本發(fā)明屬于發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多階段發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法。

背景技術(shù)：

隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展，飲食生活發(fā)生巨大變化，人們攝取了更多的垃圾食品及糖分，運(yùn)動(dòng)量不足，導(dǎo)致脂肪過量堆積和和異常分布引起肥胖。肥胖會引發(fā)血糖、胰島素、血脂等機(jī)體多項(xiàng)參數(shù)水平的紊亂，當(dāng)然近些年來科學(xué)家們越來越關(guān)心肥胖和癌癥之間的關(guān)系。

胰脂肪酶抑制劑利普司他汀由毒三素鏈霉菌代謝產(chǎn)生，它通過選擇性地抑制胃腸道內(nèi)的胰脂肪酶減少30% 的脂肪的分解和吸收，從而達(dá)到減重的目的，是目前唯一通過非中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用治療肥胖癥的藥物，其作用機(jī)制獨(dú)特，安全性高，它的四氫衍生物Orlistat( 奧利司他)已被羅氏公司成功開發(fā)為減肥藥Xenical (賽尼可) ，該藥物是目前市場上唯一的OTC 減肥藥，占據(jù)了減肥藥市場80%的市場份額。作為Oristat 合成的關(guān)鍵中間體，生物合成Lipstatin 的發(fā)酵備受關(guān)注。

利普司他汀主要由鏈霉菌在細(xì)胞膜內(nèi)合成，屬胞內(nèi)產(chǎn)物，僅有部分產(chǎn)物經(jīng)滲透后，分泌于發(fā)酵液中。微生物正常代謝時(shí)，胞內(nèi)過多的產(chǎn)物積累會對其前導(dǎo)關(guān)鍵合成酶活性產(chǎn)生抑制或阻遏，受制于細(xì)胞精密的反饋調(diào)節(jié)作用，微生物自身難以大量合成某種產(chǎn)物。因此，鏈霉菌發(fā)酵過程中，若采用合適的手段，提高細(xì)胞膜的通透性，將合成的利普司他汀及時(shí)排出胞外，釋放到發(fā)酵液中，可有效緩解甚至解除細(xì)胞的反饋調(diào)節(jié)，大大提高利普司他汀產(chǎn)量同時(shí)分離純化難度大大降低。

目前，國內(nèi)對Lipstatin 發(fā)酵的研究多見于對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件的優(yōu)化，仍然存在發(fā)酵周期長，提取分離步驟復(fù)雜收率低等問題。如能建立起一套系統(tǒng)的發(fā)酵法生產(chǎn)利普司他汀的多階段發(fā)酵與分離偶合基礎(chǔ)理論，特別對產(chǎn)物的分離提取及轉(zhuǎn)化進(jìn)行深入研究，為生物法生產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物提供參考。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一種多階段發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，采用多階段溶氧控制、分批補(bǔ)料發(fā)酵，以多階段發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀同時(shí)調(diào)控鏈霉菌菌絲體的通透性，使80%以上產(chǎn)物分泌到菌絲體外，利普司他汀產(chǎn)量高，產(chǎn)物易分離，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種多階段發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀的方法，包括菌種活化、種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)階段，所述發(fā)酵培養(yǎng)階段采用有氧多階段發(fā)酵，發(fā)酵的前10~40 h為菌體生長階段，控制溶氧水平在50-100 %；40h之后是利普司他汀產(chǎn)生階段，當(dāng)濕菌體重達(dá)到10-12 g/L時(shí)，轉(zhuǎn)入微氧發(fā)酵階段，溶解氧水平控制在20-30%。

