)用與流程

文檔序號(hào):12609660閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204,其特征在于:它的序列如下:

AGGGCCGAGCTCACTTGTCTTAGTCCGACATGGTGCCTCC 40

CTGCCCCAGAGCTCCGCCGGCACAATTGTGC 71。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204,其特征在于:在25℃,100mM Na+,1mM Mg2+的條件下,其空間結(jié)構(gòu)如下:

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204,其特征在于:對(duì)所述核酸適配體C204的5’端或3’端進(jìn)行FITC、氨基、生物素、地高辛化學(xué)修飾。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204,其特征在于:對(duì)所述核酸適配體C204做截短或延長或部分堿基替換的結(jié)構(gòu)改造所得到的產(chǎn)物進(jìn)行FITC、氨基、生物素、地高辛化學(xué)修飾。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204的篩選方法,其特征在于:基于核酸適配體的體外SELEX篩選技術(shù),利用羧基磁珠作為固相介質(zhì),以金黃色葡萄球菌腸毒素C2為靶標(biāo),通過金黃色葡萄球菌腸毒素C2磁珠從ssDNA文庫中篩選得到與金黃色葡萄球菌腸毒素C2 特異性結(jié)合的核酸適配體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204的篩選方法,其特征在于:它包括以下步驟:

(1)篩選文庫的準(zhǔn)備:準(zhǔn)備以下序列所示的隨機(jī)ssDNA文庫:

5’-AGGGCCGAGCTCACTTGT-N35-CCGCCGGCACAATTGTGC-3’;

(2)將金黃色葡萄球菌腸毒素C2與羧基磁珠偶聯(lián)制備金黃色葡萄球菌腸毒素C2磁珠;

(3)將ssDNA文庫進(jìn)行熱激活處理;

(4)將經(jīng)步驟(3)后的ssDNA文庫與步驟(2)所得的金黃色葡萄球菌腸毒素C2磁珠進(jìn)行孵育;

(5)磁性分離經(jīng)步驟(4)后的金黃色葡萄球菌腸毒素C2磁珠,洗去金黃色葡萄球菌腸毒素C2磁珠表面未結(jié)合、弱結(jié)合及非特異性結(jié)合的ssDNA;加熱金黃色葡萄球菌腸毒素C2磁珠,收集與金黃色葡萄球菌腸毒素C2磁珠特異性結(jié)合的ssDNA,即ssDNA富集文庫;

(6)PCR擴(kuò)增:將步驟(5)所得的ssDNA富集文庫進(jìn)行PCR擴(kuò)增,其中PCR擴(kuò)增所用的引物為:

引物P1:5’-FAM-AGGGCCGAGCTCACTTGT-3’

引物P2:5’-Biotin-GCACAATTGTGCCGGCGG-3’;

(7)PCR產(chǎn)物的純化:利用小片段純化試劑盒對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化;將純化后的dsDNA與鏈霉親和素磁珠進(jìn)行孵育,結(jié)合dsDNA的鏈霉親和素磁珠經(jīng)洗滌,dsDNA解鏈后,用磁力架分離,收集上清;上清經(jīng)乙醇沉淀后獲得用于下一輪篩選的次級(jí)ssDNA文庫;

(8)循環(huán)篩選:將步驟(7)所得的次級(jí)ssDNA文庫,作為下一輪篩選的次級(jí)文庫,并重復(fù)步驟(3)~(7)的篩選過程。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204的應(yīng)用,其特征在于:在分離、純化金黃色葡萄球菌腸毒素C2中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204的應(yīng)用,其特征在于:在分析檢測金黃色葡萄球菌腸毒素C2中的非疾病診斷和治療方法應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204的應(yīng)用,其特征在于:在金黃色葡萄球菌腸毒素C2為效應(yīng)分子的靶向治療中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的金黃色葡萄球菌腸毒素C2的核酸適配體C204的應(yīng)用,其特征在于:在治療金黃色葡萄球菌感染中以及在治療金黃色葡萄球菌腸毒素C2引起相關(guān)綜合癥中的應(yīng)用。

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