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殼多糖、水解產(chǎn)物和借助于酶促水解的方式用于從昆蟲生產(chǎn)至少一種目標(biāo)期望的產(chǎn)物的方法,其包括在酶促水解前執(zhí)行的步驟組合與流程

文檔序號:11779614閱讀:291來源:國知局
殼多糖、水解產(chǎn)物和借助于酶促水解的方式用于從昆蟲生產(chǎn)至少一種目標(biāo)期望的產(chǎn)物的方法,其包括在酶促水解前執(zhí)行的步驟組合與流程
本發(fā)明涉及用于制備至少一種目標(biāo)產(chǎn)物,并且更具體地來自昆蟲的殼多糖和/或脫乙酰殼多糖的方法。更具體地,本發(fā)明涉及借助于昆蟲角質(zhì)層的酶促水解用于制備殼多糖和/或脫乙酰殼多糖的方法。它還涉及具體的殼多糖和水解產(chǎn)物。根據(jù)本發(fā)明,“殼多糖”意指任何類型的殼多糖衍生物,即包含n-乙酰葡糖胺單元和d-葡糖胺單元的任何類型的多糖衍生物,特別是殼多糖-多肽共聚物(有時稱為“殼多糖/多肽復(fù)合物”)。殼多糖被認(rèn)為是生物世界中排在纖維素之后的第二大合成聚合物。事實上,殼多糖由生物世界中的許多物種合成:它構(gòu)成甲殼類和昆蟲類的外骨骼以及圍繞并保護真菌的側(cè)壁的部分。更具體地,在昆蟲中,殼多糖因此構(gòu)成其外骨骼的3至60%。根據(jù)本發(fā)明的“脫乙酰殼多糖”意指殼多糖脫乙酰作用的產(chǎn)物。脫乙酰殼多糖與殼多糖之間的通常限制是由乙酰化的程度決定:乙?;潭刃∮?0%的化合物稱為脫乙酰殼多糖,并且乙?;潭却笥?0%的化合物稱為殼多糖。殼多糖和/或脫乙酰殼多糖被用于許多應(yīng)用中:化妝品(化妝品組合物)、醫(yī)學(xué)和藥物(藥物組合物、燒傷治療、生物材料、角膜敷料、縫合材料)、營養(yǎng)學(xué)和食品加工、技術(shù)(特別是用于水過濾和凈化的過濾劑、組織形成劑、絮凝劑或吸附劑)等。事實上,殼多糖和/或脫乙酰殼多糖是生物相容的、可生物降解的和無毒的材料。傳統(tǒng)上,殼多糖以化學(xué)方法從甲殼類、頭足類,以及更特別地真菌中提取?;瘜W(xué)途徑使用大量的試劑(如鹽酸、氫氧化鈉和漂燙劑),所述試劑具有使殼多糖結(jié)構(gòu)(例如其以天然狀態(tài)存在,例如如存在于甲殼類的殼中)變性的作用,。此外,大多數(shù)化學(xué)試劑對人類和環(huán)境都有害,并且生成大量必須處理的廢水。最后,源于甲殼類的殼多糖和/或脫乙酰殼多糖可在敏感人群中產(chǎn)生過敏反應(yīng)。用于提取殼多糖的另一種途徑是酶促途徑。該途徑被視為較溫和,因此使得能夠更好地保存殼多糖和/或脫乙酰殼多糖。然而,通過該途徑獲得的殼多糖是呈褐色的,需要純化步驟以便獲得可銷售的粉末,即白色粉末?,F(xiàn)有的方法因此一般包括用于從殼多糖中去除雜質(zhì)的一個或多個步驟,例如在酶促水解之前進行的用酸脫礦物質(zhì)的步驟、和/或在酶促水解之后進行的用氧化劑漂燙殼多糖的步驟。不幸的是,用于純化殼多糖的這兩個步驟均具有改變殼多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)的作用。由本發(fā)明人開展的工作證實通過在水解之前進行特定的步驟組合,即壓榨步驟和用氧化劑處理昆蟲角質(zhì)層的步驟,能夠獲得更純凈并且結(jié)構(gòu)更接近于殼多糖的原始結(jié)構(gòu)的殼多糖。本發(fā)明因此涉及用于從昆蟲角質(zhì)層生產(chǎn)殼多糖和/或脫乙酰殼多糖的方法,其包括下述步驟:(i)壓榨昆蟲角質(zhì)層,隨后(ii)用蛋白水解酶酶促水解昆蟲角質(zhì)層,用氧化劑處理角質(zhì)層已在酶促水解之前進行?!袄ハx”意指在任何發(fā)育階段的昆蟲,如成蟲期、幼蟲期或若蟲期。優(yōu)選地,根據(jù)本發(fā)明的方法中使用的昆蟲是可食用的。更具體地,昆蟲可以選自鞘翅目(coleoptera)、雙翅目(diptera)、鱗翅目(lepidoptera)、等翅目(isoptera)、直翅目(orthoptera)、膜翅目(hymenoptera)、蜚蠊目(blattoptera)、半翅目(hemiptera)、異翅目(heteroptera)、蜉蝣目(ephemeroptera)和長翅目(mecoptera),優(yōu)選選自鞘翅目、雙翅目、直翅目和鱗翅目。優(yōu)選地,昆蟲選自黃粉蟲(tenebriomolitor)、黑水虻(hermetiaillucens)、蠟螟(galleriamellonella)、黑菌蟲(alphitobiusdiaperinus)、大麥蟲(zophobasmorio)、blatterafusca、赤擬谷盜(triboliumcastaneum)、紅棕象甲(rhynchophorusferrugineus)、家蠅(muscadomestica)、大頭金蠅(chrysomyamegacephala)、飛蝗(locustamigratoria)、沙漠蝗(schistocercagregaria)、家蟋蟀(achetadomesticus)和樗蠶(samiaricini)。更優(yōu)選地,昆蟲選自黃粉蟲、黑水虻、蠟螟、黑菌蟲、大麥蟲、blatterafusca、家蠅、大頭金蠅、飛蝗、沙漠蝗、家蟋蟀和樗蠶,且甚至更優(yōu)選地,黃粉蟲。在根據(jù)本發(fā)明的方法中可以使用一個或多個昆蟲物種,優(yōu)選單一的昆蟲物種。如果使用幾個物種,則有利地選擇兩個密切相關(guān)的物種,例如黑水虻和家蠅。昆蟲優(yōu)選是被養(yǎng)殖的,而不是從自然中獲取。例如,昆蟲在昆蟲農(nóng)場養(yǎng)殖。在專門農(nóng)場繁殖昆蟲使得不僅能夠控制和消除與昆蟲傳播疾病相關(guān)的風(fēng)險,還可以限制由于例如殺蟲劑的存在而與衍生自昆蟲的食物產(chǎn)品的毒性相關(guān)的風(fēng)險。此外,養(yǎng)殖使得能夠控制昆蟲供應(yīng)的質(zhì)量并且限制供應(yīng)的成本。“昆蟲角質(zhì)層”不僅意指它們已從昆蟲分離出的角質(zhì)層,角質(zhì)層還意指包括昆蟲的其他組成成分中的一些或全部,包括整個昆蟲。事實上,能夠?qū)⒏鶕?jù)本發(fā)明的方法應(yīng)用于整個昆蟲,如磨碎的昆蟲,或僅應(yīng)用于包含角質(zhì)層的昆蟲的部分,例如天然分離并且通過合適方法收集的昆蟲的蛻皮和/或脫皮。角質(zhì)層是由昆蟲表皮分泌的外層(或外骨骼)。一般地,它由三層組成:-上表皮,其為角質(zhì)層最薄的最外層(小于4μm);該層是不透水的,并且包含一層防水蠟、以及較少量的蛋白質(zhì)和殼多糖;-外角質(zhì)層,其為角質(zhì)層的中間層;它基本上由通過鞣制硬化并且負(fù)責(zé)角質(zhì)層的剛性的蛋白質(zhì);殼多糖和任選的黑色素組成;和-內(nèi)角質(zhì)層,其為由蛋白質(zhì)和殼多糖的混合物構(gòu)成的薄的柔性層。壓榨昆蟲角質(zhì)層的主要目的是去除富含脂肪的壓榨汁和/或富集壓榨餅以產(chǎn)生用于水解的底物。在根據(jù)本發(fā)明的方法中,壓榨昆蟲角質(zhì)層使得能夠獲得包含油(或脂質(zhì))含量小于或等于20%,優(yōu)選小于或等于15%,更優(yōu)選小于或等于12%,甚至更優(yōu)選小于或等于10%的壓榨餅。在本申請中,值的范圍被理解為是包含性的。此外,當(dāng)“大約”或“約”在數(shù)字之前時,這等價于這個數(shù)值的正或負(fù)10%。同樣地,為了使壓榨餅富集成用于水解的底物,壓榨昆蟲角質(zhì)層使得能夠獲得具有干物質(zhì)含量包含在30%至60%之間,優(yōu)選包含在40%至55%之間,且更優(yōu)選包含在45%至50%之間的壓榨餅。可以使用任何壓榨系統(tǒng)用于進行昆蟲角質(zhì)層的壓榨,例如單螺桿或雙螺桿壓榨機(angel型雙螺桿壓榨機)、壓濾機(choquenet型壓濾機)、壓板式擠壓機等。這些系統(tǒng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的,所述本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定壓榨條件以便獲得上述的油和/或水含量。在根據(jù)本發(fā)明的方法中,壓榨昆蟲角質(zhì)層隨后為酶促水解。優(yōu)選地,用至少一種蛋白水解酶,優(yōu)選蛋白酶進行酶促水解。在本申請中,名稱或后綴“肽酶”和“蛋白酶”被無差別地用于指示引起蛋白質(zhì)的肽鍵裂解的酶。有利地,這在40至60℃,優(yōu)選45至55℃的溫度下,以及在包含在6至8之間,優(yōu)選在6.5至7.5之間的ph下進行4至8小時,優(yōu)選4至5小時的時間。