1.一組用于檢測(cè)星狀病毒的引物和探針,其特征在于,由序列表SEQ ID No.1至序列表SEQ ID No.3所示的核苷酸序列組成;其中SEQ ID No.1至SEQ ID No.2所示的核苷酸序列為擴(kuò)增星狀病毒RNA的引物,SEQ ID No.3所示核苷酸序列為用于擴(kuò)增星狀病毒RNA的探針。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)星狀病毒的引物和探針,其特征在于:探針5’端標(biāo)記FAM,3’端標(biāo)記BHQ。
3.一種精確定量檢測(cè)星狀病毒的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包括權(quán)利要求1或2所述的一組用于檢測(cè)星狀病毒的引物和探針。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括星狀病毒陽(yáng)性對(duì)照RNA、one-step RT-ddPCR supermix、醋酸鎂、微滴生成油、微滴生成卡、96孔板和鋁箔熱封膜。
5.一種精確定量檢測(cè)星狀病毒的檢測(cè)方法,其特征在于,該方法包括:
(1)提取待測(cè)樣品RNA;
(2)配制RT-ddPCR反應(yīng)體系,其中,所述反應(yīng)體系包括序列表中SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3所示的用于擴(kuò)增星狀病毒RNA的引物和探針;
(3)將步驟(2)配制的RT-ddPCR反應(yīng)體系和微滴生成油加入微滴生成卡中,置于微滴生成儀中生成微滴;
(4)進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng);
(5)結(jié)果判定。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法,其特征在于,步驟(5)中,按照泊松分布原理計(jì)算獲得星狀病毒RNA的拷貝數(shù),進(jìn)而通過(guò)如下公式計(jì)算獲得待測(cè)樣品中星狀病毒的含量: