1.一種鯛魚種質(zhì)鑒定的方法,其特征在于,包含以下步驟:
(1)以鯛魚基因組DNA為模板,采用引物A進(jìn)行特異性擴(kuò)增,鑒別真鯛、黑鯛及二者的雜交后代;所述引物A的序列為SEQ ID NO:1~2;
(2)以步驟(1)鑒別獲得的雜交后代基因組DNA為模板,采用引物B進(jìn)行特異性擴(kuò)增;所述引物B的序列為SEQ ID NO:3~4;
(3)酶切步驟(2)的擴(kuò)增產(chǎn)物,鑒別正交后代和反交后代。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鯛魚種質(zhì)鑒定的方法,其特征在于,步驟(3)酶切過程采用的是限制性內(nèi)切酶MspI。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種鯛魚種質(zhì)鑒定的方法,其特征在于,步驟(3)酶切的體系為:擴(kuò)增產(chǎn)物10μL,滅菌雙蒸水18μL,10×buffer Tango 2μL,酶10~20U,37℃酶切12h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鯛魚種質(zhì)鑒定的方法,其特征在于,步驟(1)和步驟(2)的擴(kuò)增體系為:總體積20μL,其中含10×反應(yīng)緩沖液2μL,Mg2+2mmol/L,dNTP 200μmol/L,上下游引物各0.2μmol/L,Taq酶0.5U,DNA模板100ng~200ng,用滅菌雙蒸水補(bǔ)足至20μL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鯛魚種質(zhì)鑒定的方法,其特征在于,步驟(1)擴(kuò)增反應(yīng)的條件為:94℃2min;94℃30s,57℃退火30s,72℃30s,30個(gè)循環(huán);72℃延伸5min,4℃保存。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鯛魚種質(zhì)鑒定的方法,其特征在于,步驟(2)擴(kuò)增反應(yīng)的條件為:94℃2min;94℃30s,55℃退火30s,72℃30s,30個(gè)循環(huán);72℃延伸5min,4℃保存。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鯛魚種質(zhì)鑒定的方法,其特征在于,步驟(1)的擴(kuò)增產(chǎn)物采用8.0%的非變性聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳分離。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鯛魚種質(zhì)鑒定的方法,其特征在于,步驟(3)酶切產(chǎn)物采用3%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。
9.權(quán)利要求1~8任一所述鯛魚種質(zhì)鑒定的方法在鯛魚育種中的應(yīng)用。