酶促水解可以用單一蛋白酶或可選地含有至少一種蛋白酶的酶混合物進行,更優(yōu)選含有幾種蛋白酶的酶混合物,例如含有內(nèi)切蛋白酶和外切蛋白酶、或蛋白酶和多糖酶的混合物。優(yōu)選地,蛋白酶選自氨肽酶、金屬羧肽酶、絲氨酸內(nèi)肽酶、半胱氨酸內(nèi)肽酶、天冬氨酸內(nèi)肽酶、金屬內(nèi)肽酶。有利地,酶可以選自下述:*n.a.:不適用。有利地,用于水解中的酶是天冬氨酸內(nèi)肽酶,例如prolyvenp。這類酶使得能夠在獲得的殼多糖的純度方面獲得非常良好的結(jié)果,尤其是當(dāng)這類酶應(yīng)用于從鞘翅目,且更特別地從黃粉蟲獲得的壓榨餅的水解中時。酶或酶的混合物以范圍為按估計的干物質(zhì)的重量計0.2至10%,優(yōu)選按重量計0.4至8%,且更優(yōu)選0.5至2%的量引入。“估計的干物質(zhì)的重量”意指更特別地來自昆蟲或昆蟲部分的干物質(zhì)的重量,例如可以在進入酶促水解步驟時估計。在酶促活性方面,所引入的酶或酶混合物的量等價于每100g待轉(zhuǎn)化的底物(即昆蟲或含水的昆蟲部分,具有30至70%的含水量)的濕重包含2000至5000sapu的活性(下文實施例5中描述的“分光光度法酸性蛋白酶單位”),優(yōu)選3000至4000sapu。有利地,酶促水解步驟在水例如淡水的存在下進行。酶促水解中使用的水量如下確定:以ml計的水體積與以g計的昆蟲重量的比率優(yōu)選包含在0.3至10之間,更優(yōu)選在0.5至5之間,甚至更優(yōu)選在0.7至3之間,甚至更優(yōu)選約1。應(yīng)當(dāng)注意,該比率也相當(dāng)于水重量與昆蟲材料重量的比率,水的密度在常溫和常壓條件下為1.0g/ml。在根據(jù)本發(fā)明的方法中,酶促水解之前是用氧化劑處理角質(zhì)層的步驟。優(yōu)選地,在根據(jù)本發(fā)明的方法中,用于角質(zhì)層處理中的氧化劑選自過氧化氫、高錳酸鉀、臭氧和次氯酸鈉,甚至更優(yōu)選過氧化氫。有利地,當(dāng)氧化劑是過氧化氫時,用于處理昆蟲角質(zhì)層的這種試劑的量是這樣的,其使得過氧化氫含量包含在基于昆蟲的總重量按重量計1至33%之間,優(yōu)選包含在基于昆蟲的總重量按重量計2至12%之間,優(yōu)選按重量計約6%。優(yōu)選地,用氧化劑處理昆蟲角質(zhì)層在水例如淡水的存在下進行。有利地,用于處理角質(zhì)層中的水的量如下確定:以ml計的水體積與以g計的昆蟲重量的比率優(yōu)選包含在0.3至10之間,更優(yōu)選在0.5至5之間,甚至更優(yōu)選在0.7至3之間,甚至更優(yōu)選約1。根據(jù)本發(fā)明的方法使得能夠獲得具有高純度的殼多糖,例如包含在55至95%之間,優(yōu)選包含在60至95%之間,甚至更優(yōu)選在70至90%之間,且甚至更優(yōu)選在80至90%之間的純度(或重量分析純度)(參見實施例5和圖7)。優(yōu)選地,根據(jù)本發(fā)明的方法包括在壓榨步驟之前的研磨步驟。該研磨步驟的目的是將角質(zhì)層和/或昆蟲粉碎成顆粒,以便在酶促水解期間促進酶對底物的接近。當(dāng)它隨后為壓榨步驟時,該步驟還使得能夠促進壓榨汁的去除和固體物質(zhì)的分離。研磨可以有利地用混合機-研磨機,例如刀磨機進行。優(yōu)選地,在研磨結(jié)束時,昆蟲顆粒的尺寸小于1cm(使用顯微鏡可觀察到的最大粒度),優(yōu)選小于0.5cm,甚至更優(yōu)選包含在300μm至0.5cm之間的尺寸,優(yōu)選500μm至0.5cm,且甚至更優(yōu)選在500μm至1mm之間??梢约尤胍欢康乃源龠M研磨。該水量如下確定:以ml計的水體積與以g計的昆蟲重量的比率優(yōu)選包含在0.3至10之間,更優(yōu)選在0.5至5之間,甚至更優(yōu)選在0.7至3之間,甚至更優(yōu)選約1。有利地,在根據(jù)本發(fā)明的方法中,用氧化劑處理角質(zhì)層在研磨和/或壓榨步驟之前、伴隨著研磨和/或壓榨步驟和/或在研磨和/或壓榨步驟之后進行。根據(jù)本發(fā)明的方法還可以包括在壓榨和/或研磨步驟之前殺死昆蟲的步驟。該殺死步驟可以通過常規(guī)方法在冷血動物和/或小型動物(甲殼類、魚類、蝸牛等)的養(yǎng)殖中進行,例如冷(冷凍)、熱(熱燙)、去氧等。有利地,昆蟲殺死步驟通過熱燙進行。熱燙不僅可以殺死昆蟲,還可以降低微生物負(fù)荷(降低變質(zhì)風(fēng)險和健康風(fēng)險),并且使可以觸發(fā)自溶且因此觸發(fā)其快速褐變的昆蟲內(nèi)部酶失活。這種熱燙以盡可能快地促使死亡的方式進行,以便尊重動物福利,并且根據(jù)科學(xué)的建議。可選地,可以通過漂燙進行殺死。漂燙具有與上述熱燙相同的優(yōu)點。有利地,昆蟲例如通過熱燙或漂燙被殺死,隨后在被壓榨之前研磨。優(yōu)選地,熱燙步驟在水例如淡水中,在95至105℃,優(yōu)選約100℃的溫度下進行2至20分鐘,優(yōu)選5至15分鐘的時間。在該熱燙步驟中引入的水量如下確定:以ml計的水體積與以g計的昆蟲重量的比率優(yōu)選包含在0.3至10之間,更優(yōu)選在0.5至5之間,甚至更優(yōu)選在0.7至3之間,甚至更優(yōu)選約1??蛇x地,漂燙步驟用包含在80℃至130℃之間,優(yōu)選在90℃至120℃之間的溫度下的蒸汽和/或水進行。有利地,用氧化劑處理角質(zhì)層伴隨著殺死步驟和/或在殺死步驟之后,且特別是伴隨熱燙和/或在熱燙之后進行。更具體地,用氧化劑處理昆蟲角質(zhì)層可以在下述步驟的一個或多個期間進行:-伴隨著熱燙和/或在熱燙步驟之后,更優(yōu)選伴隨著熱燙,可選地,伴隨著漂燙和/或在漂燙步驟之后,更優(yōu)選伴隨著漂燙。更具體地,當(dāng)在熱燙期間進行昆蟲角質(zhì)層的處理時,可以有利地將氧化劑加入用于熱燙昆蟲的水中。-在研磨之前、伴隨著研磨和/或在研磨之后。更具體地,當(dāng)在研磨期間進行昆蟲角質(zhì)層的處理時,可以有利地將氧化劑加入用于研磨的水中。-在壓榨之前和/或伴隨著壓榨。-在昆蟲角質(zhì)層處理的具體步驟期間。在酶促水解之后,根據(jù)本發(fā)明的方法可以進一步包括熱失活步驟,目標(biāo)是使酶促水解中使用的酶或酶混合物失活。在根據(jù)本發(fā)明的方法結(jié)束時,殼多糖可以通過壓榨或酶促水解反應(yīng)混合物的離心來回收。在這個階段,也回收了目標(biāo)殼多糖副產(chǎn)物,即水解產(chǎn)物?!八猱a(chǎn)物”意指可通過蛋白質(zhì)的酶促水解獲得的,包含蛋白質(zhì)、水解蛋白質(zhì)、肽、氨基酸和/或衍生自蛋白質(zhì)的其他化合物的產(chǎn)物。本發(fā)明還涉及水解產(chǎn)物,例如可作為通過根據(jù)本發(fā)明的任何一種方法的酶促水解的副產(chǎn)物獲得的水解產(chǎn)物。根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物具有下述特征中的至少任何一個:-灰分含量基于干物質(zhì)的總重量按重量計≤3.5%-當(dāng)從素食昆蟲制備水解產(chǎn)物時,灰分含量≤2.5%-基于水溶性蛋白質(zhì)的總重量,尺寸>12,400g/摩爾的水溶性蛋白質(zhì)含量按重量計≤20%,優(yōu)選<18%,-蛋白質(zhì)含量≥70%,優(yōu)選≥74%,-當(dāng)從非飛行昆蟲制備水解產(chǎn)物時,蛋白質(zhì)含量≥80%,-脂質(zhì)含量基于干物質(zhì)的總重量按重量計≤10%,-當(dāng)從非飛行昆蟲制備水解產(chǎn)物時,脂質(zhì)含量≤4.5%,-蛋白酶消化率相對于蛋白質(zhì)的總重量>93%,-選自asp、glu、ala、gly、leu、pro、tyr、val、lys的至少任何5種氨基酸的相對豐度≥6%,-選自asp、glu、ala、leu、pro、tyr、val的至少任何3種氨基酸的相對豐度≥8%?!八厥忱ハx”意指在其通常的飲食中不含動物蛋白質(zhì)的昆蟲。作為素食昆蟲的例子,可以提到鞘翅目、鱗翅目或直翅目。“飛行昆蟲”意指能夠在成年時飛行的昆蟲,與被稱為“非飛行”的昆蟲相反。作為飛行昆蟲的例子,可以提到鱗翅目或雙翅目。作為非飛行昆蟲的例子,可以提到某些鞘翅目或直翅目。更具體地,“水溶性蛋白質(zhì)”意指蛋白質(zhì)(或粗蛋白質(zhì))中可溶于水溶液中的那些,所述水溶液的ph包含在6至8之間,有利地在7.2至7.6之間。優(yōu)選地,水溶液是緩沖溶液,其ph包含在6至8之間,有利地在7.2至7.6之間。優(yōu)選地,緩沖溶液是磷酸鹽緩沖nacl溶液,其ph等于7.4±0.2。更具體地,通過下述方法測量水溶性蛋白質(zhì)的大?。簩?00mg樣品引入10ml磷酸鹽/nacl緩沖液(ph7.4,0.137mm)內(nèi)。將樣品攪拌1分鐘(渦旋),在900g下離心1分鐘,隨后通過0.45μm膜過濾。