本發(fā)明屬于藥液提取技術領域，具體涉及一種艾草有效成分的提取方法。

背景技術：

艾草（Artemisia argyi H. Lév. & Vaniot），別名：蕭茅、冰臺、遏草、香艾、蘄艾、艾蕭、艾蒿、艾蒿、蓬藁、艾﹑灸草﹑醫(yī)草﹑黃草﹑艾絨等。多年生草本或略成半灌木狀。現(xiàn)代藥理發(fā)現(xiàn)，艾葉揮發(fā)油含量多，1,8-桉葉素（占50%以上），其它有α-側柏酮、倍半萜烯醇及其酯。風干葉含礦物質10.13%，脂肪2.59%，蛋白質 25.85%，以及維生素A、B1、B2、C等。全草入藥，有溫經、去濕、散寒、止血、消炎、平喘、止咳、安胎、抗過敏等作用。艾葉曬干搗碎得“艾絨”，制艾條供艾灸用，又可作“印泥”的原料。《本草綱目》記載：艾以葉入藥，性溫、味苦、無毒、純陽之性、通十二經、具回陽、理氣血、逐濕寒、止血安胎等功效，亦常用于針灸。其在婦產科多個方面均有作用，調經止血﹑安胎止崩﹑散寒除濕之效。治月經不調﹑經痛腹痛﹑流產﹑子宮出血， 根治風濕性關節(jié)炎﹑頭風﹑月內風等。因它可削冰令圓，又可炙百病，為醫(yī)家最常用之藥?，F(xiàn)代實驗研究證明，艾葉具有抗菌及抗病毒作用；平喘、鎮(zhèn)咳及祛痰作用；止血及抗凝血作用；鎮(zhèn)靜及抗過敏作用；護肝利膽作用等。艾草可作“艾葉茶”、“艾葉湯”、“艾葉粥”等食譜，以增強人體對疾病的抵抗能力。故艾草又被稱為“醫(yī)草”，臺灣正流行的“藥草浴”，大多就是選用艾草。

對艾草中的有效成分提取，對最大限度的發(fā)揮艾草的藥用價值有重要意義， 目前針對艾草中有效成分的提取分為三類，一類為對艾草中揮發(fā)油的提取，一類為對艾草中黃酮類物質的提取。如中國專利：申請公布號 CN 103421609 A為的專利：一種從植物艾蒿中制取精油的生產方法，步驟如下：1.艾 蒿的預處理2.艾蒿粗油的壓榨；3.艾蒿粗油水合物靜置分層；4.艾蒿精油的精餾：將靜置分層 的上部分含艾蒿精油的水合液體投入精餾工序精 餾，即得到艾蒿精油。尾渣的處理，尾渣含有有機質，將壓榨后的殘渣經粉碎即可以得到含45%以上有機質的原料。申請公布號為CN1580215A的專利：艾蒿油提取工藝：步驟為：先將艾蒿除雜，然后蒸餾；冷卻后分離，得到精油。申請公布號為：CN 102988442 A的專利：一種艾草液的提取。步驟為：現(xiàn)將鮮艾草葉洗凈，放到石油醚中浸泡一段時間后，冷卻后，放至乙酸乙酯中浸泡，三次回流提取后，冷卻得到艾草液。而對于黃酮類的提取，有如下已知專利或發(fā)明：授權公開號為：CN101264117B的發(fā)明：艾蒿黃酮的提取工藝及應用，其方法為：以艾蒿為原料，加水提取、減壓或常壓濃縮、噴霧干燥，再經石油醚萃取、乙醇或乙酸乙酯或乙酸丁酯萃取，最后經濃縮、干燥，得到艾蒿黃酮成品，其發(fā)明還公開了艾蒿黃酮作為配制治療面部痤瘡的藥物原料的應用。申請公開號為CN101791326A的專利：艾蒿黃酮的提取、純化方法，其提取步驟為：將艾蒿原粉在40-59℃條件下加入配比為8:2的規(guī)格為60-90的石油醚和乙酸乙酯混合液，用滲漉法進行脫脂脫色，得到去脂艾蒿粉，將去脂艾蒿粉在60-80℃條件下加入70%乙醇，用滲漉法得到的提取液2濃縮至原體積的五分之一，加酸調節(jié)PH直至有沉淀物出現(xiàn)，離心得艾蒿黃酮粗品；將艾蒿黃酮粗品用70%乙醇溶解后，加5%三氯乙酸，經過濾甲酸離心后得到艾蒿黃酮精品?？梢钥闯?，以上提取方案均是針對某類或某種物質成分進行定向選擇提取，在提取揮發(fā)油的同時，黃酮類及萜類物質將損失掉，在提取黃酮類物質時，同樣如此，會損失掉揮發(fā)油類物質，還有一類為粗提取，即只將艾草做水提取，得到的物質應用至相關用途，但是在粗提過程中，如果不限定條件，得到的只是一類復雜的混合物，對藥效的發(fā)揮有很大的限制作用。

