本發(fā)明涉及干細(xì)胞培養(yǎng)基技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速增殖神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基往往采用胎牛血清，由于使用動(dòng)物源的胎牛血清，導(dǎo)致干細(xì)胞培養(yǎng)基中摻入非人源物質(zhì)，造成殘留或者污染，而且現(xiàn)有的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基存在細(xì)胞貼壁性差，細(xì)胞增殖速度不夠理想等問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
基于背景技術(shù)存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提出了一種快速增殖神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，增殖速度快，細(xì)胞貼壁性好，而且無動(dòng)物源成分，不會(huì)造成殘留或者污染，同時(shí)能提高培養(yǎng)基的抗病原微生物作用，降低了培養(yǎng)基成本。
本發(fā)明提出的一種快速增殖神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括：RPMI-1640培養(yǎng)基，海藻糖，重組人胰島素，人胰島素生長因子，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，氯化鉀，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黃體酮，輔酶I，硫辛酸，維生素，黃精多糖，黨參多糖，人參皂苷。
優(yōu)選地，海藻糖的濃度為2.5～3.5g/L，重組人胰島素的濃度為2～3g/L，人胰島素生長因子的濃度為20～30mg/L，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的濃度為15～25μg/L，氯化鉀的濃度為0.8～1.3g/L，氨基酸螯合硒的濃度為0.4～0.6μg/L，谷氨酰胺的濃度為50～80mg/L，黃體酮的濃度為10～20mg/L，輔酶I的濃度為80～200μg/L，硫辛酸的濃度為15～25mg/L，維生素的濃度為50～100mg/L，黃精多糖的濃度為15～30mg/L，黨參多糖的濃度為20～40mg/L，人參皂苷的濃度為30～50mg/L。
優(yōu)選地，維生素按重量份包括：維生素E 15～17份，維生素C 20～24份，維生素B族23～25份。
優(yōu)選地，維生素B族為硫胺素、核黃素、煙酸、泛酸、吡哆醇、氰鈷胺、葉酸、生物素中兩種以上組合物。
優(yōu)選地，重組人胰島素、人胰島素生長因子和內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的濃度比為2.3×105～2.7×105：2.4×103～2.8×103：2～2.2。
優(yōu)選地，黃精多糖、黨參多糖和人參皂苷的濃度比為20～25：25～35：35～45。
優(yōu)選地，海藻糖的濃度為2.8～3.2g/L，重組人胰島素的濃度為2.3～2.7g/L，人胰島素生長因子的濃度為24～28mg/L，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的濃度為20～22μg/L，氯化鉀的濃度為1～1.2g/L，氨基酸螯合硒的濃度為0.45～0.55μg/L，谷氨酰胺的濃度為60～70mg/L，黃體酮的濃度為13～17mg/L，輔酶I的濃度為120～160μg/L，硫辛酸的濃度為18～22mg/L，維生素的濃度為60～80mg/L，黃精多糖的濃度為20～25mg/L，黨參多糖的濃度為25～35mg/L，人參皂苷的濃度為35～45mg/L。
本發(fā)明采用RPMI-1640培養(yǎng)基、海藻糖、重組人胰島素、人胰島素生長因子、內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、氨基酸螯合硒、谷氨酰胺、黃體酮、輔酶I、硫辛酸和維生素相互配合，能滋養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞保持細(xì)胞的活性；其中RPMI-1640培養(yǎng)基、海藻糖、重組人胰島素、人胰島素生長因子、內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、氨基酸螯合硒、硫辛酸和維生素為神經(jīng)干細(xì)胞提供營養(yǎng)成分；而海藻糖、輔酶I、硫辛酸和維生素相互配合，一方面可以在細(xì)胞表面能形成獨(dú)特的保護(hù)膜，有效地保護(hù)蛋白質(zhì)分子不變性失活，從而維持細(xì)胞活性，另一方面能保護(hù)許多蛋白質(zhì)和酶等分子中的巰基，有利于酶活性的發(fā)揮，同時(shí)加速神經(jīng)干細(xì)胞對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，提高神經(jīng)干細(xì)胞的新陳代謝的速率，從而提高神經(jīng)干細(xì)胞的增殖速率；海藻糖、重組人胰島素、氯化鉀、氨基酸螯合硒、谷氨酰胺相互配合，維持細(xì)胞的滲透平衡；人胰島素生長因子、內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、黃精多糖、黨參多糖、人參皂苷相互配合，一方面增強(qiáng)細(xì)胞的新陳代謝，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞快速大量增殖，另一方面提高培養(yǎng)基的抗病原微生物作用，還能使神經(jīng)干細(xì)胞在增殖的過程中進(jìn)行緩慢修復(fù)，維持細(xì)胞活性，同時(shí)降低了培養(yǎng)基成本。
本發(fā)明培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，使神經(jīng)干細(xì)胞的貼壁率達(dá)到90％以上，死細(xì)胞較少，大大提高了細(xì)胞的數(shù)量。本發(fā)明培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞生長至平臺(tái)期只需要49～50h，而現(xiàn)有技術(shù)中的培養(yǎng)基最快需要52h，常規(guī)干細(xì)胞培養(yǎng)基則需要至少60h，由此可知本發(fā)明能夠提高神經(jīng)干細(xì)胞的生長速率。同時(shí)本發(fā)明經(jīng)流式細(xì)胞表型檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所得神經(jīng)干細(xì)胞與常規(guī)培養(yǎng)基所得神經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞表型無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
