本發(fā)明涉及一種藥用化合物及其制備方法和在抗腫瘤方面的應(yīng)用，特別是涉及一類新的青蒿素-香豆素雜合分子及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

“分子雜合”是指在原有的單靶點(diǎn)藥物基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)多靶點(diǎn)藥物或具有協(xié)同作用的藥物，其主要類型包括：將作用機(jī)制不同的兩類藥物(或化學(xué)結(jié)構(gòu))通過能被特定酶水解的連接基團(tuán)連接而成的新分子(藥物)，它在體內(nèi)被酶水解后可形成兩類與不同靶標(biāo)結(jié)合的藥物而發(fā)揮協(xié)同藥理作用，亦稱為協(xié)同作用前藥；另外一種類型是：結(jié)合方式與協(xié)同作用前藥相似，但連接基團(tuán)穩(wěn)定，不易被酶水解，雜合分子中的兩類化學(xué)結(jié)構(gòu)在體內(nèi)各自與不同的靶標(biāo)結(jié)合，稱為雙重作用(靶點(diǎn))藥。雜合分子(藥物)在改善原有藥物的理化性質(zhì)、減少毒副作用、增加療效、降低耐藥性等方面發(fā)揮了重要作用，在抗腫瘤、抗菌和抗病毒藥物的分子設(shè)計(jì)中得到了大量應(yīng)用?！胺肿与s合”作為一種經(jīng)濟(jì)、高效的新藥研發(fā)手段，在現(xiàn)今的藥物研發(fā)中發(fā)揮著重要的作用。

青蒿素是一種從菊科艾屬植物黃花蒿的莖葉中提取出來的，含過氧基團(tuán)的倍半萜內(nèi)酯，青蒿素及其衍生物的抗瘧作用的療效和特點(diǎn)已被肯定。近年來的大量研究表明，青蒿素及其衍生物除了具有很好的抗瘧疾作用外，還具有抗寄生蟲、抗腫瘤、抗真菌、抗病毒、增強(qiáng)免疫等生物活性。特別是通過“分子雜合”方法獲得的多種青蒿素衍生物，不僅有效地改善了青蒿素類藥物所固有的水溶性差，半衰期短、生物利用度低等缺陷，而且抗腫瘤活性極大提高，一些結(jié)構(gòu)新穎的衍生物的抗腫瘤活性甚至優(yōu)于常用的化療藥物，極具發(fā)展?jié)摿ΑＧ噍锼仡愃幬锟鼓[瘤機(jī)制尚未完全明確，目前認(rèn)為其主要機(jī)制包括：作用于線粒體依賴性細(xì)胞凋亡通路，抑制NF-κB活化，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡；阻滯細(xì)胞周期；由Fe²⁺介導(dǎo)直接殺傷腫瘤細(xì)胞；通過作用于纖維蛋白溶解系統(tǒng)uPA、抑制VEGF誘導(dǎo)的血管生成作用來抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移等。青蒿素類藥物毒副作用小、成本較低，對(duì)多藥耐藥細(xì)胞有效，對(duì)放、化療具有增效作用，預(yù)示其極可能成為具有臨床應(yīng)用價(jià)值的抗癌新藥。

香豆素廣泛存在于自然界，具有抗腫瘤、抗感染、抗病毒及抗菌等多種生物活性，且其抗腫瘤活性常具有腫瘤細(xì)胞高選擇性和對(duì)正常細(xì)胞低毒性的特點(diǎn)。但天然香豆素往往存在活性不理想、水溶性較差或生物利用度低等缺陷，導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受到限制。通過分子雜合方法對(duì)香豆素結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化和改造，從而改善其藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和提高其抗腫瘤活性，或?qū)⒊蔀橄嚓P(guān)領(lǐng)域研究的有效策略。

為進(jìn)一步探索青蒿素類化合物的潛在的生物活性，本發(fā)明采用分子雜合策略，將各種取代的香豆素通過適當(dāng)長度的連接臂引入到二氫青蒿素的C-10位，制得青蒿素-香豆素雜合分子，經(jīng)體外抗腫瘤活性測試及構(gòu)效關(guān)系研究，發(fā)現(xiàn)了多個(gè)有價(jià)值的苗頭化合物，提供了一類新型青蒿素-香豆素雜合分子的結(jié)構(gòu)、制備方法和用途。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種青蒿素-香豆素雜合分子及其制備方法和用途，提供一種其在藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、光學(xué)異構(gòu)體或多晶型物，還提供一種以該衍生物或其鹽為活性成分的組合物。

本發(fā)明涉及結(jié)構(gòu)式如式(I)所示的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、光學(xué)異構(gòu)體或多晶型物

L＝O,O(CH₂)_nO

n＝0～3

R¹，R²獨(dú)立地為氫原子，鹵素，羥基，C₁～C₁₀羧基，C₁～C₁₀酯基，氰基，硝基，C₁～C₁₀烷基，C₁～C₁₀烷氧基，C₃～C₇環(huán)烷基，鹵代的C₁～C₁₀烷基、C₁～C₁₀烷氧基；

