本發(fā)明涉及2s-cardiospermin-5-benzoate的結(jié)構(gòu)、制備方法，以及2s-cardiospermin-5-benzoate在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis，ra)是以對稱性多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的異質(zhì)性、系統(tǒng)性、自身免疫性疾病，是在環(huán)境因素、遺傳背景以及兩者交互作用下，高度異質(zhì)性的自身免疫性疾病。ra是造成人類喪失勞動能力和致殘的主要原因之一，全世界平均發(fā)病率為0.2％～1.2％，我國患病率為0.2％～0.93％。ra患者的治療需要長期服藥以控制病程并改善癥狀，治療成本高、社會負擔重。目前臨床用于治療ra的藥物主要有非甾體抗炎藥(non-steroidalanti-inflammatorydrugs，nsaids)、糖皮質(zhì)激素、改變病情抗風(fēng)濕藥、生物制劑與植物藥制劑等，雖然具有一定的療效，卻大都有較強的毒副作用，這與需要長期服藥的理想抗類風(fēng)濕藥物尚存較大差距。因此更安全、更高效的具有抗ra活性的化合物，在研制ra治療藥物方面，具有重大價值。

本發(fā)明所涉及的化合物2s-cardiospermin-5-benzoate是本發(fā)明申請人從傳統(tǒng)中藥珍珠梅sorbariasorbifolia(l.)a.brown.中純化制備的一個新化合物，研究發(fā)現(xiàn)該化合物具有明顯的抗ra活性，具有新型抗ra藥物開發(fā)的價值。該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、制備方法及其抗ra活性均為首次公開，因此具有突出的實質(zhì)性特點。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種新化合物的制備方法，及其在制備治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明所涉及的用于制備類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的化合物為2s-cardiospermin-5-benzoate，其化學(xué)式是：c18h21no8，結(jié)構(gòu)式是：

本發(fā)明所涉及的2s-cardiospermin-5-benzoate的制備方法為：

取珍珠梅藥材，粉碎成最粗粉，加入20倍量的適當濃度的有機醇水溶液作提取溶劑，浸泡提取1～3次，每次10小時左右，合并提取液，過濾，脫醇濃縮至有機醇濃度20％左右，加樣于大孔吸附樹脂柱，先用20％左右有機醇水溶液洗脫5個柱體積去除雜質(zhì)，再用50～95％ 有機醇洗脫4個柱體積，收集50～95％有機醇洗脫部分，減壓干燥后上100～200目的硅膠柱，選擇合適的硅膠層析洗脫體系進行洗脫，收集含2s-cardiospermin-5-benzoate的洗脫部位，濃縮，結(jié)晶，過濾，即得到2s-cardiospermin-5-benzoate粗晶。粗晶溶于重結(jié)晶溶劑后形成過飽和溶液，重結(jié)晶，可得純度達98％以上的2s-cardiospermin-5-benzoate樣品。

本工藝中所涉及的用作提取溶劑的有機醇，為甲醇、乙醇中的一種，優(yōu)選為乙醇。

本工藝中所涉及的大孔吸附樹脂柱，為弱極性或非極性的大孔吸附樹脂，優(yōu)選弱極性。

本工藝中所涉及的硅膠層析洗脫體系，為二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、石油醚中的一種或幾種，優(yōu)選二氯甲烷-甲醇體系。

本工藝中所涉及的重結(jié)晶溶劑，可用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等溶劑中的一種或幾種，優(yōu)選甲醇或乙酸乙酯。

本發(fā)明還提供了該化合物在制備治療抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明涉及的化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)、制備方法及其抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的活性，均為首次公開，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實質(zhì)性特點，且有望用于一種新型抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療藥物的開發(fā)。