使用nucleogelgfc-300柱,在空間排阻色譜系統(tǒng)上進行分析,所使用的洗脫劑為磷酸鹽/nacl緩沖液(ph7.4,0.137mm),流速為1.0ml/分鐘,其中檢測通過uv檢測器在280nm處。有利地,水解產(chǎn)物包含至少70%,優(yōu)選至少74%的蛋白質(zhì),至多3.5%的灰分,以及小于20%,優(yōu)選小于18%的尺寸大于12,400g/摩爾的水溶性蛋白質(zhì)含量。優(yōu)選地,水解產(chǎn)物具有所有上述性質(zhì)。特別要注意的是,根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物可以通過其葡糖胺含量和/或其衍生物(優(yōu)選n-乙酰葡糖胺)區(qū)別于任何其他類型的水解產(chǎn)物,更特別地,基于水解產(chǎn)物的干物質(zhì)的總重量按重量計大于或等于0.01%,優(yōu)選大于或等于0.08%的含量。上述特征的所有單位和測量方法在實施例中,且更具體地在實施例6中進行描述。該水解產(chǎn)物可有利地補充有用于平衡其營養(yǎng)概況的添加劑,使得其適合于不同類型的動物。水解產(chǎn)物可以濃縮隨后干燥,以獲得干燥的水解產(chǎn)物??蛇x地,水解產(chǎn)物可以是液體形式。這些水解產(chǎn)物可以用作特別用于動物的食品或食物成分,或可選地它們可以被處理,例如分離氨基酸。下文更詳細(xì)地描述根據(jù)本發(fā)明的方法的優(yōu)選實施方案。特別地,該優(yōu)選實施方案描述了用于根據(jù)本發(fā)明的方法的各個有利步驟,例如殼多糖的溫和純化步驟:第二次壓榨、洗滌操作、任選的過濾和干燥。最后,由于殼多糖一般以粉末的形式銷售,所以也可以進行第二次研磨。后者也可以進行以促進脫乙?;磻?yīng),用于從殼多糖制備脫乙酰殼多糖。脫乙?;磻?yīng)的條件在下文詳細(xì)描述的優(yōu)選實施方案的步驟10中更全面地描述。根據(jù)本發(fā)明的殼多糖具有下述性質(zhì)中的至少任何一種:-灰分含量基于干物質(zhì)的總重量按重量計≤3%,優(yōu)選≤2.5%,-當(dāng)從黃粉蟲制備殼多糖時,灰分含量≤1%,-脂質(zhì)含量基于干物質(zhì)的總重量按重量計≤6.5%,-當(dāng)從黃粉蟲制備殼多糖時,脂質(zhì)含量≤2%,-總氨基酸≤50%,優(yōu)選≤46%,-當(dāng)從飛行昆蟲制備殼多糖時,總氨基酸≤19%,-當(dāng)用prolyvenp作為酶從黃粉蟲制備殼多糖時,氨基酸含量≤23%,-選自ala、gly、leu、pro、ser、tyr、val的至少任何3種氨基酸的相對豐度≤10%,-當(dāng)從黃粉蟲制備殼多糖時,leu、pro、val的相對豐度≤10%,-比色純度≥62%,-差異純度≥40%,優(yōu)選≥46%,-當(dāng)從黃粉蟲制備殼多糖時,差異純度≥51%,-當(dāng)從飛行昆蟲制備殼多糖時,差異純度≥73%,-當(dāng)用prolyvenp作為酶從黃粉蟲制備殼多糖時,差異純度≥73%。根據(jù)本發(fā)明的殼多糖有利地包含小于或等于50%,優(yōu)選小于或等于46%的氨基酸含量,小于或等于3%,優(yōu)選小于或等于2.5%的灰分含量,以及大于或等于40%,優(yōu)選大于或等于46%的差異純度。優(yōu)選地,殼多糖具有所有上述性質(zhì)。上述特點的所有單位和測量方法在實施例中,且更具體地在實施例6中進行描述。用于從昆蟲生產(chǎn)殼多糖的特別有利的方法包括下述步驟:a)殺死昆蟲,b)研磨昆蟲,c)壓榨昆蟲,d)用蛋白水解酶酶促水解昆蟲角質(zhì)層,e)回收殼多糖,在步驟d)之前用氧化劑處理昆蟲角質(zhì)層。各個步驟a)至e)和用氧化劑處理昆蟲角質(zhì)層的優(yōu)選實施方案如上所述或在下文優(yōu)選實施方案的相應(yīng)步驟中描述。本發(fā)明還涉及殼多糖,例如可通過根據(jù)本發(fā)明的方法獲得的殼多糖。由于根據(jù)本發(fā)明的方法使用的溫和條件,該殼多糖具有的結(jié)構(gòu)接近于殼多糖的那種,因為它在昆蟲角質(zhì)層中以天然狀態(tài)出現(xiàn),同時具有高純度,例如包含在55至95%之間,優(yōu)選包含在60至95%之間,甚至更優(yōu)選在70至90%之間,且甚至更優(yōu)選在80至90%之間的純度。用于從昆蟲生產(chǎn)脫乙酰殼多糖的特別有利的方法包括下述步驟:a)殺死昆蟲,b)研磨昆蟲,c)壓榨昆蟲,d)用蛋白水解酶酶促水解昆蟲角質(zhì)層,e)回收殼多糖,f)所回收的殼多糖的脫乙?;?,g)回收脫乙酰殼多糖,在步驟d)之前用氧化劑處理昆蟲角質(zhì)層。各個步驟a)至g)和用氧化劑處理昆蟲角質(zhì)層的優(yōu)選實施方案如上所述或在下文優(yōu)選實施方案的相應(yīng)步驟中描述。本發(fā)明還涉及可通過根據(jù)本發(fā)明的方法獲得的脫乙酰殼多糖??赏ㄟ^根據(jù)本發(fā)明的方法獲得的殼多糖和/或脫乙酰殼多糖可以有利地用于各種應(yīng)用中:-在化妝品、藥??物、營養(yǎng)或飲食組合物中,-作為用于處理燒傷的生物材料,作為第二皮膚,用于制備角膜敷料或縫合材料,-作為過濾劑、組織形成劑、絮凝劑和/或吸附劑,特別是用于水過濾和純化。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案,該方法包括在圖1中示意性描述的下述步驟。應(yīng)當(dāng)注意,在該優(yōu)選實施方案中,某些步驟被指示為任選的。●步驟1:殺死昆蟲這種殺死步驟1使得能夠在降低微生物負(fù)荷(降低變質(zhì)風(fēng)險和健康風(fēng)險),并且通過使昆蟲內(nèi)部酶失活的同時殺死昆蟲,所述昆蟲內(nèi)部酶可以觸發(fā)自溶且因此觸發(fā)其快速褐變。殺死可以通過熱燙進行。昆蟲,優(yōu)選幼蟲,因此用水熱燙2至20分鐘,優(yōu)選5至15分鐘。優(yōu)選地,水在包含在95至105℃之間,優(yōu)選100℃的溫度下。在該熱燙步驟1中引入的水量如下確定:以ml計的水體積與以g計的昆蟲重量的比率優(yōu)選包含在0.3至10之間,更優(yōu)選在0.5至5之間,甚至更優(yōu)選在0.7至3之間,甚至更優(yōu)選約1。可選地,殺死可以通過漂燙進行。優(yōu)選地,昆蟲用包含在80至130℃之間,優(yōu)選在90至120℃之間,更優(yōu)選在95至105℃之間,甚至更優(yōu)選98℃的溫度下的蒸汽(蒸汽噴嘴或床),或包含在95至105℃之間,優(yōu)選100℃(通過噴嘴)的溫度下的水,或包含在80至130℃之間,優(yōu)選在90至120℃之間,更優(yōu)選在95至105℃之間的溫度下的混合模式(水+蒸汽)進行漂燙。在漂燙室中的停留時間包含1至15分鐘之間,優(yōu)選在3至7分鐘之間。在該步驟中,還能夠根據(jù)下文中間步驟中指出的細(xì)節(jié),使用包含氧化劑的熱燙或漂燙水來處理昆蟲角質(zhì)層。●中間步驟(任選的):用氧化劑處理角質(zhì)層可以在該方法中引入用氧化劑處理角質(zhì)層的專門步驟。有利地,處理角質(zhì)層的該中間步驟在殺死步驟1和研磨步驟2之間進行。該中間步驟優(yōu)選用選自過氧化氫(h2o2)、高錳酸鉀(kmno4)、臭氧(o3)和次氯酸鈉(naclo)的氧化劑,更優(yōu)選過氧化氫進行。根據(jù)第一個實施方案,在步驟1結(jié)束時,當(dāng)后者通過熱燙進行后,在將熱燙水任選冷卻至約40至60℃,優(yōu)選約50℃的溫度之后,將氧化劑直接引入熱燙罐內(nèi)。如銷售的過氧化氫通常為水溶液的形式,例如基于水的總重量按重量計30%的溶液。引入用于處理的過氧化氫的量是這樣的,其使得過氧化氫含量包含在基于昆蟲的總重量按重量計1至33%之間,優(yōu)選基于昆蟲的總重量按重量計2至12%,優(yōu)選按重量計約6%。根據(jù)第二個實施方案,將昆蟲從熱燙罐中取出,篩分并且重新引入罐內(nèi)。隨后將過氧化氫以稀釋水溶液的形式引入罐內(nèi),過氧化氫含量隨后包含在基于水的重量按重量計1至33%之間,優(yōu)選基于重量的水按重量計2至12%,且優(yōu)選按重量計約6%。●步驟2:研磨將昆蟲從熱燙罐或處理罐或者漂燙室中取出,隨后將其篩分,并且放置在研磨機例如刀磨機中,使得能夠?qū)⒗ハx粉碎成顆粒。為了促進研磨,可以添加一定量的水。該水量類似于在熱燙步驟1期間引入的水量:以ml計的水體積與以g計的昆蟲重量的比率優(yōu)選包含在0.3至10之間,更優(yōu)選在0.5至5之間,甚至更優(yōu)選在0.7至3之間,甚至更優(yōu)選約1。還能夠保留熱燙水和/或產(chǎn)生于中間步驟的水,以便進行該步驟。這種水可能含有氧化劑。在這種情況下,角質(zhì)層的處理可以在熱燙步驟1和研磨步驟2期間或者在角質(zhì)層處理的中間步驟期間和在研磨步驟期間發(fā)生。