本發(fā)明涉及保濕化妝品
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種金槍魚皮高保濕活性肽的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：金槍魚類是遠(yuǎn)洋漁業(yè)的重要經(jīng)濟(jì)魚類，作為一種深海魚，金槍魚肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)全面，蛋白質(zhì)含量高且配合優(yōu)越。金槍魚加工過程中會出現(xiàn)大量的下腳料包括紅肉、魚頭、內(nèi)臟、鰓和魚皮等，約占總質(zhì)量的50％～70％，尤其是金槍魚皮數(shù)量非常大，但是這些下腳料往往被直接廢棄或作為飼料再次利用，目前，很少有對金槍魚下腳料進(jìn)行深度加工處理提取高附加值的產(chǎn)品，造成資源的浪費。金槍魚皮中富含大量優(yōu)質(zhì)活性結(jié)構(gòu)蛋白，本領(lǐng)域公知，分子量在50～1000Da之間的多肽稱為小肽、寡肽、低聚肽，也稱為小分子活性多肽(一般由2～6個氨基酸組成)。小分子活性多肽具有保濕、抗氧化、抗衰老、美白、抗疲勞、抗骨質(zhì)疏松、降血壓(ACE抑制肽)、免疫調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、輔助降血糖、保護(hù)胃粘膜、治療關(guān)節(jié)炎、促進(jìn)皮膚傷口愈合等多種活性。傳統(tǒng)的多肽提取工藝可分為五類，即酸法、堿法、酶法、鹽法以及熱水浸提法等。酸法、堿法、鹽法、熱水浸提法屬于高能耗產(chǎn)業(yè)，排放的酸堿鹽容易污染周圍環(huán)境，不符合綠色可持續(xù)性經(jīng)濟(jì)發(fā)展模式。生物酶法是利用酶溫反應(yīng)、高效等性質(zhì)將膠原蛋白從不同的原料中提起出來；但是生物酶法對溫度要求高，反應(yīng)穩(wěn)定性差等缺點。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種穩(wěn)定性好、操作簡便、產(chǎn)量高、耗能低、反應(yīng)溫和的金槍魚皮高保濕活性肽的制備方法及其應(yīng)用。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種金槍魚皮高保濕活性肽的制備方法，包括如下步驟：1)將金槍魚皮初步粉碎，得到金槍魚皮漿；2)將所述步驟1)得到的金槍魚皮漿微粉碎，得到金槍魚皮細(xì)漿；3)將所述步驟2)得到的金槍魚皮細(xì)漿與水混合后進(jìn)行固液分離，去除非膠原蛋白的水溶性物質(zhì)，得到金槍魚皮沉淀；4)將所述步驟3)得到的金槍魚皮沉淀和酶在水體系中進(jìn)行酶解反應(yīng)，得到金槍魚皮酶解液；5)采用超濾膜分離所述步驟4)得到酶解液，分離得到分子量小于2KD的活性多肽，所述分子量小于2KD的活性多肽為金槍魚皮高保濕活性多肽。優(yōu)選的是，所述的金槍魚皮細(xì)漿的粒徑為10～500μm。優(yōu)選的是，所述金槍魚皮沉淀與水的質(zhì)量比為1:(1～6)。優(yōu)選的是，所述酶的質(zhì)量占金槍魚皮沉淀質(zhì)量的0.2～3.5％。優(yōu)選的是，步驟4)中所述的酶為胃蛋白酶、胰蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶中的一種或多種。優(yōu)選的是，步驟4)中所述的酶解反應(yīng)的溫度為30～60℃，pH值為6.5～9.0，酶解反應(yīng)的時間為1.5～5h。優(yōu)選的是，所述步驟4)中酶解反應(yīng)后還包括滅酶，所述滅酶的溫度為80～95℃，滅酶的時間為10～30min。優(yōu)選的是，在所述超濾膜分離后還包括：將所述超濾膜分離產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽濃縮，所述的脫鹽濃縮采用納濾膜進(jìn)行。