所述的菌種活化為將砂土管保藏的菌種接種到PDA斜面培養(yǎng)基上，于溫度24-27℃，培養(yǎng)6-7天，得孢子斜面。

所述的種子培養(yǎng)為：將孢子斜面用無菌生理鹽水洗下來，接種到種子培養(yǎng)基中，在溫度24-27℃，pH為6.5-8.5，轉(zhuǎn)速為150-200 rpm的搖床中培養(yǎng)24-48h，得到種子培養(yǎng)液。所述的種子培養(yǎng)基組成為（g/L）：玉米淀粉3.0-5.0，魚蛋白胨3.0-5.0，酵母膏1.0-4.0，NaCl 1.0-3.0，葡萄糖2.0-5.0，壓榨大豆油3.0-5.0，K₂HPO₄1.0-3.0，pH7.0-7.2。

所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組分（g/L）：玉米粉10.0-15.0，魚蛋白胨8.0-12.0，酵母膏10.0-15.0，甘油6.0-10.0，NaCl 3.0-8.0，葡萄糖5.0-10.0，壓榨大豆油5.0-8.0，K₂HPO₄1.0-5.0，MgSO₄·7H₂O 0.1-1.5，CaCO₃ 1.0-3.0，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.005-0.025，ZnSO₄·7H₂O 0.005-0.025，MnCl₂·4H₂O 0.001-0.005，CoCl₂·6H₂O 0.001-0.005。將發(fā)酵培養(yǎng)基溶于60-80℃熱水中，攪拌均勻，倒入發(fā)酵罐中，通入冷卻水，121℃高壓蒸汽滅菌25-35min，滅菌前校正溶解氧DO為0%；

所述的發(fā)酵過程，發(fā)酵培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度24-27℃，控制pH6.5-8.5；調(diào)節(jié)好轉(zhuǎn)速、空氣流量及罐壓以校正溶氧DO 100%；所述的有氧多階段發(fā)酵為：發(fā)酵過程的前10~40 h為菌體生長階段，空氣流量為1.8vvm，攪拌速度為300-350 rpm，溶氧水平DO控制在50-100 %；發(fā)酵過程的40h之后是利普司他汀產(chǎn)生階段，當(dāng)濕菌體重達(dá)到10-12 g/L時(shí)，轉(zhuǎn)入微氧發(fā)酵階段，調(diào)節(jié)空氣流量為0.8-1.0vvm，攪拌速度為200-250 rpm，溶解氧水平控制在20-30%。

上述有氧多階段發(fā)酵過程中，當(dāng)葡萄糖濃度低于1g/L時(shí)，開始流加底物Ⅰ，以發(fā)酵液中葡萄糖的濃度來指導(dǎo)底物Ⅰ流加速度，使發(fā)酵罐內(nèi)葡萄糖濃度控制在1.0-1.5g/L范圍內(nèi)發(fā)酵60-80h。

底物Ⅰ流加10-20h后開始流加底物Ⅱ，控制流加時(shí)間10-15h，至反應(yīng)體系Triton-100濃度0.3-0.5g/L。

底物Ⅰ流加20-30h后開始流加底物Ⅲ，控制流加時(shí)間10-15h，至反應(yīng)體系CaCl₂濃度0.5-0.8 g/L。

其中：底物Ⅰ組成為（g/L）：葡萄糖 250-350，酵母膏80-120，甘油50-75，配置成水溶液，115℃高壓蒸汽滅菌20-30min，冷卻至室溫備用；底物Ⅱ組成為：Triton-100液體，121℃高壓蒸汽滅菌15-20min，冷卻至室溫備用；底物Ⅲ組成為：CaCl₂，配置成濃度40-50 g/L的水溶液，115℃高壓蒸汽滅菌15-20min，冷卻至室溫備用。

所述的菌株為產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)物包含利普司他汀的任意菌株，優(yōu)選為鏈霉菌，本發(fā)明中所采用的是鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443（購自美國農(nóng)業(yè)研究菌種保藏中心），將砂土管保藏的菌種接種到斜面活化培養(yǎng)；利用活化的菌種制備發(fā)酵種子液；將發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行接種前準(zhǔn)備滅菌；然后將發(fā)酵種子液按發(fā)酵培養(yǎng)基體積的2-5%比例接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，通過控制葡萄糖濃度進(jìn)行有氧多階段發(fā)酵，同時(shí)調(diào)控菌絲體的通透性，使產(chǎn)物分泌到發(fā)酵液中。

