1.一種棉花體細(xì)胞染色體Oligo-FISH方法，其特征在于：設(shè)計(jì)oligos的基因組是二倍體D基因組野生種雷蒙德氏棉G.raimondii(D5)基因組(Paterson et al.2012)；原位雜交所用棉花材料為二倍體D基因組雷蒙德氏棉G.raimondii(D5)，種植于海南三亞中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所海南野生棉花種植園，并且在河南安陽(yáng)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所溫室有備份；具體方法包括雷蒙德氏棉第1號(hào)染色體的寡核苷酸混合池設(shè)計(jì)和寡核酸探針的標(biāo)記；
所述雷蒙德氏棉第1號(hào)染色體的寡核苷酸混合池設(shè)計(jì)包括以下步驟：
(1)用RepeatMasker系統(tǒng)去除雷蒙德氏棉基因組第1號(hào)染色體序列中所有重復(fù)序列；
(2)去重復(fù)的染色體序列分成含有48個(gè)堿基的寡核苷酸片段(每個(gè)片段間步移5個(gè)堿基)；
(3)獲得的寡核苷酸片段通過(guò)BLAT系統(tǒng)與D5參考基因組進(jìn)行匹配；
(4)利用Primer3(Untergasser et al.2012)來(lái)計(jì)算Tm值和發(fā)卡Tm值，留下dTm(dTm＝Tm–發(fā)卡Tm)值大于10℃的寡核苷酸序列；
(5)利用Python和R系統(tǒng)識(shí)別并排除非單一序列，獲得染色體特異、基因組中唯一的序列組成該染色體寡核苷酸混合池；
所述寡核酸探針的標(biāo)記包括以下步驟：
1)乳化PCR，以合成的寡核苷酸序列為模板進(jìn)行乳化PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增程序：98℃2min；接著30個(gè)循環(huán)的98℃15s，56℃30s，72℃30s；最后延伸72℃5s；
2)體外轉(zhuǎn)錄，擴(kuò)增產(chǎn)物作為模版進(jìn)行體外(T7)轉(zhuǎn)錄；
3)反轉(zhuǎn)錄，體外轉(zhuǎn)錄獲得的RNA用新的5’端帶有生物素或地高辛標(biāo)記的R引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄；
4)酶解去除RNA；獲得帶標(biāo)記的單鏈ssDNA分子，即標(biāo)記好的寡核苷酸探針；1.2.3Oligo-FISH
5)取材及預(yù)處理：取種子在溫水中浸泡過(guò)夜，種植于滅菌潮濕的沙土中，然后在光照培養(yǎng)箱里28～30℃培養(yǎng)，待根長(zhǎng)至1～2cm時(shí)，截取根尖用25ppm放線菌酮25℃下處理2h，然后用蒸餾水沖洗，用卡諾固定液固定24h以上，備用；
6)酶解：取出固定好的根尖，用蒸餾水沖洗數(shù)次，混合酶液(2％纖維素酶+1％果膠酶)處理，37℃，45min；
7)制片：用60％乙酸進(jìn)行壓片，保留下好的制片在-80℃冷凍4h以上；-80℃取出，迅速揭掉蓋片，80℃烤干，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
8)熒光原位雜交流程，參照王春英等(2001)介紹的方法；地高辛標(biāo)記的探針在熒光顯微鏡下觀察顯示紅色；生物素標(biāo)記在熒光顯微鏡下觀察顯示為綠色；染色體用DAPI襯染在熒光顯微鏡下觀察顯示藍(lán)色；
9)熒光顯微鏡觀察：用Zeiss熒光顯微鏡觀察熒光信號(hào)，用Zeiss-Isis成像系統(tǒng)軟件進(jìn)行熒光原位雜交圖像的獲取、采集、加工。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的棉花體細(xì)胞染色體Oligo-FISH方法，其特征在于：所述步驟1)中每個(gè)寡核苷酸合成的oligo含有48個(gè)基因組序列堿基，5’F引物，包括T7RNA多聚酶啟動(dòng)子序列和3’R引物；通過(guò)乳化PCR的方法進(jìn)行擴(kuò)增。