優(yōu)選的是，在所述脫鹽濃縮后還包括：將所述脫鹽濃縮得到的濃縮產(chǎn)物進(jìn)行噴霧干燥，所述噴霧干燥的進(jìn)口溫度為100～120℃，出口溫度為90～105℃。本發(fā)明還提供了金槍魚皮高保濕性活性肽在保濕類化妝品中的應(yīng)用，所述金槍魚皮高保濕活性肽在化妝品中的質(zhì)量含量為0.5％～30％。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供的金槍魚皮高保濕活性肽制備方法簡單，工藝易于控制，適宜工業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)，且整個過程中未使用有機溶劑，環(huán)保、安全性高；實驗結(jié)果表明，所述方法制備得到的金槍魚皮活性肽能夠在較長時間維持皮膚含水量，具有非常好的皮膚保濕功效。附圖說明圖1是本發(fā)明實施例5中小鼠第1天給藥后8h內(nèi)皮膚含水量變化；圖2是本發(fā)明實施例5中小鼠第40天給藥后8h內(nèi)皮膚含水量變化。具體實施方式本發(fā)明提供了一種金槍魚皮高保濕活性肽的制備方法，包括如下步驟：1)將金槍魚皮初步粉碎，得到金槍魚皮漿；2)將所述步驟1)得到的金槍魚皮漿微粉碎，得到金槍魚皮細(xì)漿；3)將所述步驟2)得到的金槍魚皮細(xì)漿與水混合后進(jìn)行固液分離，去除非膠原蛋白的水溶性物質(zhì)，得到金槍魚皮沉淀；4)將所述步驟3)得到的金槍魚皮沉淀和酶在水體系中進(jìn)行酶解反應(yīng)，得到金槍魚皮酶解液；5)采用超濾膜分離所述步驟4)得到酶解液，分離得到分子量小于2KD的活性多肽，所述分子量小于2KD的活性多肽為金槍魚皮高保濕活性多肽。本發(fā)明中所述的金槍魚皮來源于金槍魚加工過程中的廢棄料金槍魚皮，本發(fā)明在金槍魚皮初步粉碎前，優(yōu)選的使用水浸泡清洗金槍魚皮，所述浸泡清洗過程中金槍魚皮與水的質(zhì)量比為1:(1～8)，優(yōu)選的為1:(1～4)，更優(yōu)選的為1:2；本發(fā)明中所述的金槍魚皮浸泡清洗的時間為10～30min，優(yōu)選的為15～25min。本發(fā)明將金槍魚皮進(jìn)行初步粉碎得到金槍魚皮漿。在本發(fā)明中，所述的初步粉碎采用料理棒或粉碎機進(jìn)行，本發(fā)明對所述的初步粉碎的時間沒有限定，只要能夠?qū)崿F(xiàn)金槍魚皮的初步粉碎即可。本發(fā)明在得到金槍魚皮漿后，將所述金槍魚皮漿進(jìn)行微粉碎，得到金槍魚皮細(xì)漿。在本發(fā)明中，所述金槍魚皮細(xì)漿的粒徑優(yōu)選為10～500μm，更優(yōu)選為10～200μm，最優(yōu)選為50～150μm。在本發(fā)明中，所述的微粉碎優(yōu)選采用膠體磨或者勻漿機進(jìn)行。本發(fā)明在得到金槍魚皮細(xì)漿后，將所述金槍魚皮細(xì)漿與水混合后進(jìn)行固液分離，去除非膠原蛋白的水溶性物質(zhì)，得到金槍魚皮沉淀。本發(fā)明中所述的金槍魚皮細(xì)漿與水的質(zhì)量比優(yōu)選的為1：(1～8)，更優(yōu)選的為1：(1～6)。本發(fā)明對所述的固液分離的方法沒有特殊限定，只要能夠?qū)崿F(xiàn)固液兩相的分離即可；具體的在本發(fā)明的實施例中采用離心的方式進(jìn)行固液分離，所述離心的轉(zhuǎn)速優(yōu)選的為5000～15000r/min，更優(yōu)選的為7000～13000r/min，最優(yōu)選為12000r/min；所述離心的時間優(yōu)選的為30～50min，更優(yōu)選的為35～45min。本發(fā)明在固液分離后，去除上清，獲得金槍魚皮沉淀。本發(fā)明在得到金槍魚皮沉淀后，將所述金槍魚皮沉淀與水和酶混合進(jìn)行酶解反應(yīng)，得到金槍魚皮酶解液。