本發(fā)明涉及一種超氧化物歧化酶的制備方法，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種超氧化物歧化酶的層析純化制備方法，屬于超氧化物歧化酶技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
超氧化物歧化酶(SOD)是一種廣泛存在于生物體內(nèi)，能催化超氧負(fù)離子發(fā)生歧化反應(yīng)的金屬酶類(lèi)。根據(jù)其中心離子的不同分為CU／Zn-SOD，Mn-SOD，F(xiàn)e-SOD三種。在體內(nèi)可以清除超氧陰離子自由基，從而起到抗氧化、抗衰老、防輻射等作用。由于該類(lèi)酶能有效清除機(jī)體內(nèi)的超氧自由基，從而有效地預(yù)防活性氧對(duì)生物品的毒害作用，因而具有抗輻射、抗腫瘤及延緩機(jī)體內(nèi)的超氧自由基，從而有效地預(yù)防活性氧對(duì)生物體的毒害作用，因而具有抗輻射、抗腫瘤及延緩機(jī)體衰老等功能，在保健品、醫(yī)藥和化妝品行業(yè)中有重要的應(yīng)用價(jià)值。目前我國(guó)傳統(tǒng)工業(yè)大多從動(dòng)物的血液和內(nèi)臟器官中提取，但這類(lèi)原料來(lái)源有限，成分復(fù)雜，且在儲(chǔ)存、運(yùn)輸?shù)确矫娲嬖谥T多不便，因此容易導(dǎo)致生產(chǎn)工藝復(fù)雜化，使生產(chǎn)成本大幅度上升。所以，尋找廉價(jià)、易得的原料，通過(guò)比較簡(jiǎn)便的方法生產(chǎn)高純度的SOD成了生產(chǎn)企業(yè)和研究人員關(guān)注的熱點(diǎn)。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，大蒜細(xì)胞中含有豐富Zn-SOD、Cu-SOD，其分子量約為32000，與從牛血等動(dòng)物血紅蛋白中所提取的十分接近，而且其它各項(xiàng)性能也來(lái)源豐富、易于處理而使生產(chǎn)成本大大降低，而且生產(chǎn)工藝也能得到很大的簡(jiǎn)化，這對(duì)于擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模，實(shí)現(xiàn)的廣泛應(yīng)用將是十分有益的。
現(xiàn)有制備方法制得的產(chǎn)品生物活性較低，工藝復(fù)雜，不易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中制備方法的問(wèn)題，提供一種超氧化物歧化酶的層析純化制備方法，能夠制得生物活性較高的產(chǎn)品，并實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，其具體的技術(shù)方案如下：
一種超氧化物歧化酶的層析純化制備方法，其特征在于：包括以下工藝步驟：
A、準(zhǔn)確量取BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹(shù)脂，轉(zhuǎn)移至層析柱內(nèi)；用酒精洗至柱內(nèi)流出液于水中不產(chǎn)生白色渾濁；用去離子水洗凈層析柱內(nèi)樹(shù)脂的酒精；
B、用1N HCl對(duì)大孔弱堿離子交換樹(shù)脂進(jìn)行轉(zhuǎn)型處理，再用去離子水洗至中性，備用；
C、準(zhǔn)確稱取SOD提取物粗品，溶解于含有酒精的去離子水中，備用；
D、以50ml/h的流速使配制好的SOD提取物粗品溶液通過(guò)層析柱；用去離子水洗去層析柱內(nèi)殘留的SOD溶液；
E、用酒精、NaCl水溶液洗脫樹(shù)脂吸附的SOD提取物，收集流出液，濃縮即得純化產(chǎn)品。
本發(fā)明在步驟A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹(shù)脂為100ml。
本發(fā)明在步驟C中，所述SOD提取物粗品為20g。
本發(fā)明在步驟C中，所述酒精濃度為20%，去離子水為200ml。
本發(fā)明在步驟E中，所述酒精濃度為40-50%，所述NaCl水溶液的濃度為20%。
本發(fā)明帶來(lái)的有益技術(shù)效果：
1、本發(fā)明采用BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹(shù)脂層析法使SOD粗品提取物得到有效純化，產(chǎn)品生物活性由50-100U/mg提高到了3000U/mg。該工藝簡(jiǎn)單、易于操作、產(chǎn)品純化成本低、易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
2、本發(fā)明根據(jù)SOD的分子量大小及物理化學(xué)性質(zhì)，尤其是SOD的分子極性，采用大孔樹(shù)脂層析技術(shù)對(duì)大蒜SOD提取物粗品進(jìn)一步分離純化，以期獲得含量較高的SOD產(chǎn)品。其生物活性約為3000U/mg左右。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
一種超氧化物歧化酶的層析純化制備方法，包括以下工藝步驟：
A、準(zhǔn)確量取BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹(shù)脂，轉(zhuǎn)移至層析柱內(nèi)；用酒精洗至柱內(nèi)流出液于水中不產(chǎn)生白色渾濁；用去離子水洗凈層析柱內(nèi)樹(shù)脂的酒精；
B、用1N HCl對(duì)大孔弱堿離子交換樹(shù)脂進(jìn)行轉(zhuǎn)型處理，再用去離子水洗至中性，備用；
C、準(zhǔn)確稱取SOD提取物粗品，溶解于含有酒精的去離子水中，備用；
D、以50ml/h的流速使配制好的SOD提取物粗品溶液通過(guò)層析柱；用去離子水洗去層析柱內(nèi)殘留的SOD溶液；
E、用酒精、NaCl水溶液洗脫樹(shù)脂吸附的SOD提取物，收集流出液，濃縮即得純化產(chǎn)品。
實(shí)施例2
在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上，優(yōu)選的：
在步驟A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹(shù)脂為100ml。
在步驟C中，所述SOD提取物粗品為20g。
在步驟C中，所述酒精濃度為20%，去離子水為200ml。
在步驟E中，所述酒精濃度為40%，所述NaCl水溶液的濃度為20%。
實(shí)施例3
在實(shí)施例1-3的基礎(chǔ)上，優(yōu)選的：
在步驟A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹(shù)脂為100ml。
在步驟C中，所述SOD提取物粗品為20g。
在步驟C中，所述酒精濃度為20%，去離子水為200ml。
在步驟E中，所述酒精濃度為50%，所述NaCl水溶液的濃度為20%。
實(shí)施例4
在實(shí)施例1-3的基礎(chǔ)上，優(yōu)選的：
在步驟A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱堿離子交換樹(shù)脂為100ml。
在步驟C中，所述SOD提取物粗品為20g。
在步驟C中，所述酒精濃度為20%，去離子水為200ml。
在步驟E中，所述酒精濃度為45%，所述NaCl水溶液的濃度為20%。