1.一種重組人生長激素融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白從N端至C端依次含有人生長激素、柔性肽接頭、至少一個人絨毛膜促性腺激素β亞基的羧基末端剛性肽和人免疫球蛋白Fc片段;其中Fc片段優(yōu)選人IgG Fc變體;更優(yōu)選地,所述人IgG Fc變體包含位于野生型人IgG Fc中的至少一種氨基酸修飾,且變體具有降低的效應子功能和/或與新生兒受體FcRn的結(jié)合親和力增強。
2.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述柔性肽接頭含有兩個或更多選自甘氨酸、絲氨酸、丙氨酸和蘇氨酸的氨基酸,優(yōu)選的,柔性肽接頭氨基酸組成的結(jié)構(gòu)通式為(GS)a(GGS)b(GGGS)c(GGGGS)d,其中a,b,c和d是大于或等于0的整數(shù),且a+b+c+d≥1,
更優(yōu)選地,所述柔性肽接頭的氨基酸選自如下序列:
(a)GSGGGSGGGGSGGGGS;
(b)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS;
(c)GSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS;
(d)GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS。
3.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述人絨毛膜促性腺激素β亞基的羧基末端剛性肽包含SEQ ID NO:1或其截短的序列,其中所述截短的序列包含至少2個糖基化位點,
優(yōu)選的,所述人絨毛膜促性腺激素β亞基的羧基末端剛性肽選自如下序列單元:
(i)SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ;
(ii)PRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ;
(iii)SSSSKAPPPS;
(iv)SRLPGPSDTPILPQ。
4.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述人絨毛膜促性腺激素β亞基的羧基末端肽剛性單元與權(quán)利要求3所述融合蛋白中的CTP氨基酸序列至少具有70%,80%,90%或95%的同一性。
5.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白包含1、2、3、4或5個人絨毛膜促性腺激素β亞基的羧基末端肽剛性單元。
6.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述人IgG Fc選自下組:
(a)含有Leu234Val、Leu235Ala和Pro331Ser突變的人IgG1絞鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)域;
(b)含有Pro331Ser突變的人IgG2絞鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)域;
(c)含有Pro331Ser、Thr250Gln和Met428Leu突變的人IgG2絞鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)域;
(d)含有Ser228Pro和Leu235Ala突變的人IgG4絞鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)域。
7.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
8.一種編碼權(quán)利要求1-7任一項所述的融合蛋白的DNA分子,優(yōu)選的,所述的DNA分子具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。
9.一種載體,其特征在于,包含如權(quán)利要求8所述DNA分子。
10.一種宿主細胞,其特征在于,包含如權(quán)利要求9所述的載體,或者轉(zhuǎn)染了權(quán)利要求9所述的載體。
11.一種制備如權(quán)利要求1-7所述重組融合蛋白的方法,其特征在于,包括如下步驟:
(a)將編碼融合蛋白的DNA引入CHO細胞,生成CHO衍生細胞系;
(b)篩選步驟(a)中每24小時期間內(nèi),表達超過30μg/106(百萬)個細胞的高產(chǎn)量細胞株;
(c)培養(yǎng)步驟(b)篩選到的細胞株,表達融合蛋白;
(d)收獲步驟(c)得到的發(fā)酵液,純化融合蛋白;
優(yōu)選的,步驟(a)中的CHO衍生細胞系為DXB-11。
12.一種藥物組合物,其特征在于,所述組合物含有根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項權(quán)利要求所述融合蛋白以及藥物學上可接受的載體。
13.如權(quán)利要求1-7所述的融合蛋白用于制備治療內(nèi)源性生長激素分泌不足的藥物的用途。