在本發(fā)明中，所述金槍魚皮沉淀與水的質(zhì)量比為1:(1～6)，更優(yōu)選為1：(3～4)；在本發(fā)明中，所述酶的質(zhì)量占金槍魚皮沉淀質(zhì)量的0.2～3.5％，更優(yōu)選為1.5～2.4％。本發(fā)明中，所述酶解反應(yīng)的溫度優(yōu)選的為30～60℃，更優(yōu)選的為35～55℃；所述酶解反應(yīng)的pH值優(yōu)選的為6.5～9.0，更優(yōu)選的為7.0～8.5；所述酶解反應(yīng)的時間優(yōu)選的為1.5～5h，更優(yōu)選的為1.5～4.5小時。本發(fā)明中，所述優(yōu)選為胃蛋白酶、胰蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶中的一種或多種，本發(fā)明對所述胃蛋白酶、胰蛋白酶、菠蘿蛋白酶和木瓜蛋白酶的來源沒有特殊限定，采用本領(lǐng)域常規(guī)的市售產(chǎn)品即可。本發(fā)明完成酶解反應(yīng)后，優(yōu)選對酶解產(chǎn)物進(jìn)行滅酶。在本發(fā)明中，所述滅酶的溫度優(yōu)選為80～95℃，更優(yōu)選為90～95℃；所述滅酶的時間優(yōu)選為10～30min，更優(yōu)選為10～20min。本發(fā)明在得到金槍魚皮酶解液后，采用超濾膜分離金槍魚皮酶解液中分子量小于2KD的活性多肽，得到金槍魚皮高保濕活性多肽。超濾膜運行壓力優(yōu)選為3～5bar。本發(fā)明優(yōu)選將超過2KD的料液繼續(xù)進(jìn)行再次酶解。在本發(fā)明中，所述再次酶解優(yōu)選按照上述技術(shù)方案所述酶解過程進(jìn)行，在此不再贅述。本發(fā)明在所述超濾膜分離后優(yōu)選將所述超濾膜分離產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽濃縮，所述的脫鹽濃縮采用納濾膜進(jìn)行。本發(fā)明對所述脫鹽處理并沒有特殊的要求，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的納濾膜脫鹽濃縮條件進(jìn)行脫鹽處理即可。納濾膜運行壓力10～20bar，脫鹽率85％～95％。本發(fā)明在所述脫鹽濃縮優(yōu)選將所述脫鹽濃縮得到的濃縮產(chǎn)物進(jìn)行噴霧干燥，得到金槍魚皮高保濕活性多肽。在本發(fā)明中，所述噴霧干燥的進(jìn)口溫度為100～120℃，更優(yōu)選的為100～110℃，出口溫度為90～105℃，更優(yōu)選的為90～100℃。本發(fā)明還提供了金槍魚皮高保濕性活性肽在保濕類化妝品中的應(yīng)用，所述金槍魚皮高保濕活性肽在化妝品中的質(zhì)量含量優(yōu)選的為0.5％～30％，更優(yōu)選的為1％～20％。本發(fā)明的金槍魚皮高保濕活性肽添加到化妝品中體外吸濕保濕性好，可使皮膚中的抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性增強，提高抗氧化體系對過多的自由基的清除作用。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的金槍魚皮高保濕活性肽的制備方法及其應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)的說明，但是不能把它們理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。