1,8-桉葉素為無色油狀透明液體，有樟腦氣息和清涼的草藥味道。沸點176～177℃，熔點1～1.5℃，凝固點1℃，閃點47～48℃。溶于乙醇(1mL溶于5mL 60%乙醇)、乙醚、氯仿、冰醋酸、丙二醇、甘油和大多數(shù)非揮發(fā)性油，微溶于水。香氣檢出閾值1～64μg/kg。天然品存在于桉葉油等270余種天然精油中，其多用于止咳糖和薄荷中，1,8-桉葉素揮發(fā)油為艾葉中揮發(fā)油中一種特定組分，而目前上述介紹的揮發(fā)油提取方法均未提及1,8-桉葉素揮發(fā)油的提取方法。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供一種從艾葉中提取1，8-桉葉素揮發(fā)油的方法及其用途，為進一步開發(fā)艾葉資源提供了理論基礎。

本研究中從艾葉中提取1，8-桉葉素揮發(fā)油的方法，包括如下步驟：

一、預處理：將無病蟲害侵染的艾草葉片洗凈，除去表面水分，20-25℃下室內陰干，將葉片粉碎或切小段，即制得艾葉原料，備用。

二、1,8-桉葉素揮發(fā)油的提?。?/p>

A將艾葉原料與7-10倍水加入滲漉器中，滲漉時間7-10天，取滲漉液，除去廢渣。

B將滲漉液加入蒸餾器，加入亮氨酸、甘油或乳酸中的任意一種的提取助劑，加溫至70℃-75℃，蒸餾提取70-90min，得到油水混合物；發(fā)明人經研究發(fā)現(xiàn)，通過篩選合適的提取助劑有助于快速提取艾葉中的1,8-桉葉素揮發(fā)油，所選助劑應具有以下特點：無毒、無腐蝕性、熱穩(wěn)定性好，能吸附低萜類化物；助劑與桉葉油發(fā)生締合作用，含有羥基的助劑，羥基與桉葉油素分子的氫原子形成氫鍵，導熱相對于不加助劑時需要更多的熱量來破壞氫鍵，相當于增大了桉葉油的沸點，使桉葉油不從系統(tǒng)中蒸餾出來或是被破壞。發(fā)明人篩選了多種提取助劑，發(fā)現(xiàn)亮氨酸、甘油和乳酸這三種助劑易溶于水，提取出來的桉葉油能完全與水和助劑分離 。

C將得到的油水混合物儲存在不銹鋼容器內，400目篩過濾后靜置分層24小時。

D分離提純：將由C步驟得到的靜置分層的油水混合物精餾，收集68-73℃的餾分，即得到含量為85-95%的1,8-桉葉素揮發(fā)油。

所述提取助劑的使用計量為：按照重量份計：亮氨酸：艾葉為1-2：10；甘油：艾葉為2-5：10；乳酸：艾葉為1-3：10。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為 ：

一、發(fā)明從艾葉中提取1,8-桉葉素揮發(fā)油制備方法簡單、工藝成熟、成本低，穩(wěn)定可靠，并經多次以上試驗，均取得了相同或相近似的結果。

二、本發(fā)明從艾葉中提取的1,8-桉葉素揮發(fā)油具有明顯的止咳祛痰效果。前期實驗發(fā)現(xiàn)，其對小白鼠止咳作用具有明顯的延長潛伏期，減少咳嗽次數(shù)的效果；而通過酚紅排出量的實驗測試，發(fā)現(xiàn)使用過1,8-桉葉素揮發(fā)油之后，其能明顯促進酚紅的排出量，說明其也具有顯著的祛痰效果。

三、從艾葉中提取的1,8-桉葉素揮發(fā)油改變了傳統(tǒng)用藥習慣，由于其具有較高的效果，可以將其開發(fā)為服用、攜帶方便的止咳祛痰類藥劑，不僅比傳統(tǒng)的化學藥劑安全性高，也能達到相同效果，同時，中藥制劑能延緩抗藥性的產生，臨床意義大，開發(fā)前景廣闊。