有益效果：

采用鏈霉菌作為生產(chǎn)用菌種，經(jīng)過發(fā)酵種子液制備、接種前準(zhǔn)備及接種、多階段溶氧控制、分批補(bǔ)料發(fā)酵階段，這是一個(gè)有氧、微氧等多階段集成發(fā)酵，實(shí)現(xiàn)鏈霉菌多階段發(fā)酵生產(chǎn)利普司他汀，同時(shí)在培養(yǎng)中后期調(diào)控菌絲體的通透性，使80%以上產(chǎn)物分泌到菌絲體外。本發(fā)明成本低，操作簡易，產(chǎn)物利普司他汀效價(jià)高，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說明

圖1 實(shí)施例1分批補(bǔ)料發(fā)酵底物流加圖；

圖2實(shí)施例2分批補(bǔ)料發(fā)酵底物流加圖；

圖3實(shí)施例3分批補(bǔ)料發(fā)酵底物流加圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例中的菌種采用鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443（購自美國農(nóng)業(yè)研究菌種保藏中心）。

本發(fā)明提供一種鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443多階段發(fā)酵方法，下面列舉實(shí)施例予以進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1

①種子的培養(yǎng)

所述的斜面活化培養(yǎng)，是將砂土孢子接種到PDA斜面培養(yǎng)基（土豆200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL，自然pH）上，于溫度24℃，培養(yǎng)箱培養(yǎng)7天，得孢子斜面。

將鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443孢子斜面用10 mL無菌生理鹽水洗下來，取2 mL接種到裝種子培養(yǎng)基的500 mL三角瓶中（裝液量75mL），在溫度27℃，pH為8.0，轉(zhuǎn)速為200 rpm的搖床中培養(yǎng)24 h，得到發(fā)酵種子培養(yǎng)液；其中所述的發(fā)酵種子培養(yǎng)基組成為（g/L）：玉米淀粉3.5，魚蛋白胨5.0，酵母膏3.0，NaCl 2.0，葡萄糖5.0，壓榨大豆油3.0，K₂HPO₄ 1.5，pH 7.2。

②接種前準(zhǔn)備

洗凈體積為5L的發(fā)酵罐，空罐121℃高壓蒸汽滅菌20min，冷卻到室溫，組裝好溫度計(jì)，pH計(jì)（已校正）和泡沫傳感器，將發(fā)酵培養(yǎng)基溶于80℃熱水中，攪拌溶解培養(yǎng)基至無沉淀，倒入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來水至培養(yǎng)基體積為3L，通入冷卻水，121℃高壓蒸汽滅菌30 min，滅菌前校正溶解氧DO為0%；其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組分（g/L）：玉米粉10.0，魚蛋白胨12.0，酵母膏12.0，甘油9.0，NaCl 6.0，葡萄糖10.0，壓榨大豆油8.0，K₂HPO₄ 3.0，MgSO₄·7H₂O 1.2，CaCO₃ 3.0，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.02，ZnSO₄·7H₂O 0.025，MnCl₂·4H₂O 0.004，CoCl₂·6H₂O 0.005。

③接種

在火焰圈保護(hù)下，以2%接種量將鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443種子液接種于5L自動(dòng)控制發(fā)酵罐中，裝液量3.0L，空氣流量1.8vvm，攪拌轉(zhuǎn)速為300r/min，培養(yǎng)溫度26℃，校正溶氧100%，自動(dòng)流加氨水控制pH8.0±0.5。

④多階段溶氧控制

鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443發(fā)酵過程分為菌體生長和利普司他汀形成兩個(gè)階段。菌體生長階段為發(fā)酵過程的前38h，這一階段需要大量氧氣，初始空氣流量為1.8vvm，攪拌速度為300rpm，溶氧水平DO控制在50-100%；利普司他汀形成階段位于發(fā)酵過程的38h之后，當(dāng)濕菌體重達(dá)到11 g/L時(shí)，轉(zhuǎn)入微氧發(fā)酵階段。但是由于發(fā)酵液粘度較高，氧的傳遞速率會相對下降，而高強(qiáng)度攪拌增加氧的供給會對菌體造成機(jī)械損傷，將加大空氣流量與增加攪拌強(qiáng)度相結(jié)合有助于解決此問題。此階段調(diào)節(jié)空氣流量為1.0vvm，攪拌速度為200rpm，溶解氧水平控制在25-30%。

⑤分批補(bǔ)料發(fā)酵

發(fā)酵38h葡萄糖濃度低于1g/L，開始流加底物Ⅰ，以發(fā)酵液中葡萄糖的濃度來指導(dǎo)底物Ⅰ流加速度，使發(fā)酵罐內(nèi)葡萄糖濃度控制在1.0-1.2g/L范圍內(nèi)發(fā)酵80h。具體流加方式如下：

底物Ⅰ流加16h后開始流加底物Ⅱ，控制流加時(shí)間15h，至反應(yīng)體系Triton-100濃度0.45 g/L。

底物Ⅰ流加26h后開始流加底物Ⅲ，控制流加時(shí)間15h，至反應(yīng)體系CaCl₂濃度0.5 g/L。

其中所述的底物Ⅰ組成為（g/L）：葡萄糖 290，酵母膏110，甘油75，配置成水溶液，115℃高壓蒸汽滅菌20min，冷卻至室溫備用。

底物Ⅱ組成為：Triton-100液體，121℃高壓蒸汽滅菌15min，冷卻至室溫備用。

底物Ⅲ組成為：CaCl₂配置成50g/L水溶液，115℃高壓蒸汽滅菌15min，冷卻至室溫備用。

發(fā)酵80h，放罐，最終測得利普司他汀效價(jià)為2200mg/L，發(fā)酵液中利普司他汀效價(jià)為1806 mg/L，占總效價(jià)的82.1%。

實(shí)施例2

1、種子的培養(yǎng)

所述的斜面活化培養(yǎng)，是將砂土孢子接種到PDA斜面培養(yǎng)基上，于溫度26℃，培養(yǎng)箱培養(yǎng)7天，得孢子斜面。

將鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443孢子斜面用10 mL無菌生理鹽水洗下來，取2 mL接種到裝種子培養(yǎng)基的500 mL三角瓶中（裝液量50mL），在溫度26℃，pH為8.5，轉(zhuǎn)速為200 rpm的搖床中培養(yǎng)30 h，得到發(fā)酵種子培養(yǎng)液；其中所述的發(fā)酵種子培養(yǎng)基組成為（g/L）：玉米淀粉4.5，魚蛋白胨4.5，酵母膏4.0，NaCl 3.0，葡萄糖4.5，壓榨大豆油5.0，K₂HPO₄ 2.5，pH 7.2。

2、接種前準(zhǔn)備

洗凈體積為5L的發(fā)酵罐，空罐121℃高壓蒸汽滅菌20min，冷卻到室溫，組裝好溫度計(jì)，pH計(jì)（已校正）和泡沫傳感器，將發(fā)酵培養(yǎng)基溶于80℃熱水中，攪拌溶解培養(yǎng)基至無沉淀，倒入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來水至培養(yǎng)基體積為3L，通入冷卻水，121℃高壓蒸汽滅菌30 min，滅菌前校正溶解氧DO為0%；其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組分（g/L）：玉米粉12.0，魚蛋白胨11.0，酵母膏15.0，甘油10.0，NaCl 5.0，葡萄糖10.0，壓榨大豆油8.0，K₂HPO₄ 5.0，MgSO₄·7H₂O 1.5，CaCO₃ 3.0，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.025，ZnSO₄·7H₂O 0.015，MnCl₂·4H₂O 0.005，CoCl₂·6H₂O 0.005。

