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一種利用高產(chǎn)酯土著生香酵母強(qiáng)化大曲提高食醋總酸總酯、還原糖含量的方法與流程

文檔序號(hào):12056167閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種利用高產(chǎn)酯土著生香酵母強(qiáng)化大曲提高食醋總酸總酯、還原糖含量的方法,其特征在于:包括如下步驟:

高產(chǎn)酯土著生香酵母的分離:采集傳統(tǒng)山西老陳醋工藝發(fā)酵第3天和第6天的酒醅,分別利用孟加拉紅選擇培養(yǎng)基通過10倍遞減梯度稀釋法分離酵母菌,取梯度稀釋樣品液各100uL涂布于孟加拉紅選擇培養(yǎng)基的平板上,28℃倒置培養(yǎng)48h,選擇菌落特征明顯的單菌落在孟加拉紅選擇培養(yǎng)基上進(jìn)一步劃線純化培養(yǎng)2~3次,純化后轉(zhuǎn)入YEPD固體斜面,4℃保存,備用;經(jīng)過了兩批次的分離純化實(shí)驗(yàn),獲得酵母菌,所得到的酵母菌通過菌落形態(tài)觀察、鏡檢、理化特征檢測(cè)、rRNA基因D1/D2區(qū)序列檢測(cè)鑒定,以及產(chǎn)酒、產(chǎn)酯性能、環(huán)境耐受性檢測(cè),最終獲得高產(chǎn)酯土著生香酵母:畢赤酵母屬(Pichia manshurica)Y14,乙醇假絲酵母(Candida ethanolica)Y18;

高產(chǎn)酯土著生香酵母單菌株培養(yǎng):Y14、Y18分別以2%的接種量接種在YEPD培養(yǎng)基中30℃培養(yǎng)20h,將菌種用冷卻至室溫的無菌水稀釋至107/ml;

高產(chǎn)酯土著生香酵母菌強(qiáng)化大曲,進(jìn)行醋酸發(fā)酵:采用稀釋至107/ml的高產(chǎn)酯土著生香酵母Y18單一菌株或Y14和Y18的聯(lián)合雙菌株強(qiáng)化大曲,然后進(jìn)行醋酸發(fā)酵,強(qiáng)化時(shí)高產(chǎn)酯土著生香酵母菌菌液的總ml數(shù)等于大曲用量的總g數(shù),聯(lián)合雙菌株強(qiáng)化時(shí)其中Y14和Y18的用量各占高產(chǎn)酯土著生香酵母菌菌液總ml數(shù)的50%。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用高產(chǎn)酯土著生香酵母強(qiáng)化大曲提高食醋總酸總酯、還原糖含量的方法,其特征在于:所述畢赤酵母屬(Pichia manshurica)Y14在麥芽汁液體培養(yǎng)基中25℃培養(yǎng)三天,細(xì)胞球形、卵形,大小為4.6-6.5×3.8-6.5mm.麥芽汁瓊脂斜面25℃培養(yǎng)1個(gè)月,菌落奶酪狀,淺白灰色,表面平滑,不反光,邊緣整齊;玉米粉瓊脂Dalmau平板培養(yǎng),不產(chǎn)生假菌絲;rRNA基因D1/D2區(qū)序列檢測(cè)鑒定,測(cè)序引物為:NL1: GCA TAT CAA TAA GCG GAG GAA AAG;NL4:GGT CCG TGT TTC AAG ACG G;檢測(cè)結(jié)果為:Genbank序列登錄號(hào)為KP027538,其堿基序列如SEQ ID NO:1所示;將Y14菌株活化,接種于醋酸鈉產(chǎn)孢培養(yǎng)基平板上,25℃培養(yǎng)4~5d,利用芽孢染色法染色,高倍鏡觀察子囊孢子的形狀及孢子數(shù)目,Y14可形成子囊孢子,用孔雀綠染色,子囊孢子呈現(xiàn)藍(lán)色、綠色或無色;所述畢赤酵母屬(Pichia manshurica)Y14保藏編號(hào)為:CGMCC NO.12407,保藏單位為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào),保藏日期是2016年4月28日。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用高產(chǎn)酯土著生香酵母強(qiáng)化大曲提高食醋總酸總酯、還原糖含量的方法,其特征在于:所述乙醇假絲酵母(Candida ethanolica)Y18在麥芽汁液體培養(yǎng)基中25℃培養(yǎng)三天,細(xì)胞卵形、臘腸形,大小為4.0-7.2×3.0-5.2mm.麥芽汁瓊脂斜面25℃培養(yǎng)1個(gè)月,菌落奶酪狀,淺灰色,表面平滑,不反光,邊緣整齊;在玉米粉瓊脂Dalmau平板培養(yǎng),不產(chǎn)生假菌絲;rRNA基因D1/D2區(qū)序列檢測(cè)鑒定,測(cè)序引物為:NL1: GCA TAT CAA TAA GCG GAG GAA AAG;NL4:GGT CCG TGT TTC AAG ACG G;檢測(cè)結(jié)果為:Genbank序列登錄號(hào)為KP339953,其堿基序列如SEQ ID NO:2所示;將Y18菌株活化,接種于醋酸鈉產(chǎn)孢培養(yǎng)基平板上,25℃培養(yǎng)4~5d,利用芽孢染色法染色,高倍鏡觀察子囊孢子的形狀及孢子數(shù)目,Y18不形成子囊和子囊孢子;所述乙醇假絲酵母(Candida ethanolica)Y18保藏編號(hào)為:CGMCC NO. 12409,保藏單位為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào),保藏日期是2016年4月28日。

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