本發(fā)明涉及sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate的結構、制備方法，以及sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate在制備治療類風濕性關節(jié)炎藥物中的應用。

背景技術：

類風濕關節(jié)炎(rheumatoidarthritis，ra)是以對稱性多關節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的異質性、系統(tǒng)性、自身免疫性疾病，是在環(huán)境因素、遺傳背景以及兩者交互作用下，高度異質性的自身免疫性疾病。ra是造成人類喪失勞動能力和致殘的主要原因之一，全世界平均發(fā)病率為0.2％～1.2％，我國患病率為0.2％～0.93％。ra患者的治療需要長期服藥以控制病程并改善癥狀，治療成本高、社會負擔重。目前臨床用于治療ra的藥物主要有非甾體抗炎藥(non-steroidalanti-inflammatorydrugs，nsaids)、糖皮質激素、改變病情抗風濕藥、生物制劑與植物藥制劑等，雖然具有一定的療效，卻大都有較強的毒副作用，這與需要長期服藥的理想抗類風濕藥物尚存較大差距。因此更安全、更高效的具有抗ra活性的化合物，在研制ra治療藥物方面，具有重大價值。

本發(fā)明所涉及的化合物sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate是本發(fā)明申請人從傳統(tǒng)中藥珍珠梅sorbariasorbifolia(l.)a.brown.中純化制備的一個新化合物，研究發(fā)現(xiàn)該化合物具有明顯的抗ra活性，具有新型抗ra藥物開發(fā)的價值。該化合物的化學結構、制備方法及其抗ra活性均為首次公開，因此具有突出的實質性特點。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種新化合物的制備方法，及其在制備治療類風濕關節(jié)炎藥物中的應用。

本發(fā)明所涉及的用于制備類風濕關節(jié)炎的化合物為sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate，其化學式是：c18h21no9，結構式是：

本發(fā)明所涉及的sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate的制備方法為：

取珍珠梅藥材，粉碎成最粗粉，加入20倍量的適當濃度的有機醇水溶液作提取溶劑，浸泡提取1～3次，每次10小時左右，合并提取液，過濾，脫醇濃縮至有機醇濃度20％左右，加樣于大孔吸附樹脂柱，先用20％左右有機醇水溶液洗脫5個柱體積去除雜質，再用50～95％有機醇洗脫4個柱體積，收集50～95％有機醇洗脫部分，減壓干燥后上100～200目的硅膠柱， 選擇合適的硅膠層析洗脫體系進行洗脫，收集含sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate的洗脫部位，濃縮，結晶，過濾，即得到sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate粗晶。粗晶溶于重結晶溶劑后形成過飽和溶液，重結晶，可得純度達98％以上的sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate樣品。

本工藝中所涉及的用作提取溶劑的有機醇，為甲醇、乙醇中的一種，優(yōu)選為乙醇。

本工藝中所涉及的大孔吸附樹脂柱，為弱極性或非極性的大孔吸附樹脂，優(yōu)選弱極性。

本工藝中所涉及的硅膠層析洗脫體系，為二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、石油醚中的一種或幾種，優(yōu)選二氯甲烷-甲醇體系。

本工藝中所涉及的重結晶溶劑，可用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等溶劑中的一種或幾種，優(yōu)選甲醇或乙酸乙酯。

本發(fā)明還提供了該化合物在制備治療抗風濕性關節(jié)炎藥物中的應用。

本發(fā)明涉及的化合物，其化學結構、制備方法及其抗類風濕性關節(jié)炎的活性，均為首次公開，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實質性特點，且有望用于一種新型抗類風濕性關節(jié)炎治療藥物的開發(fā)。

附圖說明

圖1是sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate正離子質譜圖(hr-esi-ms)。

圖2是sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate紫外光譜圖(溶劑：cd3od)。

圖3是sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate¹hnmr譜圖(溶劑：cd3od)。

圖4是sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate¹³cnmr譜(溶劑：cd3od)。

圖5是sutherlandin-5-p-hydroxybenzoatedept譜(溶劑：cd3od)。

圖6是sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate¹h-¹hcosy譜(溶劑：cd3od)。

圖7是sutherlandin-5-p-hydroxybenzoatehmqc譜(溶劑：cd3od)。

圖8是sutherlandin-5-p-hydroxybenzoatehmbc譜(溶劑：cd3od)。

圖9是sutherlandin-5-p-hydroxybenzoatenoesy譜(溶劑：cd3od)。

具體實施方式

下面的實施例用以解釋本發(fā)明，但是并非對本發(fā)明實質內容的限制。

實施例1.sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate的制備

取珍珠梅藥材，粉碎成最粗粉，加入20倍量95％乙醇，浸泡提取1～3次，每次10小時左右，合并提取液，過濾，脫醇濃縮至乙醇濃度20％左右，加樣于ab-8型弱極性大孔吸附樹脂柱，先用20％的乙醇溶液洗脫5個柱體積去除雜質，再用95％乙醇洗脫4個柱體積，收集95％乙醇洗脫部分，減壓干燥后上100～200目的硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇為洗脫體系，按 甲醇濃度由低到高進行階段洗脫，收集甲醇濃度20～30％的洗脫部分，濃縮，結晶，過濾，減壓干燥，得到sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate粗晶。將粗晶溶于乙酸乙酯，形成過飽和溶液進行重結晶，過濾，減壓干燥，即得。