附圖說明

圖1是2s-cardiospermin-5-benzoate正離子質(zhì)譜圖(hr-esi-ms)。

圖2是2s-cardiospermin-5-benzoate紫外光譜圖(溶劑：cd3od)。

圖3是2s-cardiospermin-5-benzoate¹hnmr譜圖(溶劑：cd3od)。

圖4是2s-cardiospermin-5-benzoate¹³cnmr譜(溶劑：cd3od)。

圖5是2s-cardiospermin-5-benzoatedept譜(溶劑：cd3od)。

圖6是2s-cardiospermin-5-benzoate¹h-¹hcosy譜(溶劑：cd3od)。

圖7是2s-cardiospermin-5-benzoatehmqc譜(溶劑：cd3od)。

圖8是2s-cardiospermin-5-benzoatehmbc譜(溶劑：cd3od)。

具體實施方式

下面的實施例用以解釋本發(fā)明，但是并非對本發(fā)明實質(zhì)內(nèi)容的限制。

實施例1.2s-cardiospermin-5-benzoate的制備

取珍珠梅藥材，粉碎成最粗粉，加入20倍量95％乙醇，浸泡提取1～3次，每次10小時左右，合并提取液，過濾，脫醇濃縮至乙醇濃度20％左右，加樣于ab-8型弱極性大孔吸附樹脂柱，先用20％的乙醇溶液洗脫5個柱體積去除雜質(zhì)，再用95％乙醇洗脫4個柱體積，收集95％乙醇洗脫部分，減壓干燥后上100～200目的硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇為洗脫體系，按 甲醇濃度由低到高進行階段洗脫，收集甲醇濃度10～15％的洗脫部分，濃縮，結(jié)晶，過濾，減壓干燥，得到2s-cardiospermin-5-benzoate粗晶。將粗晶溶于乙酸乙酯，形成過飽和溶液進行重結(jié)晶，過濾，減壓干燥，即得。

實施例2.2s-cardiospermin-5-benzoate的制備

取珍珠梅藥材，粉碎成最粗粉，加入20倍量甲醇，浸泡提取1～3次，每次10小時左右，合并提取液，過濾，脫醇濃縮至適當體積，補水至醇濃度20％左右，加樣于d-101型非極性大孔吸附樹脂柱，先用20％的甲醇溶液洗脫5個柱體積去除雜質(zhì)，再用80％甲醇洗脫4個柱體積，收集80％甲醇洗脫部分，減壓干燥后上100～200目的硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇為洗脫體系，按甲醇濃度由低到高進行階段洗脫，收集甲醇濃度10～15％的洗脫部分，濃縮，結(jié)晶，過濾，減壓干燥，即得到2s-cardiospermin-5-benzoate粗晶。將粗晶溶于乙酸乙酯，形成過飽和溶液進行重結(jié)晶，過濾，減壓干燥，即得。

實施例3.2s-cardiospermin-5-benzoate的結(jié)構(gòu)確證

1.儀器與材料

jascop-1020數(shù)字式旋光儀，agilenttof/6500高分辨率質(zhì)譜，島津uv-2401型可見-紫外分光光度計，核磁為brukeavanceiii500nmrspectrometer，熔點測定儀為yanacomp53型(熔點未校正)。2s-cardiospermin-5-benzoate樣品為按上述實施例1步驟制備。

