本發(fā)明涉及用于從微生物生物質中回收脂質的方法以及涉及使用該回收脂質的方法生產(chǎn)脂質的方法。
背景技術：
：：已知某些微生物如細菌、真菌和酵母將有機分子轉化為脂質。通過異養(yǎng)微生物產(chǎn)生的油通常稱作單細胞油或微生物油，以及產(chǎn)生脂質的微生物稱為產(chǎn)油微生物(oleaginousmicrobe)。用于生產(chǎn)單細胞油的過程一般包括培養(yǎng)微生物、使細胞能夠累積脂質、收獲富含脂質的細胞以及從微生物細胞中回收脂質的步驟。基于微生物的脂質(即單細胞油)可以用作用于生產(chǎn)生物燃料如生物柴油、可再生柴油或生物航空燃料的原材料。在生長介質上培養(yǎng)的產(chǎn)油微生物可以包含最高達它們的總的干物質含量的80％的脂質。用于從微生物生物質中回收脂質的方法的效率對于通過微生物的發(fā)酵的經(jīng)濟可行的生產(chǎn)是至關緊要的。用于脂質回收的方法將提供約95％的油產(chǎn)率以在經(jīng)濟上可行。而且，用于回收脂質的方法不應破壞由其提取了油的殘留生物質的價值或降低提取的油的質量，其可以進一步加工或原樣使用。脂質回收過程一般包括從培養(yǎng)介質中收獲微生物細胞、破壞微生物細胞以及回收油以得到粗微生物油和殘留生物質部分的步驟?？梢詮臐駶櫟纳镔|中回收油或在干燥提取的情況下，在回收油之前使微生物生物質脫水。殘留的生物質部分由于其包含有價值的蛋白質部分可以用作動物飼料，或可以用于通過燃燒產(chǎn)生能量。回收脂質的方法基本上決定了殘留生物質作為動物飼料的價值，因為在多個處理步驟中微生物生物質的蛋白質容易降解。收獲步驟用于從培養(yǎng)介質中分離微生物細胞。常規(guī)的收獲技術包括過濾和離心。在回收脂質之前，也可以通過機械脫水裝置在干燥步驟之前濃縮微生物生物質。通常通過用溶劑如亞臨界或超臨界狀態(tài)的二氧化碳或液體烴如己烷提取，從收獲的微生物細胞中回收油。在用多種方法如超聲處理、滲透性沖擊、機械剪切力如擠出、冷壓和熱沖擊，提取脂質之前，微生物細胞也可能被破壞。完全破壞微生物細胞的需要取決于用于提取脂質的溶劑。在不能完全破壞細胞的情況下，可以在提取中使用非極性和極性溶劑的混合物。在干燥提取中，在溶劑提取之前干燥收獲的生物質以除去盡可能多的游離水。也可以從濕潤的生物質中提取脂質。在干燥提取中，在溶劑提取之前，一般干燥微生物生物質至高于90％的干物質含量。在濕潤途徑提取中，溶劑提取步驟中的生物質的干物質含量可以低至5％。在濕潤提取的情況下，如果將其用于有附加值的應用，需要干燥得到的濕潤的殘留生物質部分。傳統(tǒng)細胞收獲技術如過濾和離心通常產(chǎn)生干物質含量為15％至最高達40％的生物質。通過干燥可以進一步增加收獲的生物質的干物質含量，然而，這消耗許多的能量。通過加熱、冷凍干燥或噴霧干燥可以執(zhí)行干燥(Farr,W.E.andProctor,A.,GreenVegetableOilProcessing,2012,AOCSPress)。通常，具有低于30w-％的干物質含量的生物質不能認為是經(jīng)濟地干燥。干燥和濕潤途徑提取之間的選擇取決于從微生物生物質中除去過多液體的難易。如果不能將生物質機械脫水至高于30％的干物質含量，則往往優(yōu)選的是濕潤途徑提取。如果殘留的生物質的后續(xù)處理不需要進一步干燥，例如如果需通過厭氧消化或通過水熱液化處理生物質，則濕潤提取也是優(yōu)選的。從濕潤的微生物生物質中除去水的難易取決于微生物生物質中的微生物的類型。認為絲狀生物由于它們大的細胞尺寸而更容易地收獲，而已知藻類生物質由于小的細胞尺寸而具有不良的過濾性。