按照本發(fā)明，在取代基的定義中：

優(yōu)選地，R¹，R²獨(dú)立地為氫原子，鹵素，羥基，C₁～C₆羧基，C₁～C₆酯基，氰基，硝基，C₁～C₆烷基，C₁～C₆烷氧基，C₃～C₇環(huán)烷基，鹵代的C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基；

按照本發(fā)明，在取代基的定義中：

優(yōu)選地，R¹，R²獨(dú)立地為氫原子，鹵素，羥基，C₁～C₄羧基，C₁～C₄酯基，氰基，硝基，C₁～C₄烷基，C₁～C₄烷氧基，C₃～C₇環(huán)烷基，鹵代的C₁～C₄烷基、C₁～C₄烷氧基；

按照本發(fā)明，在取代基的定義中：

優(yōu)選的R¹，R²＝氫原子，鹵素，羥基，C₁～C₂羧基，C₁～C₂酯基，氰基，硝基，三氟甲基，甲基、甲氧基。

按照本發(fā)明，特別優(yōu)選通式(I)的衍生物為：

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-三氟甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-氰基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-硝基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲氧基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-3,4-二甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-3-氯-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-2H-苯并噻喃-2-酮-3-羧酸乙酯；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-4-三氟甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-4-氰基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-4-硝基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-4-甲氧基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-3,4-二甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-3-氯-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-2H-苯并噻喃-2-酮-3-羧酸乙酯；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-4-三氟甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-4-氰基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-4-硝基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-4-甲氧基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-3,4-二甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-3-氯-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮；

7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-2H-苯并噻喃-2-酮-3-羧酸乙酯

及其藥學(xué)上可接受的溶劑化物、光學(xué)異構(gòu)體或多晶型物。

而且，本發(fā)明的藥物可以是衍生物本身與藥學(xué)上可接受的稀釋劑、輔助劑和/或載體混合的藥物，也可以是以本發(fā)明衍生物或其鹽作為活性成為之一的組合物與藥學(xué)上可接受的稀釋劑、輔助劑和/或載體混合的藥物。

將本發(fā)明的藥物加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，可以制成藥學(xué)上可接受的各種劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑或各種緩控釋制劑等。

本發(fā)明藥物的載體是藥學(xué)領(lǐng)域中可得到的常見類型，包括：粘合劑、潤滑劑、崩解劑、助溶劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑、懸浮劑、無色素、矯味劑、防腐劑、加溶劑或基質(zhì)等。

上式(I)衍生物用于患者的臨床劑量可以根據(jù)：活性成分在體內(nèi)的治療功效和生物利用度、它們的代謝和排泄速率和患者的年齡、性別、疾病期來進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，成人的每日劑量一般應(yīng)為10～500mg，優(yōu)選為50～300mg。

本發(fā)明所述的單位制劑是制成常用的藥用劑型的計(jì)量單位，每單位制劑即片劑表述為每片、膠囊劑表述為每粒、顆粒劑表述為每袋或口服液表述為每支等。

本發(fā)明的化合物可作為活性成分用于抗腫瘤活性，本發(fā)明也包括給予患有或易患有此病的病人治療有效量。

本發(fā)明的式(I)化合物的制備：

目標(biāo)化合物的合成路線描述了本發(fā)明的式(I)化合物的制備，所有的原料都是通過這些合成路線中描述的方法、通過有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法制備的或者可商購。本發(fā)明的全部最終化合物都是通過這些合成路線中描述的方法或通過與其類似的方法制備的，這些方法是有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。這些合成路線中應(yīng)用的全部可變因數(shù)如下文的定義。

按照本發(fā)明的式(I)化合物，在下述的目標(biāo)化合物合成路線中，取代基如前面所定義。

目標(biāo)化合物的合成路線

將二氫青蒿素(A1)與等摩爾的三氟乙酸酐、三乙胺在5～10體積份的二氯甲烷中于-5～25℃反應(yīng)1～10小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，在該溶液中加入事先制得的香豆素類化合物(A2)，室溫下攪拌下反應(yīng)5～24h，TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn)，得目標(biāo)化合物(I)粗品，經(jīng)有機(jī)溶劑(如二氯甲烷)萃取，硅膠柱層析法純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝1～8:1，得目標(biāo)化合物(I)精品。

