本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及2,4,6-三取代嘧啶類衍生物，具體涉及抗腫瘤活性的4位含查爾酮結(jié)構(gòu)單元的6-取代-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)嘧啶類化合物及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

大量的文獻(xiàn)報(bào)道了嘧啶類衍生物的生物活性及其藥理活性。嘧啶類藥物廣泛地應(yīng)用在抗腫瘤、抗炎、抗菌以及抗病毒等多個方面，因此在藥物分子設(shè)計(jì)方面得到了廣泛的應(yīng)用，并且已有多種優(yōu)秀的抗腫瘤藥物成功上市，其抗腫瘤藥物的優(yōu)秀代表為：5-氟尿嘧啶(5-FU)，目前仍然是臨床上治療實(shí)體瘤以及消化道腫瘤的重要藥物。查爾酮類化合物因?yàn)榭梢酝ㄟ^結(jié)合秋水仙堿結(jié)合位點(diǎn)而抑制微管蛋白聚合的抗有絲分裂性質(zhì)而被廣泛了解關(guān)注。由于查爾酮化合物是由烯酮連接的兩個芳環(huán)構(gòu)成，其結(jié)構(gòu)的特殊性導(dǎo)致其具有柔性，從而能與不同的生物受體結(jié)合，也正是基于這個原因以及其本身的生物活性，無數(shù)的科研工作者將之應(yīng)用于各類藥物的研究中，得到了意想不到的成效，尤其在抗腫瘤、抗瘧疾、抗HIV、抗菌、提供食用等等方面得到了較為令人驚喜的研究成果與進(jìn)展。因此依據(jù)藥物分子合成設(shè)計(jì)拼合原理，合成一系列的4位含查爾酮結(jié)構(gòu)單元的6-取代-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)嘧啶類化合物，期望得到生物活性良好的化合物，目前未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為開發(fā)利用現(xiàn)有的臨床藥物資源，本發(fā)明目的在于提供一類4位含查爾酮結(jié)構(gòu)單元的6-取代-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)嘧啶類化合物，為尋找新的抗腫瘤活性化合物開辟一條新途徑；本發(fā)明另一目的在于提供其制備方法和其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明所述4位含查爾酮結(jié)構(gòu)單元的6-取代-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)嘧啶類化合物結(jié)構(gòu)通式如下：

通式Ⅰ中：R₁為甲基、苯基；R₂為3，4,5-三甲氧基苯基、4-溴苯基、4-氟苯基、3-氟苯基、3-硝基苯基、3-溴苯基、3,5-二氟苯基、2-氟-4-溴苯基、3-溴-4-氟苯基、3-羥基苯基、2-噻吩基、2-呋喃基、3,5-二氟苯基、3,5-二氯苯基。

優(yōu)選如下化合物之一：

N-(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(4-溴苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(4-氟苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(3-氟苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(3-硝基苯乙烯基苯乙酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(3-溴苯乙烯基苯乙酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(3,5-二氟苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(2-氟-4-溴苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(3-溴-4-氟苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(3-羥基苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(噻吩-2-苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(呋喃-2-苯乙烯基苯乙酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺

N-(3,5-二氟苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺

N-(3,5-二氯苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺

制備路線：

制備方法：

1)、將乙酰乙酸乙酯或苯甲酰乙酸乙酯和硫脲在氫氧化鉀的乙醇溶液中回流發(fā)生環(huán)合反應(yīng)得到6-取代-2巰基嘧啶；乙酰乙酸乙酯或苯甲酰乙酸乙酯和硫脲摩爾比為：1:1.0-:1.5。

2)、將6-取代-2巰基嘧啶和2-氯亞甲基苯并咪唑在水和二氧六環(huán)的混合溶液中加熱，以氫氧化鉀催化發(fā)生取代反應(yīng)生成2位苯并咪唑取代的6-取代-2-硫脲嘧啶；6-取代-2巰基嘧啶和2-氯亞甲基苯并咪唑摩爾比為：1:1.0-1.3。

3)、將2位苯并咪唑取代的6-取代-2-硫脲嘧啶與三氯氧磷加熱反應(yīng)，使4位的羥基氯代生成2位苯并咪唑取代的4-氯-6-取代-2-硫脲嘧啶；2位苯并咪唑取代的6-取代-2-硫脲嘧啶與三氯氧磷摩爾比為：1:15-20。