優(yōu)選地,在研磨完成時,昆蟲顆粒的尺寸小于1cm(使用顯微鏡可觀察到的最大粒度),優(yōu)選小于0.5cm。優(yōu)選地,顆粒的尺寸包含在300μm至0.5cm之間,更優(yōu)選在500μm至0.5cm之間,且甚至更優(yōu)選在500μm至1mm之間。無需過度減小粒子的尺寸,例如至小于250μm的尺寸。該研磨步驟2促進酶對其底物的接近。在該步驟中,能夠?qū)⒀趸瘎┮胙心C,以便根據(jù)前述中間步驟中所示的方法處理角質(zhì)層。當(dāng)角質(zhì)層的處理不伴隨著研磨進行時,在該步驟期間,能夠添加通常用于產(chǎn)物保存和穩(wěn)定性的抗氧化添加劑?!癫襟E3:壓榨昆蟲角質(zhì)層隨后將源于研磨步驟2的濕糊劑根據(jù)程序放置在壓榨機中,所述程序使得能夠壓榨且分離包含脂肪級分和蛋白質(zhì)級分兩者的汁。優(yōu)選地,壓榨步驟使得能夠獲得包含油含量小于或等于20%,優(yōu)選小于或等于15%,更優(yōu)選小于或等于12%,甚至更優(yōu)選小于或等于10%的壓榨餅。類似地,壓榨步驟使得能夠獲得干物質(zhì)含量包含在30%至60%之間,優(yōu)選包含在40%至55%之間,且更優(yōu)選包含在45%至50%之間的壓榨餅。任何壓榨系統(tǒng)可以用于進行壓榨步驟,例如單螺桿或雙螺桿壓榨機(angel型雙螺桿壓榨機)、壓濾機(choquenet型壓濾機)、壓板式擠壓機等。這些系統(tǒng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的,所述本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定壓榨條件以便獲得上述的油和/或水含量。如果用包含氧化劑的水獲得來自研磨步驟2的濕糊劑,則在壓榨步驟3之前去除該氧化劑的至少一部分可以是有利的。該壓榨步驟3可以任選地從熱燙的昆蟲開始在研磨步驟2之前進行。然而,在研磨步驟2之后執(zhí)行壓榨步驟3是有利的。該壓榨步驟3因此使得能夠獲得壓榨汁和壓榨餅。●步驟4:酶促水解將源于研磨步驟2的濕糊劑或源于壓榨步驟3的壓榨餅放置在具有水的水解罐中。任選地,且如下所述,源于分離步驟12的蛋白質(zhì)級分可以通過將其與壓榨餅混合而在該酶促水解步驟4中重新引入。任選地,且在熱燙水不含氧化劑的情況下,可以回收熱燙水并且在水解步驟中重新引入。事實上,這種水含有通過這種熱燙的動作已溶解的昆蟲級分,并且通過在水解中使用后者能夠減少損失。任選地,來自熱燙的這種水可以脫脂,因為某些蠟可以溶解在水中。在該酶促水解步驟4中引入的水量類似于在熱燙步驟1中引入的水量:以ml計的水體積與以g計的昆蟲重量的比率優(yōu)選包含在0.3至10之間,更優(yōu)選在0.5至5之間,甚至更優(yōu)選在0.7至3之間,甚至更優(yōu)選約1。在6至8,更特別地6.5至7.5的ph下,在40至60℃,更特別地45至55℃的溫度下,酶的水解用蛋白酶如商業(yè)蛋白酶進行4至8小時,更特別地4至5小時。在水解步驟中引入的酶的量基于進入水解的干物質(zhì)的估計總重量按重量計小于10%,優(yōu)選小于6%,更優(yōu)選約2%。蛋白酶解水解導(dǎo)致含有肽、葡糖胺和寡聚殼多糖的可溶相,以及由殼多糖主要是殼多糖-多肽共聚物形成的固體殘余物?!癫襟E5:熱失活為了停止反應(yīng)的酶的活性并且穩(wěn)定水解的可溶相,通過將該汁在80至105℃之間加熱10至25分鐘,優(yōu)選15至20分鐘來進行熱失活。根據(jù)一種程序,根據(jù)農(nóng)業(yè)食品工業(yè)的通常滅菌技術(shù)進行該熱失活步驟5。根據(jù)另一種程序,通過在ir或uv輻射下加熱或通過微波加熱進行酶失活?!癫襟E6:壓榨主要由殼多糖組成的固體殘余物被回收,隨后在壓榨機中壓榨用于使該殘余物的排出最大化,以便將該壓榨物重新注入可溶相內(nèi)。因此形成的壓榨殘余物基本上由殼多糖組成,主要以殼多糖-多肽共聚物的形式?!癫襟E7和8(任選的):洗滌和干燥隨后將固體殘余物洗滌、過濾、再次洗滌、隨后通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)干燥。有利地,干燥系統(tǒng)被設(shè)計成保護殼多糖-多肽共聚物的結(jié)構(gòu):控制液體比重測定法、通風(fēng)和空氣的組成。有利地,干燥可以在通風(fēng)爐中在60至80℃,優(yōu)選約70℃的溫度下進行。任選地,這些步驟可以包括最終的脫脂步驟:用hcl處理固體殘余物,以去除最后的脂質(zhì)殘留物,特別是角質(zhì)層蠟。接下來的步驟9至11用于將殼多糖轉(zhuǎn)化為脫乙酰殼多糖,并且因此僅在所需產(chǎn)物為脫乙酰殼多糖時使用?!癫襟E9(任選的):研磨隨后例如在切割(刀)磨機中,將主要包含殼多糖的干燥的固體殘余物研磨。通過脫乙酰反應(yīng)從殼多糖生產(chǎn)脫乙酰殼多糖在很大程度上取決于殼多糖顆粒的大小。因此,脫乙酰化之前干燥固體殘留物的非常細(xì)的研磨使得可能顯著增加產(chǎn)率和脫乙?;磻?yīng)的速率,如下表1所示:研磨30秒研磨45秒研磨60秒研磨120秒50%的顆粒<174μm<117μm<95μm<67μm90%的顆粒<310μm<244μm<157μm<159μmda*99%90%85%80%表1:根據(jù)殼多糖的先前研磨脫乙?;男省?乙?;潭萪a的測量。在表1中報道的測試中進行的脫乙酰化條件如下:反應(yīng)時間4小時,100℃,以30體積%在水溶液中的naoh,估計的殼多糖:naoh溶液的比率等于1:20。因此,固體殘余物優(yōu)選研磨成小于200μm,更優(yōu)選小于160μm的粒度?!癫襟E10:脫乙?;S后將任選在步驟9中研磨的固體殘余物置于反應(yīng)器中,向其中加入濃縮氫氧化鈉溶液共4至24小時,且優(yōu)選6至18小時。含量范圍為30%至40%的在水溶液中的氫氧化鈉以g研磨的殼多糖的重量/以ml水溶液中的氫氧化鈉的體積的比率加入,所述比率包含在1:50至1:10之間,優(yōu)選約1:20。隨后將罐加熱,脫乙?;瘻囟仍?0至150℃之間,優(yōu)選在90至120℃之間,且更優(yōu)選在100℃下。脫乙酰殼多糖因此以粉末形式獲得。隨后,脫乙酰殼多糖可以經(jīng)歷本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何操作,允許其被官能化,特別是通過加入自由基(羧基化、羥基化等)?!癫襟E11(任選的):干燥隨后將脫乙酰殼多糖粉末在30至80℃之間,優(yōu)選在50至70℃之間,優(yōu)選在約60℃下干燥,以便獲得干物質(zhì)含量大于85%,更特別地大于90%的粉末。接下來的步驟用于從壓榨步驟3中獲得的汁中回收脂肪級分和蛋白質(zhì)級分,并且因此僅在需要這種回收時使用?!癫襟E12:分離壓榨汁經(jīng)歷一個或多個分離步驟,以便使脂肪級分(昆蟲油)與蛋白質(zhì)級分(昆蟲血淋巴蛋白)分離。這些步驟可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的任何油分離技術(shù)進行,例如離心、傾析、通過反滲透分離、超濾、超臨界co2等、或這些技術(shù)中的幾種的組合??紤]到昆蟲中存在非常不同組成的油,脂肪級分的分離可能是復(fù)雜的,并且脂肪酸可以具有短鏈(c2-c5)以及非常長的鏈(例如,對于蠟:>c25)。在離心過程中將溫度升高到高于這些油的熔點(大約38℃)使得能夠溶解該膏狀物,并且促進脂肪級分與汁的剩余部分的分離。離心液隨后經(jīng)歷根據(jù)(潷析器或tricanter型)的程序的傾析,用于油和蛋白質(zhì)的最佳可能分離。因此,這些步驟使得能夠獲得脂肪級分。一旦與脂肪級分分離,蛋白質(zhì)級分就可以緊在水解步驟4之前與源于壓榨步驟3的壓榨餅混合。事實上,在壓榨步驟3中,通常多于20%的蛋白質(zhì)在汁中損失,因此回收該級分并且使其經(jīng)受水解步驟有益?!癫襟E13(任選的):濃縮根據(jù)一種程序,通過水性部分的真空蒸發(fā)進行濃縮。濃縮物具有大于10%,優(yōu)選大于20%的干提取物。該操作促進干燥,并且可以在該步驟中添加通常用于產(chǎn)物保存和穩(wěn)定性的添加劑。●步驟14(任選的):干燥濃縮物最終通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)進行干燥,例如噴霧/霧化(“噴霧干燥”),這使得能夠獲得提取物,即富含濃縮肽和葡糖胺的濃縮物的干粉,所述葡糖胺特別源于通過h2o2(基本上)的殼多糖部分水解。參考附圖,由給出作為舉例說明的下述實施例,本發(fā)明的其他特點和優(yōu)點將變得清楚,所述附圖分別表示:-圖1是根據(jù)本發(fā)明的方法的優(yōu)選實施例的流程圖,-圖2是比較通過含和不含過氧化氫的酶促方法獲得的殼多糖的純度的圖表,-圖3是舉例說明提?。