技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公布了一套基于高通量測(cè)序技術(shù)的多重PCR引物及其方法，用該方法來(lái)擴(kuò)增鼠T淋巴細(xì)胞群TCRA基因mRNA，對(duì)擴(kuò)增子文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序以產(chǎn)生T細(xì)胞受體庫(kù)的免疫應(yīng)答譜，了解免疫狀態(tài)并揭示發(fā)病機(jī)制。具體為以mRNA為模版高覆蓋的擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞TCRA基因CDR3區(qū)域，同時(shí)獲得VDJC片段的組合信息。構(gòu)建TCRA基因擴(kuò)增子文庫(kù)的引物包括：正向引物一組共39個(gè)，通過(guò)一一對(duì)應(yīng)方式覆蓋23個(gè)V片段；反向引物一組共32個(gè)，由測(cè)序接頭、key序列、barcode編碼及TRAC特異性反向互補(bǔ)序列串聯(lián)組成，其中barcode序列分為32種，可在一次測(cè)序?qū)嶒?yàn)中測(cè)序32個(gè)樣本。通過(guò)該種方法，可以有效的擴(kuò)增98個(gè)有功能的TRAV片段，同時(shí)對(duì)TRAJ片段實(shí)現(xiàn)無(wú)偏差擴(kuò)增，為免疫組學(xué)的基礎(chǔ)及臨床研究提供幫助。

技術(shù)研發(fā)人員：范盤(pán)生;李仁強(qiáng);于海禮
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北京天科雅生物科技有限公司
文檔號(hào)碼：201610821985
技術(shù)研發(fā)日：2016.09.13
技術(shù)公布日：2017.01.04