3、接種

在火焰圈保護(hù)下，以2.5%接種量將鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443種子液接種于5L自動(dòng)控制發(fā)酵罐中，裝液量3.0L，空氣流量1.8vvm，攪拌轉(zhuǎn)速為350r/min，培養(yǎng)溫度25℃，校正溶氧100%，自動(dòng)流加氨水控制pH8.5±0.5。

4、多階段溶氧控制

鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443發(fā)酵過程分為菌體生長和利普司他汀形成兩個(gè)階段。菌體生長階段為發(fā)酵過程的前42h，這一階段需要大量氧氣，初始空氣流量為1.8vvm，攪拌速度為350rpm，溶氧水平DO控制在60-100%；利普司他汀形成階段位于發(fā)酵過程的42h之后，當(dāng)濕菌體重達(dá)到12 g/L時(shí)，轉(zhuǎn)入微氧發(fā)酵階段。但是由于發(fā)酵液粘度較高，氧的傳遞速率會相對下降，而高強(qiáng)度攪拌增加氧的供給會對菌體造成機(jī)械損傷，將加大空氣流量與增加攪拌強(qiáng)度相結(jié)合有助于解決此問題。此階段調(diào)節(jié)空氣流量為1.0vvm，攪拌速度為250rpm，溶解氧水平控制在25-30%。

5、分批補(bǔ)料發(fā)酵

發(fā)酵42h葡萄糖濃度低于1g/L，開始流加底物Ⅰ，以發(fā)酵液中葡萄糖的濃度來指導(dǎo)底物Ⅰ流加速度，使發(fā)酵罐內(nèi)葡萄糖濃度控制在1.2-1.5g/L范圍內(nèi)發(fā)酵78h。具體流加方式如下：

底物Ⅰ流加14h后開始流加底物Ⅱ，控制流加時(shí)間10h，至反應(yīng)體系Triton-100濃度（g/L）0.5。

底物Ⅰ流加24h后開始流加底物Ⅲ，控制流加時(shí)間10h，至反應(yīng)體系CaCl₂濃度（g/L）0.7。

其中所述的底物Ⅰ組成為（g/L）：葡萄糖 350，酵母膏120，甘油75，配置成水溶液，115℃高壓蒸汽滅菌20min，冷卻至室溫備用。

底物Ⅱ組成為：Triton-100液體，121℃高壓蒸汽滅菌15min，冷卻至室溫備用。

底物Ⅲ組成為（g/L）：CaCl₂ 46，配置成水溶液，115℃高壓蒸汽滅菌15min，冷卻至室溫備用。發(fā)酵78h，放罐，最終測得利普司他汀效價(jià)為2420mg/L，發(fā)酵液中利普司他汀效價(jià)為2061 mg/L，占總效價(jià)的85.2%。

實(shí)施例3

1、種子的培養(yǎng)

所述的斜面活化培養(yǎng)，是將砂土孢子接種到PDA斜面培養(yǎng)基上，于溫度27℃，培養(yǎng)箱培養(yǎng)6天，得孢子斜面。

將鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443孢子斜面用10 mL無菌生理鹽水洗下來，取2 mL接種到裝種子培養(yǎng)基的500 mL三角瓶中（裝液量75mL），在溫度24℃，pH為6.5，轉(zhuǎn)速為150 rpm的搖床中培養(yǎng)48 h，得到發(fā)酵種子培養(yǎng)液；其中所述的發(fā)酵種子培養(yǎng)基組成為（g/L）：玉米淀粉5.0，魚蛋白胨3.0，酵母膏1.0，NaCl 1.5，葡萄糖2.0，壓榨大豆油3.5，K₂HPO₄ 3.0，pH 7.0。

