本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)，主要涉及一種利用膜分離-電滲析技術(shù)制備大豆降壓肽的方法。

背景技術(shù)：

為了獲得高純度特殊功能的活性肽，目前最好的方法是采用現(xiàn)代色譜技術(shù)對水解物進行逐步分離，而這種分離方法雖然最終能夠獲得目標(biāo)活性肽，但是所得到的產(chǎn)量往往都是微克級，并且需要花費大量的時間和支付購買色譜柱相關(guān)耗材帶來的經(jīng)濟成本，難以實現(xiàn)對生物活性肽的規(guī)模化分離。另一方面，單獨應(yīng)用壓力驅(qū)動的膜分離技術(shù)雖然可以大規(guī)模分離蛋白質(zhì)水解物，但是由于其較低的選擇性，往往只能分離分子量差異較大的活性肽和氨基酸，對于生物活性好，而分子量比較接近的活性肽的有效富集效果相對較差。而且高通量的膜分離會帶來膜包的嚴(yán)重污染，影響分離效果。

與其他分離技術(shù)相比，膜分離-電滲析技術(shù)可以根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物的等電點和分子量，選擇、設(shè)定合適的外加電場、分離液的pH值和超濾膜，并且本發(fā)明通過設(shè)計不同濃度梯度的KCl分離液對大豆降壓肽進行粗分的同時分離出帶正電荷和帶負(fù)電荷的降壓肽，實現(xiàn)對目標(biāo)產(chǎn)物的選擇性、大規(guī)模分離。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種利用膜分離-電滲析技術(shù)制備大豆降壓肽的方法。

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

一種利用膜分離-電滲析技術(shù)制備大豆降壓肽的方法，該方法包括以下步驟：(1)大豆蛋白水解物的制備：將大豆分離蛋白置于酶反應(yīng)器中，加入適量蒸餾水?dāng)嚢杌靹颍M行預(yù)熱處理，再將溫度調(diào)到55℃，調(diào)節(jié)pH為8.5，加入底物濃度為4％的Alcalase蛋白酶水解4h，反應(yīng)過程中保持體系pH不變，水解結(jié)束后，沸水浴滅酶10min，冷卻到室溫后在3000g的條件下離心15min取上清液，得到大豆蛋白水解物；(2)大豆降壓肽的分離：將蛋白水解物通過中性超濾膜，超濾后得到粗水解物-抑制肽(ACE)；(3)電滲析：將電滲析儀的直流電源發(fā)生器的電壓和電流分別設(shè)置為20V、0.17A，通過陰離子交換膜(AXM)和陽離子交換膜(CXM)同時分離獲得帶正負(fù)電荷的降壓肽。

大豆分離蛋白置于酶反應(yīng)器中的濃度為8％(w/v)，在90℃水浴條件下熱處理10min。

酶解溫度為55℃，酶解pH為8.5，酶解時間4h。

蛋白水解物通過中性超濾膜為1kDa，使相對分子質(zhì)量小于1kDa的多數(shù)降壓肽通過。

膜分離-電滲析的回收池裝有15-20g/L NaCl溶液，起到緩沖離子交換的作用，在電場作用下，通過超濾膜的帶負(fù)電荷和帶正電荷的降壓肽分別在KCl(1)和KCl(2)中收集。

電滲析儀的設(shè)計應(yīng)用中KCl離子濃度為0.5-1.0g/L，在KCl(1)中收集分離得到帶負(fù)電荷的大豆降壓肽,其相對分子質(zhì)量的范圍主要在200-300之間，在KCl(2)中收集分離得到帶正電荷的大豆降壓肽，相對分子質(zhì)量的范圍主要在400-500之間；膜分離-電滲析技術(shù)(EDUF)可用于分離提純大豆蛋白源降血壓肽，具有較好的選擇性和分離效果，且操作方便設(shè)備簡單。

本方法可用于分離提純大豆蛋白源降血壓肽，具有較好的選擇性和分離效果，操作方便設(shè)備簡單的特點。

附圖說明

附圖本發(fā)明膜分離-電滲析裝置原理圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明具體實施例進行詳細(xì)描述。

一種利用膜分離-電滲析技術(shù)制備大豆降壓肽的方法，該方法包括以下步驟：(1)大豆蛋白水解物的制備：將大豆分離蛋白置于酶反應(yīng)器中，加入適量蒸餾水?dāng)嚢杌靹颍?0℃預(yù)熱處理10min，再將溫度降到55℃穩(wěn)定，調(diào)節(jié)pH為8.5，加入底物濃度為4％的Alcalase蛋白酶水解4h，反應(yīng)過程中保持體系pH不變，水解結(jié)束后，沸水浴滅酶10min，冷卻到室溫后在3000g的條件下離心15min取上清液，得到大豆蛋白水解物；(2)大豆降壓肽的分離：將蛋白水解物通過中性超濾膜，超濾后得到粗水解物抑制肽(ACE)；(3)電滲析：電滲析儀的設(shè)計應(yīng)用中KCl離子濃度為0.5-1.0g/L，在KCl(1)中收集分離得到帶負(fù)電荷的大豆降壓肽,其相對分子質(zhì)量的范圍主要在200-300之間，在KCl(2)中收集分離得到帶正電荷的大豆降壓肽，相對分子質(zhì)量的范圍主要在400-500之間，使降壓肽達到分離的目的。

實施例1

將5g大豆分離蛋白置于酶反應(yīng)器中，加入100mL蒸餾水?dāng)嚢杌靹颍?0℃預(yù)熱處理10min，再將溫度降到55℃穩(wěn)定，用0.1M NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為8.5，加入底物濃度為4％的Alcalase蛋白酶水解4h，反應(yīng)過程中保持體系pH不變，水解結(jié)束后，沸水浴滅酶10min，冷卻到室溫后在3000g的條件下離心15min取上清液，得到大豆蛋白水解物通過膜分離-電滲析裝置，電滲析儀的設(shè)計應(yīng)用中KCl離子濃度為1.0g/L，在KCl(1)中收集分離得到帶負(fù)電荷的大豆降壓肽,其相對分子質(zhì)量的范圍主要在200-300之間，在KCl(2)中收集分離得到帶正電荷的大豆降壓肽，相對分子質(zhì)量的范圍主要在400-500之間，使降壓肽達到分離的目的。