1.一種船舶壓載水中10-50um生物快速檢測方法,其特征在于包括如下步驟:
(1)使用大孔徑過濾器將經(jīng)壓載水處理設(shè)備處理后的壓載水樣品中不小于50um的存活生物濾出,得濾出液;
(2)取Aml濾出液,使用小孔徑過濾器過濾并截留濾出液中不小于10um的存活生物、小于10um的存活生物隨液體濾出;
(3)使用3-10%Aml的清洗液反沖洗小孔徑過濾器、將截留的尺寸在10-50um的存活生物沖洗進入到樣品槽內(nèi);
(4)向樣品槽內(nèi)加入活細胞熒光染色劑,染色5-30分鐘;
(5)染色后,向樣品槽內(nèi)加入其內(nèi)液體體積0.5-2倍的細胞裂解液;
(6)待細胞充分裂解后,使用熒光計檢測樣品槽內(nèi)液體的相對熒光強度;
相對熒光強參考值的獲取方法如下:
選用已知符合壓載水處理D-2標準中對10-50um存活生物的規(guī)定、含10-50um存活生物個數(shù)達到上限的水樣作為參考檢測樣品,使用大孔徑過濾器將參考檢測樣品中不小于50um的存活生物濾出,得濾出液;
b、取Aml濾出液,使用小孔徑過濾器過濾并截留濾出液中不小于10um的存活生物、小于10um的存活生物隨液體濾出;
c、使用3-10%Aml的清洗液反沖洗小孔徑過濾器、將截留的尺寸在10-50um的存活生物沖洗進入到樣品槽內(nèi);
d、向樣品槽內(nèi)加入活細胞熒光染色劑,染色5-30分鐘;
e、染色后,向樣品槽內(nèi)加入其內(nèi)液體體積0.5-2倍的細胞裂解液;
f、待細胞充分裂解后,使用熒光計檢測樣品槽內(nèi)液體的相對熒光強度;
g、按步驟a中參考檢測樣品的選取標準選取1-100種不同的參考檢測樣品,每種參考檢測樣品按步驟a、b、c、d、e、f的操作方法檢測至少一次,根據(jù)所得數(shù)據(jù)求出平均相對熒光強度值,該平均相對熒光強度值為相對熒光強度參考值;
將第(6)步獲得的相對熒光強度值與第g步獲得的相對熒光強度參考值對比,判斷該壓載水樣品是否符合排放標準。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種船舶壓載水中10-50um生物快速檢測方法,其特征在于:第a步中所述的參考檢測樣品經(jīng)如下方法獲得:使用大孔徑過濾器將經(jīng)壓載水處理設(shè)備處理后的待排放的壓載水樣品中不小于50um的存活生物濾出,得濾出液;取Aml濾出液,使用小孔徑過濾器過濾并截留濾出液中不小于10um的存活生物、小于10um的存活生物隨液體濾出;使用3-10%Aml的清洗液反沖洗小孔徑過濾器、將截留的尺寸在10-50um的存活生物沖洗進入到樣品槽內(nèi);將樣品槽內(nèi)的液體經(jīng)FDA-CMFDA法在熒光顯微鏡下檢測,其中10-50um存活生物的含量符合要求時,即可成為參考檢測樣品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種船舶壓載水中10-50um生物快速檢測方法,其特征在于:第a步中所述的參考檢測樣品經(jīng)如下方法獲得:人工配制藻類溶液或自然海水經(jīng)紫外線處理或經(jīng)次氯酸鈉處理,得測試液;使用大孔徑過濾器將測試液中不小于50um的存活生物濾出,得濾出液;取Aml濾出液,使用小孔徑過濾器過濾并截留濾出液中不小于10um的存活生物、小于10um的存活生物隨液體濾出;使用3-10%Aml的清洗液反沖洗小孔徑過濾器、將截留的尺寸在10-50um的存活生物沖洗進入到樣品槽內(nèi);將樣品槽內(nèi)的液體經(jīng)FDA-CMFDA法在熒光顯微鏡下檢測,其中10-50um存活生物的含量符合要求時,即可成為參考檢測樣品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的一種船舶壓載水中10-50um生物快速檢測方法,其特征在于:所述的大孔徑過濾器為使用網(wǎng)孔對角線長度為35-50um的尼龍篩絹制成的過濾器;所述的小孔徑過濾器為使用絕對孔徑為10um 的微孔濾膜制成的、可以反沖洗的過濾器。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種船舶壓載水中10-50um生物快速檢測方法,其特征在于:所述活細胞熒光染色劑為FDA或/和CMFDA,其加入量根據(jù)樣品槽內(nèi)液體體積、以1-3mg/ml的比例加入。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種船舶壓載水中10-50um生物快速檢測方法,其特征在于:所述的清洗液是BES、MOPS、PBS、濃度為0.2-1.0M的pH=6.0-7.2的Tris-HCl中的至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的一種船舶壓載水中10-50um生物快速檢測方法,其特征在于:所述細胞裂解液為甲醇與氯仿按體積比1:1-1:3的混合液或丙酮中的一種。
8.一種船舶壓載水中10-50um生物快速檢測裝置,其特征在于:包括樣品箱、沖洗液箱、裂解液箱、廢水箱、檢測箱、一級過濾器和二級濾器,一級過濾器的出口與樣品箱進口相連,檢測箱上設(shè)有染色劑加入口,樣品箱、沖洗液箱和染色劑箱的出口上分別設(shè)有樣品泵、沖洗泵和裂解泵,樣品泵的出口經(jīng)過濾閥與二級過濾器的一端口相連,二級過濾器的另一端口經(jīng)沖洗閥與沖洗泵出口相連,二級過濾器與沖洗閥間的連接管經(jīng)排液閥與廢水箱相連,檢測箱的進液口經(jīng)進液閥與過濾閥和二級過濾器間的連接管路相連,裂解泵出口與檢測箱相連,檢測箱上設(shè)有熒光計。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的船舶壓載水中10-50um生物快速檢測裝置,其特征在于:所述的一級過濾器為網(wǎng)孔對角線長度為35-50um的尼龍篩絹;二級濾器為絕對孔徑為10um 的微孔濾膜;熒光計的發(fā)射光波長為460-490nm,接收的激發(fā)光波長為510-550nm。