本發(fā)明涉及氮芥類抗腫瘤藥物的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺及其制備方法。

背景技術(shù)：

氮芥類藥物是常用的一種抗腫瘤藥物，具有特別好的抗腫瘤活性，但是作為傳統(tǒng)的細(xì)胞毒類藥物，其仍具有生物烷化劑所特有的缺點，在抑制和毒害增生活躍的腫瘤細(xì)胞的同時，對其它增生較快的正常細(xì)胞也產(chǎn)生抑制作用，例如對一些骨髓細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞、還有一些毛發(fā)細(xì)胞也具有阻擾滅殺的效果，這就會引起例如惡心、嘔吐、脫發(fā)等嚴(yán)重的不良反應(yīng)；另外，氮芥類藥物還具有免疫抑制作用，會降低機體的防御功能，使細(xì)菌病毒等趁虛而入，引起各種感染。

氮芥類抗腫瘤藥物從構(gòu)造上看由兩部分組成：烷基化部分和載體部分，烷基化部分是主體部分，也是抗腫瘤活性的功能基團，載體部分可看成結(jié)構(gòu)修飾的部分，對其進行結(jié)構(gòu)修飾可以不斷提高藥物在人體內(nèi)的吸收、分布，進而有助于提高對腫瘤細(xì)胞的選擇性，同時也能有效的抑制副作用的產(chǎn)生。

因此，如何對氮芥衍生物進行修飾，合成出具有較低的毒副作用的氮芥，已成為目前研究的熱點。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于欲提供一種具有較低毒副作用的且能增強腫瘤治療效果，同時兼具殺菌消炎療效的氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六酰基-1,4-苯二胺，其可達到降低病人化療后因免疫能力下降而引起并發(fā)癥的風(fēng)險。

本發(fā)明的另一目的為提供上述氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺的制備方法。

為了達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)。

一種氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺，其特征在于，結(jié)構(gòu)如式Ⅰ：

上述氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，制備N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺；

步驟2，將反應(yīng)原料N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺、二氯甲烷和三乙胺裝入反應(yīng)器中，冰水浴冷卻，攪拌，并向反應(yīng)器中滴加十六酰氯和二氯甲烷的混合溶液，滴加完成后，撤掉冰水浴，在室溫下反應(yīng)至少12-14小時，待反應(yīng)完全后，使用蒸餾水洗滌反應(yīng)液，且用無水硫酸銅干燥，常壓蒸餾，對蒸餾后的濾餅進行純化，即得。

步驟1包含以下子步驟：

子步驟1a，首先按照以下步驟制備N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺：將4-氯硝基苯、二乙醇胺、碳酸鉀和質(zhì)量百分比為1％的CuSO₄溶液依次加入反應(yīng)器中，攪拌均勻，升溫至82℃時，向反應(yīng)器中加入甲苯，繼續(xù)升溫至115-120℃，恒溫攪拌反應(yīng)6-9小時，待反應(yīng)完全后，蒸餾去除甲苯，將蒸餾后的母液倒入50-70℃的熱水中，攪拌，靜置過夜后抽濾水層得粗品，使用無水乙醇對所述粗品重結(jié)晶，得黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺。

優(yōu)選地，步驟1a中，所述4-氯硝基苯、二乙醇胺、碳酸鉀的摩爾比為(1.00∶1.20∶0.60)-(1.00∶1.40∶0.7)。

優(yōu)選地，步驟1a中，所述質(zhì)量百分比為1％的CuSO₄溶液與所述4-氯硝基苯的用量的比例為(0.2-0.5)mL:(2-3)g。

優(yōu)選地，步驟1a中，所述甲苯與所述4-氯硝基苯的用量的比例為1mL:(2-3)g。

子步驟1b，然后按照以下步驟制備N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺：取所述黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺溶于裝有干燥的二氯甲烷的反應(yīng)器中，并向所述反應(yīng)器中加入三乙胺；再在室溫下攪拌滴加二氯亞砜和二氯甲烷的混合溶液，所述滴加時間為1-1.5小時，升高溫度至40-45℃，回流，同時攪拌反應(yīng)2小時，反應(yīng)完全后靜置冷卻，并用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，合并有機層并用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾去除溶劑，得N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺的粗品，使用無水乙醇對所述粗品重結(jié)晶，得黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺。

