本發(fā)明屬于海洋天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從海藻中綜合提取巖藻黃質(zhì)和海藻多糖的方法。

背景技術(shù)：

巖藻黃質(zhì)屬于類胡蘿卜素的一種，廣泛存在于藻類、海洋浮游植物、水生貝殼類等動植物中，具有良好的抗氧化作用、抗腫瘤活性、減肥及神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)等多方面作用。研究表明巖藻黃質(zhì)可以抑制宮頸癌、乳腺癌、淋巴癌等常見癌癥，可以使癌細(xì)胞內(nèi)妨礙癌細(xì)胞自然死亡的蛋白質(zhì)大量減少，從而顯著提高癌細(xì)胞的凋亡率，有效抑制增殖率?？茖W(xué)家們同時還證實使用巖藻黃質(zhì)作為濃縮食品添加劑不會引起實驗動物的成癮或者其他任何副作用。巖藻黃質(zhì)被發(fā)現(xiàn)有抗血管新生作用，它可以有效抑制內(nèi)皮祖細(xì)胞分化成內(nèi)皮細(xì)胞，從而抑制新的血管組成，可以有益于防治和血管再生相關(guān)的疾病。

海藻多糖是一種獨特的結(jié)合有硫酸基團(tuán)的水溶性多糖，也稱褐藻多糖硫酸酯，褐藻糖膠。研究表明海藻多糖具有雙向調(diào)節(jié)免疫力、清除自由基、抗衰老、抗凝血和抗血栓、抗腫瘤和HIV病毒、消除胃腸系統(tǒng)紊亂、抗過敏、增強(qiáng)肝功能、降低高血脂和高血壓、穩(wěn)定血糖水平，并具有促進(jìn)肌膚再生、皮膚保濕等超過20項以上的生理功效。

針對巖藻黃質(zhì)及海藻多糖的諸多功能及優(yōu)點，對今后人類健康所帶來的幫助，如何提出一種同時從海藻中綜合提取巖藻黃質(zhì)和海藻多糖粗品的方法，以能夠更高效、更充分的利用原料將是本領(lǐng)域的重要研究課題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種從海藻中綜合提取巖藻黃質(zhì)和海藻多糖的方法，可以更高效、更充分的利用原料，從而能夠有效的提高原料利用率。

本發(fā)明提供了一種從海藻中綜合提取巖藻黃質(zhì)和海藻多糖的方法，包括以下步驟：

向海藻原料中加入不同濃度的乙醇于避光下加熱攪拌超聲輔助萃取，分別收集浸提液和海藻殘渣，將收集的浸提液濃縮干燥，得到巖藻黃質(zhì)粗提物濃縮液；

以TLC展層劑為洗脫劑經(jīng)硅膠柱對所述巖藻黃質(zhì)粗提物濃縮液進(jìn)行層析，收集含巖藻黃質(zhì)的流出物，濃縮干燥，得到巖藻黃質(zhì)提取物；

以水為溶劑水浴加熱浸提海藻殘渣，提取物經(jīng)濃縮后加乙醇分級沉淀，冷凍干燥得海藻多糖提取物。

作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述海藻原料選自海帶、巨藻、泡葉藻、馬尾藻、墨角藻、裙帶菜和羊棲菜中的至少一種。

作為優(yōu)選技術(shù)方案，乙醇的濃度為20％-90％，海藻原料與乙醇的料液比為1：3-100。

作為優(yōu)選技術(shù)方案，向海藻原料中加入乙醇于避光下在60℃-80℃范圍內(nèi)加熱攪拌。

作為優(yōu)選技術(shù)方案，超聲輔助萃取的時間為0.5-5小時，超聲功率為200-600W。

作為優(yōu)選技術(shù)方案，加熱攪拌超聲輔助萃取次數(shù)為2-6次，總萃取時間在4-48小時。

作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述TLC展層劑為丙酮：石油醚1:2-10、乙酸乙酯：石油醚1:2-10或甲醇：二氯甲烷1:5-20，優(yōu)選丙酮：石油醚1:2-10。