复倩蚧瘜W(xué))方法和用氧化劑處理對獲得的殼多糖的影響的圖表,-圖4是比較通過酶促方法獲得的殼多糖的純度的圖表,所述酶促方法包括研磨和壓榨的一個或多個初步步驟,-圖5是比較在從其中提取殼多糖的中間產(chǎn)物的不同級分中測量的脂質(zhì)含量的圖表,-圖6顯示了通過酶促方法獲得的壓榨汁和壓榨餅之間的脂質(zhì)分布,所述酶促方法包括在研磨和壓榨之前的步驟或在壓榨之前的步驟,-圖7是比較通過酶促方法獲得的殼多糖的純度的圖表,所述酶促方法包括在研磨操作、壓榨和用氧化劑處理之前的一個或多個步驟,-圖8:組合步驟對水解產(chǎn)物中的脂質(zhì)含量的作用,-圖9:通過該方法獲得的水解產(chǎn)物的消化率,-圖10:tm+prolyve:水解產(chǎn)物中的氨基酸的相對豐度,-圖11:tm+sumizyme:水解產(chǎn)物中的氨基酸的相對豐度,-圖12:tm+novozyme:水解產(chǎn)物中的氨基酸的相對豐度,-圖13:tm+中性蛋白酶:水解產(chǎn)物中的氨基酸的相對豐度,-圖14:hi+prolyve:水解產(chǎn)物中的氨基酸的相對豐度,-圖15:gm+prolyve:水解產(chǎn)物中的氨基酸的相對豐度,-圖16:ad+prolyve:水解產(chǎn)物中的氨基酸的相對豐度,-圖17:將氧化劑和壓榨步驟組合對殼多糖中的灰分含量的作用,-圖18:組合步驟對殼多糖中的脂質(zhì)含量的協(xié)同作用,-圖19:tm+prolyve:殼多糖中的氨基酸的相對豐度,-圖20:tm+sumizyme:殼多糖中的氨基酸的相對豐度,-圖21:tm+novozyme:殼多糖中的氨基酸的相對豐度,-圖22:tm+中性蛋白酶:殼多糖中的氨基酸的相對豐度,-圖23:hi+prolyve:水解產(chǎn)物中的氨基酸的相對豐度,-圖24:gm+prolyve:殼多糖中的氨基酸的相對豐度,-圖25:ad+prolyve:殼多糖中的氨基酸的相對豐度,-圖26:殼多糖的重量分析純度-不同酶,-圖27:殼多糖的重量分析純度-不同昆蟲,-圖28:從黃粉蟲獲得的殼多糖的比色純度-不同酶,-圖29:通過該方法獲得的殼多糖的比色純度-不同昆蟲,-圖30:所獲得的殼多糖的差異純度,和-圖31:所獲得的殼多糖的結(jié)晶度。在下文給出的實例中,對規(guī)定或指令的任何參考涉及如對本申請的提交日期有效的所述規(guī)定或所述指令。實施例1:根據(jù)本發(fā)明的方法的實施例將50g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的50ml6%過氧化氫溶液。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后用100ml體積的水研磨。將因此獲得的液體傳送到雙螺桿型壓榨機內(nèi),這導(dǎo)致具有20.9±1.3%干物質(zhì)含量的17.89±0.87g壓榨餅,以及具有4.04±0.05%干物質(zhì)含量的389.49±6.53g壓榨汁。將因此獲得的10g(濕重)壓榨餅轉(zhuǎn)移到含有50ml水和0.1g蛋白酶(prolyve)的錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(在大約6.5的ph下)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。因此,通過該方法獲得0.64±0.05g殼多糖。實施例2:用氧化劑處理角質(zhì)層的存在對所獲得的殼多糖純度的影響將25g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的50ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后用25ml體積的水研磨。在具有過氧化氫的反應(yīng)的情況下,將因此獲得的液體置于過氧化氫溶液下1小時,隨后轉(zhuǎn)移到含有4%蛋白酶(sumizymelp)溶液的250-ml錐形瓶中,否則將其直接轉(zhuǎn)移到含有蛋白酶溶液的錐形瓶中。將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(ph大約6.5)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。在使用過氧化氫后因此獲得的干燥殘余物相對于初始干物質(zhì)為6.3±0.7%,而產(chǎn)生于不含過氧化氫的方法的干燥殘余物相對于初始干物質(zhì)為9.75±0.9%。與相對于產(chǎn)生于化學(xué)提取的那種獲得的干殘余物的重量相比,確定了殼多糖的純度,初始干物質(zhì)的5%。它因此對于用過氧化物處理后獲得的產(chǎn)物確認(rèn)為79.9±9%,并且在不存在過氧化物的情況下確認(rèn)為51.5±4.9%(參見圖2)。實施例3:使用氧化劑和酶促水解處理角質(zhì)層的順序的影響酶促獲得脫乙酰殼多糖(不添加氧化劑)將50g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的50ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后用100ml體積的水研磨。將因此獲得的液體轉(zhuǎn)移到含有150ml1%蛋白酶溶液(prolyve)的500-ml錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(ph大約6.5)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。通過該方法獲得1.656±0.021g殼多糖。在熱燙期間添加h2o2而酶促獲得殼多糖將50g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的50ml6%h2o2水溶液。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后與100ml體積的水混合。將因此獲得的液體轉(zhuǎn)移到含有150ml1%蛋白酶溶液(prolyve)的500-ml錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。通過該方法獲得1.98±0.22g殼多糖。通過水解后伴隨h2o2添加的酶促途徑獲得殼多糖將50g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的50ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后用100ml體積的水研磨。將因此獲得的液體轉(zhuǎn)移到含有150ml1%蛋白酶溶液(prolyve)的500-ml錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(ph大約6.5)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。隨后將殘余物置于在65℃下6%h2o2溶液中1小時。將因此獲得的殼多糖過濾(0.45-0.5μm),隨后在70℃下干燥24小時。通過該方法獲得1.304±0.091g殼多糖。通過化學(xué)途徑獲得殼多糖將50g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的50ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后用60ml體積的水研磨。將因此獲得的液體與50ml水一起轉(zhuǎn)移至1l瓶中。加入500ml1mhcl,并且將整體置于在90℃下的攪拌1小時。隨后將反應(yīng)混合物過濾并且用水洗滌,直到獲得澄清的殘余物。隨后將該殘余物轉(zhuǎn)移到1l瓶中,向其中加入500ml1mnaoh,并且將整體置于在90℃下的攪拌24小時。隨后將反應(yīng)混合物過濾并且洗滌,直到獲得澄清的濾液,并且將殘余物最終在70℃下干燥24小時。通過該方法獲得0.944±0.005g殼多糖。所獲得的殼多糖的分子量測定(通過粘度測定法)將含有1g殼多糖和10ml1mnaoh的燒瓶在90℃下靜置4小時。隨后將混合物過濾(0.45-0.5μm),并且將因此洗滌的殘余物在70℃下靜置24小時。溶劑的制備:將5glicl置于100ml的n,n-二甲基乙酰胺中,并且攪拌4-5小時(直到完全溶解)。通過將0.2mg殼多糖溶解在1ml溶劑中來獲得原液。從該原液開始制備濃度為0.1mg/ml、0.08mg/ml和0.04mg/ml的稀釋液。