本發(fā)明屬于功能靶標(biāo)基因的克隆與利用領(lǐng)域，具體公開了稻瘟菌的MoR1基因序列及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

病原真菌可通過多種機制對真菌農(nóng)藥產(chǎn)生抗性，包括1：解毒，真菌體內(nèi)迅速產(chǎn)生抗體，通過與農(nóng)藥結(jié)合使其喪失抗性；2代謝,在農(nóng)藥結(jié)合到其作用靶標(biāo)之前，通過代謝作用迅速將其降解；3：迅速排出，真菌細胞在農(nóng)藥還未達到其作用標(biāo)靶時便迅速排至細胞外；4：降低農(nóng)藥的吸收，通過改變吸收系統(tǒng)相關(guān)基因可以減少農(nóng)藥的吸收量；5：靶標(biāo)位點的突變，通過突變農(nóng)藥作用靶標(biāo)位點，使得藥物徹底喪失功能。目前殺真菌農(nóng)藥主要針對真菌中細胞膜或者細胞內(nèi)亞細胞器中一些非常重要的作用靶標(biāo)來設(shè)計。其中甲氧基丙烯酸酯類(Strobiluin)類廣譜殺真菌藥物是目前應(yīng)用最為廣泛的殺真菌農(nóng)藥，其通過作用于線粒體中的電子傳遞鏈來達到廣譜殺真菌的作用，其代表藥物如：吡唑醚菌酯和嘧菌酯等。但，稻瘟菌群體中已對甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑具有較高抗性的菌株。稻瘟病病是危害水稻最嚴重的病害之一，造成世界范圍內(nèi)水稻平均減產(chǎn)10％-30％(Skamnioti P et al,2009)給糧食安全帶來嚴重威脅。水稻是中國第一大糧食作物，中國稻瘟病年均發(fā)生面積380萬hm2以上，造成產(chǎn)量年損失數(shù)億公斤(楊勤忠等，2009)利用真菌農(nóng)藥控制和預(yù)防稻瘟病是減少損失的有效途徑之一，而耐藥性稻瘟菌菌株的出現(xiàn)為稻瘟病的可持續(xù)控制帶來新的挑戰(zhàn)，本研發(fā)明中找到的耐藥性關(guān)鍵基因MoR1，可為持續(xù)控制稻瘟病提供關(guān)鍵靶標(biāo)基因。

參考文獻

Skamnioti P,Gurr SJ(2009)Against the grain:safeguarding rice from rice blast disease.Trends in biotechnology 27:141-150.

楊勤忠，林菲，馮淑杰，等.水稻稻瘟病抗性基因的分子定位及克隆研究進展。中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009,42(5):1601-1615.

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的包括：

提供一種稻瘟菌耐藥性的基因序列，以及該基因序列編號的蛋白質(zhì)；

提供該基因序列及其編碼蛋白的用途

提供一種抑制稻瘟菌耐藥性的藥物靶點，等

本發(fā)明首次公開了稻瘟菌MoR1基因序列，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；

進一步的，公開了稻瘟菌MoR1基因作為稻瘟菌農(nóng)藥基因靶標(biāo)的用途；尤其作為耐藥性稻瘟菌的農(nóng)藥基因靶標(biāo)的用途；

以及稻瘟菌MoR1基因作為耐藥性稻瘟菌基因靶標(biāo)的用途。

另一方面，本發(fā)明提供了一種稻瘟菌農(nóng)藥基因靶標(biāo)，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；

本發(fā)明還提供了一種稻瘟菌多抗真菌農(nóng)藥基因靶標(biāo)，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；

所述稻瘟菌優(yōu)選為耐藥性稻瘟菌。

此外，本發(fā)明還提供了稻瘟菌MoR1基因編碼的蛋白質(zhì)，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；

進一步的，提供了稻瘟菌MoR1基因編碼的蛋白質(zhì)作為稻瘟菌多抗真菌農(nóng)藥靶點的用途。

本發(fā)明還提供了一種稻瘟菌農(nóng)藥靶點，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；