作為優(yōu)選技術(shù)方案，海藻殘渣與水的料液比為1：10-30，水浴溫度75℃-95℃。

作為優(yōu)選技術(shù)方案，水浴加熱浸提海藻殘渣的次數(shù)為2-5次，單次浸提時間為2-4小時。

作為可選技術(shù)方案，在向海藻原料中加入不同濃度的乙醇之前，還包括將海藻原料粉碎、用清水浸泡洗滌去除表面雜質(zhì)的步驟。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果在于：

1、相比于單純的提取巖藻黃質(zhì)的方法而言，本方法不僅能經(jīng)濟(jì)快速、安全低毒的提取巖藻黃質(zhì)，而且能充分利用剩余原料提取海藻多糖，提高了原料利用率；

2、本發(fā)明所提取得到的巖藻黃質(zhì)提取物純度較高，經(jīng)UV450nm波長檢測巖藻黃質(zhì)含量不低于85％，相比于現(xiàn)有提取含量達(dá)到的75％-80％有了明顯的提高。

3、本發(fā)明提取速度快、速率高、所使用的提取溶劑低毒經(jīng)濟(jì)環(huán)保，不僅可有效降低成本，增加企業(yè)利潤，而且還同時得到了高純度巖藻黃質(zhì)以及海藻多糖粗提物，從而滿足不同的市場需求。

具體實施方式

下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明實施例提供了一種從海藻中綜合提取巖藻黃質(zhì)和海藻多糖的方法，包括以下步驟：

S1：向海藻原料中加入不同濃度的乙醇于避光下加熱攪拌超聲輔助萃取，分別收集浸提液和海藻殘渣，將收集的浸提液濃縮干燥，得到巖藻黃質(zhì)粗提物濃縮液；

S2：以TLC展層劑為洗脫劑經(jīng)硅膠柱對所述巖藻黃質(zhì)粗提物濃縮液進(jìn)行洗脫，收集含巖藻黃質(zhì)的流出物，濃縮干燥，得到巖藻黃質(zhì)提取物；

S3：以水為溶劑水浴加熱浸提海藻殘渣，提取物經(jīng)濃縮后加乙醇分級沉淀，冷凍干燥得海藻多糖提取物。

在上述實施例中，不論是浸提海藻原料提取巖藻黃質(zhì)時使用的溶劑，還是水浴浸提海藻殘渣提取海藻多糖時使用的溶劑均為安全、低毒溶劑，能夠在提取巖藻黃質(zhì)的同時，充分利用剩余原料提取海藻多糖，可有效提高原料的利用率。

由本發(fā)明上述實施例所提供的制備方法制備得到的巖藻黃質(zhì)和海藻多糖由于具有抗腫瘤、抗癌、降血壓降血脂等功效，可有效添加到食品保健品中起到保健作用，加之本實施例所提取得到的巖藻黃質(zhì)的含量高達(dá)85％，提取所得海藻多糖的含量高達(dá)65％，因此其在作為有效成分用于保健品時，其所發(fā)揮的藥效以及所制備成的保健品的價格能夠同時滿足于市場及消費者的接受程度，因此本實施例所提供的方法在有效降低成本、增加企業(yè)利潤的同時，可更好的滿足于不同的市場需求。

在一優(yōu)選實施例中，所述海藻原料選自海帶、巨藻、泡葉藻、馬尾藻、墨角藻、裙帶菜和羊棲菜中的至少一種。可以理解的是，本發(fā)明所列舉的海藻原料并不限定于上述實施例中所列舉的，還可以是其它含有巖藻黃質(zhì)和海藻多糖成分的動植物，例如海洋浮游植物、水生貝殼類。