優(yōu)選地，步驟1b中，所述黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺與所述二氯亞砜的摩爾比為1:1-1:2。

優(yōu)選地，步驟1b中，所述黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺與所述二氯甲烷、所述三乙胺的用量比例為2.7g：60mL：1.1mL。

優(yōu)選地，步驟1b中，所述二氯亞砜與所述二氯甲烷的體積比為1:(13-15)。

子步驟1c，最后按照以下步驟制備N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺：取所述黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺溶于裝有濃鹽酸的反應(yīng)器中，并向所述反應(yīng)器中加入氯化亞錫，在氮氣氛圍下回流攪拌反應(yīng)，待顏色變?yōu)闊o色透明時停止反應(yīng)；使用0℃的冰水浴冷卻，并用濃氨水調(diào)pH至7.5～8.0，用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾溶劑，即得。

優(yōu)選地，步驟1c中，所述黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺與所述氯化亞錫、所述濃鹽酸的用量比為1mmol:(1-6)mol:(10-50)mL。

優(yōu)選地，步驟2中，所述反應(yīng)原料中，所述N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺與所述二氯甲烷a的用量比為1.00g:20.0mL；所述N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺與所述三乙胺的摩爾比為1:3-1:5。

優(yōu)選地，步驟2中，所述N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺與所述十六酰氯的摩爾比為1:1.5-1:2.5；所述十六酰氯與所述二氯甲烷的混合溶液中，所述十六酰氯與所述二氯甲烷的摩爾比為1:4-1:6。

優(yōu)選地，步驟2中，所述滴加的時間為1-2小時。

優(yōu)選地，步驟2中，所述純化采用柱層析技術(shù)，所述柱層析技術(shù)中的流動相為石油醚與乙酸乙酯的混合物，且所述石油醚與所述乙酸乙酯的體積比為1:1-1:3。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明以N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺為藥效基團，以十六酰氯對N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺進行結(jié)構(gòu)修飾，使得本發(fā)明的氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺在具有增強氮芥治療指數(shù)的前提下，又可以有效降低氮芥的毒副作用，同時兼具殺菌、消炎的療效，以達到降低病人化療后因免疫力下降而引起的并發(fā)癥的風(fēng)險。

附圖說明

下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細(xì)說明。

圖1為N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺的紅外光譜圖；圖中，橫坐標(biāo)為波數(shù)，單位為cm^-1，縱坐標(biāo)為透光率，單位為％；

圖2為N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺的紅外光譜圖；圖中，橫坐標(biāo)為波數(shù)，單位為cm^-1，縱坐標(biāo)為透光率，單位為％；

圖3為N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺的紅外光譜圖；圖中，橫坐標(biāo)為波數(shù)，單位為cm^-1，縱坐標(biāo)為透光率，單位為％；

圖4為式Ⅰ的氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺的紅外光譜圖。圖中，橫坐標(biāo)為波數(shù)，單位為cm^-1，縱坐標(biāo)為透光率，單位為％；

具體實施方式

下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。

本發(fā)明提供一種具有較低毒副作用的且能增強腫瘤治療效果，同時兼具殺菌消炎療效的氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺，其結(jié)構(gòu)如式Ⅰ：

上述氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺的制備方法，包括以下步驟：

步驟1，制備N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺；

子步驟1a，首先按照以下步驟制備N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺：將4-氯硝基苯、二乙醇胺、碳酸鉀和質(zhì)量濃度為1％的CuSO₄溶液依次加入反應(yīng)器中，攪拌均勻，所述CuSO₄溶液的，升溫至82℃時，向反應(yīng)器中加入甲苯，繼續(xù)升溫至115-120℃，恒溫攪拌反應(yīng)6-9小時，使用薄層色譜法跟蹤反應(yīng)進程，待反應(yīng)完全后，蒸餾去除甲苯，將蒸餾后的余液倒入50℃-70℃的熱水中，攪拌，靜置過夜后抽濾水層得粗品，使用無水乙醇對所述粗品重結(jié)晶，得黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺。