以及一種稻瘟菌多抗真菌農(nóng)藥靶點，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示。

有益效果

稻瘟菌損失的谷物每年可養(yǎng)活約6千萬人口，而耐藥性稻瘟菌的出現(xiàn)為稻瘟病為目前真菌農(nóng)藥的有效使用帶來嚴重威脅。本發(fā)明中的MoR1基因可作為關(guān)鍵的標(biāo)靶基因，在稻瘟病菌尤其是耐藥性稻瘟病菌的可持續(xù)防控過程中起關(guān)鍵作用，為糧食安全提供保障。

附圖說明

圖1：吡唑醚菌酯對不同稻瘟菌菌株生長的抑制比率

圖2：嘧菌酯對不同稻瘟菌菌株生長的抑制比率

圖3：攜帶不同MoR1等位基因的三個菌株在兩種真菌農(nóng)藥培養(yǎng)條件下的生長情況圖。

其中A，B,C分別為三個不同的菌株027,635和029，A1，B1，C1為在0.01PPM吡唑醚菌酯下培養(yǎng)7天后三個菌株的生長情況，A2，B2，C2為在0.01PPM嘧菌酯下培養(yǎng)7天后三個菌株的生長情況。

圖4以226菌株為背景菌株，敲除MoR1基因獲得的其中兩個獨立的轉(zhuǎn)化子的PCR檢測圖

其中，第1到第4列為利用MoR1基因特異的引物擴增檢測轉(zhuǎn)化子1和轉(zhuǎn)化子2的情況，第5列為菌株226未敲除陽性對照，第7列為陰性對照，最后一列為MoR1基因回補后的檢測結(jié)果。

說明：MoR1只編碼一個蛋白，轉(zhuǎn)化子1和2是敲除試驗中的兩個獨立的敲除突變體，都是針對MoR1基因的，為了實驗嚴謹，需要兩個以上獨立轉(zhuǎn)化子的實驗一致才認為可靠，也即為平行實驗組。

圖5a敲除轉(zhuǎn)化子和對照包含完整的MoR1基因的稻瘟菌菌株在0.01ppm吡唑醚菌酯條件下的菌絲生長圖

圖5b敲除轉(zhuǎn)化子和對照包含完整的MoR1基因的稻瘟菌菌株在0.01ppm吡唑醚菌酯條件下的菌絲生長情況柱狀圖

圖6敲除轉(zhuǎn)化子和對照包含完整的MoR1基因的稻瘟菌菌株在0.01ppm嘧菌酯條件下的菌絲生長圖

圖7 MoR1基因編碼蛋白的3D結(jié)構(gòu)

其中，1為MoR1基因左側(cè)跨膜α-螺旋跨膜結(jié)構(gòu)區(qū)域；

2為MoR1基因右側(cè)跨膜α-螺旋跨膜結(jié)構(gòu)區(qū)域；

3為MoR1基因轉(zhuǎn)運結(jié)合活性功能區(qū)域。

具體實施方式

實施例1不同稻瘟菌菌株對真菌農(nóng)藥吡唑醚菌酯和嘧菌酯的抗性水平實驗

實驗方法和步驟：將兩個敲除轉(zhuǎn)化子的菌株與野生型菌株在燕麥培養(yǎng)基上活化，25℃黑暗條件下培養(yǎng)4-7d后，在菌落邊緣同一圓周上打取菌餅，分別接種于終濃度為0.01ppm吡唑醚菌酯、0.02ppm嘧菌酯及未經(jīng)處理的CM培養(yǎng)基上(配方：1L；酵母提取物6g，酸水解酪蛋白3g，酶水解酪蛋白3g，蔗糖10g，瓊脂15g)，每個處理每個菌株設(shè)3次重復(fù)，25℃黑暗條件下培養(yǎng)7d后，用十字交叉法測量各處理條件下各菌株的菌落生長直徑并拍照記錄。

實驗結(jié)果如圖1、圖2所示。圖1，圖2為不同稻瘟菌菌株對兩種主流真菌農(nóng)藥吡唑醚菌酯和嘧菌酯的抗性水平的表型，表明不同菌株對兩種農(nóng)藥的抗性水平具有顯著的差異。圖3為兩個敲除轉(zhuǎn)化子的菌株與野生型菌株在兩種農(nóng)藥培養(yǎng)條件下的生長情況。

