1.一種判斷MircroRNA基因敲除動物作為實驗動物模型的可靠性的方法，其特征在于，包括以下步驟:
1）準備好相關(guān)實驗試劑；
2）野生型小鼠和miR-144/451基因敲除的雄性小鼠各兩只，通過繁殖得到大量的野生型小鼠和miR-144/451基因敲除鼠；
3）按照SPF級飼養(yǎng)標準飼養(yǎng)小鼠，濕度控制在40%-70%，溫度控制在20-25℃，用已滅菌處理的飼料、墊料和飲水一周更換二到三次；
4）合籠方式為1只miR-144/451基因敲除的雄鼠和1-5只miR-144/451基因敲除的雌鼠交配進行繁殖，發(fā)現(xiàn)雌鼠有懷孕表現(xiàn)立即分籠生育，并及時記錄生育出的小鼠父母系來源；
5）步驟4）中的小鼠DNA提取:取3周齡的小鼠尾部末端組織，長度為0.5cm，放入1.5ml EP管中，每管加l00μl裂解液，95℃，靜置20分鐘，冷卻后加入l00μl中和液混勻，取以上的含鼠DNA的上清液用于PCR進行小鼠基因型鑒定；
6）小鼠DNA的PCR：下列反應(yīng)物構(gòu)成20μl的PCR反應(yīng)體系：含鼠DNA的上清液2μl、引物1μl、DNA聚合酶混合物10μl、雙蒸水7μl；上述材料混勻離心后置于PCR儀設(shè)定條件循環(huán)擴增：預變性，95℃，5分鐘；變性，95℃，40秒；退火，60.5℃，40秒；延伸，72℃，1min；循環(huán)，72℃，5分鐘；
7）進行瓊脂糖凝膠電泳：取瓊脂糖粉末0.75g加入50ml的TAE電泳緩沖液中，微波爐中加熱至沸騰，將溶解澄清的瓊脂物室溫冷卻至60℃加入Goldview 5μl或EB 3μl混勻，緩緩倒入已置好梳子的膠板中，室溫放置30min，待凝膠完全凝固后輕輕拔出梳子；將制備好的1.5%瓊脂糖凝膠放入電泳槽，加入1×TAE溶液至高出凝膠表面；取PCR反應(yīng)終產(chǎn)物10μl加樣到膠孔中，電壓100V電泳，時間為30min；
8）凝膠成像：電泳結(jié)束后，取出凝膠置于凝膠成像分析儀下拍照，小鼠電泳基因型片段為：miR-144/451野生型小鼠為290bp、純合子190bpheterozygous (-/+)250bp和190bp；
9）喂食：使用帶有抗凝劑的玻璃毛細管從miR-144/451野生型小鼠小內(nèi)眥靜脈取血200微升，使用12#灌胃器將野生型小鼠的血液喂食給miR-144/451基因敲除型小鼠；
10）提取樣本：在喂食3小時、6小時、12小時、24小時后，分別使用帶有抗凝劑的玻璃毛細管從miR-144/451基因敲除型小鼠小內(nèi)眥靜脈取血200微升；
11）提取樣本中的RNA：每0.1mL步驟10）得到的全血加入裂解液Trizolreagent 1 ml，大力混勻，靜置5到10分鐘；加入200μl氯仿，劇烈搖晃15s，靜置5分鐘；4℃，12000g離心15min；將上清轉(zhuǎn)入新的EP管，加入500μl異丙醇，顛倒混勻后室溫沉淀10min； 4℃，12000g離心20min；棄上清，加入1ml75%乙醇；4℃，12000g離心5min；棄上清，室溫靜置至干燥加入20μlDEPC水溶解；55℃水浴5min；
12）反轉(zhuǎn)錄RNA:配置反應(yīng)液體系：步驟11）中得到的總RNA 1 ng、RTase Mix 1μl、5xReaction Buffer 5μl，使用ddH2O將反應(yīng)體系補足至25μl；混勻后加溫至37℃，而后保溫60分鐘，再加溫至85℃，保溫10分鐘；
13）全血DNA的PCR：下列反應(yīng)物構(gòu)成20μl的PCR反應(yīng)體系：步驟12）得到的全血DNA 2μl、上游引物2μl、下游引物2μl 、DNA聚合酶混合物10μl、雙蒸水7μl；混勻離心后置于PCR儀設(shè)定條件循環(huán)擴增：預變性，95℃，5分鐘；變性，95℃，40秒；退火，60.5℃，40秒；延伸，72℃，1min；循環(huán)，72℃，5分鐘；
14）使用U6作為內(nèi)參，判斷miR-451的表達水平。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的判斷MircroRNA基因敲除動物作為實驗動物模型的可靠性的方法，其特征是，步驟7）中，50ml的TAE電泳緩沖液由57.1ml的冰乙酸、242g的Tris-base、100ml濃度為0.5mol/L 的EDTA配制而成，并由雙蒸水定容至1L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的判斷MircroRNA基因敲除動物作為實驗動物模型的可靠性的方法，其特征是，步驟7）中，1×TAE電泳緩沖液由10ml的50xTAE電泳緩沖液加雙蒸水定容至500ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的判斷MircroRNA基因敲除動物作為實驗動物模型的可靠性的方法，其特征是，步驟7）中，所述EB濃度為10mg/ml，由1g的EB、100ml的去離子水混勻溶解后避光保存，室溫放置而制成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的判斷MircroRNA基因敲除動物作為實驗動物模型的可靠性的方法，其特征是，步驟5）中，所述裂解液由40μl的0.5M EDTA、25μl的10N NaOH、100ml的蒸餾水制成，并調(diào)節(jié) PH 至 8.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的判斷MircroRNA基因敲除動物作為實驗動物模型的可靠性的方法，其特征是，步驟5）中，所述中和液由4ml的1M Tris-HCl加蒸餾水定容至100ml。