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提高格爾登素發(fā)酵水平的方法與流程

文檔序號:11936874閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種提高格爾登素發(fā)酵水平的方法,其特征在于,通過將吸水鏈霉菌XM201基因組中編碼格爾登素I型聚酮合酶的上游啟動子PgdmA序列通過原位置換換成XM201基因組內(nèi)源的高效啟動子P5061,使得格爾登素聚酮鏈的合成效率提高,并使格爾登素在發(fā)酵中的產(chǎn)量得以提高。

2.如權(quán)利要求書1所述的提高格爾登素發(fā)酵水平的方法,其特征在于,所述上游啟動子PgdmA的序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如權(quán)利要求書1所述的提高格爾登素發(fā)酵水平的方法,其特征在于,所述高效啟動子P5061的序列如SEQ ID NO.2所示。

4.如權(quán)利要求書1所述的提高格爾登素發(fā)酵水平的方法,其特征在于,構(gòu)建步驟如下:

第一步:設(shè)計并構(gòu)建用于格爾登素上游啟動子PgdmA與高效啟動子P5061進(jìn)行置換的載體I;

第二步:將第一步構(gòu)建得到的載體I通過接合轉(zhuǎn)移導(dǎo)入受體菌吸水鏈霉菌XM201中進(jìn)行同源重組;

第三步:通過對突變株的篩選和阿泊拉霉素抗性驗證,并通過PCR產(chǎn)物片段大小的差異篩選得到啟動子置換的突變株。

5.權(quán)利要求書4所述提高格爾登素發(fā)酵水平的方法,其特征在于,步驟一的具體構(gòu)建方法是,在質(zhì)粒pKC1139的SpeI/HindIII位點插入來自PgdmA區(qū)域左側(cè)的2111bpPCR片段和來自PgdmA區(qū)域右側(cè)的2106bp PCR片段,中間用XbaI位點插入743bp PCR得到P5061的序列。

6.權(quán)利要求書1所述提高格爾登素發(fā)酵水平的方法,其特征在于,所述發(fā)酵是指將鏈霉菌孢子或者菌絲體接種在種子培養(yǎng)基中于30℃、220rpm的轉(zhuǎn)速下培養(yǎng)36小時后轉(zhuǎn)接發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵6天。

7.權(quán)利要求書6所述提高格爾登素發(fā)酵水平的方法,其特征在于,所述種子培養(yǎng)基含有質(zhì)量體積比為1%的葡萄糖、1%的蛋白胨和0.5%的酵母提取物;所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有質(zhì)量體積比為3%的淀粉、7%的葡萄糖、4%的黃豆餅粉、0.3%的硫酸銨、1%的碳酸鈣、0.001%的氯化鈷和0.1%的大豆油。

8.權(quán)利要求書6所述提高格爾登素發(fā)酵水平的方法,其特征在于,種子培養(yǎng)物按15%的接種量轉(zhuǎn)接于發(fā)酵培養(yǎng)基。

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