子步驟1b，然后按照以下步驟制備N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺：取所述黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺溶于裝有干燥的二氯甲烷的反應(yīng)器中，并向所述反應(yīng)器中加入三乙胺；再在室溫下攪拌滴加二氯亞砜和二氯甲烷的混合溶液，所述滴加時間為1-1.5小時，升高溫度至40-45℃，回流，同時攪拌反應(yīng)2小時，反應(yīng)完全后靜置冷卻，并用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，合并有機層并用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾去除溶劑，得N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺的粗品，使用無水乙醇對所述粗品重結(jié)晶，得黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺。

子步驟1c，最后按照以下步驟制備N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺：取所述黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺溶于裝有濃鹽酸的反應(yīng)器中，并向所述反應(yīng)器中加入氯化亞錫，在氮氣氛圍下回流攪拌反應(yīng)，待顏色變?yōu)闊o色透明時停止反應(yīng)；使用0℃的冰水浴冷卻，并用濃氨水調(diào)pH至7.5～8.0，用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾溶劑，即得。

步驟2，將反應(yīng)原料N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺、二氯甲烷和三乙胺裝入反應(yīng)器中，冰水浴冷卻，攪拌，并向反應(yīng)器中滴加摩爾比為1:4-1:6的十六酰氯和二氯甲烷的混合溶液，滴加完成后，撤掉冰水浴，在室溫下反應(yīng)12-14小時，待反應(yīng)完全后，使用蒸餾水洗滌反應(yīng)液，且用無水硫酸鈉干燥，常壓蒸餾，對蒸餾后的濾餅進行純化，即得。

實施例1

1.1 N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺的合成

向250mL三口燒瓶內(nèi)分別加入4-氯硝基苯12.64g(0.080mol)、二乙醇胺10.99g(0.104mol)和7.18g(0.052mol)碳酸鉀，最后加入1.2mL質(zhì)量濃度為1％的CuSO₄溶液，混合均勻。加熱升高溫度，當(dāng)溫度達到82℃時，向反應(yīng)液中加入5.0mL的甲苯，繼續(xù)升高溫度控制反應(yīng)溫度為117℃，使用薄層色譜法跟蹤反應(yīng)進程，恒溫攪拌反應(yīng)6h。待反應(yīng)完全后，蒸餾去除甲苯，將蒸餾后的余液倒入50℃的熱水中，劇烈攪拌，靜置過夜后抽濾除去水層得粗品，粗品用無水乙醇重結(jié)晶，得黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺 11.39g，收率63.0％。

1.2 N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺的合成

稱取2.70g(0.012mol)黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺即化合物N,N-二(2-羥基乙基)-4-硝基苯胺，溶于60.0mL干燥的二氯甲烷中，然后向反應(yīng)瓶中加入1.1mL的三乙胺，取1.3mL(0.018mol)氯化亞砜溶于20.0mL二氯甲烷，室溫攪拌下將該溶液滴加到反應(yīng)瓶，滴加的時間為lh，滴加完成后，升高溫度至40℃，在回流的狀態(tài)下攪拌反應(yīng)2h。反應(yīng)完全后靜置冷卻，用30.0mL干燥的二氯甲烷稀釋，分別用20.0mL的飽和碳酸氫鈉溶液洗滌三次，合并有機層用無水硫酸鈉干燥，0.01MPa下減壓蒸餾除去溶劑二氯甲烷，得N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺的粗品。粗品用無水乙醇重結(jié)晶得黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺 2.99g，收率95.0％。

1.3 N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺的合成

稱取1.04g(4mmol)黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺溶于40.0mL濃鹽酸中，然后加入8.30g(20mmol)氯化亞錫，氮氣保護下回流待溶液顏色變?yōu)闊o色透明時停止反應(yīng)。用0℃的冰水浴冷卻，加入20.0mL的水稀釋，用濃氨水調(diào)pH至7.5～8.0，用苯甲酸乙酯萃取三次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，即得。由于新生成的化合物具有化學(xué)活性比較高的基團氨基，其化學(xué)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定易被氧化，因此在用苯甲酸乙酯萃取后，向其溶液中加入過量的濃鹽酸，制備其鹽酸鹽低溫避光備用，待應(yīng)用時加堿萃取即可使用，收率93.0％。