EP2450424A1中建議將濕潤途徑提取作為用于藻類生物質的有效脂質回收方法，如其清楚陳述的，在提取之前沒有必要干燥濕潤的微生物生物質。因此，EP2450424A1在提取之前沒有涉及過濾和干燥步驟。此外，由于使用了丙烷(在提取步驟中需要至少20巴的壓力以保持提取劑/溶劑為液態(tài))，該文獻本身引用了升高的提取壓力。對于加熱步驟，沒有提及使用的精確壓力。根據(jù)該文獻的實施例顯示了使用文獻中公開的方法的相當?shù)偷闹|產(chǎn)率，且沒有提到從生物質中提取的油中的氮含量。已知存在于收獲的細胞中的水降低溶劑提取的效率，因為其阻礙疏水性脂質與溶劑接觸。另外，水趨向于與溶劑形成乳液，這進一步降低提取效率并使得更難以從剩余的液相中分離提取的脂質。因此，如果可以將微生物生物質機械脫水至高于30％的干物質含量，則相對于濕潤提取，往往優(yōu)選的是干燥提取。之前Davies(Davies,R.1992.ScaleUpofYeastOilTechnology.IndustrialApplicationsofSingleCellOils.Editedby:D.J.KyleandC.Ratledge,AOCSPublishing)已經(jīng)公開了當在干重基礎上生物質的含油量超過35％時，一般用于釀造和烘焙酵母工業(yè)來收獲酵母的噴嘴盤分離器(nozzlediscseparator)對于收獲產(chǎn)油酵母(oleaginousyeast)是無效的。對于具有高于干重基礎上35％的含油量的產(chǎn)油酵母生物質，建議交叉流過濾(crossflowfiltration)。然而，該收獲方法具有低通量和膜積垢的缺點，這意味著需要大的膜面積。即使將噴嘴盤分離器用于收獲干重基礎上含油量在35％以下的產(chǎn)油酵母，得到的濃縮酵母漿具有15-20％的干物質含量。普遍認為太低的用于干燥的干物質含量是不經(jīng)濟的。為此，對于使用噴嘴盤分離器收獲的含油量低于干重基礎上35％的產(chǎn)油酵母，常常優(yōu)選的是濕潤提取。WO2011/143380公開了用于從藻類細胞中分離油的方法，在該方法中，使?jié)駶櫟脑孱惿镔|經(jīng)受水熱碳化處理(hydrothermalcarbonizationtreatment)(HTC)，通過過濾從含水部分分離得到的結合油和焦(char)部分，以及通過溶劑提取從焦部分分離油。在170至225℃的溫度下進行水熱碳化處理。該方法具有其產(chǎn)生在生長階段可以作為營養(yǎng)物重新使用的富含氮、磷和鉀的含水部分的優(yōu)點。沒有報告水熱碳化處理對生物質的過濾性或提取步驟的效率具有任何影響。然而，文獻看起來舉例說明了基于過程蒸餾顆粒(processdistillergrain)和其他原材料的方法。這類原材料不包含很多的脂質并因而將在過濾濕潤生物質中不存在任何困難，其中該方法不包括過濾之前的熱處理步驟。此外，為了實現(xiàn)脂肪酸甲酯(FAME)的高產(chǎn)率，需要提取干燥的焦以及含水濾液。此外，相對于例如氮或磷含量，沒有參考關于重新得到的油的質量。實際上，該文獻清楚地陳述了含水產(chǎn)物包含原始存在于生物質中的大部分的氮、磷和鉀且提取水相將清楚地產(chǎn)生與原始生物質的氮含量相同水平(inlevelwith)的氮含量。也常在收獲步驟中巴氏殺菌微生物生物質以殺死微生物和滅活酶，這可能另外破壞脂質結構。在US2003/014369公開的方法中，通過將生物質生長介質中的生物質加熱至60-100℃的溫度持續(xù)最高達90分鐘進行巴氏殺菌。