具體實施方式

實施例1 從艾葉中提取1，8-桉葉素揮發(fā)油方法一

一、預處理：將無病蟲害侵染的艾草葉片洗凈，除去表面水分，20-25℃下室內陰干，將葉片粉碎或切小段，即制得艾葉原料，備用。

二、1,8-桉葉素揮發(fā)油的提?。?/p>

A將艾葉原料與7倍水加入滲漉器中，滲漉時間7-10天，取滲漉液，除去廢渣。

B將滲漉液加入蒸餾器，加入亮氨酸，亮氨酸：艾葉重量比為:1：2；加溫至70℃，蒸餾提取70-90min，得到油水混合物。

C將得到的油水混合物儲存在不銹鋼容器內，400目篩過濾后靜置分層24小時。

D分離提純：將由C步驟得到的靜置分層的油水混合物精餾，收集68-73℃的餾分，即得到含量為88.92%的1.8-桉葉素揮發(fā)油。

實施例2 從艾葉中提取1，8-桉葉素揮發(fā)油方法二

一、預處理：將無病蟲害侵染的艾草葉片洗凈，除去表面水分，20-25℃下室內陰干，將葉片粉碎或切小段，即制得艾葉原料，備用。

二、1,8-桉葉素揮發(fā)油的提?。?/p>

A將艾葉原料與10倍水加入滲漉器中，滲漉時間7-10天，取滲漉液，除去廢渣。

B將滲漉液加入蒸餾器，加入亮氨酸，亮氨酸：艾葉重量比為：1：10；加溫:75℃，蒸餾提取70-90min，得到油水混合物。

C將得到的油水混合物儲存在不銹鋼容器內，400目篩過濾后靜置分層24小時。

D分離提純：將由C步驟得到的靜置分層的油水混合物精餾，收集68-73℃的餾分，即得到含量為90.93%的1,8-桉葉素揮發(fā)油。

實施例3 從艾葉中提取1，8-桉葉素揮發(fā)油方法三

一、預處理：將無病蟲害侵染的艾草葉片洗凈，除去表面水分，20-25℃下室內陰干，將葉片粉碎或切小段，即制得艾葉原料，備用。

二、1,8-桉葉素揮發(fā)油的提取：

A將艾葉原料與9倍水加入滲漉器中，滲漉時間7-10天，取滲漉液，除去廢渣。

B將滲漉液加入蒸餾器，加入甘油，甘油與艾葉重量比為：1:2；加溫至70℃℃，蒸餾提取70-90min，得到油水混合物。

C將得到的油水混合物儲存在不銹鋼容器內，400目篩過濾后靜置分層24小時。

D分離提純：將由C步驟得到的靜置分層的油水混合物精餾，收集68-73℃的餾分，即得到含量為85.09%的1,8-桉葉素揮發(fā)油。

實施例4 從艾葉中提取1，8-桉葉素揮發(fā)油方法四

一、預處理：將無病蟲害侵染的艾草葉片洗凈，除去表面水分，20-25℃下室內陰干，將葉片粉碎或切小段，即制得艾葉原料，備用。

二、1,8-桉葉素揮發(fā)油的提取：

A將艾葉原料與8倍水加入滲漉器中，滲漉時間7-10天，取滲漉液，除去廢渣。

B將滲漉液加入蒸餾器，加入甘油，甘油與艾葉重量比為：1:5；加溫至72℃，蒸餾提取90min，得到油水混合物。

C將得到的油水混合物儲存在不銹鋼容器內，400目篩過濾后靜置分層24小時。

D分離提純：將由C步驟得到的靜置分層的油水混合物精餾，收集68-73℃的餾分，即得到含量為89.87%的1,8-桉葉素揮發(fā)油。

實施例5 從艾葉中提取1，8-桉葉素揮發(fā)油方法五

一、預處理：將無病蟲害侵染的艾草葉片洗凈，除去表面水分，20-25℃下室內陰干，將葉片粉碎或切小段，即制得艾葉原料，備用。

二、1,8-桉葉素揮發(fā)油的提?。?/p>

A將艾葉原料與7倍水加入滲漉器中，滲漉時間7-10天，取滲漉液，除去廢渣。

B將滲漉液加入蒸餾器，加入乳酸，乳酸與艾葉重量比為：1:3；加溫至73℃，蒸餾提取70-90min，得到油水混合物。

C將得到的油水混合物儲存在不銹鋼容器內，400目篩過濾后靜置分層24小時。

D分離提純：將由C步驟得到的靜置分層的油水混合物精餾，收集68-73℃的餾分，即得到含量為94.00%的1,8-桉葉素揮發(fā)油。

實施例6 從艾葉中提取1，8-桉葉素揮發(fā)油方法六

一、預處理：將無病蟲害侵染的艾草葉片洗凈，除去表面水分，20-25℃下室內陰干，將葉片粉碎或切小段，即制得艾葉原料，備用。