1.4式Ⅰ的氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺的合成

首先合成十六酰氯：在裝有回流冷凝管的250mL的三口燒瓶中加入十六酸，再加入十六酸質(zhì)量的1.5％的二甲基甲酰胺，插入冷凝管，在冷凝管的一端緩慢滴加氯化亞砜，十六酸與氯化亞砜的摩爾比為1:1.5。待滴加完畢后傾斜反應(yīng)裝置，在回流冷凝管的一端插入尾氣吸收裝置，室溫下靜止反應(yīng)24小時，反應(yīng)物由固體全部變?yōu)橐后w時反應(yīng)完畢，解壓蒸出過量的氯化亞砜及副產(chǎn)物HCl、SO₂，即得十六酰氯，對所制備的十六酰氯進行檢測，得無色的十六酰氯的純度大于98％，收率為95.0％，沸點為199℃，密度為0.91g/mL。

在裝有回流冷凝管的250mL的三口燒瓶中加入1.00g N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺、20.0mL干燥的二氯甲烷和1.2mL的三乙胺，冰水浴冷卻，攪拌下滴加摩爾比為1:5的十六酰氯和二氯甲烷的混合溶液15.0mL，滴加時間約為1.5小時，其中，N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺與十六酰氯的物料配比為1:2，滴加結(jié)束后撤掉冰水浴，常溫反應(yīng)12小時，反應(yīng)結(jié)束后使用30mL的水洗滌反應(yīng)液，無水硫酸鈉干燥，常壓蒸餾，濾餅用柱層析(V(石油醚：乙酸乙酯)1∶1)純化得暗紅色晶體，即為最終產(chǎn)物，產(chǎn)物收率為85.0％。

實施例2

1.1 N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺的合成

向250mL三口燒瓶內(nèi)分別加入摩爾比為1:1.2:0.6的4-氯硝基苯、二乙醇胺和碳酸鉀，最后加入質(zhì)量濃度為1％的CuSO₄溶液，且質(zhì)量濃度為1％的CuSO₄溶液與4-氯硝基苯的用量比為0.5mL:3g，混合均勻；加熱升高溫度，當(dāng)溫度達到82℃時，向反應(yīng)液中加入甲苯，且甲苯與4-氯硝基苯的用量比為1mL:2g；繼續(xù)升高溫度控制反應(yīng)溫度為120℃，使用薄層色譜法跟蹤反應(yīng)進程，恒溫攪拌反應(yīng)9h。待反應(yīng)完全后，蒸餾去除甲苯，將蒸餾后的母液倒入60℃的熱水中，劇烈攪拌，靜置過夜后抽濾除去水層得粗品，粗品用無水乙醇重結(jié)晶，得黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺。

1.2 N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺的合成

稱取2.70g(0.012mol)黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺即化合物N,N-二(2-羥基乙基)-4-硝基苯胺，溶于60.0mL干燥的二氯甲烷中，然后向反應(yīng)瓶中加入1.1mL的三乙胺；取1.3mL(0.018mol)二氯亞砜溶于20.0mL二氯甲烷溶液，室溫攪拌下將該溶液滴加到反應(yīng)瓶，滴加的時間為l.5h，滴加完成后，加熱至45℃，回流，并在回流的狀態(tài)下攪拌反應(yīng)2h。反應(yīng)完全后靜置冷卻，用30.0mL干燥的二氯甲烷稀釋，并分別用20.0mL的飽和碳酸氫鈉溶液洗滌三次，合并有機層用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾除去溶劑，得N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺的粗品。粗品用無水乙醇重結(jié)晶得黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺 2.99g，收率95.0％。

1.3 N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺的合成

稱取4mmol黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺溶于120.0mL濃鹽酸中，然后加入24mmol氯化亞錫，氮氣保護下回流待溶液顏色變?yōu)闊o色透明時停止反應(yīng)。用0℃的冰水浴冷卻，加入20.0mL的水稀釋，用濃氨水調(diào)pH至7.5～8.0，用乙酸乙酯萃取3次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，即得。由于新生成的化合物具有化學(xué)活性比較高的基團氨基，其化學(xué)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定易被氧化，因此在用乙酸乙酯萃取后，向其溶液中加入過量的濃鹽酸，制備其鹽酸鹽低溫避光備用，待應(yīng)用時加堿萃取即可使用。

1.4式Ⅰ的氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺的合成

首先合成十六酰氯：在裝有回流冷凝管的250mL的三口燒瓶中加入十六酸，再加入十六酸質(zhì)量的1.5％的二甲基甲酰胺，插入冷凝管，在冷凝管的一端緩慢滴加氯化亞砜，十六酸與氯化亞砜的摩爾比為1:1.5。待滴加完畢后傾斜反應(yīng)裝置，在回流冷凝管的一端插入尾氣吸收裝置，室溫下靜止反應(yīng)24小時，反應(yīng)物由固體全部變?yōu)橐后w時反應(yīng)完畢，解壓蒸出過量的氯化亞砜及副產(chǎn)物HCl、SO₂，即得十六酰氯，對所制備的十六酰氯進行檢測，得無色的十六酰氯的純度大于98％，收率為95.0％，沸點為199℃，密度為0.91g/mL。

在裝有回流冷凝管的250mL的三口燒瓶中加入1.00g N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺、20.0mL干燥的二氯甲烷和1.2mL的三乙胺，冰水浴冷卻，攪拌下滴加摩爾比為1:6的十六酰氯和二氯甲烷的混合溶液15.0mL，滴加時間約為1小時，其中，N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺與十六酰氯的物料配比為1:2.5，滴加結(jié)束后撤掉冰水浴，常溫反應(yīng)14小時，反應(yīng)結(jié)束后使用30mL的水洗滌反應(yīng)液，無水硫酸鈉干燥，常壓蒸餾，濾餅用柱層析(V(石油醚：乙酸乙酯)1∶2)純化得暗紅色晶體，即為最終產(chǎn)物，產(chǎn)物收率為85.0％。

實施例3

1.1 N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺的合成

向250mL三口燒瓶內(nèi)分別加入摩爾比為1:1.4:0.7的4-氯硝基苯、二乙醇胺和碳酸鉀，最后加入質(zhì)量濃度為1％的CuSO₄溶液，且質(zhì)量濃度為1％的CuSO₄溶液與4-氯硝基苯的用量比為0.2mL:2g，混合均勻；加熱升高溫度，當(dāng)溫度達到82℃時，向反應(yīng)液中加入甲苯，且甲苯與4-氯硝基苯的用量比為1mL:3g；繼續(xù)升高溫度控制反應(yīng)溫度為120℃，使用薄層色譜法跟蹤反應(yīng)進程，恒溫攪拌反應(yīng)7.5h。待反應(yīng)完全后，蒸餾去除甲苯，將蒸餾后的母液倒入70℃的熱水中，劇烈攪拌，靜置過夜后抽濾除去水層得粗品，粗品用無水乙醇重結(jié)晶，得黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺。

1.2 N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺的合成

稱取2.70g(0.012mol)黃色針狀晶體N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺即化合物N,N-二(2-羥基乙基)-4-硝基苯胺，溶于60.0mL干燥的二氯甲烷中，然后向反應(yīng)瓶中加入1.1mL的三乙胺；取0.024mol二氯亞砜溶于20.0mL二氯甲烷溶液，室溫攪拌下將該溶液滴加到反應(yīng)瓶，滴加的時間為l.5h，滴加完成后，加熱至45℃，回流，并在回流的狀態(tài)下攪拌反應(yīng)2h。反應(yīng)完全后靜置冷卻，用30.0mL干燥的二氯甲烷稀釋，并分別用20.0mL的飽和碳酸氫鈉溶液洗滌三次，合并有機層用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾除去溶劑，得N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺的粗品。粗品用無水乙醇重結(jié)晶得黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺 2.99g，收率95.0％。

1.3 N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺的合成

稱取4mmol黃色針狀晶體N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺溶于200.0mL濃鹽酸中，然后加入12mmol氯化亞錫，氮氣保護下回流待溶液顏色變?yōu)闊o色透明時停止反應(yīng)。用0℃的冰水浴冷卻，加入20.0mL的水稀釋，用濃氨水調(diào)pH至7.5～8.0，用乙酸乙酯萃取3次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，即得。由于新生成的化合物具有化學(xué)活性比較高的基團氨基，其化學(xué)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定易被氧化，因此在用乙酸乙酯萃取后，向其溶液中加入過量的濃鹽酸，制備其鹽酸鹽低溫避光備用，待應(yīng)用時加堿萃取即可使用。

