1.兩種人galig重組蛋白的表達(dá)方法,其特征在于,具體步驟如下:
(1)密碼子優(yōu)化:
對(duì)大腸桿菌20個(gè)氨基酸所對(duì)應(yīng)的密碼子進(jìn)行統(tǒng)計(jì),然后對(duì)人mitogalig和cytogaligORF進(jìn)行密碼子優(yōu)化,將優(yōu)化的mitogalig和cytogaligORF進(jìn)行化學(xué)合成并連接至pET-28b的Nde I和Xho I克隆位點(diǎn)上,制備重組質(zhì)粒pET-28b-mitogalig-Homo和pET-28b-cytogalig-Homo;
(2)重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
①將pET-28b-mitogalig質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21中,將轉(zhuǎn)化液在含卡那霉素Kanamycin的瓊脂盤(pán)上劃線后37℃培養(yǎng)12 h,獲得大量單菌落;
②在誘導(dǎo)重組蛋白前一天,挑取單菌落接種于1 mL LB培養(yǎng)液中,進(jìn)行12h的前培養(yǎng);
③將前培養(yǎng)按1%的體積接種于20 mL LB培養(yǎng)液中,37℃震蕩培養(yǎng)至OD600 介于0.7~1.0時(shí),取菌液并向其中加入IPTG,然后繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)后,離心并徹底去上清;
④pET-28b-cytogalig-Homo按照上述步驟①-③相同的方法和步驟進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。
2.如權(quán)利要求1所述的兩種人galig重組蛋白的表達(dá)方法,其特征在于,步驟(1)中,所述的優(yōu)化是指:人mitogalig和cytogaligORF中某氨基酸所對(duì)應(yīng)的密碼子是大腸桿菌中出現(xiàn)頻率較高的,則保留該密碼子;反之,當(dāng)使用的密碼子是大腸桿菌中出現(xiàn)頻率很低的或不出現(xiàn)的時(shí),則對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化,將原密碼子修改為大腸桿菌的密碼子。
3.如權(quán)利要求1所述的兩種人galig重組蛋白的表達(dá)方法,其特征在于:步驟①中,所述的瓊脂盤(pán)中,卡那霉素Kanamycin的含量為50 μg /mL。
4.如權(quán)利要求1所述的兩種人galig重組蛋白的表達(dá)方法,其特征在于:步驟②和步驟③中,所述的LB培養(yǎng)液中,卡那霉素Kanamycin的含量為50 μg /mL。
5.如權(quán)利要求1所述的兩種人galig重組蛋白的表達(dá)方法,其特征在于:步驟③中,所述的IPTG在菌液中的終濃度為0-1 mmol/L。
6.如權(quán)利要求1所述的兩種人galig重組蛋白的表達(dá)方法,其特征在于:步驟③中,添加IPTG后,所述的培養(yǎng)時(shí)間為2-3小時(shí)。
7.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述兩種人galig重組蛋白進(jìn)行抗血清的制備方法,其特征在于:以所制備的重組蛋白作為抗原,將其與弗氏佐劑充分乳化,所形成的乳化劑注射動(dòng)物體內(nèi),測(cè)定效價(jià),1周后心臟采血,分離血清,即為重組蛋白的抗血清,該抗血清于-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>