二、1,8-桉葉素揮發(fā)油的提?。?/p>

A將艾葉原料與8倍水加入滲漉器中，滲漉時間7-10天，取滲漉液，除去廢渣。

B將滲漉液加入蒸餾器，加入乳酸，乳酸與艾葉重量比為：1:10；加溫至75℃，蒸餾提取80min，得到油水混合物。

C將得到的油水混合物儲存在不銹鋼容器內，400目篩過濾后靜置分層24小時。

D分離提純：將由C步驟得到的靜置分層的油水混合物精餾，收集68-73℃的餾分，即得到含量為95.00%的1,8-桉葉素揮發(fā)油。

效果實施例

從艾葉中提取1,8-桉葉素揮發(fā)油，在制備止咳藥品中的應用。發(fā)明人對從艾葉中提取的1.8-桉葉素揮發(fā)油的止咳化痰作用進行了深入研究，結果如下：

一、從艾葉中提取1,8-桉葉素揮發(fā)油止咳藥理作用研究

1、對小白鼠的止咳作用

采用氨水引咳法處理小白鼠：取小白鼠100只，雌雄各半，隨機分為10組，分別為空白對照組（A）、1,8-桉葉素揮發(fā)油低劑量組（B）200mg/kg、1,8-桉葉素揮發(fā)油中劑量組（C）400mg/kg、1,8-桉葉素揮發(fā)油高劑量組（D）800mg/kg和陽性對照組（磷酸可待因，E）3mg/kg，每組10只。各小鼠每天按0.15mL/10g體重灌胃給藥1次，連續(xù)5天。末次給藥后30min，將小白鼠逐一放入鐘罩內，均勻地噴入氨水的氣霧，持續(xù)30s，把小鼠移置鐘罩外，立即進行觀察，記錄各小鼠的咳嗽潛伏期及3min內咳嗽次數(shù)（注：小鼠咳嗽的判斷以劇烈收縮腹肌并張嘴為準，時可聽到輕微咳嗽聲，潛伏期指從開始噴霧到產生咳嗽的時間）。結果見表1：

注：與空白組比較*P＜0.05，**P＜0.01。

表1可以看出，從艾葉中提取的1,8-桉葉素揮發(fā)油在800mg/kg劑量下，對小白鼠止咳作用與磷酸可待因3mg/kg劑量相當，均與對照組和低劑量組有顯著化差異，說明從艾葉中提取的1,8-桉葉素揮發(fā)油有明顯的止咳作用。

2.對小白鼠的祛痰實驗

取健康小白鼠100只，雌雄各半，按體重和性別隨機分為2組，每組50只，分別為空白對照組、艾葉1,8-桉葉素揮發(fā)油組?？瞻讓φ战M給予同體積蒸餾水，給藥劑量按人和小鼠20倍等效劑量折算，給藥體積為1.0ml/100g。每日給藥 1 次，連續(xù)6天。末次給藥30min后，腹腔注射5%的酚紅溶液(0.1ml/10g)，注射酚紅30 min后處死小鼠，剪開頸部皮膚，小心分離氣管（操作過程中避免出血），剝離氣管周圍組織，剪取自甲狀軟骨氣管至氣管分支處的一段氣管。放進盛有 2 mL 0.9% 氯化鈉的試管中，再加1mol/L NaOH 溶液0.1mL，后用紫外分光光度計于波長546nm 測吸光度值，用已知濃度酚紅溶液做一標準曲線，根據(jù)曲線計算小鼠氣管中酚紅含量（μg/ml）并與空白組比較。

酚紅標準曲線的制備：用萬分之一（分析）天平精密稱取一定量苯酚紅，以 5%碳酸氫鈉溶解，配成1ml含100ug酚紅的溶液，然后依次稀釋成每毫升含苯酚0.2、0.4、0.6、1、3、7、10ug，以5%碳酸氫鈉溶液為空白對照，用分光光度計在546nm處，測吸光度值，每個濃度平行測定3次，取其平均值，以苯酚紅劑量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，得酚紅標準曲線方程 Y =0.1544X+0.0031（r = 0.9998）。

本實施例艾葉1,8-桉葉素揮發(fā)油對小鼠氣管酚紅排泌量的影響：與空白對照組比較，艾葉1,8-桉葉素揮發(fā)油組能顯著增加小鼠氣管酚紅排泌量，有顯著性差異（P<0.05），表明艾葉1,8-桉葉素揮發(fā)油組具有祛痰作用。結果見表 2。

注：與空白組比較*P＜0.05，**P＜0.01。

表2可以看出，從艾葉中提取的1,8-桉葉素揮發(fā)油對小白鼠能明顯促進酚紅的排出量，有明顯的止咳祛痰效果。