隨后用ostwald型粘度計一式三份地測量這些各種溶液的粘度,并且分子量由下式計算:[η]=kmwα(1)其中[η]:以cm3/g的固有粘度,mw:以g/摩爾(或da)的殼多糖的摩爾質(zhì)量,和mark-houwink系數(shù)α=0.71和k=0.000893,固有粘度由下述獲得:[η]=ηr/c(2)其中ηr:折合粘度(不含單位),c:以mg/ml的濃度,折合粘度由下述獲得:ηr=t/t0(3)其中t:以s對于溶液測量的衰減時間,t0:以s對于溶劑測量的衰減時間。從圖3可以看出,所獲得的殼多糖分子的大小根據(jù)所使用的提取方法。因此,化學(xué)方法損害了分子的完整性(所獲得的mw低于70,000g/摩爾),但最苛刻的處理是由在水解后用過氧化氫漂燙殼多糖,甚至酶促水解組成的那種(mw低于9,000g/摩爾)。根據(jù)本發(fā)明的方法(在熱燙期間或緊在熱燙之后,即在方法開始時伴隨過氧化氫添加的酶促水解)相對于最初在昆蟲中可以發(fā)現(xiàn)的那種確實降低了分子的尺寸(通過簡單酶促水解的殼多糖的mw為130,000g/摩爾),但至小得多的程度(mw接近于80,000g/摩爾),并且所獲得的結(jié)果大于與常規(guī)化學(xué)提取相關(guān)的那種。實施例4:在酶促水解之前的壓榨步驟對所獲得的殼多糖純度的影響測試不同類型的機械預(yù)處理:單獨的研磨(“研磨1”)、研磨隨后為壓榨、研磨隨后為壓榨和第二次研磨(“研磨2”)、以及單獨的壓榨。對于壓榨,在下述條件下使用angel型壓榨機。-速度=82轉(zhuǎn)/分;-w(能量)=3hp(馬力)或2.68x106j;-孔隙率(近似值)=第一部分中為0.5mm和最后部分中為0.2mm。1.材料與方法使用一次研磨的殼多糖生產(chǎn)將200g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),并且置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的200ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后與200ml體積的水混合。將因此獲得的液體轉(zhuǎn)移到含有2g蛋白酶(prolyve)的錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(在大約6.5的ph下)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。因此,通過該方法獲得8.13±0.27g殼多糖。使用研磨隨后為壓榨的殼多糖生產(chǎn)將200g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),并且置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的200ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后與200ml體積的水混合。將因此獲得的液體傳送到雙螺桿型壓榨機內(nèi)。將30g因此獲得的壓榨餅轉(zhuǎn)移到含有150ml水和0.3g蛋白酶(prolyve)的錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(在大約6.5的ph下)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。因此,通過該方法獲得4.71±0.11g殼多糖。使用第一次研磨(“研磨1”)隨后為壓榨和第二次研磨(“研磨2”)的殼多糖生產(chǎn)將200g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),并且置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的200ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后與200ml體積的水混合。將因此獲得的液體傳送到雙螺桿型壓榨機內(nèi)。使因此獲得的壓榨餅在70℃的烘箱中干燥24小時,隨后研磨至250μm。將10g因此獲得的粉末轉(zhuǎn)移到含有50ml水和0.1g蛋白酶(prolyve)的錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(在大約6.5的ph下)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。因此,通過該方法獲得4.93±0.12g殼多糖。僅使用壓榨的殼多糖生產(chǎn)將200g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),并且置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的200ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后傳送到雙螺桿型壓榨機內(nèi)。將90g因此獲得的壓榨餅轉(zhuǎn)移到含有450ml水和0.9g蛋白酶(prolyve)的錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(在大約6.5的ph下)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。因此,通過該方法獲得6.48±0.28g殼多糖。通過化學(xué)途徑的殼多糖生產(chǎn)將50g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),并且置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的50ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后與60ml體積的水混合。將因此獲得的液體轉(zhuǎn)移到1-l容器中,并且加入500ml1mhcl溶液。將整體置于在90℃下的攪拌1小時。隨后過濾內(nèi)容物,并且將固體殘余物轉(zhuǎn)移到含有500ml1mnaoh溶液的1l瓶中;將整體置于在90℃下的攪拌24小時。隨后過濾殘余物,并且置于在70℃下的通風(fēng)爐中24小時。因此,獲得0.944±0.005g化學(xué)純化的殼多糖。純度的計算殼多糖的純度通過比較獲得的干燥殘余物的重量相對于產(chǎn)生于化學(xué)提取的重量來確定,初始干物質(zhì)的大約5%。脂質(zhì)含量的測量將2g樣品置于燒杯中,向其中加入0.2gna2so4和15mlchcl3/meoh(2/1v/v)。將整體置于磁力攪拌下20分鐘,隨后過濾溶液,并將殘留物再次置于具有10mlchcl3/meoh(2/1v/v)的燒杯中。將整體置于磁力攪拌下15分鐘,隨后過濾溶液,將溶劑相合并且蒸發(fā)至恒重。脂質(zhì)含量測定為相對于樣品的初始重量(2g)在提取-蒸發(fā)后按重量計的百分比。2.結(jié)果從由圖4可以看出的,該方法對所獲得的殼多糖純度具有影響,使用最小的壓榨獲得最好的結(jié)果。最好的結(jié)果使用研磨隨后為壓榨獲得,即純度為78%的殼多糖,并且最差的結(jié)果使用單獨的研磨獲得,即純度為48%的殼多糖。由其提取殼多糖的中間產(chǎn)物的更精細(xì)分析顯示低脂質(zhì)含量促進所獲得的殼多糖的更大純度(圖5)?!爸虚g產(chǎn)物”意指進入酶促水解的產(chǎn)物,即源于水解前的最后一步,即根據(jù)上述生產(chǎn)方法,研磨步驟1或2或壓榨步驟。殼多糖和水解汁中的脂質(zhì)含量的分析事實上顯示,根據(jù)中間產(chǎn)物中存在的初始脂質(zhì)含量,殼多糖中的脂質(zhì)含量相對穩(wěn)定,為7至15%,而水解產(chǎn)物中的脂質(zhì)含量從11%到47%不等(圖3)。更具體地,如果中間產(chǎn)物具有35%的脂質(zhì)含量,則:-產(chǎn)生于水解的殼多糖僅為50%純的,并且將含有10%的脂質(zhì),和-水解產(chǎn)物的脂質(zhì)含量本身將接近于40%。然而,如果中間產(chǎn)物的脂質(zhì)含量為7%,則:-水解后獲得的殼多糖將具有80%的純度,并且將具有8%的脂質(zhì)含量,并且水解產(chǎn)物也將具有約10%的低脂質(zhì)含量。這指示當(dāng)初始脂質(zhì)含量很高,大于12%時,負(fù)責(zé)水解的酶不僅促使水解蛋白質(zhì),還通過催化多功能性(catalyticpromiscuity)水解脂質(zhì)。因此,在初始脂質(zhì)分別為35%和7%的情況下,獲得殼多糖中類似的脂質(zhì)含量,即8.6和7.9%。然而,殼多糖的純度在這種情況下分別從48%到84%。