沒有報告巴氏殺菌對隨后的脫水或脂質提取步驟具有任何影響。EP2450426涉及用于純化已從生物材料得到的脂質材料的純化方法。該方法包括使用至少一種極性溶劑和至少一種非極性溶劑，并表明了多種反應條件是怎樣影響純化的油中的磷和金屬含量。然而，該文獻沒有關于提取的油的氮含量的記載且沒有關于從生物質提取油的任何方法或提取期間的任何條件怎樣可以影響例如提取的油中的氮含量的記載。本發(fā)明涉及從產(chǎn)油酵母生物質中回收脂質以及涉及使用該回收脂質的方法生產(chǎn)脂質的方法。Davies(Davies,R.1992.ScaleUpofYeastOilTechnology.IndustrialApplicationsofSingleCellOils.Editedby:D.J.KyleandC.Ratledge,AOCSPublishing)報告了當生物質中的脂質含量在干重基礎上超過35％時，產(chǎn)油酵母細胞的不良回收率。由于酵母生物質的軟細胞結構導致的過濾膜的立即堵塞，所以用閉端(deadend)微過濾器收獲產(chǎn)油酵母細胞是不可能的。實驗還指出可以用交叉流過濾配置收獲產(chǎn)油酵母細胞，但是過濾結果是不良的，具有收獲的生物質的僅28％的干物質含量，通常認為這對于隨后的干燥步驟來說太低。還發(fā)現(xiàn)待收獲的生物質懸浮液中存在的木質纖維素材料或剩余的木質纖維素材料使膜積垢更糟糕。因此，需要用于從產(chǎn)油酵母生物質中以及尤其從具有以下的高脂質含量的酵母生物質中回收脂質的有效方法：即在干重基礎上超過35％、如例如在干重基礎上至少約40％、或如例如在干重基礎上至少約50％、如例如在干重基礎上至少約60％、如例如在干重基礎上至少約70％、如例如在干重基礎上至少約80％。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的是提供用于從產(chǎn)油酵母生物質中回收脂質的有效方法。相應地，本發(fā)明的第一方面涉及用于從產(chǎn)油酵母生物質中回收微生物脂質的方法，所述方法包括以下步驟：(i)提供包含含有產(chǎn)油酵母生物質的發(fā)酵肉湯的含水懸浮液，(ii)在高于5巴的壓力下在至少160℃的溫度下使所述懸浮液經(jīng)受水熱處理1秒至360分鐘，(iii)使水熱處理的懸浮液經(jīng)受分離步驟以得到液體部分和酵母生物質部分，(iv)使酵母生物質部分經(jīng)受干燥步驟以得到干燥的酵母生物質部分，(v)用液體溶劑使干燥的生物質部分經(jīng)受提取步驟以產(chǎn)生包含微生物脂質的液體部分和包含殘留的酵母生物質部分的固體部分，(vi)從步驟(v)的液體部分中回收微生物脂質，(vii)可選地，從步驟(v)的產(chǎn)物中分離殘留的生物質部分。本發(fā)明的第二目的是提供使用用于從產(chǎn)油酵母生物質中回收脂質的方法用產(chǎn)油酵母生產(chǎn)微生物脂質的方法。相應地，本發(fā)明的第二方面涉及用于生產(chǎn)微生物脂質的方法，該方法包括：(i)提供培養(yǎng)介質，(ii)通過在培養(yǎng)介質中接種產(chǎn)油酵母提供發(fā)酵肉湯來產(chǎn)生產(chǎn)油酵母生物質，(iii)孵育接種了所述產(chǎn)油酵母的所述介質使脂質能夠累積，(iv)通過根據(jù)本文所描述的用于回收微生物脂質的方法中的任一種的方法從所述產(chǎn)油酵母生物質中回收微生物脂質。本發(fā)明的進一步方面涉及由本發(fā)明的方法可得到的殘留生物質。本發(fā)明的又進一步的方面涉及通過本發(fā)明的方法可得到的微生物脂質。