4)、將對氨基苯乙酮與取代苯甲醛、2-噻吩甲醛、2-呋喃甲醛在氫氧化鉀的乙醇溶液中發(fā)生克萊森-施密特縮合反應(yīng)得到關(guān)鍵中間體查爾酮4-氨基苯乙烯基苯乙酮、4-氨基噻吩-2-乙烯基苯乙酮、4-氨基呋喃-2-乙烯基苯乙酮；

5)、將2位苯并咪唑取代的4-氯-6-取代-2-硫脲嘧啶與上述4)中取代的氨基類查爾酮加熱反應(yīng)得到4位含查爾酮結(jié)構(gòu)單元的6-取代-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)嘧啶類化合物。2位苯并咪唑取代的4-氯-6-取代-2-硫脲嘧啶與取代的氨基類查爾酮摩爾比為：1:0.8-1.2。

本發(fā)明所述4位含查爾酮結(jié)構(gòu)單元的6-取代-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)嘧啶類化合物對胃癌細(xì)胞(MGC-803)、人肝癌細(xì)胞(Hepg2)、人食管癌細(xì)胞(EC109)、人乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231)有很好的抑制作用。其中有些化合物對胃癌細(xì)胞(MGC-803)、人肝癌細(xì)胞(Hepg2)、人食管癌細(xì)胞(EC109)、人乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231)的IC₅₀值小于10(μmol/L)，與臨床上已使用的抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶做對照，優(yōu)于其活性。因此，本發(fā)明提供的此類4位含查爾酮結(jié)構(gòu)單元的6-取代-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)嘧啶類化合物為開發(fā)新型抗腫瘤藥物和藥物的聯(lián)合用藥開辟了另一有效途徑，此類化合物如能開發(fā)成為新藥將有良好的市場應(yīng)用前景。而且本發(fā)明所述方法反應(yīng)路線短，簡單可行，收率較高，達(dá)64％以上。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。

合成化合物表征使用的儀器：NMR譜使用瑞典Bruker DPX-400型超導(dǎo)核磁共振儀測定，TMS為內(nèi)標(biāo)；高分辨質(zhì)譜使用Waters-Micromass公司Q-Tof質(zhì)譜儀測定。

實(shí)施例1

N-(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

將氫氧化鉀(3.656g，0.653mol)加入裝有60mL乙醇的150mL燒瓶中，50℃超聲溶解均勻后，加入壓成粉狀的硫脲(4.506g，0.592mol)在70℃加熱攪拌呈透明狀后，滴加乙酰乙酸乙酯(7.5mL，0.592mol)，升溫85℃回流5h后，趁熱抽濾，濾餅用約70mL水溶解，稀鹽酸溶液調(diào)pH至6，過程中發(fā)熱加少許冰塊降溫，析出沉淀后，抽濾用水洗滌后，真空干燥得產(chǎn)物6-甲基-2巰基嘧啶，白色固體(6.445g，收率78.25％)。

在室溫條件下，取對氨基苯乙酮(0.324g，0.0024mol)溶于4mL乙醇中，加入氫氧化鉀(0.200g，0.0036mol)慢慢升溫75℃加熱攪拌，待完全溶解后，逐滴滴加4mL甲醇溶解或稀釋的3,4,5-三甲氧基苯甲醛(0.002mol)，回流5h后停止反應(yīng)，冷卻至室溫后抽濾，甲醇洗濾餅后，然后真空干燥得3,4,5-三甲氧基苯乙烯基-4-氨基苯乙酮，黃色固體粉末。

將氫氧化鉀(0.685g，0.012mol)溶解于10mL水中，再加入6-甲基-2巰基嘧啶(1.415g，0.01mol)超聲溶解后，加入2mL二氧六環(huán)，攪拌加熱至60℃。然后將2-氯亞甲基苯并咪唑(0.011mol)于60℃左右溫水下超聲溶解于8mL二氧六環(huán)中，緩慢滴加至上述反應(yīng)體系中，用1.5mL二氧六環(huán)清洗燒瓶和滴管，加完后加熱65℃反應(yīng)2h，然后趁熱抽濾，濾餅用少量二氧六環(huán)洗滌，最后真空干燥得2位苯并咪唑取代的6-甲基-2-硫脲嘧啶，黃色固體(2.528g，91.93％)。