因此,一方面52%的雜質(zhì)和另一方面16%,平均8%是由于脂質(zhì),并且仍附著至殼多糖的蛋白質(zhì)的量因此比更多脂質(zhì)存在于經(jīng)受水解的中間產(chǎn)物中的情況下高38個點。最后,也可以研究壓榨上游的研磨的重要性(圖6)。因此,可以清楚地看出,當(dāng)進行初步研磨時,餅和壓榨汁之間的脂質(zhì)分布遠(yuǎn)遠(yuǎn)更有效,12.9相對于87.1,針對42.7相對于57.3。實施例5:在酶促水解之前的步驟組合對所獲得的殼多糖純度的影響測試不同類型的預(yù)處理:單獨的研磨、研磨隨后為壓榨、用氧化劑(h2o2)處理角質(zhì)層隨后為研磨、以及用氧化劑(h2o2)處理角質(zhì)層隨后為研磨和壓榨。對于壓榨,使用實施例4中所述的angel型壓榨機,在下述條件下:-速度=82轉(zhuǎn)/分;-w(能量)=3hp(馬力)或2.68x106j;-孔隙率(近似值)=第一部分中為0.5mm和最后部分中為0.2mm。1.材料與方法使用研磨的殼多糖生產(chǎn)將200g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的200ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后與200ml體積的水混合。將因此獲得的液體轉(zhuǎn)移到含有2g蛋白酶(prolyve)的錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(在大約6.5的ph下)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。通過該方法獲得8.13±0.27g殼多糖。使用研磨隨后為壓榨的殼多糖生產(chǎn)將200g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的200ml水。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后用200ml體積的水研磨。將因此獲得的液體傳送通過雙螺桿型壓榨機內(nèi)。將30g因此獲得的壓榨餅轉(zhuǎn)移到含有150ml水和0.3g蛋白酶(prolyve)的錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(在大約6.5的ph下)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。通過該方法獲得4.71±0.11g殼多糖。用氧化劑(h2o2)處理角質(zhì)層后隨后為研磨的殼多糖生產(chǎn)將50g黃粉蟲幼蟲引入燒杯內(nèi),置于100℃下的水浴中,其含有預(yù)先煮沸的50ml6%過氧化氫溶液。5分鐘后,將燒杯從水浴中取出,將幼蟲排干,隨后用100ml體積的水研磨。將因此獲得的液體轉(zhuǎn)移到含有150ml水和0.5g蛋白酶(prolyve)的錐形瓶中,并且將整體置于在45℃下的磁力攪拌4小時(在大約6.5的ph下)。隨后將錐形瓶置于在90℃下的水浴中15分鐘,以便使酶失活,隨后將溶液在0.45-0.5μm下熱過濾。因此獲得的殼多糖在70℃下干燥24小時。通過該方法獲得1.98±0.22g殼多糖。用氧化劑(h2o2)處理角質(zhì)層隨后為研磨和壓榨的殼多糖生產(chǎn)該測試根據(jù)實施例1進行。純度的計算根據(jù)最初包含在幼蟲中的殼多糖含量,即幼蟲干重的大約5%,通過重量分析法計算殼多糖純度。2.結(jié)果結(jié)果呈現(xiàn)于圖7中。通過酶促水解獲得的殼多糖的純度高度依賴于所使用的預(yù)處理方法。因此,當(dāng)僅在酶促水解之前進行研磨時,該方法僅導(dǎo)致48%的純度,而壓榨步驟或用氧化劑處理角質(zhì)層的添加使得能夠獲得50-78%的純度。最后,將壓榨步驟與用氧化劑處理角質(zhì)層組合使得能夠獲得純度88%的殼多糖。產(chǎn)生于將壓榨步驟與用氧化劑處理角質(zhì)層的步驟組合的協(xié)同效應(yīng)下表2概括了圖7中呈現(xiàn)示的結(jié)果。單獨的研磨研磨+壓榨h2o2+研磨h2o2+研磨+壓榨所獲得的殼多糖的純度48%78%50%88%相對于單獨的研磨在殼多糖純度中的改善-+63%+4%+83%表2:根據(jù)所使用的預(yù)處理方法在殼多糖的純度中的改善表2證實了將壓榨步驟和用氧化劑處理步驟組合的協(xié)同效應(yīng)。實施例6:根據(jù)所使用的制備方法表征水解產(chǎn)物和殼多糖i.材料與方法a)材料昆蟲研究了各種昆蟲:-鞘翅目:黃粉蟲(黃粉蟲或tm),-鱗翅目:蠟螟(蠟螟或gm),-雙翅目:黑水虻(黑水虻或hi),和-直翅目:家蟋蟀(家蟋蟀或ad)。酶在水解步驟中使用各種酶。酶促活性的這種測量基于在通過蛋白水解酶的酪蛋白水解期間在275nm處的酪氨酸釋放的測量原理(通過karenpratt的valleyresearchsapuassay方法)。sapu/g=蛋白酶的一個分光光度計單位δa=相關(guān)吸光度i=在原點處的y軸11=最終反應(yīng)體積m=校正曲線的斜率30=反應(yīng)時間(分鐘)c=所加入的酶溶液中的酶濃度(g/ml)1=所加入的酶溶液的1ml體積校正曲線通過測量在磷酸鹽緩沖液(0.2m,ph7)中不同濃度的酪氨酸溶液的吸光度而獲得。使5ml酪蛋白溶液(0.7%w/v,磷酸鹽緩沖液0.2m,ph7,在90℃下加熱30分鐘并且具有加入的3.75g/l溶液)與待測試的1ml酶溶液(在100ml甘氨酸緩沖液中0.15g,0.05m)一起在37℃下溫育30分鐘。隨后加入5mltca溶液(18gtca,11.35g無水乙酸鈉,21ml冰乙酸,用脫礦物質(zhì)的水補足為1升溶液),在渦旋下混合,過濾并測量在275nm處的吸光度。對照相同制備但不添加酶,而是加入1ml脫礦物質(zhì)的水以便具有相同的反應(yīng)體積。因此對于所使用的各種酶(prolyvenp、novozyme37071、中性蛋白酶和sumizyme)測量的活性列于表3中。表3.所使用的酶的活性和酶質(zhì)量的對應(yīng)關(guān)系。b)生產(chǎn)方法僅使用研磨的生產(chǎn)方法(在圖中指示為“研磨”)將600g新鮮昆蟲(在黃粉蟲、蠟螟或黑水虻的情況下的幼蟲;在家蟋蟀的情況下的蟋蟀)引入腔室內(nèi),在其中它們用蒸汽殺死(115℃,5分鐘)。隨后將昆蟲引入混合器內(nèi),并且加入75ml水/100g昆蟲,隨后將整體混合。隨后將因此獲得的100g(濕重)的產(chǎn)物引入配備有冷凝器和機械攪拌器的三頸燒瓶內(nèi),隨后加入具有等價于3789sapu的活性的蛋白水解酶。隨后將反應(yīng)混合物加熱至45℃共4小時。隨后將溫度升高到90℃共15分鐘,并且最后過濾反應(yīng)混合物(0.40-0.45μm)。殘余物在70℃下干燥24小時:這因此是通過純化的酶促途徑獲得的殼多糖;將濾液冷凍且凍干:這因此是水解產(chǎn)物。無論研究何種昆蟲或酶,方法是相同的。使用研磨隨后為壓榨的生產(chǎn)方法(圖中指示為“研磨+壓榨”)將600g新鮮昆蟲(在黃粉蟲、蠟螟或黑水虻的情況下的幼蟲;或在家蟋蟀的情況下的蟋蟀)引入腔室內(nèi),在其中用蒸汽(115℃,5分鐘)殺死它們。隨后將昆蟲引入混合器內(nèi),并且加入75ml水/100g昆蟲,隨后將整體混合且壓榨(雙螺桿壓榨機、或壓濾機或其他壓榨系統(tǒng))。隨后將因此獲得的100g(濕重)的產(chǎn)物引入配備有冷凝器和磁力攪拌器的三頸燒瓶內(nèi),加入500ml水以及具有等價于3789sapu的活性的蛋白水解酶。隨后將反應(yīng)混合物在45℃下加熱4小時。隨后將溫度升高到90℃共15分鐘,并且最后過濾反應(yīng)混合物(0.40-0.45μm)。殘余物在70℃下干燥24小時:這因此是通過純化的酶促途徑獲得的殼多糖;將濾液冷凍且凍干:這因此是水解產(chǎn)物。無論研究何種昆蟲或酶,方法是相同的。使用昆蟲角質(zhì)層的研磨和氧化處理的生產(chǎn)方法(圖中指示為“研磨+h2o2”)將600g新鮮昆蟲(在黃粉蟲、蠟螟或黑水虻的情況下的幼蟲;或在家蟋蟀的情況下的蟋蟀)引入腔室內(nèi),在其中用水/h2o2混合物(6%)的蒸氣(115℃,5分鐘)殺死它們。隨后將昆蟲引入混合器內(nèi),并且加入75ml水/100g昆蟲,隨后將整體混合。隨后將因此獲得的100g(濕重)的產(chǎn)物引入配備有冷凝器和機械攪拌器的三頸燒瓶內(nèi),隨后加入具有等價于3789sapu的活性的蛋白水解酶。隨后將反應(yīng)混合物在45℃下加熱4小時。隨后將溫度升高到90℃共15分鐘,并且最后過濾反應(yīng)混合物(0.40-0.45μm)。殘余物在70℃下干燥24小時:它因此是通過純化的酶促途徑獲得的殼多糖;將濾液冷凍且凍干:這因此是水解產(chǎn)物。無論研究何種昆蟲或酶,方法是相同的。