實施例1將金槍魚皮與水1:4進(jìn)行浸泡清洗15min，備用；將浸泡清洗好的金槍魚皮進(jìn)入粉碎機處理成漿狀物，備用；將漿狀物進(jìn)入膠體磨進(jìn)行勻漿處理，得到粒徑范圍為10～200μm的料體備用；將勻漿處理后料體與水1:1進(jìn)入離心機5000r/min，離心時間50min，棄濾液，沉淀備用；將沉淀物與水1:1在生物酶解罐中混合均勻，添加沉淀物質(zhì)量0.2％的酶，反應(yīng)條件為30℃，pH為6.5，反應(yīng)5小時；將酶解罐反應(yīng)溫度升至80℃，保濕30min滅酶；將滅酶后的料液過分子量為2KD的超濾膜包，超過2KD的料液返回酶解罐再進(jìn)行酶解；將上述小于2KD的料液直接進(jìn)入納濾膜進(jìn)行脫鹽濃縮處理，運行壓力16bar，脫鹽率92％，備用；再將脫鹽后料液進(jìn)行噴霧干燥處理，進(jìn)口溫度在100℃，出口溫度在90℃，得分子量小于2KD金槍魚皮高保濕活性肽粉末。實施例2將金槍魚皮與水1:2進(jìn)行浸泡清洗20min，備用；將浸泡清洗好的金槍魚皮進(jìn)入粉碎機處理成漿狀物，備用；將漿狀物進(jìn)入膠體磨進(jìn)行勻漿處理，得到粒徑范圍為10～300μm的料體備用；將勻漿處理后料體與水1:8進(jìn)入離心機15000r/min，離心時間30min，棄濾液，沉淀備用；將沉淀與水1:6在生物酶解罐中混合均勻，添加沉淀物質(zhì)量3.5％的酶，反應(yīng)條件為60℃，pH為9，反應(yīng)1.5小時；將酶解罐反應(yīng)溫度升至95℃，保濕10min滅酶；將滅酶后的料液過分子量為2KD的超濾膜包，超過2KD的料液返回酶解罐再進(jìn)行酶解；將上述小于2KD的料液直接進(jìn)入納濾膜進(jìn)行脫鹽濃縮處理，運行壓力18bar，脫鹽率95％，備用；再將脫鹽后料液進(jìn)行噴霧干燥處理，進(jìn)口溫度在120℃，出口溫度在105℃，得分子量小于2KD金槍魚皮高保濕活性肽粉末。實施例3將金槍魚皮與水1:3進(jìn)行浸泡清洗25min，備用；將浸泡清洗好的金槍魚皮進(jìn)入粉碎機處理成漿狀物，備用；將漿狀物進(jìn)入膠體磨進(jìn)行勻漿處理，得到粒徑范圍為10～400μm的料體備用；將勻漿處理后料體與水1:4進(jìn)入離心機10000r/min，離心時間40min，棄濾液，沉淀備用；將沉淀物與水1:5在生物酶解罐中混合均勻，添加沉淀物質(zhì)量2.5％的酶，反應(yīng)條件為55℃，pH為8，反應(yīng)3小時；將酶解罐反應(yīng)溫度升至90℃，保濕15min滅酶；將滅酶后的料液過分子量為2KD的超濾膜包，超過2KD的料液返回酶解罐再進(jìn)行酶解；將上述小于2KD的料液直接進(jìn)入納濾膜進(jìn)行脫鹽濃縮處理，運行壓力12bar，脫鹽率92％，備用；再將脫鹽后料液進(jìn)行噴霧干燥處理，進(jìn)口溫度在110℃，出口溫度在98℃，得分子量小于2KD金槍魚皮高保濕活性肽粉末。實施例4將金槍魚皮與水1:3進(jìn)行浸泡清洗20min，備用；將浸泡清洗好的金槍魚皮進(jìn)入粉碎機處理成漿狀物，備用；將漿狀物進(jìn)入膠體磨進(jìn)行勻漿處理，得到粒徑范圍為10～500μm的料體備用；將勻漿處理后料體與水1:3進(jìn)入離心機7500r/min，離心時間45min，棄濾液，沉淀備用；將沉淀物與水1:3在生物酶解罐中混合均勻，添加沉淀物質(zhì)量1％的酶，反應(yīng)條件為50℃，pH為7，反應(yīng)4.5小時；將酶解罐反應(yīng)溫度升至95℃，保濕10min滅酶；將滅酶后的料液過分子量為2KD的超濾膜包，超過2KD的料液返回酶解罐再進(jìn)行酶解；將上述小于2KD的料液直接進(jìn)入納濾膜進(jìn)行脫鹽濃縮處理，運行壓力10bar，脫鹽率88％，備用；再將脫鹽后料液進(jìn)行噴霧干燥處理，進(jìn)口溫度在110℃，出口溫度在98℃，得分子量小于2KD金槍魚皮高保濕活性肽粉末。實施例5按照常規(guī)霜劑制備方法制備金槍魚皮高保濕活性肽霜劑：將6.0％甘油、3.5％丙二醇、0.2％三乙醇胺、0.4％吐溫80和73.9％純化水于75℃水浴中溶解，得到水相；2.0％硬脂酸、3.5％單硬脂酸甘油酯、5.0％十六十八醇、3.0％聚二甲基硅氧烷、0.5％TEGOCare450、1.0％鯨蠟硬脂醇聚醚-10于75℃水浴中熔融，得到油相；將油相和水相攪拌混合，并乳化，降溫至60℃，將實施例3所得金槍魚皮高保濕活性肽添加1.0％，攪拌均勻，冷卻，即得含量為1.0％的金槍魚皮高保濕活性肽霜劑。