本發(fā)明所述的重量份與體積份的關(guān)系是g與ml的關(guān)系。

具體實(shí)施方式：

聯(lián)系如下實(shí)施例，將更好地理解本發(fā)明的化合物和它們的制備，這些實(shí)施例旨在闡述而不是限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)驗(yàn)例1：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-1)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-羥基-4-甲基香豆素1.8g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)24h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.01g，收率47％。mp.92～93℃,LC-MS(m/z):443.1[M+H]⁺,907.3[2M+Na]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.97(d,J＝4.5Hz,3H,9-CH₃),1.04(d,J＝5.4Hz,3H,6-CH₃),1.26-1.41(m,3H),1.44(s,3H,3-CH₃),1.70-2.05(m,6H),2.35(m,1H,4-H),2.40(s,3H,4’-CH₃),2.84-2.89(m,1H,4-H),5.43(s,1H,12-H),5.58(d,J＝2.1Hz,1H,10-H),6.15(s,1H,3’-H),7.05(dd,J＝1.8Hz,J＝6.3Hz,1H,6’-H),7.11(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),7.51(m,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例2：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-三氟甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-2)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)攪拌反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-羥基-4-三氟甲基香豆素2.3g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)14小時(shí)(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.53g，收率51％。mp.186～187℃,LC-MS(m/z):497.17[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.97(d,J＝4.5Hz,3H,9-CH₃),1.04(d,J＝5.4Hz,3H,6-CH₃),1.27-1.35(m,3H),1.45(s,3H,3-CH₃),1.59-1.65(m,1H),1.71-1.75(m,1H),1.84-1.97(m,3H),2.01-2.06(m,1H),2.35-2.43(m,1H,4-H),2.84-2.91(m,1H,4-H),5.42(s,1H,12-H),5.61(d,J＝2.4Hz,1H,10-H),6.64(s,1H,3’-H),7.09(dd,J＝1.8Hz,J＝6.9Hz,1H,6’-H),7.19(d,J＝1.8Hz,1H,),7.63(m,1H,5’-H)

實(shí)驗(yàn)例3：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-硝基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-3)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)攪拌反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-羥基-4-硝基香豆素2.1g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)5小時(shí)(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體1.89g，收率40％。mp.155～157℃,LC-MS(m/z):473.17[M]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.97(d,J＝4.5Hz,3H,9-CH₃),1.04(d,J＝5.4Hz,3H,6-CH₃),1.27-1.33(m,3H),1.45(s,3H,3-CH₃),1.59-1.65(m,1H),1.72-1.74(m,1H),1.84-1.97(m,3H),2.01-2.06(m,1H),2.33-2.43(m,1H,4-H),2.80-2.81(m,1H,4-H),5.38(s,1H,12-H),5.61(d,J＝2.4Hz,1H,10-H),6.64(s,1H,3’-H),6.89(dd,J＝1.8Hz,J＝6.9Hz,1H,6’-H),7.13(d,J＝1.8Hz,1H,),7.58(m,1H,5’-H)

實(shí)驗(yàn)例4：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-氰基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-4)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)攪拌反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-羥基-4-氰基香豆素1.9g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)5.5小時(shí)(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.58g，收率57％。mp.168～1170℃,LC-MS(m/z):454.18[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.97(d,J＝4.5Hz,3H,9-CH₃),1.06(d,J＝5.4Hz,3H,6-CH₃),1.27-1.33(m,3H),1.41(s,3H,3-CH₃),1.60-1.67(m,1H),1.76-1.77(m,1H),1.84-1.97(m,3H),2.01-2.06(m,1H),2.35-2.45(m,1H,4-H),2.81-2.85(m,1H,4-H),5.39(s,1H,12-H),5.65(d,J＝2.4Hz,1H,10-H),6.69(s,1H,3’-H),6.93(dd,J＝1.8Hz,J＝6.9Hz,1H,6’-H),7.19(d,J＝1.8Hz,1H,),7.65(m,1H,5’-H)