在一優(yōu)選實施例中，乙醇的濃度為20％-90％，海藻原料與乙醇的料液比為1：3-100。在本實施例中，在選用有機(jī)溶劑浸提海藻時選用的是不同濃度的乙醇，其安全低毒，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，可確保不會有其它有機(jī)試劑殘留致毒。其中，乙醇的濃度可根據(jù)實際情況進(jìn)行選用，例如還可以為30％、40％、50％、60％、70％、80％等，料液比也可根據(jù)實際生產(chǎn)情況進(jìn)行調(diào)整，例如需要多次、反復(fù)提取時，一次性使用的溶劑量可少量或適中，若提取次數(shù)較少，則可一次性使用較大溶劑量進(jìn)行提取，只要能夠確保有效提取有效成分即可。料液比還可以為1:10、1:20、1:30、1:40、1:50、1:60、1:70、1:80、1:90等。

在一優(yōu)選實施例中，向海藻原料中加入乙醇于避光下在60℃-80℃范圍內(nèi)加熱攪拌。在本實施例中，選擇在避光的條件加熱提取海藻原料，以確保有效成分的高效溶出。這里需要說明的是，在現(xiàn)有的提取方法中，由于巖藻黃質(zhì)受熱易降解，因此并不常采用加熱的方式來提取巖藻黃質(zhì)，但經(jīng)試驗證明，巖藻黃質(zhì)在有其它物質(zhì)保護(hù)的混合物中受熱降解度大大降低，如本實施例中利用有機(jī)溶劑加熱浸提巖藻黃質(zhì)粗提物時由于粗提物中有葉綠素等其他物質(zhì)，既保證了加熱浸提巖藻黃質(zhì)不降解，又提高了產(chǎn)品得率，縮短了浸提時間，從而可有效降低有機(jī)溶劑使用量，并節(jié)約了成本。

在一優(yōu)選實施例中，超聲輔助萃取的時間為0.5-5小時，超聲功率為200-600W。在本實施例中，為了能夠有效提高有效成分的溶出率，在加熱攪拌提取的同時還輔助以超聲萃取。其中，可根據(jù)有效成分的溶出程度調(diào)整超聲萃取的時間以及功率，例如，超聲萃取時間還可以為1、2、3、4小時，超聲功率還可以為300、400、500W等。

在一優(yōu)選實施例中，加熱攪拌超聲輔助萃取次數(shù)為2-6次，總萃取時間在4-48小時。為了能夠更充分地提取有效成分，同時還對加熱攪拌超聲輔助萃取的次數(shù)以及總萃取時間進(jìn)行了限定，例如提取次數(shù)還可以為3、4、5次，總萃取時間還可以為5、10、15、20、25、30、35、40、45小時等。可以理解的是，本實施例中萃取多次可以為利用新鮮的溶劑進(jìn)行多次萃取，以最大程度的將有效成分全部溶出。

在一優(yōu)選實施例中，所述TLC展層劑為丙酮：石油醚1:2-10、乙酸乙酯：石油醚1:2-10或甲醇：二氯甲烷1:5-20。在本實施例中，為了能夠獲得純度較高的巖藻黃質(zhì)提取物，本實施例中先利用薄層色譜對所提取到的巖藻黃質(zhì)粗提物濃縮液進(jìn)行了展開，然后利用展開效果好的展層劑經(jīng)硅膠柱對所提取到的巖藻黃質(zhì)粗提物濃縮液進(jìn)行洗脫，收集含巖藻黃質(zhì)的流出物。在一優(yōu)選實施例中，TLC展層劑為丙酮：石油醚1:2-10，使用該展層劑，可使巖藻黃質(zhì)與其它物質(zhì)的分離效果更好，從而可獲得純度更高的巖藻黃質(zhì)提取物。

在一優(yōu)選實施例中，海藻殘渣與水的料液比為1：10-30，水浴溫度75℃-95℃。在本實施例中，為了能夠同時開發(fā)海藻殘渣，有效提高產(chǎn)品的利用率，還同時提取得到海藻殘渣中的多糖成分，從而可進(jìn)一步利用為后續(xù)產(chǎn)品開發(fā)提供原料。本實施例中提取多糖的步驟較為簡單，與巖藻黃質(zhì)共同提取，在能夠同時獲取兩種成分的同時，還能簡化相應(yīng)的提取工藝，從而更有利于規(guī)模化的生產(chǎn)提取。為了高效提取海藻多糖成分，本實施例中限定了海藻殘渣與水的料液比以及提取溫度，其中，海藻殘渣與水的料液比還可為1:15、1:20、1:25等，提取溫度還可以為80℃、85℃、90℃等，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)整。