與現(xiàn)有技術相反，本發(fā)明使提取之前的水的量最小化。這具有用干燥的生物質更有效地進行提取的優(yōu)點，因為已知水與脂質形成乳液，這妨礙使用有機溶劑的提取步驟并使得難以從液相/水相分離有機相。此外，通過本發(fā)明的流程，提供了更能量有效的方法，因為在干燥得到的生物質之前通過過濾除去了盡可能多的水。本發(fā)明還涉及在不需要分離的液體部分的任何提取的情況下提取干燥的生物質。而且，通過本發(fā)明的方法提供了高質量的油，其例如指的是提取的油的低氮含量。因為高雜質含量，如例如氮，將阻礙重新得到的油至燃料的催化過程，所以從進一步處理重新得到的油的觀點看這是重要的。對于提取的油中的雜質如例如金屬殘留，這也是適用的。應理解低水平的例如氮的含義是指該水平低于存在于原始生物質中的氮的量。本發(fā)明還提供了在提取期間不需要應用壓力的方法并因此不涉及提取過程中的溶劑(其在正常壓力(1atm)下具有低沸點)。具有低沸點溫度的溶劑的一個實例是丙烷，其需要外部壓力以在正常溫度如約20℃至約100℃的范圍內(nèi)的溫度下保持液態(tài)。具體實施方式在本發(fā)明的實施方式的描述中，為了清楚，將采用具體的專業(yè)術語。然而，本發(fā)明不旨在限于所選擇的具體術語，并且應理解各具體術語包括以類似的方式操作來實現(xiàn)類似目的的所有技術等價物。當描述本發(fā)明的實施方式時，沒有明確描述所有可能的實施方式的組合和改變(permutation)。雖然如此，在互相不同的從屬權利要求中陳述的或在不同實施方式中所描述的某些測量的唯一事實不表示不可以使用這些測量的組合來獲利。本發(fā)明預見了所描述的實施方式的所有可能組合和改變。本發(fā)明的第一方面提供了用于從產(chǎn)油酵母生物質中回收微生物脂質的方法，所述方法包括以下步驟：(i)提供包含含有產(chǎn)油酵母生物質的發(fā)酵肉湯的含水懸浮液，(ii)在高于5巴的壓力下在至少160℃的溫度下使所述懸浮液經(jīng)受水熱處理1秒至360分鐘，(iii)使水熱處理的懸浮液經(jīng)受分離步驟以得到液體部分和酵母生物質部分，(iv)使酵母生物質部分經(jīng)受干燥步驟以得到干燥的酵母生物質部分，(v)用液體溶劑使干燥的生物質部分經(jīng)受提取步驟以產(chǎn)生包含微生物脂質的液體部分和包含殘留的酵母生物質部分的固體部分，(vi)從步驟(v)的液體部分中回收微生物脂質，(vii)可選地，從步驟(v)的產(chǎn)物中分離殘留的生物質部分。因此，在本發(fā)明的一個方面，沒有用溶劑提取步驟(iii)中得到的液體部分來得到任何油。本發(fā)明的另一方面涉及用于生產(chǎn)微生物脂質的方法，該方法包括：(a)提供培養(yǎng)介質，(b)通過在培養(yǎng)介質中接種產(chǎn)油酵母來提供發(fā)酵肉湯以產(chǎn)生產(chǎn)油酵母生物質，(c)孵育接種了所述產(chǎn)油酵母的所述介質使脂質能夠累積，(d)通過本文所描述的用于從產(chǎn)油酵母生物質中回收微生物脂質的方法從所述產(chǎn)油酵母生物質中回收微生物脂質。