實(shí)驗(yàn)例5：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲氧基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-5)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-羥基-4-甲氧基香豆素1.9g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)12h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.02g，收率44％。mp.112～114℃,LC-MS(m/z):459.2[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.96(d,J＝4.5Hz,3H,9-CH₃),1.19(d,J＝5.4Hz,3H,6-CH₃),1.24-1.40(m,3H),1.41(s,3H,3-CH₃),1.71-2.11(m,6H),2.35(m,1H,4-H),2.40(s,3H,4’-CH₃),2.84-2.89(m,1H,4-H),3.53(s,3H,-OCH₃),5.39(s,1H,12-H),5.58(d,J＝2.1Hz,1H,10-H),5.95(s,1H,3’-H),6.91(dd,J＝1.8Hz,J＝6.3Hz,1H,6’-H),7.01(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),7.73(m,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例6：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-3,4-二甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-6)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-羥基-3,4-二甲基香豆素1.9g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)24h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.28g，收率50％。mp.109～111℃,LC-MS(m/z):457.2[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.97(d,J＝5.6Hz,3H,9-CH₃),1.04(d,J＝7.6Hz,3H,6-CH₃),1.24-1.35(m,3H),1.44(s,3H,3-CH₃),1.59-1.95(m,6H),2.01-2.05(m,1H),2.18(s,3H,4’-CH₃),2.37(s,3H,3’-CH₃),2.39-2.44(m,1H),2.80-2.88(m,1H,4-H),5.44(s,1H,12-H),5.56(d,J＝3.2Hz,1H,10-H),7.03(dd,J＝2.4Hz,J＝8.8Hz,1H,6’-H),7.09(d,J＝2.4Hz,1H,8’-H),7.50(d,J＝8.8Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例7：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-3-氯-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-7)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-羥基-3-氯-4-甲基香豆素2.1g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)12h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.67g，收率56％。mp.97～98℃,LC-MS(m/z):477.1[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.97(d,3H,J＝6Hz,9-CH₃),1.04(d,3H,J＝7.2Hz,6-CH₃),1.24-1.35(m,3H),1.45(s,1H,3-CH₃),1.59-1.64(m,1H),1.71-1.75(m,1H),1.82-1.98(m,3H),2.01-2.07(m,1H),2.34-2.42(m,1H),2.55(s,3H,4’-CH₃),2.82-2.89(m,1H,4-H),5.43(s,1H,12-H),5.58(d,1H,J＝3.2Hz),7.09(dd,1H,J＝2.4Hz,J＝8.8Hz,6’-H),7.13(d,1H,J＝2.4Hz,8’-H),7.53(d,1H,J＝8.8Hz,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例8：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-2H-苯并噻喃-2-酮-3-羧酸乙酯(TY-8)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-羥基香豆素-3-羧酸乙酯2.3g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)24h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.05g，收率41％。mp.82～84℃,LC-MS(m/z):501.2[M+H]⁺,523.1[M+Na]⁺，¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.97(d,J＝4.2Hz,3H,9-CH₃),1.03(d,J＝5.7Hz,3H,6-CH₃),1.21-1.34(m,4H),1.40(t,J＝5.4Hz,3H,-COOCH₂CH₃),1.44(s,3H,3-CH₃),1.59-1.65(m,1H),1.70-1.74(m,1H),1.75-1.97(m,3H),2.01-2.05(m,1H),2.34-2.42(td,1H,4-H),2.83-2.90(m,1H,4-H),4.40(q,J＝5.4Hz,2H,-COOCH₂CH₃),5.41(s,1H,12-H),5.60(d,J＝2.4Hz,1H,10-H),7.06(dd,J＝6.3Hz,J＝1.5Hz,1H,6’-H),7.13(d,J＝1.5Hz,1H,8’-H),7.51(d,J＝6.3Hz,1H,5’-H),8.50(s,1H,3’-H)。