分別取三氯氧磷(10mL，0.107mol)和三氯化磷(1mL，0.011mol)在冰浴條件下，混合攪拌10min混合完全均勻后，加入2位苯并咪唑取代的6-甲基-2-硫脲嘧啶(1.567g，0.006mol)，然后緩慢升溫至100℃，2h后有大量粉紅色固體生成，滴入數(shù)滴水，至所有固體溶解，反應(yīng)液澄清繼續(xù)回流反應(yīng)5h后停止反應(yīng)，待體系稍冷后，倒入劇烈攪拌的冰水中，待三氯氧磷完全反應(yīng)后，用氨水調(diào)pH至8后繼續(xù)攪拌20min，過程中始終保持有冰，抽濾，濾餅用蒸餾水洗至中性，得到2位苯并咪唑取代的4-氯-6-甲基-2-硫脲嘧啶，白色固體(1.626g，收率96.50％)。

將2位苯并咪唑取代的4-氯-6-甲基-2-硫脲嘧啶(0.174g，0.60mmol)和3,4,5-三甲氧基苯乙烯基-4-氨基苯乙酮(0.157g，0.50mmol)分別溶解于8mL、2mL無水乙醇中，升溫至90℃，將后者緩慢滴加入加熱攪拌的前者體系中，薄層色譜法監(jiān)測反應(yīng)，待反應(yīng)結(jié)束后停止反應(yīng)，冷卻至室溫后抽濾，濾餅用分析純的無水乙醇洗，經(jīng)真空干燥得產(chǎn)物N-(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基苯乙酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)6-甲基嘧啶-4-胺(0.157g，收率64.4％)。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.183-184℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.36(s,1H，NH,benzimidazole,D₂O exchangeable),8.18(d,J＝8.6Hz,2H,ethylene linkage H),7.97(d,J＝15.5Hz,1H，phenyl H),7.71(dd,J＝10.9,8.1Hz,5H，phenyl H and benzimidazole H),7.49(dd,J＝6.0,3.0Hz,2H，phenyl H and benzimidazole H),7.28(s,2H,phenyl H and benzimidazole H),6.55(s,1H,pyrimidine H),4.93(s,2H,CH₂-S),3.90(s,6H,CH₃O-),3.72(s,3H,CH₃O-),2.24(s,3H,CH₃-).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):187.65,166.92,164.63,160.41,153.61,151.58,144.23,144.02,143.80,143.46,140.11,132.27,131.26,130.89,130.39,126.16,121.64,119.58,114.21,107.01,103.17,60.61,56.73,26.54,22.98；HR-MS(ESI)Calcd for C₃₁H₂₉N₅O₄S[M+H]⁺:568.2018,found:568.2016。

實(shí)施例2

N-(4-溴苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用4-溴苯甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.180-181℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.60(s,1H，NH,benzimidazole),8.12(d,J＝8.7Hz,2H，ethylene linkage H),8.02(d,J＝15.6Hz,1H，phenyl H),7.91(d,J＝8.5Hz,2H，phenyl H),7.79–7.65(m,6H，phenyl H and benzimidazole H),7.48(dd,J＝6.1,3.2Hz,2H，phenyl H and benzimidazole H),6.62(s,1H，pyrimidine H),4.96(s,2H，CH₂-S),2.26(s,3H,CH₃-)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):187.66,166.18,164.03,163.57,162.90,161.25,160.31,151.03,143.29,142.45,134.58,132.57,132.34,131.28,131.20,130.27,126.17,124.33,123.23,120.23,114.21,103.03,56.48,26.54,21.93,19.03；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₈H₂₂BrN₅OS[M+H]⁺:556.0806,found:556.0803。

實(shí)施例3

N-(4-氟苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用4-氟苯甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.171-172℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.62(s,1H，NH,benzimidazole),8.12(d,J＝8.8Hz,2H，ethylene linkage H),8.06–7.92(m,3H，phenyl H),7.77–7.66(m,5H，phenyl H),7.48(dd,J＝6.1,3.2Hz,2H，phenyl H and benzimidazole H),7.33(t,J＝8.8Hz,2H，phenyl H and benzimidazole H),6.61(d,J＝5.7Hz,1H，pyrimidine H),4.96(s,2H，CH₂-S),2.26(s,3H,CH₃-)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):187.69,166.26,165.07,162.59,160.33,151.09,143.28,142.60,132.62,131.98,131.95,131.76,131.68,131.21,130.23,126.16,122.34,120.17,116.51,116.29,114.89,114.21,103.03,55.86,26.53,22.03；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₈H₂₂FN₅OS[M+H]⁺:496.1607,found:496.1605。