實施例2稻瘟菌MoR1基因的克隆

克隆和測序方法：PCR引物：(F:TTTGGATTTGTGTCTTCTGCC R:TGCATCACTTAATCTTTGCCAC),采用Sanger測序(北京華大基因測序公司)將PCR產(chǎn)物直接測序拼接，MoR1基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。并進一步通過對100株稻瘟菌MoR1基因測序和分析，發(fā)現(xiàn)MoR1基因的突變與兩種主要農(nóng)藥的抗性敏感性顯著相關(guān)。MoR1基因編碼一個ABC類型的轉(zhuǎn)運子(轉(zhuǎn)運蛋白)。

實施例3MoR1基因的多抗農(nóng)藥功能驗證實驗

為進一步驗證MoR1的抗藥性功能，首先選取包含完整的MoR1基因序列、且對兩種農(nóng)藥具備一定抗性的菌株226為受體菌株，敲除了MoR1基因并進行了回補驗證(回補方法：，利用MoR1基因全長引物F:TTTGGATTTGTGTCTTCTGCC R:TGCATCACTTAATCTTTGCCAC，從菌株125中通過PCR克隆出完整的MoR1基因并轉(zhuǎn)入載體pyK11，通過pyK11轉(zhuǎn)化226轉(zhuǎn)化子，最終將MoR1基因回補到敲除突變體中)。

使用MoR1基因檢測引物(引物MoR1-F:AAGTCACTCTTGCTAAAGTC；MoR1-R:CCTTCTGGATGAGATACAGG.)，對226菌株、兩個轉(zhuǎn)化子及回補轉(zhuǎn)化子進行PCR擴增。以226菌株為背景菌株，敲除MoR1基因獲得的其中兩個獨立的轉(zhuǎn)化子的PCR檢測圖及對比圖，如說明書附圖4所示。

敲除轉(zhuǎn)化子和對照包含完整的MoR1基因的稻瘟菌菌株在0.01ppm吡唑醚菌酯條件下的菌絲生長情況圖，培養(yǎng)基為CM完全培養(yǎng)基(配方：1L；酵母提取物6g，酸水解酪蛋白3g，酶水解酪蛋白3g，蔗糖10g，瓊脂15g)。實驗結(jié)果如說明書附圖5a、圖5b、圖6所示；實驗表明已成功獲得MoR1基因敲除的轉(zhuǎn)化子及MoR1基因回補的轉(zhuǎn)化子。

圖5a、圖5b表明，226菌株野生型(MoR1+)與敲除轉(zhuǎn)化子在完全培養(yǎng)基生長條件7天后，菌絲直徑大小無明顯差異；當(dāng)在完全培養(yǎng)基中包含0.01ppm的吡唑醚菌酯條件下，雖然226菌株野生型(MoR1+)生長也得到一定程度的抑制(圖左第一列，圖右第一列)，但在兩個獨立的敲除轉(zhuǎn)化子中(MoR1-)，表現(xiàn)出對0.01ppm的吡唑醚菌酯非常敏感。表明MoR1參與了菌株耐受吡唑醚菌酯的作用。與圖5a、圖5b類似，圖6中，兩個獨立的敲除轉(zhuǎn)化子在0.01ppm嘧菌酯條件下，與對照相比，表現(xiàn)出對農(nóng)藥更為敏感的特征。表明MoR1基因參與了包括吡唑醚菌酯和嘧菌酯在內(nèi)的多真菌農(nóng)藥抗性，可作為真菌農(nóng)藥的新的靶標(biāo)基因。

實施例4MoR1基因編碼蛋白的3D結(jié)構(gòu)解析實驗

通過對MoR1基因蛋白的3D解構(gòu)建模與解析，發(fā)現(xiàn)MoR1基因編碼的蛋白具有典型的ABCC轉(zhuǎn)運子結(jié)構(gòu)(圖7)，包含兩側(cè)對稱的跨膜結(jié)構(gòu)，每個跨膜結(jié)構(gòu)包含6個α-螺旋跨膜域(圖7，跨膜結(jié)構(gòu)區(qū)域1和2)，另外下測包含兩個關(guān)鍵的功能區(qū)域，包括活性的氨基酸以及大量的β-折疊結(jié)構(gòu)區(qū)域。此區(qū)域為關(guān)鍵的藥物或者離子等結(jié)合區(qū)域，通過消耗ATP的方式將物質(zhì)泵出細胞膜外或泵入細胞膜內(nèi)。

序列表

<110> 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所

<120> 稻瘟菌農(nóng)藥靶標(biāo)基因MoR1及其編碼蛋白和應(yīng)用

<130> 2016

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<400> 1

000

<210> 2

<211> 1446

<212> PRT

<213> 稻瘟菌（拉丁名）

<400> 2

Met Glu Cys Pro Ala Asp Ala Asp Arg Val Phe Gly Pro Ala Ile Gln

1 5 10 15

Gly Cys Arg Ser Asp Phe Asp Phe Thr Leu Leu Phe Gln Asp Ser Val

20 25 30

Leu Gly Ile Leu Pro Ser Ser Val Leu Ile Ile Leu Ala Ala Ala Arg

35 40 45

Leu Val Phe Leu Ala Arg Arg His Ala Val Ala Ser Leu Asn Trp Leu

50 55 60

Tyr His Ser Lys Ile Gly Phe Asn Ile Leu Ser Phe Ala Leu Gln Leu

65 70 75 80

Thr Ile Leu Val Gln Arg Cys Arg Ile Gln Asp Leu Glu Thr Ser Ala

85 90 95

Ala Ile Pro Trp Ala Thr Leu Gly Leu Ala Ala Thr Cys Ala Leu Phe

100 105 110

Leu Leu Ser Ala Val Glu His Arg Arg Ser Ala Arg Pro Ser Ser Leu

115 120 125

Ile Val Ala Tyr Leu Phe Ile Phe Val Leu Thr Glu Ala Thr Arg Ala

130 135 140

Arg Thr Tyr Tyr Leu Lys Arg Gln Thr Val Ala Ala Ser Ile Thr Ala

145 150 155 160

Ala Asn Cys Cys Val Lys Phe Val Leu Leu Ile Leu Glu Glu Gln Lys

165 170 175

Lys Thr Leu Arg Ser Gly Ser Asp Gly Ser Arg Lys Lys Ala Ala Ser

180 185 190

Glu Asp Leu Ala Gly Pro Thr Asn Gln Thr Phe Phe Leu Trp Leu Asn

195 200 205

Arg Leu Phe Leu Thr Gly Tyr Arg Arg Ala Phe Thr Thr Thr Asp Leu

210 215 220

Glu Leu Ile Ser Ser Pro Leu Tyr Val Lys Ser Ile Arg Ala Gln Phe

225 230 235 240

His Gly Met Thr Asn Gly Gln Thr Ala Asn Gly His Ser Leu Phe Ser

245 250 255

Ser Ser Thr Asn Thr Phe Ala Leu Gln Ala Phe Thr Ser Leu Gly Ser

260 265 270

Tyr Ala Leu Ala Pro Val Ile Pro Arg Leu Ala Val Thr Gly Phe Thr

275 280 285

Phe Ser Gln Ser Phe Leu Val Thr Ala Leu Leu Asp Tyr Leu Glu Asn

290 295 300

Gly Arg Asp Arg Pro Ala Ser His Gly Tyr Gly Leu Leu Gly Ala Tyr

305 310 315 320

Ala Phe Val Tyr Ile Gly Ile Ala Val Ser Asn Ser Trp Tyr Ser Arg

325 330 335

His Thr Tyr Lys Ser Val Ser Ile Ile Arg Gly Gly Leu Ile Val Ser