實(shí)驗(yàn)例9：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-9)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(2-羥基乙氧基)-4-甲基香豆素2.4g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)18h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.38g，收率49％。mp.64～66℃,HR-MS m/z:509.2075[M+Na]⁺，¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.89(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.92(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.18-1.28(m,3H),1.44(s,3H,3-CH₃),1.49-1.55(m,2H),1.58-1.80(m,3H),1.86-1.89(m,1H),2.02-2.06(m,1H),2.33-2.37(m,1H,4-H),2.40(s,3H,4’-CH₃),2.63-2.66(m,1H,4-H),3.79-3.85(m,1H),4.15-4.25(m,3H),4.89(d,J＝1.8Hz,1H,10-H),5.45(s,1H,12-H),6.14(s,1H,3’-H),6.83(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),6.86(dd,J＝6.6Hz,J＝1.8Hz,1H,6’-H),7.50(d,J＝6.6Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例10：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-4-三氟甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-10)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(2-羥基乙氧基)-4-三氟甲基香豆素2.7g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)24h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體3.12g，收率58％。mp.64～66℃,HR-MS m/z:563.2[M+Na]⁺，¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.89(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.93(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.21-1.27(m,3H),1.42-1.43(m,1H),1.45(s,3H,3-CH₃),1.46-1.50(m,1H),1.51-1.55(m,1H),1.68-1.74(m,2H),1.86-1.90(m,1H),2.01-2.07(m,1H),2.33-2.41(m,1H,4-H),2.61-2.69(m,1H,4-H),3.81-3.86(m,1H),4.18-4.26(m,3H),4.89(d,J＝2.7Hz,1H,10-H),5.44(s,1H,12-H),6.63(s,1H,3’-H),6.90(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),6.93(dd,J＝1.8Hz,J＝6.6Hz,1H,6’-H),7.63(dd,J＝6.6Hz,J＝1.2Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例11：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-4-硝基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-11)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(2-羥基乙氧基)-4-硝基甲基香豆素2.5g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)12h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體3.3g，收率64％。mp.69～71℃,HR-MS m/z:540.19[M+Na]⁺，¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.87(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.91(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.15-1.28(m,3H),1.31-1.35(m,1H),1.37(s,3H,3-CH₃),1.39-1.42(m,1H),1.48-1.59(m,1H),1.69-1.75(m,2H),1.88-1.93(m,1H),2.11-2.17(m,1H),2.33-2.41(m,1H,4-H),2.61-2.69(m,1H,4-H),3.81-3.86(m,1H),4.18-4.26(m,3H),4.79(d,J＝2.7Hz,1H,10-H),5.54(s,1H,12-H),6.53(s,1H,3’-H),6.93(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),6.90(dd,J＝1.8Hz,J＝6.6Hz,1H,6’-H),7.59(dd,J＝6.6Hz,J＝1.2Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例12：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-4-氰基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-12)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(2-羥基乙氧基)-4-氰基甲基香豆素2.3g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)10h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.4g，收率49％。mp.97～99℃,HR-MS m/z:498.20[M+H]⁺，¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.87(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.91(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.05-1.21(m,3H),1.29-1.31(m,1H),1.35(s,3H,3-CH₃),1.38-1.42(m,1H),1.44-1.51(m,1H),1.66-1.74(m,2H),1.87-1.98(m,1H),2.11-2.17(m,1H),2.29-2.36(m,1H,4-H),2.66-2.72(m,1H,4-H),3.84-3.89(m,1H),4.14-4.22(m,3H),4.77(d,J＝2.7Hz,1H,10-H),5.48(s,1H,12-H),6.56(s,1H,3’-H),6.96(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),7.11(dd,J＝1.8Hz,J＝6.6Hz,1H,6’-H),7.62(dd,J＝6.6Hz,J＝1.2Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例13：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-4-甲氧基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-13)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(2-羥基乙氧基)-4-甲氧基香豆素2.4g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)16h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.61g，收率52％。mp.96～98℃,HR-MS m/z:525.2[M+Na]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.89(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.93(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.21-1.27(m,3H),1.42-1.43(m,1H),1.45(s,3H,3-CH₃),1.46-1.50(m,1H),1.51-1.55(m,1H),1.68-1.74(m,2H),1.86-1.90(m,1H),2.01-2.07(m,1H),2.33-2.41(m,1H,4-H),2.61-2.69(m,1H,4-H),3.53(s,3H,-OCH₃),3.77-3.84(m,1H),4.11-4.22(m,3H),4.81(d,J＝2.7Hz,1H,10-H),5.41(s,1H,12-H),6.87(s,1H,3’-H),6.94(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),6.97(dd,J＝1.8Hz,J＝6.6Hz,1H,6’-H),7.66(dd,J＝6.6Hz,J＝1.2Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例14：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-3,4-二甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-14)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(2-羥基乙氧基)-3,4-二甲基香豆素2.3g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)8h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.95g，收率59％。mp.88～90℃,HR-MS m/z:501.2[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.94(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.96(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.23-1.29(m,3H),1.42-1.43(m,1H),1.45(s,3H,3-CH₃),1.46-1.50(m,1H),1.51-1.55(m,1H),1.68-1.74(m,2H),1.86-1.90(m,1H),2.01-2.07(m,1H),,2.18(s,3H,4’-CH₃),2.37(s,3H,3’-CH₃),2.41-2.44(m,1H,4-H),2.61-2.69(m,1H,4-H),,3.69-3.86(m,1H),4.11-4.22(m,3H),4.73(d,J＝2.7Hz,1H,10-H),5.31(s,1H,12-H),6.78(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),6.88(dd,J＝1.8Hz,J＝6.6Hz,1H,6’-H),7.61(dd,J＝6.6Hz,J＝1.2Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例15：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-3-氯-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-15)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(2-羥基乙氧基)-3-氯-4-甲基香豆素2.5g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)16h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.08g，收率40％。mp.108～110℃,HR-MS m/z:521.18[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.96(d,J＝5.6Hz,3H,9-CH₃),1.04(d,J＝7.2Hz,3H,6-CH₃),1.19-1.37(m,3H),1.44(s,3H,3-CH₃),1.60-1.71(m,2H),1.86-1.98(m,3H),1.98-2.03(m,1H),2.04-2.09(m,1H),2.34-2.42(m,1H,4-H),2.55(s,3H,4’-CH₃),2.82-2.89(m,1H,4-H),3.79-3.85(m,1H),4.15-4.25(m,3H),5.43(s,1H,12-H),5.58(d,J＝3.6Hz,1H,10-H),7.09(dd,J＝2.4Hz,J＝8.8Hz,1H,6’-H),7.13(d,J＝2.4Hz,1H,8’-H),7.53(d,J＝8.8Hz,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例16：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]乙氧基}-2H-苯并噻喃-2-酮-3-羧酸乙酯(TY-16)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(2-羥基乙氧基)香豆素-3-羧酸乙酯2.8g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)16h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.93g，收率54％。mp.79～81℃,HR-MS m/z:545.2[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.96(d,J＝5.6Hz,3H,9-CH₃),1.04(d,J＝7.2Hz,3H,6-CH₃),1.19-1.37(m,3H),1.44(s,3H,3-CH₃),1.60-1.71(m,2H),1.86-1.98(m,3H),1.98-2.03(m,1H),2.04-2.09(m,1H),2.34-2.42(m,1H,4-H),2.55(s,3H,4’-CH₃),2.82-2.89(m,1H,4-H),3.79-3.85(m,1H),4.15-4.25(m,3H),4.40(q,J＝5.4Hz,2H,-COOCH₂CH₃),5.41(s,1H,12-H),5.60(d,J＝2.4Hz,1H,10-H),7.06(dd,J＝6.3Hz,J＝1.5Hz,1H,6’-H),7.13(d,J＝1.5Hz,1H,8’-H),7.51(d,J＝6.3Hz,1H,5’-H),8.50(s,1H,3’-H)。