實(shí)施例4

N-(3-氟苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用3-氟苯甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.161-162℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.65(s,1H，NH,benzimidazole),8.12(d,J＝8.7Hz,2H，ethylene linkage H),8.04–7.91(m,3H，phenyl H),7.78–7.64(m,5H，phenyl H),7.48(t,J＝4.7Hz,5H，phenyl H and benzimidazole H),6.63(s,1H，pyrimidine H),4.97(s,2H，CH₂-S),2.27(s,3H,CH₃-)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):187.49,166.58,160.37,151.31,143.83,141.06,134.54,133.76,132.56,132.09,131.24,130.42,129.31,128.74,126.17,125.82,125.33,119.95,114.23,103.16,26.52,22.48；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₈H₂₂FN₅OS[M+H]⁺:496.1607,found:496.1608。

實(shí)施例5

N-(3-硝基苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用3-硝基苯甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.170-171℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.65(s,1H，NH,benzimidazole),8.79(s,1H，ethylene linkage H),8.41(d,J＝7.8Hz,1H，ethylene linkage H),8.29(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H，phenyl H),8.18(dd,J＝12.2,9.0Hz,3H，phenyl H),7.90–7.67(m,6H，phenyl H and benzimidazole H),7.49(dd,J＝6.2,3.2Hz,2H，benzimidazole H),6.63(s,1H，pyrimidine H),4.96(s,2H，CH₂-S),2.26(s,3H,CH₃-)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):187.58,166.65,160.38,151.43,148.90,143.94,141.23,137.20,135.42,132.07,131.25,130.84,130.51,126.19,125.22,125.05,123.55,119.87,114.25,103.12,26.49,22.62；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₈H₂₂N₆O₃S[M+H]⁺:523.1552,found:523.1551。

實(shí)施例6

N-(3-溴苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用3-溴苯甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.169-170℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.58(s,1H，NH,benzimidazole),8.24(s,1H，ethylene linkage H),8.14(d,J＝8.8Hz,2H，phenyl H),8.05(d,J＝15.6Hz,1H，ethylene linkage H),7.91(d,J＝7.8Hz,1H，phenyl H),7.79–7.58(m,6H，phenyl H and benzimidazole H),7.55–7.41(m,3H，phenyl H and benzimidazole H),6.61(s,1H，pyrimidine H),4.94(d,J＝7.9Hz,2H，CH₂-S),2.26(s,3H,CH₃-)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):187.59,166.64,160.38,151.44,143.83,142.01,137.82,133.41,132.19,131.43,131.32,131.24,130.43,128.65,126.19,123.95,122.89,119.86,114.24,103.13,26.50,22.62；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₈H₂₂BrN₅OS[M+H]⁺:556.0806,found:556.0806。

實(shí)施例7

N-(3,5-二氟苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用3,5-二氟苯甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.182-183℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.73(s,1H，NH,benzimidazole),8.14(dd,J＝14.4,12.3Hz,3H，ethylene linkage H and phenyl H),7.95–7.66(m,7H，phenyl H and benzimidazole H),7.48(dd,J＝6.2,3.2Hz,2H,phenyl H),7.41–7.30(m,1H,phenyl H),6.64(s,1H，pyrimidine H),4.97(s,2H,CH₂-S),2.27(s,3H,CH₃-)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):187.54,166.47,164.42,164.29,161.98,161.84,160.34,151.25,143.78,141.12,139.13,132.12,131.21,130.47,129.17,128.91,126.16,125.17,119.98,114.21,112.38,112.12,105.90,103.12,26.52,22.35；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₈H₂₁F₂N₅OS[M+H]⁺:514.1513,found:514.1509。

實(shí)施例8

N-(2-氟-4-溴苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用2-氟-4-溴苯甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.171-172℃；δ10.86(d,J＝11.3Hz,1H，NH,benzimidazole),8.06(dd,J＝31.4,12.2Hz,2H，ethylene linkage H),7.91(d,J＝8.4Hz,1H，phenyl H),7.82(d,J＝8.6Hz,1H，phenyl H),7.74–7.65(m,4H，phenyl H and benzimidazole H),7.56(d,J＝8.6Hz,1H，phenyl H),7.48(ddd,J＝12.8,6.1,3.1Hz,2H，phenyl H and benzimidazole H),6.66(d,J＝6.1Hz,1H，pyrimidine H),4.97(d,J＝9.5Hz,2H,CH₂-S),2.28(s,3H,CH₃-).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):168.4,165.8,162.2,161.2,153.7,144.3,136.2,131.3,130.7,130.1,129.4,126.9,126.1,123.8,119.3,115.9,114.2,100.2,60.8,27.1,14.7；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₈H₂₁BrFN₅OS[M+H]⁺:574.0712,found:574.0713.

實(shí)施例9

N-(3-溴-4-氟苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用3-溴-4-氟苯甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.179-180℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):11.01(s,1H，NH,benzimidazole),8.42(d,J＝6.7Hz,1H，phenyl H),8.13(d,J＝8.6Hz,2H，ethylene linkage H),8.02(dd,J＝15.5,11.0Hz,2H，phenyl H),7.75–7.66(m,5H,phenyl H and benzimidazole H),7.51–7.44(m,3H,phenyl H and benzimidazole H),6.70(d,J＝5.0Hz,1H，pyrimidine H),5.00(s,2H,CH₂-S),2.51(d,J＝1.5Hz,3H,CH₃-)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):187.03,166.02,163.20,160.41,159.87,157.93,150.81,143.20,140.61,133.33,131.78,130.73,130.61,129.89,129.28,125.68,123.18,119.45,117.24,117.01,113.73,108.96,108.75,102.59,26.45,25.99,21.95；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₈H₂₁BrFN₅OS[M+H]⁺:574.0712,found:574.0711.

實(shí)施例10

N-(3-羥基苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用3-羥基苯甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.194-195℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.80(s,1H，NH,benzimidazole),7.86(d,J＝8.6Hz,2H，ethylene linkage H),7.62(s,1H,phenyl H),7.51(dd,J＝6.1,3.2Hz,3H,phenyl H),7.44(dd,J＝12.2,5.3Hz,3H,phenyl H),7.29–7.25(m,2H,benzimidazole H),7.16(d,J＝7.7Hz,1H,phenyl H),7.08(dd,J＝9.7,5.0Hz,2H,benzimidazole H),6.73(dd,J＝7.9,2.0Hz,1H,phenyl H),6.51(s,1H,pyrimidine H),4.80(s,2H,CH₂-S),2.32(d,J＝1.7Hz,3H,CH₃-)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):187.31,165.96,163.02,159.88,157.80,150.83,143.62,142.92,135.99,132.09,130.73,129.84,129.68,129.28,125.70,121.72,119.67,119.57,117.73,115.31,113.74,102.55,55.98,26.01,21.84,18.52；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₈H₂₃N₅O₂S[M+H]⁺:494.1650,found:494.1650.

實(shí)施例11

N-(噻吩-2-乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用2-噻吩甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.190-191℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.73(s,1H，NH,benzimidazole),8.02(d,J＝8.8Hz,2H，ethylene linkage H),7.90(d,J＝15.3Hz,1H,phenyl H),7.81(d,J＝5.0Hz,1H,phenyl H),7.73(dd,J＝6.0,3.2Hz,3H,phenyl H),7.64(d,J＝8.8Hz,2H,benzimidazole H),7.59(d,J＝15.3Hz,1H,phenyl H),7.49(dd,J＝6.1,3.2Hz,2H,benzimidazole H),6.65(s,1H，pyrimidine H),4.97(s,2H,CH₂-S),2.27(s,3H,CH₃-)；¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):189.50,166.56,160.37,151.81,151.34,143.88,143.46,132.98,132.55,131.23,130.19,129.52,127.40,126.17,121.46,119.95,114.22,103.08,33.90,26.53,24.11,20.31；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₆H₂₁N₅OS₂[M+H]⁺:484.1266,found:484.1266.