因此，本發(fā)明的一個實施方式涉及用于生產(chǎn)微生物脂質的方法，該方法包括：(a)提供培養(yǎng)介質，(b)通過在培養(yǎng)介質中接種產(chǎn)油酵母以提供發(fā)酵肉湯來產(chǎn)生產(chǎn)油酵母生物質，(c)孵育接種了所述產(chǎn)油酵母的所述介質使脂質能夠累積，(i)提供包含含有步驟(c)的產(chǎn)油酵母生物質的發(fā)酵肉湯的含水懸浮液，(ii)在高于5巴的壓力下在至少160℃的溫度下使所述懸浮液經(jīng)受水熱處理1秒至360分鐘，(iii)使水熱處理的懸浮液經(jīng)受分離步驟以得到液體部分和酵母生物質部分，(iv)使酵母生物質部分經(jīng)受干燥步驟以得到干燥的酵母生物質部分，(v)用液體溶劑使干燥的生物質部分經(jīng)受提取步驟以產(chǎn)生包含微生物脂質的液體部分和包含殘留的酵母生物質部分的固體部分，(vi)從步驟(v)的液體部分中回收微生物脂質，(vii)可選地，從步驟(v)的產(chǎn)物中分離殘留的生物質部分。在進一步的實施方式中，將包含在由步驟(iii)得到的液體部分中的營養(yǎng)物再循環(huán)至培養(yǎng)介質(a)。本發(fā)明的進一步方面提供了通過根據(jù)本發(fā)明的方法可得到的殘留生物質。在本發(fā)明的又進一步的方面，沒有用溶劑提取步驟(iii)中得到的液體部分。本發(fā)明的發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)在步驟(iv)中的干燥和/或步驟(v)中的提取之前，用水洗滌步驟(iii)中分離的酵母生物質部分是有利的。這將產(chǎn)生在隨后將油反應成例如燃料產(chǎn)物之前幾乎不需要或不需要進一步純化的更高純度的提取油。發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)通過在高于160℃的溫度下使包含產(chǎn)油酵母生物質的含水懸浮液經(jīng)受水熱處理(HTT)可以解決與收獲具有高脂質含量的產(chǎn)油酵母生物質有關的問題。在水熱處理期間，酵母生物質的密度降低且細胞組合在一起形成團塊(flock)，這使得能夠通過常規(guī)的過濾或離心方法有效分離液體部分。在不受任何理論約束的情況下，認為由于熱處理，酵母的細胞內(nèi)分子被提取至水相，這增加油份額(oilshare)并降低生物質的密度。還提出水熱處理改變酵母細胞的表面結構和表面電荷，這導致形成能夠通過過濾分離的細胞團塊。還發(fā)現(xiàn)使用用于模擬從木質纖維素生物質提取糖類的強度系數(shù)(severityfactor)可以表達合適的熱處理條件(溫度和處理時間作為變量)。使用式(1)可以計算強度系數(shù)logR0(Pedersen,M.andA.S.Meyer(2010).Lignocellulosepretreatmentseverity-relatingpHtobiomatrixopening.NewBiotechnology27(6):739-750.)。在高于5巴、如6至25巴的范圍內(nèi)、例如10至25巴的范圍內(nèi)、如10至15巴的范圍內(nèi)的壓力下進行水熱處理(步驟(ii))?？商鎿Q地，水熱處理期間的壓力可以是例如在約6.0巴至約20.0巴的范圍內(nèi)，如例如約6.0巴至約7.0巴、如例如約10.0巴至約11.0巴、如例如約13.0巴至約18巴、如例如約16巴至約19巴。因此，可以例如根據(jù)以下分配上述壓力，當反應溫度是約160℃時，壓力可以是例如約6.2巴至約6.8巴，或當溫度是約180℃時，壓力可以是例如約10.3巴至約11.0巴，或當溫度是約190℃時，壓力可以是例如約13.7巴至約18巴，或當溫度是約200℃時，壓力可以是例如約16.2巴，或當溫度是約210℃時，壓力可以是例如約19.6巴。進行水熱處理(步驟(ii))持續(xù)1秒至360分鐘，如5分鐘至240min的范圍、例如10分鐘至120min的范圍。