實(shí)驗(yàn)例17：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-17)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(3-羥基丙氧基)-4-甲基香豆素2.3g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)16h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.38g，收率49％。mp.64～66℃,HR-MS m/z:509.2075[M+Na]⁺，¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.89(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.92(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.18-1.28(m,3H),1.44(s,3H,3-CH₃),1.49-1.55(m,2H),1.58-1.80(m,3H),1.86-1.89(m,1H),2.02-2.06(m,1H),2.33-2.37(m,1H,4-H),2.40(s,3H,4’-CH₃),2.63-2.66(m,1H,4-H),3.79-3.85(m,1H),4.15-4.25(m,3H),4.89(d,J＝1.8Hz,1H,10-H),5.45(s,1H,12-H),6.14(s,1H,3’-H),6.83(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),6.86(dd,J＝6.6Hz,J＝1.8Hz,1H,6’-H),7.50(d,J＝6.6Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例18：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-4-三氟甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-18)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(3-羥基丙氧基)-4-三氟甲基香豆素2.9g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)24h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體3.15g，收率57％。mp.89～91℃,HR-MS m/z:577.2[M+Na]⁺，¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.84(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.90(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.18-1.28(m,3H),1.41(s,3H,3-CH₃),1.39-1.45(m,2H),1.61-1.88(m,3H),1.86-1.89(m,1H),2.02-2.11(m,1H),2.29-2.33(m,1H,4-H),2.40(s,3H,4’-CH₃),2.63-2.66(m,1H,4-H),3.79-3.85(m,1H),4.14-4.25(m,3H),4.89(d,J＝1.8Hz,1H,10-H),5.35(s,1H,12-H),6.14(s,1H,3’-H),6.86(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),6.90(dd,J＝6.6Hz,J＝1.8Hz,1H,6’-H),7.54(d,J＝6.6Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例19：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-4-氰基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-19)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(3-羥基丙氧基)-4-氰基香豆素2.5g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)16h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.70g，收率53％。mp.97～99℃,HR-MS m/z:534.2[M+Na]⁺，¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.87(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.99(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.03-1.08(m,3H),1.44(s,3H,3-CH₃),1.43-1.47(m,2H),1.66-1.82(m,3H),1.90-1.94(m,1H),2.07-2.15(m,1H),2.21-2.31(m,1H,4-H),2.30(s,3H,4’-CH₃),2.56-2.62(m,1H,4-H),3.74-3.81(m,1H),4.12-4.21(m,3H),4.79(d,J＝1.8Hz,1H,10-H),5.42(s,1H,12-H),6.23(s,1H,3’-H),6.79(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),6.89(dd,J＝6.6Hz,J＝1.8Hz,1H,6’-H),7.72(d,J＝6.6Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例20：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-4-硝基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-20)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(3-羥基丙氧基)-4-硝基香豆素2.7g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)16h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.39g，收率45％。mp.87～89℃,HR-MS m/z:554.2[M+Na]⁺，¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.89(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.97(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.03-1.11(m,3H),1.38(s,3H,3-CH₃),1.40-1.49(m,2H),1.61-1.75(m,3H),1.80-1.88(m,1H),2.01-2.12(m,1H),2.17-2.21(m,1H,4-H),2.33(s,3H,4’-CH₃),2.49-2.52(m,1H,4-H),3.69-3.89(m,1H),4.31-4.391(m,3H),4.87(d,J＝1.8Hz,1H,10-H),5.49(s,1H,12-H),6.44(s,1H,3’-H),6.70(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),7.11(dd,J＝6.6Hz,J＝1.8Hz,1H,6’-H),7.89(d,J＝6.6Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例21：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-4-甲氧基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-21)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(3-羥基丙氧基)-4-甲氧基香豆素2.5g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)16h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.43g，收率47％。mp.69～70℃,HR-MS m/z:539.2[M+Na]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:δ:0.81(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.97(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.10-1.04(m,3H),1.36(s,3H,3-CH₃),1.40-1.49(m,2H),1.62-1.79(m,3H),1.82-1.88(m,1H),2.01-2.12(m,1H),2.15-2.25(m,1H,4-H),2.41(s,3H,4’-CH₃),2.47-2.52(m,1H,4-H),3.51(s,3H,-OCH₃),3.77-3.84(m,1H),4.11-4.22(m,3H),4.81(d,J＝2.7Hz,1H,10-H),5.39(s,1H,12-H),6.77(s,1H,3’-H),6.91(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),6.94(dd,J＝1.8Hz,J＝6.6Hz,1H,6’-H),7.61(dd,J＝6.6Hz,J＝1.2Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例22：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-3,4-二甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-22)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(3-羥基丙氧基)-3,4-二甲基香豆素2.5g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)10h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.83g，收率55％。mp.88～90℃,HR-MS m/z:515.26[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.88(d,J＝5.7Hz,3H,9-CH₃),0.91(d,J＝4.2Hz,3H,6-CH₃),1.21-1.26(m,3H),1.38-1.43(m,2H),1.41-1.44(m,1H),1.46(s,3H,3-CH₃),1.49-1.51(m,1H),1.53-1.58(m,1H),1.65-1.77(m,2H),1.88-1.93(m,1H),2.11-2.17(m,1H),2.28(s,3H,4’-CH₃),2.35(s,3H,3’-CH₃),2.43-2.51(m,1H,4-H),2.64-2.69(m,1H,4-H),3.74-3.88(m,1H),4.13-4.23(m,3H),4.73(d,J＝2.7Hz,1H,10-H),5.38(s,1H,12-H),6.78(d,J＝1.8Hz,1H,8’-H),6.97(dd,J＝1.8Hz,J＝6.6Hz,1H,6’-H),7.74(dd,J＝6.6Hz,J＝1.2Hz,1H,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例23：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-3-氯-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮(TY-23)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(3-羥基丙氧基)-3-氯-4-甲基香豆素2.7g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)24h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.72g，收率51％。mp.121～122℃,HR-MS m/z:535.2[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.90(d,J＝5.6Hz,3H,9-CH₃),1.14(d,J＝7.2Hz,3H,6-CH₃),1.23-1.32(m,3H),1.41(s,3H,3-CH₃),1.49-1.55(m,2H),1.64-1.74(m,2H),1.81-1.92(m,3H),1.99-2.05(m,1H),2.11-2.19(m,1H),2.39-2.47(m,1H,4-H),2.67(s,3H,4’-CH₃),2.81-2.96(m,1H,4-H),3.88-3.96(m,1H),4.22-4.33(m,3H),5.33(s,1H,12-H),5.44(d,J＝3.6Hz,1H,10-H),7.01(dd,J＝2.4Hz,J＝8.8Hz,1H,6’-H),7.22(d,J＝2.4Hz,1H,8’-H),7.49(d,J＝8.8Hz,5’-H)。