1.4式Ⅰ的氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺的合成

首先合成十六酰氯：在裝有回流冷凝管的250mL的三口燒瓶中加入十六酸，再加入十六酸質(zhì)量的1.5％的二甲基甲酰胺，插入冷凝管，在冷凝管的一端緩慢滴加氯化亞砜，十六酸與氯化亞砜的摩爾比為1:1.5。待滴加完畢后傾斜反應(yīng)裝置，在回流冷凝管的一端插入尾氣吸收裝置，室溫下靜止反應(yīng)24小時，反應(yīng)物由固體全部變?yōu)橐后w時反應(yīng)完畢，解壓蒸出過量的氯化亞砜及副產(chǎn)物HCl、SO₂，即得十六酰氯，對所制備的十六酰氯進行檢測，得無色的十六酰氯的純度大于98％，收率為95.0％，沸點為199℃，密度為0.91g/mL。

在裝有回流冷凝管的250mL的三口燒瓶中加入1.00g N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺、20.0mL干燥的二氯甲烷和1.2mL的三乙胺，冰水浴冷卻，攪拌下滴加摩爾比為1:4的十六酰氯和二氯甲烷的混合溶液15.0mL，滴加時間約為2小時，其中，N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺與十六酰氯的物料配比為1:1.5，滴加結(jié)束后撤掉冰水浴，常溫反應(yīng)14小時，反應(yīng)結(jié)束后使用30mL的水洗滌反應(yīng)液，無水硫酸鈉干燥，常壓蒸餾，濾餅用柱層析(V(石油醚：乙酸乙酯)1∶3)純化得暗紅色晶體，即為最終產(chǎn)物，產(chǎn)物收率為85.0％。

對上述實施例1制備的N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺進行元素分析，結(jié)果如表1所示。

表1 N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺的元素分析結(jié)果

對N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺采用溴化鉀壓片法進行紅外分析，結(jié)果如圖1所示，產(chǎn)物在3282cm^-1處出現(xiàn)強吸收峰，屬于-OH的伸縮振動所產(chǎn)生的吸收峰；2906cm^-1處出現(xiàn)吸收峰，歸屬亞甲基及中C-H的伸縮振動所產(chǎn)生的吸收峰；1600cm^-1、1521cm^-1、1483cm^-1吸收峰是苯環(huán)的骨架振動所產(chǎn)生的吸收峰；1203cm^-1處出現(xiàn)的吸收峰屬C-N振動吸收峰；819cm^-1出現(xiàn)的吸收峰表明為苯環(huán)的對二取代C-H彎曲振動引起的吸收峰；1326cm^-1處出現(xiàn)的吸收峰為硝基的伸縮振動所產(chǎn)生的吸收峰。綜合以上元素分析及紅外圖譜分析結(jié)果確定所合成的化合物為目標(biāo)化合物N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺。

對上述實施例1制備的N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺進行元素分析，結(jié)果如表2所示。

表2元素分析結(jié)果

對N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺采用溴化鉀壓片法進行紅外分析，結(jié)果如圖2所示，對比圖1和圖2可知，產(chǎn)物在3282cm^-1處未出現(xiàn)-OH的伸縮振動吸收峰，且圖2較圖1在752cm^-1及694cm^-1處出現(xiàn)了比較強的吸收峰，歸屬為C-Cl伸縮振動產(chǎn)生的吸收峰；同樣在2962cm^-1處出現(xiàn)了亞甲基中C-H的伸縮振動吸收峰；1591cm^-1、1510cm^-1、1494cm^-1處的吸收峰是苯環(huán)的骨架振動產(chǎn)生的吸收峰；827cm^-1處出現(xiàn)的吸收峰表明苯環(huán)的對二取代C-H健彎曲振動的吸收峰；1317cm^-1處出現(xiàn)的吸收峰為硝基的N-O健伸縮振動產(chǎn)生的吸收峰。綜合以上元素分析及紅外圖譜分析結(jié)果確定所合成的化合物為目標(biāo)化合物N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺。