在一個實施方式中，在160至180℃范圍內(nèi)的溫度下進行水熱處理(步驟(ii))持續(xù)30min至180min，如160℃下180min或180℃下30至60min。因此，在本發(fā)明的一個實施方式中，在對應于至少約3.5、優(yōu)選地至少約3.9的強度系數(shù)logR0的條件下進行水熱處理。在一個進一步的實施方式中，強度系數(shù)在約3.5至約5.5的范圍內(nèi)，如例如約4至約4.5。一般在密閉容器中進行熱處理。發(fā)明人還出乎意料地發(fā)現(xiàn)通過包括在160℃以上的溫度下水熱處理酵母生物質和隨后溶劑提取的方法回收的脂質包含非常少的量的磷和金屬雜質。發(fā)現(xiàn)水熱處理使得能夠有效收獲高脂質含量的微生物細胞和高產(chǎn)率地回收高質量微生物油。因此，本發(fā)明涉及以下方法，其中，基于存在于生物質中的油或脂質的含量，提取的油或脂質的產(chǎn)率在至少約70％、如例如約至少80％、如例如約至少90％、如例如約至少95％、如例如約至少98％、如例如約100％的范圍內(nèi)。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的方法能夠在不大量損失微生物脂質的情況下有效地收獲具有高含量的微生物脂質(如脂質含量大于35％)的產(chǎn)油酵母生物質。在本發(fā)明的一個實施方式中，酵母生物質具有按細胞團(cellmass)的重量計至少20％的脂質含量。在一個優(yōu)選的實施方式中，酵母生物質具有按細胞團的重量計至少30％的脂質含量。在一個更加優(yōu)選的實施方式中，酵母生物質具有按細胞團的重量計的至少35％、如例如在干重基礎上至少約40％、或如例如在干重基礎上至少約50％、如例如在干重基礎上至少約60％、如例如在干重基礎上至少約70％、如例如在干重基礎上至少約80％的脂質含量。使用任何傳統(tǒng)的溶劑如乙醇或烴可以執(zhí)行脂質的提取。優(yōu)選地使用己烷提取，因為其保證良好的提取產(chǎn)率和油質量?？梢杂贸Ｒ?guī)的方式進行提取步驟。在本發(fā)明的一個實施方式中，使用烴溶劑，如包含低級烷烴、優(yōu)選地脂肪族C2-C8烷烴的烴溶劑，進行提取步驟(v)。更加優(yōu)選的是C5-C8烷烴，如例如戊烷、己烷、庚烷或辛烷。而且，發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)在含水懸浮液包含由在包含木質纖維素水解產(chǎn)物的培養(yǎng)介質中培養(yǎng)產(chǎn)油酵母得到的發(fā)酵肉湯的情況下，水熱處理增加殘留生物質的量。這表示存在于發(fā)酵肉湯中的溶解的木質纖維素材料在水熱處理期間轉變?yōu)楣虘B(tài)并在隨后的分離步驟中與殘留的生物質分離。從含水懸浮液中將溶解的木質纖維素材料回收至固體生物質部分具有增加由回收過程得到的有價值的殘留生物質部分的量的優(yōu)點。同時，這降低由使用木質纖維素材料或水解產(chǎn)物的產(chǎn)油酵母生產(chǎn)得到的廢水部分的化學需氧量(chemicaloxygendemand)。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式中，由在包含木質纖維素材料的培養(yǎng)介質中培養(yǎng)產(chǎn)油酵母得到發(fā)酵肉湯。在另一個優(yōu)選的實施方式中，由在包含木質纖維素水解產(chǎn)物的培養(yǎng)介質中培養(yǎng)產(chǎn)油酵母得到發(fā)酵肉湯。