2、接種前準(zhǔn)備

洗凈體積為5L的發(fā)酵罐，空罐121℃高壓蒸汽滅菌20min，冷卻到室溫，組裝好溫度計(jì)，pH計(jì)（已校正）和泡沫傳感器，將發(fā)酵培養(yǎng)基溶于60℃熱水中，攪拌溶解培養(yǎng)基至無沉淀，倒入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來水至培養(yǎng)基體積為3L，通入冷卻水，121℃高壓蒸汽滅菌30 min，滅菌前校正溶解氧DO為0%；其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組分（g/L）：玉米粉15.0，魚蛋白胨8.0，酵母膏10.0，甘油6.0，NaCl 3.0，葡萄糖5.0，壓榨大豆油5.0，K₂HPO₄ 1.0，MgSO₄·7H₂O 0.1，CaCO₃ 1.0，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.005，ZnSO₄·7H₂O 0.005，MnCl₂·4H₂O 0.001，CoCl₂·6H₂O 0.001。

3、接種

在火焰圈保護(hù)下，以1.5%接種量將鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443種子液接種于5L自動(dòng)控制發(fā)酵罐中，裝液量3.0L，空氣流量1.8vvm，攪拌轉(zhuǎn)速為350r/min，培養(yǎng)溫度27℃，校正溶氧100%，自動(dòng)流加氨水控制pH6.5±0.5。

4、多階段溶氧控制

鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443發(fā)酵過程分為菌體生長和利普司他汀形成兩個(gè)階段。菌體生長階段為發(fā)酵過程的前38h，這一階段需要大量氧氣，初始空氣流量為1.8vvm，攪拌速度為350rpm，溶氧水平DO控制在50-100%；利普司他汀形成階段位于發(fā)酵過程的38h之后，當(dāng)濕菌體重達(dá)到10 g/L時(shí)，轉(zhuǎn)入微氧發(fā)酵階段。但是由于發(fā)酵液粘度較高，氧的傳遞速率會相對下降，而高強(qiáng)度攪拌增加氧的供給會對菌體造成機(jī)械損傷，將加大空氣流量與增加攪拌強(qiáng)度相結(jié)合有助于解決此問題。此階段調(diào)節(jié)空氣流量為0.8vvm，攪拌速度為200rpm，溶解氧水平控制在20-25%。

5、分批補(bǔ)料發(fā)酵

發(fā)酵38h葡萄糖濃度低于1g/L，開始流加底物Ⅰ，以發(fā)酵液中葡萄糖的濃度來指導(dǎo)底物Ⅰ流加速度，使發(fā)酵罐內(nèi)葡萄糖濃度控制在1.0-1.3g/L范圍內(nèi)發(fā)酵75h。具體流加方式如下：

底物Ⅰ流加10h后開始流加底物Ⅱ，控制流加時(shí)間12h，至反應(yīng)體系Triton-100濃度（g/L）0.3。

底物Ⅰ流加20h后開始流加底物Ⅲ，控制流加時(shí)間15h，至反應(yīng)體系CaCl₂濃度（g/L）0.8。

其中所述的底物Ⅰ組成為（g/L）：葡萄糖 250，酵母膏80，甘油50，配置成水溶液，115℃高壓蒸汽滅菌30min，冷卻至室溫備用。

底物Ⅱ組成為：Triton-100液體，121℃高壓蒸汽滅菌20min，冷卻至室溫備用。

底物Ⅲ組成為（g/L）：CaCl₂ 40，配置成水溶液，115℃高壓蒸汽滅菌20min，冷卻至室溫備用。發(fā)酵75h，放罐，最終測得利普司他汀效價(jià)為1700mg/L，發(fā)酵液中利普司他汀效價(jià)為1328 mg/L，占總效價(jià)的78.1%。

本發(fā)明用于多階段發(fā)酵法生產(chǎn)利普司他汀，具有廣闊的應(yīng)用前景。通過開發(fā)鏈霉菌Stretomyces toxytricini NRRL 15443多階段發(fā)酵生產(chǎn)工藝，降低生產(chǎn)成本、提高了產(chǎn)物利普司他汀的效價(jià)，且產(chǎn)物易分離，有利于工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)。