2.化合物結(jié)構(gòu)鑒定

無色粘稠油狀物(甲醇),易溶于二甲亞砜、甲醇，微溶于乙酸乙酯、丙酮、氯仿、水，不溶于石油醚，(c0.49,甲醇)。正離子esi-msm/z：380[m+h]⁺，402[m+na]⁺，781[2m+na]⁺；負離子esi-msm/z：378[m-h]^-，414[m+cl]^-，757[2m-h]^-。正離子hr-esi-msm/z：實測值402.1159[m+na]⁺，計算值402.1165(c18h21no8na[m+na]⁺)；負離子hr-esi-msm/z：實測值414.0964[m+cl]^-，計算值414.0956(c18h21no8cl[m+cl]^-)。uvλmaxnm(logε)inmeoh：273(2.01)，229(3.20)，196(3.56)。¹h-nmr(500hz,cd3od)δ：8.08(2h,brd,j＝7.8hz,h-3',7')，7.61(1h,brt,j＝7.8hz,h-5')，7.49(2h,brt,j＝7.8hz,h-4',6')，5.75(1h,brs,ha-4)，5.68(1h,brs,h-2)，5.61(1h,brs,hb-4)，5.02(1h,brd,j＝13.5hz,ha-5)，4.99(1h,brd,j＝13.5hz,hb-5)，4.59(1h,d,j＝7.7hz,h-1”)，3.86(1h,dd,j＝11.9,2.2hz,ha-6”)，3.59(1h,dd,j＝11.9,6.2hz,hb-6”)，3.42(1h,t,j＝9.1hz,h-3”)，3.35(1h,ddd,j＝9.8,6.2,2.2hz,h-5”)，3.26(1h,dd,j＝9.8,9.1hz,h-4”)，3.25(1h,dd,j＝9.1,7.7hz,h-2”)。¹³c-nmr(125hz,cd3od)δ：167.5(s,c-1')，138.8(s,c-3)，134.4(d,c-5')，130.9(s,c-2')，130.7(d,c-3',7')，129.6(d,c-4',6')，119.9(t,c-4)，117.4(s,c-1)，102.0(d,c-1”)，78.4(d,c-5”)，77.7(d,c-3”)，74.6(d,c-2”)，71.4(d,c-4”)，67.6(d,c-2)，64.8(t,c-5)，62.7(d,c-6”)。以上 nmr數(shù)據(jù)根據(jù)dept譜以及¹h-¹hcosy、hmqc和hmbc等二維譜數(shù)據(jù)解析結(jié)果予以歸屬。經(jīng)過與2s-cardiospermin-5-p-hydroxybenzoate的碳譜數(shù)據(jù)和cd譜進行對比，確定該化合物c-2的絕對構(gòu)型為s。據(jù)此推斷該化合物結(jié)構(gòu)為：

實施例4.2s-cardiospermin-5-benzoate片劑的制備

取2s-cardiospermin-5-benzoate10克，加入適量95％乙醇，形成浸膏，然后加入環(huán)糊精或多孔淀粉，混勻，形成軟材，造粒機造粒，真空干燥，整粒，然后加入潤滑劑、矯味劑混合壓片，片重250mg～500mg,每片含2s-cardiospermin-5-benzoate5～10mg。

實施例5.2s-cardiospermin-5-benzoate膠囊劑的制備

取2s-cardiospermin-5-benzoate10克，加入淀粉、羧甲基纖維素鈉，混勻，灌裝膠囊，即得。每粒膠囊重含2s-cardiospermin-5-benzoate5～10mg。

實施例6.2s-cardiospermin-5-benzoate對佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血清中peg2與no水平的影響

1.儀器與材料

ex1800型酶聯(lián)免疫分析儀(biotek)；uv-2450型分光光度計(日本島津)。卡介苗，上海生物制品研究所；羊毛脂、石蠟油、no試劑盒、前列腺素e2(pge2)試劑盒，購于南京建成試劑公司；雷公藤多苷片，上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)產(chǎn)品，批號141001。wistar大鼠，spf級，雌性，體質(zhì)量120～150g，由山東綠葉制藥實驗動物中心提供。

2.建模與給藥

將大鼠隨機分為4組(每組8只)，分別為對照組、陽性對照雷公藤多苷片組、模型組及2s-cardiospermin-5-benzoate組。對照組大鼠右后足跖皮內(nèi)注射生理鹽水，其他各組右后足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑(每10mg卡介苗溶解于1ml石蠟油中，混勻后高壓滅菌)0.1ml，記錄大鼠左后足踝關(guān)節(jié)的周長。各給藥組于造模后第9天開始ig給藥，氰苷組與雷公藤多苷均按10mg/kg給藥，模型組和對照組給予等量生理鹽水，各組連續(xù)給藥13d。

3.指標檢測

末次給藥(造模后第21天)lh后心臟采血、取血清，-20℃保存，按照試劑盒說明書分別測量血清中no和pge2的量。檢測結(jié)果見表1。

表1.2s-cardiospermin-5-benzoate對佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血清中peg2與no水平的影響(n＝8)

4.結(jié)論：2s-cardiospermin-5-benzoate可顯著抑制佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血清中peg2與no的水平，且其活性強于同等劑量的雷公藤多苷，可以用來制備治療抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。