本發(fā)明的優(yōu)點包括水熱處理能夠通過常規(guī)收獲方式如過濾和離心從含水懸浮液中有效地收獲具有高脂質含量的產(chǎn)油酵母生物質。有效的收獲是指收獲的生物質具有高干物質含量且在收獲過程中沒有損失油或含油細胞。結果，需要在隨后的提取步驟之前通過干燥除去僅少量的水且在處理期間油不會損失。本發(fā)明從而能夠經(jīng)濟可行地從具有高脂質含量的產(chǎn)油酵母生物質中回收脂質，因為水熱處理使對于干燥的需要最小化，已知其是回收過程中最耗能的步驟。產(chǎn)油酵母可以是能夠累積細胞間脂質的任何酵母使得當在合適的條件下培養(yǎng)時脂質占酵母的總生物質(每細胞干重)的至少15％(w/w)。產(chǎn)油酵母包括以下種屬的產(chǎn)油酵母物種：棒孢酵母屬(Clavispora)、地絲菌屬(Geotrichum)、Deparyomyces、管囊酵母屬(Pachysolen)、克魯維酵母屬(Kluyveromyces)、耐堿酵母屬(Galactomyces)、漢遜酵母屬(Hansenula)、白冬孢酵母屬(Leucosporidium)、釀酒酵母屬(Saccharomyces)、擲孢酵母屬(Sporobolomyces)、鎖擲酵母屬(Sporidiobolus)、Waltomyces、擬內(nèi)胞霉屬(Endomycopsis)、隱球酵母屬(Cryptococcus)如彎曲隱球酵母屬(Cryptococcuscurvatus)、紅冬孢酵母屬(Rhodosporidium)如串珠狀紅冬孢酵母屬(Rhodosporidiumtoruloides)或Rhodosporidiumfluviale、薔薇色酵母屬(Rhodotorula)如紅酵母屬(Rhodotorulaglutinis)、耶氏酵母屬(Yarrowia)如解脂耶氏酵母屬(Yarrowialipolytica)、畢赤氏酵母屬(Pichia)如樹干畢赤氏酵母屬(Pichiastipitis)、假絲酵母屬(Candida)如彎曲假絲酵母屬(Candidacurvata)、油脂酵母屬(Lipomyces)如斯氏油脂酵母屬(Lipomycesstarkeyi)以及絲孢酵母屬(Trichosporon)如皮狀絲孢酵母屬(Trichosporoncutaneum)或出芽絲孢酵母屬(Trichosporonpullulans)。優(yōu)選地，酵母菌株是屬于假絲酵母、薔薇色酵母、絲孢酵母、紅冬孢酵母、油脂隱球酵母或釀酒酵母的那些。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式中，酵母是紅冬孢酵母屬、薔薇色酵母屬、油脂隱球酵母屬或釀酒酵母屬中的酵母。在進一步的實施方式中，通過本發(fā)明的方法使用的產(chǎn)油酵母是產(chǎn)油酵母中的兩種或更多種物種的混合物。在高于160℃的溫度下的水熱處理還破壞酵母細胞并能夠在沒有單獨的細胞破壞步驟的情況下有效提取脂質。發(fā)現(xiàn)由水熱處理的酵母生物質提取的油包含少量的磷和金屬雜質，這對于隨后將脂質加工成燃料組分是必要的并且這降低對于用于原微生物油的進一步純化步驟的需要。木質纖維素材料術語“木質纖維素生物質”或“木質纖維素材料”意味著包括但不限于木本植物或非木本植物的草本植物或包含纖維素和/或半纖維素的其他材料：材料可以是農(nóng)業(yè)殘留(如麥秸、稻秸、谷殼、外殼、玉米秸、甘蔗渣、甘蔗梢(sugarcanetop)和葉)、專門的能源作物(如柳枝黍(switchgrass)、芒草(Miscanthus)、蘆竹(Arundodonax)、虉草(reedcanarygrass)、楊柳(willow)、水風信子(waterhyacinth)、能源甘蔗(energycane)、能源高粱(energysorghum))、木材或殘留(包括鋸木廠和紙漿和/或造紙廠殘留或部分，如半纖維素、廢棄的亞硫酸鹽廢液、廢纖維和/或初級污泥(primarysludge))、苔蘚或腐葉土或市政紙張廢物。