具體實(shí)施方式
下面，通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說明。
實(shí)施例1
本發(fā)明提出的一種快速增殖神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括：RPMI-1640培養(yǎng)基，海藻糖，重組人胰島素，人胰島素生長因子，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，氯化鉀，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黃體酮，輔酶I，硫辛酸，維生素，黃精多糖，黨參多糖，人參皂苷。
實(shí)施例2
本發(fā)明提出的一種快速增殖神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括：RPMI-1640培養(yǎng)基，海藻糖，重組人胰島素，人胰島素生長因子，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，氯化鉀，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黃體酮，輔酶I，硫辛酸，維生素，黃精多糖，黨參多糖，人參皂苷。
其中，海藻糖的濃度為2.5g/L，重組人胰島素的濃度為3g/L，人胰島素生長因子的濃度為20mg/L，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的濃度為25μg/L，氯化鉀的濃度為0.8g/L，氨基酸螯合硒的濃度為0.6μg/L，谷氨酰胺的濃度為50mg/L，黃體酮的濃度為20mg/L，輔酶I的濃度為80μg/L，硫辛酸的濃度為25mg/L，維生素的濃度為50mg/L，黃精多糖的濃度為30mg/L，黨參多糖的濃度為20mg/L，人參皂苷的濃度為50mg/L。
實(shí)施例3
本發(fā)明提出的一種快速增殖神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括：RPMI-1640培養(yǎng)基，海藻糖，重組人胰島素，人胰島素生長因子，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，氯化鉀，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黃體酮，輔酶I，硫辛酸，維生素，黃精多糖，黨參多糖，人參皂苷。
其中，海藻糖的濃度為3.5g/L，重組人胰島素的濃度為2g/L，人胰島素生長因子的濃度為30mg/L，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的濃度為15μg/L，氯化鉀的濃度為1.3g/L，氨基酸螯合硒的濃度為0.4μg/L，谷氨酰胺的濃度為80mg/L，黃體酮的濃度為10mg/L，輔酶I的濃度為200μg/L，硫辛酸的濃度為15mg/L，維生素的濃度為100mg/L，黃精多糖的濃度為15mg/L，黨參多糖的濃度為40mg/L，人參皂苷的濃度為30mg/L。
維生素按重量份包括：維生素E 17份，維生素C 20份，維生素B族25份；維生素B族為核黃素、泛酸、氰鈷胺、生物素的組合物。
實(shí)施例4
本發(fā)明提出的一種快速增殖神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括：RPMI-1640培養(yǎng)基，海藻糖，重組人胰島素，人胰島素生長因子，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，氯化鉀，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黃體酮，輔酶I，硫辛酸，維生素，黃精多糖，黨參多糖，人參皂苷。
其中，海藻糖的濃度為2.8g/L，重組人胰島素的濃度為2.7g/L，人胰島素生長因子的濃度為24mg/L，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的濃度為22μg/L，氯化鉀的濃度為1g/L，氨基酸螯合硒的濃度為0.55μg/L，谷氨酰胺的濃度為60mg/L，黃體酮的濃度為17mg/L，輔酶I的濃度為120μg/L，硫辛酸的濃度為22mg/L，維生素的濃度為60mg/L，黃精多糖的濃度為25mg/L，黨參多糖的濃度為25mg/L，人參皂苷的濃度為45mg/L。
維生素按重量份包括：維生素E 15份，維生素C 24份，維生素B族23份；維生素B族為硫胺素、煙酸、吡哆醇、葉酸的組合物。
實(shí)施例5
本發(fā)明提出的一種快速增殖神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括：RPMI-1640培養(yǎng)基，海藻糖，重組人胰島素，人胰島素生長因子，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，氯化鉀，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黃體酮，輔酶I，硫辛酸，維生素，黃精多糖，黨參多糖，人參皂苷。
其中，海藻糖的濃度為3.2g/L，重組人胰島素的濃度為2.3g/L，人胰島素生長因子的濃度為28mg/L，內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的濃度為20μg/L，氯化鉀的濃度為1.2g/L，氨基酸螯合硒的濃度為0.45μg/L，谷氨酰胺的濃度為70mg/L，黃體酮的濃度為13mg/L，輔酶I的濃度為160μg/L，硫辛酸的濃度為18mg/L，維生素的濃度為80mg/L，黃精多糖的濃度為20mg/L，黨參多糖的濃度為35mg/L，人參皂苷的濃度為35mg/L。
維生素按重量份包括：維生素E 16份，維生素C 22份，維生素B族24份；維生素B族為硫胺素、核黃素、煙酸、泛酸、吡哆醇、氰鈷胺、葉酸、生物素的組合物。
以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。