對上述實施例1制備的N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺進行元素分析，結(jié)果如表3所示。

表3元素分析結(jié)果

對N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺采用溴化鉀壓片法進行紅外分析，結(jié)果如圖3所示，對比圖3和圖2可知，圖3在3562cm^-1及3442cm^-1處出現(xiàn)了兩個比較弱的吸收峰，該峰歸屬伯胺N-H的伸縮振動吸收峰；2962cm^-1處強吸收峰，歸屬亞甲基的C-H伸縮振動吸收峰；1571cm^-1、1496cm^-1、1458cm^-1處的吸收峰歸屬苯環(huán)的骨架振動所產(chǎn)生的吸收峰；819cm^-1處的吸收峰表明為苯環(huán)的對二取代C-H健彎曲振動的吸收峰；1431cm^-1處出現(xiàn)的吸收峰歸屬C-N伸縮振動吸收峰；圖中在2586cm^-1及2333cm^-1處出現(xiàn)的兩個中強吸收峰，歸屬為胺鹽N-H振動吸收峰。綜合元素分析結(jié)果及紅外圖譜分析結(jié)果確定所合成的化合物為目標(biāo)化合物N,N-二(2-氯乙基)-1,4苯二胺。

表4式Ⅰ的芳胺氮芥衍生物的元素分析結(jié)果

對上述實施例1制備的式Ⅰ的芳胺氮芥衍生物進行元素分析，結(jié)果如表4所示。

對上述式Ⅰ的芳氮芥衍生物采用溴化鉀壓片法進行紅外分析，如圖4所示，其主要譜帶的歸屬結(jié)果如表5所示。

由圖4和表5可知，在3703cm^-1處出現(xiàn)了酰胺基的-NH伸縮振動吸收峰；1702cm^-1出現(xiàn)的強吸收峰歸屬C＝O的伸縮振動吸收峰；2919～2850cm^-1處出現(xiàn)的多重峰歸屬甲基亞甲基C-H伸縮振動吸收峰；1519～1471cm^-1為芳環(huán)的骨架振動吸收峰；719cm^-1及692cm^-1出現(xiàn)的吸收峰歸屬C-Cl伸縮振動吸收峰。表5的元素分析結(jié)果理論值與實測值沒有顯著性差異。由紅外光譜圖及元素分析結(jié)果可以確定所合成的化合物為式Ⅰ的氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六?；?1,4-苯二胺。

表5式Ⅰ的芳氮芥衍生物的紅外主要譜帶分析結(jié)果

本發(fā)明提出的N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺在低氧環(huán)境下有較好的細(xì)胞毒性，氨基的供電子作用使氮芥的氮原子上電子云密度增大，提高了氮芥的烷化作用。而腫瘤細(xì)胞中存在許多低氧細(xì)胞，正常細(xì)胞中的細(xì)胞相對是富氧的，如果藥物只在低氧環(huán)境中有細(xì)胞毒性，那么這種藥物就對腫瘤細(xì)胞具有選擇性。本發(fā)明以N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺為藥效基團，以4-氯硝基苯，二乙醇胺為起始原料在堿性物質(zhì)的存在下，通過親核取代反應(yīng)一步合成了N,N-二(2-羥乙基)-4-硝基苯胺，所得化合物與二氯亞砜在三乙胺催化作用下，合成了芳胺氮芥類的主體化合物N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺；以二價錫作為還原劑使N,N-二(2-氯乙基)-4-硝基苯胺4位的硝基還原為氨基得到氮芥類藥物的藥效體N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺；以十六酰氯對N,N-二(2-氯乙基)-1,4-苯二胺進行結(jié)構(gòu)修飾，使得本發(fā)明的氮芥衍生物N,N-二(2-氯乙基)-N′-十六酰基-1,4-苯二胺具有增強氮芥治療指數(shù)的前提下，又可以有效降低氮芥的毒副作用，同時兼具殺菌、消炎的療效，以達到降低病人化療后因免疫力下降而引起的并發(fā)癥的風(fēng)險。

雖然，本說明書中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。