實(shí)施例12

N-(呋喃-2-乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-甲基嘧啶-4-胺的制備

用2-呋喃甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.186-187℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.68(s,1H，NH,benzimidazole),7.97(dd,J＝5.2,3.5Hz,3H,funan H and ethylene linkage H),7.73(dd,J＝6.2,3.2Hz,2H,funan H),7.63(d,J＝8.8Hz,2H,benzimidazole H),7.56(s,2H,benzimidazole H),7.50(dd,J＝6.2,3.2Hz,2H,phenyl H),7.14(d,J＝3.3Hz,1H,phenyl H),6.72(dd,J＝3.4,1.8Hz,1H,phenyl H),6.63(s,1H，pyrimidine H),4.96(s,2H,CH₂-S),2.27(s,3H,CH₃-).¹³C NMR(100MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):186.69,165.99,159.89,151.26,150.84,146.09,142.93,131.98,130.76,129.88,129.45,125.73,119.58,118.65,116.69,113.76,113.10,102.55,26.01,21.83.；HR-MS(ESI)Calcd for C₂₆H₂₁N₅O₂S[M+H]⁺:468.1494,found:468.1494.

實(shí)施例13

N-(3,5-二氟苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺的制備

用苯甲酰乙酸乙酯替代乙酰乙酸乙酯，3,5-二氟苯甲醛替代3,4,5-三甲氧基苯甲醛，制備方法同實(shí)施例1。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.222-223℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.68(s,1H，NH,benzimidazole),8.22(d,J＝8.8Hz,2H,ethylene linkage H),8.12(d,J＝15.6Hz,1H,phenyl H),7.88–7.82(m,4H,phenyl H),7.78–7.68(m,5H,phenyl H),7.51–7.44(m,5H,phenyl H and benzimidazole H),7.35(dd,J＝10.3,8.1Hz,1H,phenyl H),7.24(s,1H,pyrimidine H),5.03(s,2H,CH₂-S)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):186.89,167.79,163.87,161.65,161.42,161.29,160.52,151.75,144.23,140.39,138.62,135.65,131.21,130.97,130.74,130.10,128.81,126.36,125.42,124.64,118.62,113.73,112.72,111.76,111.50,105.31,99.90,26.40；HR-MS(ESI)Calcd for C₃₃H₂₃F₂N₅O₂S[M+H]⁺:576.1669,found:576.1669。

實(shí)施例14

N-(3,5-二氯苯乙烯基苯基酮)-2-(苯并咪唑-2-亞甲硫基)-6-苯基嘧啶-4-胺的制備

用3,5-二氯苯甲醛替代3,5-二氟苯甲醛，制備方法同實(shí)施例13。

產(chǎn)物為黃色粉末狀固體。m.p.253-254℃；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):10.72(s,1H，NH,benzimidazole),8.22(d,J＝8.8Hz,2H,ethylene linkage H),8.15(d,J＝15.6Hz,1H,phenyl H),8.08(d,J＝1.6Hz,2H,phenyl H),7.88–7.82(m,5H,phenyl H),7.73(dd,J＝6.2,3.2Hz,2H,benzimidazole H),7.70(s,1H,phenyl H),7.68–7.66(m,1H,phenyl H),7.49–7.45(m,5H,phenyl H and benzimidazole H),7.25(s,1H,pyrimidine H),5.03(s,2H,CH₂-S)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆,δ,ppm):191.45,186.89,167.83,161.72,160.58,151.84,144.31,139.96,138.80,138.59,135.71,134.60,133.78,131.19,131.04,130.80,130.20,129.22,128.86,127.56,127.17,126.43,125.54,124.88,118.68,113.80,99.98,26.44；HR-MS(ESI)Calcd for C₃₃H₂₃Cl₂N₅OS[M+H]⁺:608.1078,found:608.1077。

應(yīng)用例1

體外抗腫瘤活性測試：以CCK-8法采用四種細(xì)胞系，分別為胃癌細(xì)胞(MGC-803)、人肝癌細(xì)胞(Hepg2)、人食管癌細(xì)胞(EC109)、人乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231)。

收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入100μl，鋪板調(diào)整待測細(xì)胞密度，(邊緣孔用PBS填充)。體積百分5％CO₂下37℃孵育24h，至細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平地板)，加入濃度梯度本發(fā)明合成的藥物，一般設(shè)9個濃度，每孔200μl，設(shè)3個復(fù)孔。體積百分5％CO₂下37℃孵育72h，倒置顯微鏡下觀察。每孔加入5μLCCK-8進(jìn)行染色，繼續(xù)培養(yǎng)72h。終止培養(yǎng)，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD450nm處測量各孔的吸光值。用SPSS軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并計(jì)算IC₅₀值。

體外抗腫瘤活性測試表