實(shí)驗(yàn)例24：7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]丙氧基}-2H-苯并噻喃-2-酮-3-羧酸乙酯(TY-24)的制備

在100mL反應(yīng)瓶中加入2.8g(0.01mol)二氫青蒿素和1.01g(0.01mol)三乙胺，加入30mL干燥的二氯甲烷，攪拌使之溶解，冷卻到-5℃，攪拌下滴加1.4mL(0.01mol)三氟乙酸酐，滴畢，于0℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)，即得10-三氟乙酰氧基二氫青蒿素的二氯甲烷溶液，無需進(jìn)行處理，直接用于下步反應(yīng)。在上面制得的溶液中加入7-(3-羥基丙氧基)香豆素-3-羧酸乙酯2.9g(0.01mol)，加畢室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)16h(TLC監(jiān)測反應(yīng)終點(diǎn))。向反應(yīng)液中再加入30mL二氯甲烷，分出有機(jī)層，并以飽和碳酸氫鈉溶液洗滌5次(5×20mL)，無水硫酸鈉干燥有機(jī)相,濾除干燥劑，減壓蒸出二氯甲烷，得粗品，以柱色譜純化(200-300目硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色固體2.46g，收率44％。mp.141～143℃,HR-MS m/z:559.25[M+H]⁺,¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.94(d,J＝5.6Hz,3H,9-CH₃),1.11(d,J＝7.2Hz,3H,6-CH₃),1.27-1.37(m,3H),1.41(s,3H,3-CH₃),1.51-1.59(m,2H),1.69-1.77(m,2H),1.88-1.92(m,3H),1.97-2.01(m,1H),2.11-2.19(m,1H),2.24-2.41(m,1H,4-H),2.65(s,3H,4’-CH₃),2.81-2.94(m,1H,4-H),3.59-3.67(m,1H),4.19-4.25(m,3H),4.38(q,J＝5.4Hz,2H,-COOCH₂CH₃),5.44(s,1H,12-H),5.71(d,J＝2.4Hz,1H,10-H),7.11(dd,J＝6.3Hz,J＝1.5Hz,1H,6’-H),7.23(d,J＝1.5Hz,1H,8’-H),7.61(d,J＝6.3Hz,1H,5’-H),8.45(s,1H,3’-H)。

實(shí)施例25：片劑的制備

取7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮精品20g，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成片劑1000片，每片含有7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮20mg。