實施例6按照常規(guī)霜劑制備方法制備金槍魚皮高保濕活性肽霜劑：將6.0％甘油、3.5％丙二醇、0.2％三乙醇胺、0.4％吐溫80和71.9％純化水于75℃水浴中溶解，得到水相；2.0％硬脂酸、3.5％單硬脂酸甘油酯、5.0％十六十八醇、3.0％聚二甲基硅氧烷、0.5％TEGOCare450、1.0％鯨蠟硬脂醇聚醚-10于75℃水浴中熔融，得到油相；將油相和水相攪拌混合，并乳化，降溫至60℃，將實施例3所得金槍魚皮高保濕活性肽添加3.0％，攪拌均勻，冷卻，即得含量為3.0％的金槍魚皮高保濕活性肽霜劑。實施例7按照常規(guī)霜劑制備方法制備金槍魚皮高保濕活性肽霜劑：將6.0％甘油、3.5％丙二醇、0.2％三乙醇胺、0.4％吐溫80和69.9％純化水于75℃水浴中溶解，得到水相；2.0％硬脂酸、3.5％單硬脂酸甘油酯、5.0％十六十八醇、3.0％聚二甲基硅氧烷、0.5％TEGOCare450、1.0％鯨蠟硬脂醇聚醚-10于75℃水浴中熔融，得到油相；將油相和水相攪拌混合，并乳化，降溫至60℃，將實施例3所得金槍魚皮高保濕活性肽添加5.0％，攪拌均勻，冷卻，即得含量為5.0％的金槍魚皮高保濕活性肽霜劑。實施例8按對比例1中的配方及方法制備不加金槍魚皮高保濕活性肽的空白霜劑作為空白霜劑對照。實施例9取實施例5、實施例6、實施例7、實施例8制備得到的樣品均勻涂抹于小鼠皮膚，給藥劑量0.05g/d(以1ml注射器和電子天平定量)，連續(xù)給藥40d。第1天和第40天分別測定8小時內(nèi)小鼠皮膚的含水量，具體分組見表1。表1皮膚含水量實驗動物的分組和給藥種類組別給藥種類對照組1不給藥對照組2實施例8樣品實驗組1實施例5樣品實驗組2實施例6樣品實驗組3實施例7樣品將測得第1天不同時間的皮膚含水量結(jié)果見表2，數(shù)據(jù)繪制成圖1；將第40天測得不同時間的皮膚含水量結(jié)果見3，數(shù)據(jù)繪制成圖2。表2小鼠第1天給藥后8h內(nèi)皮膚含水量變化組別0h1h2h4h6h8h對照組1(不給藥)35.8％36.5％36.2％37.3％36.9％36.1％對照組2(基質(zhì))43.9％41.5％41.7％41.0％38.5％37.8％實驗組1(1％Pro)44.7％43.5％42.0％40.7％39.6％38.2％實驗組2(3％Pro)47.9％43.1％42.4％41.6％40.3％38.5％實驗組3(5％Pro)48.9％44.8％43.1％42.9％41.7％40.1％表2小鼠第40天給藥后8h內(nèi)皮膚含水量變化組別0h1h2h4h6h8h對照組1(不給藥)36.1％35.6％36.6％36.6％36.1％35.9％對照組2(基質(zhì))45.5％41.8％41.8％41.1％40.5％40.3％實驗組1(1％Pro)45.9％43.7％42.7％41.3％41.3％41.2％實驗組2(3％Pro)49.3％45.6％43.0％42.0％41.7％41.7％實驗組3(5％Pro)51.6％48.1％47.3％46.9％46.3％45.5％根據(jù)表2、表3中的結(jié)果繪制圖1、圖2，可以看出實施例5中40天后實驗組1～3皮膚含水量均高于對照組1，且實驗組3皮膚含水量明顯高于實驗組1～2。實驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的金槍魚皮活性肽能夠在較長時間維持皮膚含水量，具有較好的皮膚保濕功效。由以上實施例可知，本發(fā)明提供的金槍魚皮活性肽有較好的保濕功效等作用，且本發(fā)明制備方法簡單，易于控制，適宜工業(yè)化、規(guī)模化生產(chǎn)。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3