在一優(yōu)選實施例中，水浴加熱浸提海藻殘渣的次數(shù)為2-5次，單次浸提時間為2-4小時。在本實施例中，為了能夠充分有效提取有效成分，在提取時可多次提取，并且可延長單次的提取時間，例如，可分為2、3、4、5次提取，每次可提取2、3、4小時不等，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實際生產(chǎn)情況進(jìn)行調(diào)整。

在一可選實施例中，在向海藻原料中加入不同濃度的乙醇之前，還包括將海藻原料粉碎、用清水浸泡洗滌去除表面雜質(zhì)的步驟。為了能夠使海藻原料干凈，利于后續(xù)有效成分的提取，在對其進(jìn)行溶劑浸提之前，還可用清水浸泡出去表面雜質(zhì)。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員還可使用其它的已知的方法來凈化處理其表面雜質(zhì)。

為了更清楚詳細(xì)地介紹本發(fā)明實施例所提供的一種從海藻中綜合提取巖藻黃質(zhì)和海藻多糖的方法，下面將結(jié)合具體實施例進(jìn)行描述。

實施例1

將海帶粉碎，用清水浸泡洗滌去掉表面的雜質(zhì)；取5kg清洗后的海帶于燒杯中，加入3L 80％乙醇提取液，80℃不斷攪拌提取15h，期間300W超聲輔助萃取30min；重復(fù)萃取3次，直到乙醇無色，并將浸提物濃縮冷凍干燥得巖藻黃質(zhì)粗提物；濃縮物使用丙酮：石油醚1:1為洗脫液過柱洗脫，收集洗脫液40℃旋轉(zhuǎn)濃縮，濃縮產(chǎn)物冷凍干燥得高純度巖藻黃質(zhì)；將提取巖藻黃質(zhì)剩余的海藻殘渣以料液比殘渣：水1g：10ml于90℃浸提3次，每次浸提2.5h；將提取物旋蒸濃縮后依次加30％，65％，80％乙醇分級醇沉，醇沉產(chǎn)物冷凍干燥即得海藻多糖提取物。其中，經(jīng)UV450nm波長檢測，所提取到的巖藻黃質(zhì)的含量為85％，海藻多糖含量為68％。

實施例2

將巨藻粉碎，用清水浸泡洗滌去掉表面的雜質(zhì)；取5kg清洗后的海帶于燒杯中，加入5L 70％乙醇提取液，75℃不斷攪拌提取10h，間間斷使用280W超聲輔助萃取1h；重復(fù)萃取4次，直到乙醇無色，并將浸提物濃縮冷凍干燥得巖藻黃質(zhì)粗提物；濃縮液使用乙酸乙酯：石油醚1:4為洗脫液過柱洗脫，收集洗脫液40℃旋轉(zhuǎn)濃縮，濃縮產(chǎn)物冷凍干燥得高純度巖藻黃質(zhì)；將提取巖藻黃質(zhì)剩余的海藻殘渣以料液比殘渣：水1g：25ml于95℃浸提2次，每次提取4h；將提取物旋蒸濃縮后依次加30％，65％，80％乙醇分級醇沉，醇沉產(chǎn)物冷凍干燥即得海藻多糖提取物。其中，經(jīng)UV450nm波長檢測，所提取到的巖藻黃質(zhì)的含量為87％，海藻多糖含量為65％。