實(shí)施例26：膠囊劑的制備

取7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮精品10g，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成膠囊1000粒，每粒含有7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮10mg。

實(shí)施例27：顆粒劑的制備

取7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮精品25g，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成顆粒劑1000袋，每袋含有7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮25mg。

實(shí)施例28：緩釋片劑的制備

取7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮精品30g，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成緩釋片1000片，每片含有1-7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮30mg。

實(shí)施例29：緩釋膠囊劑的制備

取7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮精品20g，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成緩釋膠囊1000粒，每粒含有7-{[(10S)-二氫青蒿素-10-氧基]}-4-甲基-2H-苯并噻喃-2-酮20mg。

部分化合物的體外抗腫瘤細(xì)胞的應(yīng)用實(shí)例

實(shí)驗(yàn)材料

人宮頸癌細(xì)胞HeLa，人肝癌細(xì)胞HepG2，人纖維肉瘤細(xì)胞HT-1080，人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116，人黑色素瘤細(xì)胞A375-S2，人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，人肺癌細(xì)胞A549，人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞U-937，人慢性髓原白血病細(xì)胞K562，人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞HL60購于American Type Culture Collection(ATCC，Rockville，MD，USA)。細(xì)胞接種在含10％胎牛血清、2％谷氨酰胺的RPMI-1640培養(yǎng)液中，在37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

藥品及試劑

各化合物于無菌條件下，用二甲基亞砜(DMSO)溶解后，用RPMI 1640培養(yǎng)液稀釋至所需濃度，DMSO終濃度小于0.5％。

胎牛血清，北京元亨圣馬生物技術(shù)研究所。

5-氟尿嘧啶(5-FU)、胰蛋白酶、谷氨酰胺、青霉素、鏈霉素、二甲基亞砜(DMSO)、四甲基偶氮唑(MTT)購于美國Sigma公司。

儀器

二氧化碳培養(yǎng)箱(NuAir，USA)、酶聯(lián)免疫分析儀(Tecan，Austria)、96孔培養(yǎng)板(Corning，USA)、倒置顯微鏡(Motic，China)。

基本原理：

四甲基偶氮唑(3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT)是一種能接受氫原子的染料，可作用于活細(xì)胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素c的作用下tetrazolium環(huán)開裂，生成藍(lán)紫色的結(jié)晶甲臜(formazan)，甲臜結(jié)晶的生成量僅與活細(xì)胞數(shù)目成正比(死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原)。用DMSO溶解甲臜后，在一定波長下用酶標(biāo)儀測定光密度值，即可定量測出細(xì)胞的存活率。

操作步驟：

貼壁細(xì)胞 選用對(duì)數(shù)生長期的貼壁腫瘤細(xì)胞，用胰酶消化后，用含10％小牛血清的RPMIl640培養(yǎng)基配成5×10⁴/ml的細(xì)胞懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔100l，37℃，5％CO₂培養(yǎng)24h。實(shí)驗(yàn)組更換新的含不同濃度被測樣品的培養(yǎng)液，對(duì)照組則更換含等體積溶劑的培養(yǎng)液，每組設(shè)3個(gè)平行孔，37℃，5％CO₂培養(yǎng)48h。棄去上清液，用PBS小心洗2次，每孔加入100l新鮮配制的含0.5mg/ml MTT的培養(yǎng)基，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。小心棄去上清，并加入150l DMSO，用微型振蕩器混勻10min后，用酶標(biāo)儀在492nm處測定光密度值。

懸浮細(xì)胞 選用對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，用含10％小牛血清的RPMI l640培養(yǎng)基配成1×10⁴/ml的細(xì)胞懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔50l，37℃，5％CO₂培養(yǎng)24h。實(shí)驗(yàn)組加入含不同濃度被測樣品的培養(yǎng)液50l，對(duì)照組則加入含等體積溶劑的培養(yǎng)液，每組設(shè)3個(gè)平行孔，37℃，5％CO₂培養(yǎng)48h，每孔加入10l新鮮配制的含5mg/ml MTT的培養(yǎng)基，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。用三聯(lián)液(SDS 10g，10M HCl 0.1ml，異丁醇5ml，用蒸餾水稀釋至100ml)100l溶解結(jié)晶，37℃孵育12h。用酶標(biāo)儀在492nm處測定光密度值。

結(jié)果評(píng)定：

按下式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長的抑制率：腫瘤細(xì)胞生長抑制率(％)＝[A₄₉₂(陰性對(duì)照)－A₄₉₂(加藥組)]/A₄₉₂(陰性對(duì)照)×100％，從中求出樣品的半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)。本發(fā)明中進(jìn)行的部分化合物的結(jié)構(gòu)見表1，其體外抗腫瘤細(xì)胞活性測定結(jié)果如表2。

表1.部分化合物的結(jié)構(gòu)

表2.體外抗腫瘤細(xì)胞活性測定結(jié)果