使用研磨、昆蟲角質(zhì)層的氧化處理和壓榨的生產(chǎn)方法(圖中指示為“研磨+h2o2+壓榨”)將600g新鮮昆蟲(在黃粉蟲、蠟螟或黑水虻的情況下的幼蟲;或在家蟋蟀的情況下的蟋蟀)引入腔室內(nèi),在其中用水/h2o2混合物的蒸氣(115℃,5分鐘)殺死它們。隨后將昆蟲置于混合器內(nèi),并且加入75ml水/100g昆蟲,隨后將整體混合且壓榨(雙螺桿壓榨機、或壓濾機或其他壓榨系統(tǒng))。隨后將因此獲得的100g(濕重)的產(chǎn)物引入配備有冷凝器和磁力攪拌器的三頸燒瓶內(nèi),隨后加入500ml水以及具有等價于3789sapu的活性的蛋白水解酶。隨后將反應(yīng)混合物在45℃下加熱4小時。隨后將溫度升高到90℃共15分鐘,并且最后過濾反應(yīng)混合物(0.40-0.45μm)。殘余物在70℃下干燥24小時:這因此是通過純化的酶促途徑獲得的殼多糖;將濾液冷凍且凍干:這因此是水解產(chǎn)物。無論研究何種昆蟲或酶,方法是相同的。c)分析灰分含量的測量灰分含量通過基于日期為27-01-2009的ecregulation152/2009的方法確定。蛋白質(zhì)含量的測量蛋白質(zhì)含量通過dumas法獲得,轉(zhuǎn)換因子為6.25,由標(biāo)準(zhǔn)nfeniso16634-1改編。脂質(zhì)含量的測量脂質(zhì)含量通過由ecregulation152/2009–方法b–sn改編的方法獲得。胃蛋白酶消化率胃蛋白酶消化率通過directive72/199/ec中描述的方法測量。氨基酸的相對豐度氨基酸的豐度通過衍生自日期為27-01-2009-sn的ecregulation152/2009的方法測定。色氨酸含量通過由日期為27-01-2009的ecregulation152/2009–sn改編的方法分開測定。通過將每個氨基酸的含量與氨基酸含量相關(guān)聯(lián)來計算相對豐度。氨基酸含量氨基酸含量通過將對于每種氨基酸(包括色氨酸)獲得的各個值加在一起來確定。重量分析純度通過比較獲得的干燥殘余物的重量相對于產(chǎn)生于化學(xué)提取的重量,確定重量分析純度,后者在大約5%的初始干物質(zhì)下進行評估。比色純度通過使用imagej軟件,根據(jù)三種顏色紅色、綠色和藍色(rgb)分析樣品的照片來估計樣品的顏色,它們的平均值表示對真實顏色的評價。采取通過chitine法國銷售的對蝦殼多糖樣品作為標(biāo)準(zhǔn)(100%純度),并且所生產(chǎn)樣品的比色純度計算為該顏色的百分比(樣品顏色與標(biāo)準(zhǔn)顏色的比率)。差異純度對于該測量,從絕對純度(100%)的值中減去已知雜質(zhì)(氨基酸、脂質(zhì)和灰分)的量,以獲得由差異估計的純度值;即含有30%蛋白質(zhì)、10%脂質(zhì)和1%灰分的樣品因此被指定為100-30-10-1=59%的純度。結(jié)晶度根據(jù)waxs(廣角x射線散射)技術(shù),在配備有l(wèi)ynxeyexe檢測器的brukerd8advance儀器(a25davinci設(shè)計)上進行測量。結(jié)果遵循loelovich,m.res.rev.:j.chem.2014,3,7-14中所述的方法加以解釋。ii.水解產(chǎn)物a)灰分對各種昆蟲和不同酶研究了源于方法“研磨+h2o2+壓榨”的水解產(chǎn)物的灰分含量。以按水解產(chǎn)物的重量計%所述的這些灰分含量顯示于下表4中。tm+prolyve2.3tm+sumizyme2.5tm+novozyme1.95tm+中性蛋白酶2.6hi+prolyve3.3gm+prolyve2.4ad+prolyve2.4表4:水解產(chǎn)物的灰分含量-不同的昆蟲和酶。因此,對于所有測試的昆蟲和酶,水解產(chǎn)物中的灰分含量<3.5%,并且即使對于天然具有低至中等灰分含量的昆蟲,該含量也<3%。b)蛋白質(zhì)含量對各種昆蟲和不同酶研究了源于方法“研磨+h2o2+壓榨”的水解產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)含量。以按水解產(chǎn)物的重量計%所述的這些含量顯示于下表5中。tm+prolyve81.2tm+sumizyme80tm+novozyme83.25tm+中性蛋白酶85.1hi+prolyve74.85gm+prolyve76.6ad+prolyve82.8表5:水解產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)含量-不同的昆蟲和酶。對于所有測試的昆蟲和酶,水解產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)含量>74%,并且即使對于非飛行昆蟲,該含量也≥80%。c)脂質(zhì)含量對各種昆蟲和不同酶研究了源于方法“研磨+h2o2+壓榨”的水解產(chǎn)物中的脂肪含量。以按水解產(chǎn)物的重量計%所述的這些含量顯示于下表6中。tm+prolyve2.9tm+sumizyme4.4tm+中性蛋白酶2.7hi+prolyve8.3gm+prolyve9.5ad+prolyve3表6:水解產(chǎn)物中的脂質(zhì)含量-不同的昆蟲和酶。將使用氧化劑的步驟和壓榨步驟組合有助于顯著降低水解產(chǎn)物中的脂質(zhì)含量(圖8)。因此,對于所有的昆蟲,該含量小于10%,并且對于非飛行昆蟲甚至小于5%。d)消化率該方法使得能夠獲得具有非常高的消化率水平的水解產(chǎn)物,>93%,無論研究何種酶或昆蟲(圖9)。e)氨基酸豐度通過該方法獲得的水解產(chǎn)物主要由氨基酸如丙氨酸、谷氨酸鹽、天冬氨酸和酪氨酸,以及較少程度的纈氨酸、絲氨酸和甘氨酸組成,無論研究何種酶或昆蟲(圖10-16)。iii.殼多糖a)灰分對各種昆蟲和不同酶研究了源于方法“研磨+h2o2+壓榨”的殼多糖的灰分含量。以按殼多糖的重量計%所述的這些灰分含量顯示于下表7中。tm+prolyve0.5tm+sumizyme0.95tm+novozyme0.75tm+中性蛋白酶0.65hi+prolyve2.3gm+prolyve0.7ad+prolyve2.35表7:殼多糖的灰分含量-不同的昆蟲和酶。通過該方法獲得的殼多糖中的灰分含量非常低,<2.5%,無論研究何種酶或昆蟲。此外,觀察到加入壓榨和氧化劑步驟對所獲得的殼多糖中的灰分含量的引人注意的協(xié)同作用(圖17)。因此,對于方法“研磨+h2o2+壓榨”,存在脫礦物質(zhì)化,相對于使用單獨研磨的方法,所述脫礦物質(zhì)化可以達到76.2%,針對對于方法“研磨+壓榨”的僅66.7%和方法“研磨+h2o2”的63.5%的脫礦物質(zhì)化。b)脂質(zhì)含量通過該方法獲得的殼多糖中的脂質(zhì)含量非常低,<6.5%,無論使用何種昆蟲或酶(表8),并且在黃粉蟲的情況下甚至<3.2%,無論使用何種酶。tm+prolyve3.1tm+sumizyme2.8tm+novozyme2.05tm+中性蛋白酶2.5gm+prolyve6.3ad+prolyve6表8.殼多糖中的脂質(zhì)含量。此外,觀察到將氧化劑添加和壓榨步驟組合的引人注意的協(xié)同作用(圖18)。事實上,在這種情況下,觀察到60-77%的脂質(zhì)含量中的降低,針對在使用單獨壓榨的方法中的15-60%以及在具有單獨的氧化劑添加的方法中的3-3.6%。c)氨基酸含量和豐度存在于殼多糖中的氨基酸含量相對較低,<46%,無論研究何種酶或昆蟲(表9)。tm+prolyve22.75tm+sumizyme44.74tm+novozyme45.45tm+中性蛋白酶45.20hi+prolyve12.97gm+prolyve18.92ad+prolyve45.56表9.殼多糖中存在的氨基酸含量。可以說對于所有昆蟲,丙氨酸、酪氨酸和脯氨酸,以及較少程度的纈氨酸、甘氨酸、亮氨酸和絲氨酸是附著到殼多糖的主要氨基酸,其含量平均在總氨基酸的15%至35%之間(圖19-25)。d)重量分析純度因此獲得的殼多糖的重量分析純度>36%,無論何種昆蟲,并且在黃粉蟲的情況下甚至>40%,無論何種酶(圖27和26)。e)比色純度將添加氧化劑和壓榨步驟組合促進所獲得的產(chǎn)物的相對高的比色純度,62-81%,無論使用何種酶或昆蟲(圖28和29)。f)差異純度所獲得的產(chǎn)物的差異純度相對較高>46%,無論考慮何種昆蟲和酶,并且在黃粉蟲的情況下甚至>51%,并且在黃粉蟲+prolyve的情況下,它甚至可以達到73%(圖30)。g)結(jié)晶度用氧化劑的處理趨于使殼多糖更無定形(圖31),無論研究何種昆蟲。所獲得的殼多糖的結(jié)晶度,即結(jié)晶和無定形面積的比率在0.19至0.58之間,并且在黃粉蟲的情況下,甚至在0.45至0.58之間。當(dāng)前第1頁12
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