實施例3

將泡葉藻粉碎，用清水浸泡洗滌去掉表面的雜質(zhì)；取5kg清洗后的泡葉藻于燒杯中，加8L 85％乙醇提取液，75℃不斷攪拌提取20h，間320W超聲輔助萃取30min；重復(fù)萃取2次，直到乙醇無色，并將浸提物濃縮冷凍干燥得巖藻黃質(zhì)粗提物；提取物使用甲醇：二氯甲烷1:5為洗脫液過柱洗脫，收集洗脫液50℃旋轉(zhuǎn)濃縮，濃縮產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥得高純度巖藻黃質(zhì)；將提取巖藻黃質(zhì)剩余的海藻殘渣以料液比殘渣：水1g：20ml于85℃浸提4次，每次提取3h；將提取物旋蒸濃縮后依次加30％，65％，80％乙醇分級醇沉，醇沉產(chǎn)物冷凍干燥即得海藻多糖提取物。其中，經(jīng)UV450nm波長檢測，所提取到的巖藻黃質(zhì)的含量為90％，海藻多糖含量為67％。

實施例4

將裙帶菜粉碎，用清水浸泡洗滌去掉表面的雜質(zhì)；取5kg清洗后的裙帶菜，加5L 60％乙醇提取液，65℃不斷攪拌提取5h，期間200W超聲輔助萃取10min；重復(fù)萃取4次，直到乙醇無色，并將浸提物濃縮冷凍干燥得巖藻黃質(zhì)粗提物；將提取物使用乙酸乙酯：石油醚1:4為洗脫液過柱洗脫，收集洗脫液50℃旋轉(zhuǎn)濃縮，濃縮產(chǎn)物經(jīng)冷凍得高純度巖藻黃質(zhì)；將提取巖藻黃質(zhì)剩余的海藻殘渣以料液比殘渣：水1g：30ml于90℃浸提5次，每次浸提3h；將提取物旋蒸濃縮后依次加30％，65％，80％乙醇分級醇沉，醇沉產(chǎn)物冷凍干燥即得海藻多糖提取物。其中，經(jīng)UV450nm波長檢測，所提取到的巖藻黃質(zhì)的含量為85％，海藻多糖含量69％。

實施例5

將羊棲菜粉碎，用清水浸泡洗滌去掉表面的雜質(zhì)；取5kg清洗后的羊棲菜，加10L 50％乙醇提取液，90℃不斷攪拌提取12h，期間380W超聲輔助萃取30min；重復(fù)萃取3次，直到乙醇無色，并將浸提物濃縮冷凍干燥得巖藻黃質(zhì)粗提物；提取物使用丙酮：石油醚1:5為洗脫液過柱洗脫，收集洗脫液45℃旋轉(zhuǎn)濃縮，濃縮產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥得高純度巖藻黃質(zhì)；將提取巖藻黃質(zhì)剩余的海藻殘渣以料液比殘渣：水1g:30ml于90℃浸提浸提4次，每次提取4h；將提取物旋蒸濃縮后依次加30％，65％，80％乙醇分級醇沉，醇沉產(chǎn)物冷凍干燥即得海藻多糖提取物。其中，經(jīng)UV450nm波長檢測，所提取到的巖藻黃質(zhì)的含量為90％，海藻多糖含量為65％。

實施例6

將墨角藻粉碎，用清水浸泡洗滌去掉表面的雜質(zhì)；取5kg清洗后的墨角藻，加20L 75％乙醇提取液，60℃不斷攪拌提取3h，期間300W超聲輔助萃取10min；重復(fù)萃取4次，直到乙醇無色，并將浸提物濃縮冷凍干燥得巖藻黃質(zhì)粗提物；提取物使用甲醇：二氯甲烷1:6為洗脫液過柱洗脫，收集洗脫液55℃旋轉(zhuǎn)濃縮，濃縮產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥得到巖藻黃質(zhì)；講提取巖藻黃質(zhì)剩余的海藻殘渣以料液比殘渣：水1g：20ml于95℃浸提3次，每次提取4h；將提取物旋蒸濃縮后依次加30％，65％，80％乙醇分級醇沉，醇沉產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥即得海藻多糖提取物。其中，經(jīng)UV450nm波長檢測，所提取到的巖藻黃質(zhì)的含量為89％，海藻多糖含量為67％。