實施例2.sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate的制備

取珍珠梅藥材，粉碎成最粗粉，加入20倍量甲醇，浸泡提取1～3次，每次10小時左右，合并提取液，過濾，脫醇濃縮至適當體積，補水至醇濃度20％左右，加樣于d-101型非極性大孔吸附樹脂柱，先用20％的甲醇溶液洗脫5個柱體積去除雜質，再用90％甲醇洗脫4個柱體積，收集90％甲醇洗脫部分，減壓干燥后上100～200目的硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇為洗脫體系，按甲醇濃度由低到高進行階段洗脫，收集甲醇濃度20～30％的洗脫部分，濃縮，結晶，過濾，減壓干燥，即得到sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate粗晶。將粗晶溶于乙酸乙酯，形成過飽和溶液進行重結晶，過濾，減壓干燥，即得。

實施例3.sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate的結構確證

1.儀器與材料

jascop-1020數(shù)字式旋光儀，agilenttof/6500高分辨率質譜，島津uv-2401型可見-紫外分光光度計，核磁為brukeavanceiii500nmrspectrometer，熔點測定儀為yanacomp53型(熔點未校正)。sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate樣品為按上述實施例1步驟制備。

2.化合物結構鑒定

無色針晶(甲醇)，mp79-81℃,易溶于二甲亞砜、甲醇，微溶于乙酸乙酯、丙酮、氯仿、水，不溶于石油醚，正離子esi-msm/z：396[m+h]⁺，418[m+na]⁺；負離子esi-msm/z：394[m-h]^-，430[m+cl]^-，789[2m-h]^-。正離子hr-esi-msm/z：實測值418.1104[m+na]⁺，計算值418.1114(c18h21no9na[m+na]⁺)；負離子hr-esi-msm/z：實測值394.1139[m-h]^-，計算值394.1138(c18h20no9[m-h]^-)。uvλmaxnm(logε)inmeoh：259(3.29)，210(3.49)，198(3.52)。¹h-nmr(500hz,cd3od)δ：7.93(2h,brd,j＝8.8hz,h-3',7')，6.85(2h,brd,j＝8.8hz,h-4',6')，5.74(1h,brs,h-2)，5.09(2h,abtype,ha-5)，4.73(1h,brd,j＝13.6hz,ha-4)，4.64(1h,brd,j＝13.6hz,hb-4)，4.35(1h,d,j＝7.8hz,h-1”)，3.88(1h,dd,j＝12.0,2.2hz,ha-6”)，3.70(1h,dd,j＝12.0,5.2hz,hb-6”)，3.38(1h,t,j＝8.6hz,h-3”)，3.34(1h,t,j＝8.6hz,h-4”)，3.30(1h,ddd,j＝9.8,5.2,2.2hz,h-5”)，3.24(1h,dd,j＝8.6,7.8hz,h-2”)。¹³c-nmr(125hz,cd3od)δ：167.1(s,c-1')，164.0(s,c-5')，159.8(s,c-3)，133.1(d,c-3',7')，121.4(s,c-2')，116.5(s,c-1)，116.4(d,c-4',6')，104.3(d,c-1”)，97.7(d,c-2)，78.1(d,c-5”)，78.0(d,c-3”)，74.9(d,c-2”)，71.4(d,c-4”)，68.4(t,c-4)，64.6(t,c-5)，62.5(t,c-6”)。以上nmr數(shù)據(jù)根據(jù)dept譜以及¹h-¹hcosy、hmqc和hmbc等 二維譜數(shù)據(jù)解析結果予以歸屬。據(jù)此推斷該化合物結構為：

實施例4.sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate片劑的制備

取sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate10克，加入適量95％乙醇，形成浸膏，然后加入環(huán)糊精或多孔淀粉，混勻，形成軟材，造粒機造粒，真空干燥，整粒，然后加入潤滑劑、矯味劑混合壓片，片重250mg～500mg,每片含sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate5～10mg。

實施例5.sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate膠囊劑的制備

取sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate10克，加入淀粉、羧甲基纖維素鈉，混勻，灌裝膠囊，即得。每粒膠囊重含sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate5～10mg。

實施例6.sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate對佐劑關節(jié)炎大鼠血清中peg2與no水平的影響

1.儀器與材料

ex1800型酶聯(lián)免疫分析儀(biotek)；uv-2450型分光光度計(日本島津)?？ń槊?，上海生物制品研究所；羊毛脂、石蠟油、no試劑盒、前列腺素e2(pge2)試劑盒，購于南京建成試劑公司；雷公藤多苷片，上海復旦復華藥業(yè)產(chǎn)品，批號141001。wistar大鼠，spf級，雌性，體質量120～150g，由山東綠葉制藥實驗動物中心提供。

2.建模與給藥

將大鼠隨機分為4組(每組8只)，分別為對照組、陽性對照雷公藤多苷片組、模型組及sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate組。對照組大鼠右后足跖皮內注射生理鹽水，其他各組右后足跖皮內注射弗氏完全佐劑(每10mg卡介苗溶解于1ml石蠟油中，混勻后高壓滅菌)0.1ml，記錄大鼠左后足踝關節(jié)的周長。各給藥組于造模后第9天開始ig給藥，氰苷組與雷公藤多苷均按10mg/kg給藥，模型組和對照組給予等量生理鹽水，各組連續(xù)給藥13d。

3.指標檢測

末次給藥(造模后第21天)lh后心臟采血、取血清，-20℃保存，按照試劑盒說明書分別測量血清中no和pge2的量。檢測結果見表1。

表1.sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate對佐劑關節(jié)炎大鼠血清中peg2與no水平的影響(n＝8)

4.結論：sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate可顯著抑制佐劑關節(jié)炎大鼠血清中peg2與no的水平，且其活性強于同等劑量的雷公藤多苷，可以用來制備治療抗類風濕關節(jié)炎的藥物。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發(fā)明披露的技術范圍內，根據(jù)本發(fā)明的技術方案及其發(fā)明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內。