本發(fā)明屬于生物化工領(lǐng)域，具體涉及一種虎杖甙糖苷化的方法。
背景技術(shù)：
虎杖甙是是多酚類化合物白藜蘆醇的單葡萄糖苷，化學(xué)名稱為3,4’-5-三羥基二苯乙烯 3-O-D-葡萄糖苷，主要來源于花生、葡萄（紅葡萄酒）、虎杖、桑椹等植物。虎杖甙是一種生物性很強的天然多酚類物質(zhì)，是傳統(tǒng)中藥的有效活性成分，具有抗感染，預(yù)防腫瘤，降低血小板聚集，預(yù)防和治療動脈粥樣硬化、心腦血管疾病等，具有廣泛的應(yīng)用前景。
虎杖甙在水中溶解度不高，難以被人體吸收，因此在食品、藥品和化妝品領(lǐng)域中受到限制。將虎杖甙進行糖苷化后可以較好的解決該問題。目前已經(jīng)有利用環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶進行虎杖甙糖苷化的報道，如Process Biochemistry 47(2012): 528–532，J. Agric. Food Chem. 2012, 60, 8183 – 8189等。目前公開的方法存在轉(zhuǎn)化率低(<80%),輔料昂貴（α-環(huán)糊精），采用低成本輔料（如淀粉等）轉(zhuǎn)化率低等問題。最為關(guān)鍵的是，目前，由于無法徹底將底物虎杖甙轉(zhuǎn)化完全，目前公開的方法未報到如何進行產(chǎn)品和底物的分離，因此難以放大等問題，難以實用化。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種虎杖甙糖苷化的方法。
為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種虎杖甙糖苷化的方法，以虎杖甙為底物，在環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶和糖基供體的存在下，在pH為5~7、溫度為40~70℃的水溶液中攪拌反應(yīng)，HPLC檢測反應(yīng)進程至產(chǎn)品虎杖甙糖苷不再增加，結(jié)束反應(yīng)，而后進行產(chǎn)品和底物分離的后處理操作，具體的，先除去反應(yīng)液中多余的糖基供體，再采用萃取法或柱層析法將產(chǎn)品和底物進行分離。
優(yōu)選地，采用萃取法進行產(chǎn)品和底物分離的后處理操作時，其具體過程如下：將大孔樹脂Ⅰ通過濃度為95%的乙醇浸泡過夜后濕法裝柱，而后用蒸餾水沖洗至無乙醇流出；將反應(yīng)液過濾、濃縮后上樣，采用蒸餾水沖洗至無糖基供體流出，之后再采用濃度為40%的乙醇沖洗至所有產(chǎn)品流出，最后合并產(chǎn)品樣品，濃縮并采用等體積的乙酸乙酯進行多次萃取，收集水層、凍干得產(chǎn)品純品。
進一步優(yōu)選地，所述的大孔樹脂Ⅰ為DM18大孔吸附樹脂。
進一步優(yōu)選地，所述反應(yīng)過程中所采用的糖基供體為α-環(huán)糊精、玉米淀粉或其組合。
優(yōu)選地，采用柱層析法進行產(chǎn)品和底物分離的后處理操作時，其具體過程如下：在層析柱中裝入大孔樹脂Ⅱ并用無水乙醇浸泡過夜，依次采用三倍層析柱體積的無水乙醇和去離子水對所述大孔樹脂Ⅱ進行沖洗，待用；將反應(yīng)液進行離心處理，收集液體，并上樣，上樣后采用去離子水沖洗，最后采用濃度為30%的乙醇溶液進行洗脫，收集洗脫液，HPLC檢測分析，合并底物含量小于1%的溶液，將溶劑置換成水，凍干得產(chǎn)品純品。
進一步優(yōu)選地，所述的大孔樹脂Ⅱ為購自西安藍曉科技新材料股份有限公司生產(chǎn)的型號為LXT-J420大孔吸附樹脂。
進一步優(yōu)選地，所采用的糖基供體為玉米淀粉。
優(yōu)選地，反應(yīng)過程中，所述的環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶、糖基供體與虎杖甙的投料質(zhì)量比為：0.5-1: 60-90:6。
由于上述技術(shù)方案的運用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點：本發(fā)明的虎杖甙糖苷化的方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，在對虎杖甙糖苷化后，再采用萃取或柱層析法將產(chǎn)品和底物進行分離，能夠得到純度達98%以上、含量達90%以上的產(chǎn)品，節(jié)約了生產(chǎn)成本，提高了產(chǎn)品收率，解決了現(xiàn)有技術(shù)中虎杖甙糖苷1化后底物和產(chǎn)品難以分離的問題，可進行放大生產(chǎn)，實用性強。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細的說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。實施例中采用的實施條件可以根據(jù)具體使用的不同要求做進一步調(diào)整，未注明的實施條件為常規(guī)實驗中的條件。
實施例1（采用α-環(huán)糊精作為糖基供體反應(yīng)）
底物虎杖甙18 g，加入環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶（購自天野酶制劑）3 mL，糖基供體α-環(huán)糊精 270 g，去離子水2 L，調(diào)節(jié)pH至5.5，加熱至60℃，攪拌6小時后，HPLC檢測轉(zhuǎn)化率為90%，停止反應(yīng)，進行后處理。
實施例2（采用玉米淀粉作為糖基供體反應(yīng)）
底物虎杖甙45 g，加入環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶（購自天野酶制劑）7.5 mL，糖基供體玉米淀粉450 g，去離子水2 L，調(diào)節(jié)pH至5.5，加熱至60℃，攪拌6小時后HPLC檢測轉(zhuǎn)化率為70%，停止反應(yīng)，進行后處理。
實施例3（萃取法后處理）
將實施例1中的反應(yīng)液經(jīng)濾紙過濾后，濃縮一倍后，過DM18 大孔樹脂（購自山東魯抗立科化學(xué)有限公司）以除去糖基供體，具體步驟為先將100 g大孔樹脂用濃度為95%的乙醇浸泡過夜再濕法裝柱，采用蒸餾水沖洗至無乙醇流出，上樣后用蒸餾水沖洗至無糖基供體流出，采用濃度為40%的乙醇沖洗至所有產(chǎn)品流出，合并產(chǎn)品樣品，濃縮至0.5 L，用等體積的乙酸乙酯萃取10次，收集水層凍干得產(chǎn)品36 g（收率90%）, HPLC純度98%，含量90%，HPLC分析虎杖甙含量為0.1%。
實施例4 （柱層析法后處理）
將實施例2中的反應(yīng)液經(jīng)4000 r/m離心10 min，收集液體。預(yù)裝9 L大孔吸附樹脂LXT-J420（購自西安藍曉科技新材料股份有限公司）于層析柱中，用9 L無水乙醇浸泡過夜后用3*9 L無水乙醇沖洗，然后再用3*9 L去離子水沖洗待用。將上述離心液體上樣并用2*9 L去離子水沖洗，然后用3*9 L 30%乙醇水溶液洗脫，按4.5 L/瓶收集最后用3*9 L乙醇沖洗柱子得到的洗脫液。將上述收集瓶送HPLC分析，合并其中虎杖甙含量小于1%的收集瓶，并將溶劑置換成水，凍干得產(chǎn)品54 g(收率70%)。HPLC純度99%，產(chǎn)品含量99%，HPLC分析虎杖甙含量為0.2%。
上述實施例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。