340 345 350

Ile Phe Glu Lys Val Leu Arg Leu Gly Glu Asp Ser Ser Ile Glu Ala

355 360 365

Lys Ala Thr Thr Leu Met Ile Ser Asp Val Gln Arg Ile Val Gly Gly

370 375 380

Leu Val Tyr Ile His Glu Val Trp Ala Gly Val Leu Glu Thr Ala Leu

385 390 395 400

Ala Thr Tyr Leu Leu Gln Arg Val Met Gly Val Ser Ser Val Ala Met

405 410 415

Leu Gly Leu Ala Leu Ser Cys Gly Val Gly Ala Tyr Phe Val Ala Gly

420 425 430

Asn Met Ser Leu Gln Gln Gly Lys Trp Leu Lys Ala Met Glu Gln Arg

435 440 445

Ile Asp Ala Thr Lys Arg Leu Cys Asp Ser Leu Lys Ala Val Lys Met

450 455 460

Arg Gly Ala Glu Thr Arg Val Ser Arg Val Val Asn Glu Leu Arg Arg

465 470 475 480

Leu Glu Ile Gln Ala Ala Arg Pro Phe Arg Ala Leu Ile Thr Ala Ser

485 490 495

Val Ile Leu Ser Tyr Ser Thr Met Thr Leu Ser Pro Leu Leu Val Phe

500 505 510

Ala Ala Tyr Ile Gly Val Asn Gly Asn Asp Asp Asn Leu Asp Ser Ala

515 520 525

Thr Met Phe Ser Ser Leu Val Leu Ile Ala Leu Leu Gly Ser Pro Leu

530 535 540

Val His Leu Phe Gln Ala Met Pro Ala Leu Gly Ser Ala His Gly Cys

545 550 555 560

Phe Glu Arg Ile Leu Ala Phe Leu Lys Thr Pro Glu Lys Pro Leu Thr

565 570 575

Ile Lys Asn Glu Pro Glu Thr Met Pro Glu Ser Asn Arg Gly Thr Lys

580 585 590

Asp Ala Ser Ile Gln Arg Ser Glu Ala Asn Glu Thr Ala Leu Ser Ile

595 600 605

Arg His Ala Ser Ile Gly Trp Ser Pro Asp Glu Pro Val Leu Lys Asp

610 615 620

Ile Asn Leu Gln Ile Gln Lys Gly Ser Phe Val Ala Leu Val Gly Lys

625 630 635 640

Thr Gly Ser Gly Lys Ser Leu Leu Leu Lys Ser Ala Ile Gly Glu Gly

645 650 655

Gly His Val Ser Gly Ser Ile Asp Ile Ser Leu Asp Lys Val Ala Tyr

660 665 670

Cys Ser Gln Ser Pro Trp Leu Glu Asn Ile Ser Ala Glu His Thr Trp

675 680 685

Thr Gln Phe Gly Glu Ser Gly Asp Ala Lys Trp Leu Ala Gly Val Ile

690 695 700

Asp Ala Cys Cys Leu Asp Asp Leu Thr Gly Leu Pro Asp Tyr Arg Thr

705 710 715 720

Gly Arg Ile Gly Ser Gly Gly Ala Arg Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln

725 730 735

Arg Leu Ala Leu Ala Arg Ala Ile Ala Thr Arg Lys Asp Ile Val Leu

740 745 750

Leu Asp Asp Val Phe Ser Ala Leu Asp Arg Thr Thr Lys His His Ile

755 760 765

Ala Thr Arg Leu Leu Gly Pro Glu Gly Leu Leu Arg Arg Leu Gly Thr

770 775 780

Thr Val Leu Phe Ala Thr His Asp Ser Ser Ile Ala Asn Leu Ala Asp

785 790 795 800

Gln Val Tyr Glu Ile Thr Val Asp Gly Ile Leu Thr Pro Val Leu Val

805 810 815

Gln Lys Pro Ala Asp Asp Glu Gly Thr Lys His Glu Asp Ser Asp Ala

820 825 830

Lys Tyr Thr Val Thr Asp Ala Ser Asn Asp Glu Lys Thr Ser Thr Ala

835 840 845

Pro Asp His Gly Thr Asn Thr Val Met Thr His Lys Val Glu Asn Gly

850 855 860

Gly Glu Ala Thr Gly Thr Ser Val Ser Asp Lys Lys Val Tyr Leu Arg

865 870 875 880

Tyr Ala Arg Ala Met Gly Phe Lys Asn Ala Ala Thr Phe Leu Phe Leu

885 890 895

Val Met Gly Cys Ala Val Cys Phe Lys Ile Pro Asp Leu Trp Val Gln

900 905 910

Trp Trp Ser Thr Ala Ile Lys Gln Gly Thr Thr Tyr Ser Ser Ser Tyr

915 920 925

Trp Ile Gly Ile Leu Ala Leu Leu Glu Val Leu Pro Leu Leu Met Leu

930 935 940

Trp Leu Ser Leu Phe His Val Leu Phe Phe Ile Val Pro Arg Ser Ala

945 950 955 960

Ser Thr Met His Asp Ser Leu Leu Arg Thr Val Leu Leu Ala Pro Phe

965 970 975

Gly Phe Ile Ser Arg Val Asp Thr Gly Ser Leu Met Asn Arg Phe Asn

980 985 990

Gln Asp Leu Met Phe Val Asp Thr Arg Leu Pro Ile Asp Leu Phe Asn

995 1000 1005

Thr Ser Ile Asp Phe Phe Ile Thr Ile Ile Gln Leu Ile Leu Val

1010 1015 1020

Val Leu Val Ser Lys Glu Ala Leu Ala Ile Leu Pro Val Val Phe

1025 1030 1035

Gly Ala Leu Tyr Leu Ile Gln Lys Val Tyr Leu Arg Ser Ser Lys

1040 1045 1050

Gln Leu Arg Leu Leu Asp Leu Asp Trp Lys Ala Asp Leu His Thr

1055 1060 1065

Ala Phe Gly Glu Thr Thr Ala Gly Leu Ser Val Ile Arg Ala Asn

1070 1075 1080

Gly Trp Leu Asp Pro Met Arg Ala Lys Phe Ala Glu Lys Leu Asp

1085 1090 1095

Arg Ser Gln Glu Pro Phe Tyr Leu Leu Tyr Met Val Gln Arg Trp

1100 1105 1110

Leu Gln Leu Val Leu Asn Leu Val Val Ala Gly Leu Ala Ile Ala

1115 1120 1125

Ile Ala Gly Val Ala Ile Gly Leu Arg Asp Lys Val Ala Ala Gly

1130 1135 1140

Ala Val Gly Val Ala Leu Leu Asn Thr Thr Thr Leu Gly Glu Thr

1145 1150 1155

Leu Thr Asn Phe Ile Met Ser Trp Thr Ser Leu Glu Thr Ser Leu

1160 1165 1170

Gly Ala Ile Ala Arg Val Cys Thr Phe Glu Gln Asp Thr Pro Arg

1175 1180 1185

Glu Arg Glu Glu Pro Ser Thr Thr Asp Leu Pro Asp Asn Arg Pro

1190 1195 1200

Gly Ala Gly Gln Ile Ser Phe Glu Asn Val Trp Ala Thr Tyr Glu

1205 1210 1215

Asp Glu Gly Cys Gly Ser Asn Trp Gly Leu Ser Gly Ile Thr Leu

1220 1225 1230

Ala Val Gln Pro Gly Glu Arg Val Ala Val Cys Gly Arg Thr Gly

1235 1240 1245

Ser Gly Lys Ser Thr Leu Leu Leu Ala Leu Leu Gly Met Leu His

1250 1255 1260

Thr Pro Ala Gly Ser Ile Arg Ile Asp Gly Val Asp Thr Ser Thr

1265 1270 1275

Leu Pro Ile Asp Val Leu Arg Arg Arg Phe Thr Val Val Ser Gln

1280 1285 1290

Asp Ser Phe Phe Glu Pro Thr Ser Thr Phe Arg Gln Glu Leu Asp

1295 1300 1305

Pro Ser Gly Asp Met Ser Asp Gln Ile Ile Glu Glu Val Leu Arg

1310 1315 1320

Glu Cys Arg Ala Trp Glu Ile Val Asp Gly Ser Gly Gly Leu Gly

1325 1330 1335

Gly Lys Arg Ala Asp Ala Asn Leu Ser Ala Gly Glu Val Gln Leu

1340 1345 1350

Leu Ala Ile Ala Arg Leu Val Leu Gln Trp Gln Ser Gln Pro Ala

1355 1360 1365

Gly Ser Gly Gly Ile Ile Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Asn Leu

1370 1375 1380

Asp Arg Gln Thr Glu Val Leu Val Glu Ser Ile Met Ala Ala Arg

1385 1390 1395

Leu Gln His Ala Thr Val Val Ser Val Met His Arg Leu Glu Ala

1400 1405 1410

Val Ala Ala Tyr Asp Lys Val Ala Val Leu Asp Lys Gly Val Leu

1415 1420 1425

Val Asp Phe Gly Pro Val Thr Asp Val Met Ala Arg Cys Glu Leu

1415 1420 1425

Phe Thr Gly

1445