術語木質纖維素材料還包含低木質素材料、如大型藻類生物質的材料。另外，材料還包含來自工業(yè)實踐的半纖維素或纖維素部分。術語木質纖維素材料包含任何種類的纖維素部分。根據(jù)本公開，可以將原材料或某些部分如來自不同來源、植物物種或工業(yè)過程的原材料的半纖維素和/或纖維素混合在一起并用于用于培養(yǎng)微生物生物質的原材料。一般，木質纖維素中的木質素含量高于5％。木質纖維素生物質還可以包含淀粉，例如在完整植物的情況下。術語木質纖維素材料包含至少50wt％的木質纖維素、優(yōu)選地至少60wt％的木質纖維素、更優(yōu)選地至少70wt％的木質纖維素、最優(yōu)選地至少80wt％的木質纖維素。通常，木質纖維素材料包含60-95wt％的木質纖維素、一般70-90wt％或80-90wt％的木質纖維素。包含木質纖維素材料的培養(yǎng)介質“包含木質纖維素材料的培養(yǎng)介質”是指用于培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)介質，該介質包含木質纖維素、纖維素的片段或包含來源于蛋白質的氮化合物和金屬的木質木質纖維素的水解產(chǎn)物、以及用于培養(yǎng)所述微生物必須的其他組分如氮、磷、無機鹽和/或微量元素的來源、消泡劑。木質纖維素可以用作用于所述微生物的碳源，但是在培養(yǎng)介質中也可以具有其他功能。水解“水解”在此處是指將聚合糖糖化為糖低聚物和單體。一般在兩個階段中進行糖化：首先通過熱化學或化學方法，然后通過使用能夠水解聚合糖的酶來水解底物，即木質纖維素材料或木質纖維素?？商鎿Q地以及根據(jù)木質纖維素材料，可以通過使用熱化學或化學方法或通過能夠水解聚合糖的酶或這些方法的一些組合執(zhí)行糖化?；瘜W方法包括但不限于酸處理。水解產(chǎn)物術語“水解產(chǎn)物”或“水解材料”在此處是指已經(jīng)經(jīng)歷水解的材料。木質纖維素水解產(chǎn)物術語“木質纖維素水解產(chǎn)物”在此處是指包括纖維素和/或半纖維素、低聚糖、單糖和/或二糖、乙酸、甲酸、其他有機酸、呋喃甲醛、羥基甲基呋喃甲醛、乙酰丙酸、酚化合物的木質纖維素或木質纖維素材料的水解產(chǎn)物、由木質素、纖維素、半纖維素和/或木質纖維素的其他組分形成的其他水解和/或降解產(chǎn)物、來源于蛋白質的氮化合物、金屬和/或木質纖維素的非水解或部分水解的片段。水熱處理“水熱處理”或“水熱加工”在此處同義地使用且是指將包含微生物生物質的含水懸浮液加熱至至少160℃的溫度并在高于5巴的壓力下使包含所述微生物生物質的含水懸浮液經(jīng)受至少160℃的溫度1s至360分鐘的過程。應注意在本發(fā)明的背景下，上述方法，即熱化學處理、蒸汽噴發(fā)(steamexplosion)、熱水提取、自動水解、亞臨界水處理、超臨界水處理、強酸處理、弱酸處理、堿處理(例如石灰、氨)、有機溶劑處理(例如醇、有機酸)、機械處理、機械熱處理和離子液體處理不在水熱加工(或水熱處理，熱處理，HTT)的定義內(nèi)。強度系數(shù)術語“強度系數(shù)(severityfactor)”在此處是指參數(shù)LogR0，其是基于以下等式計算的并在溫度和時間方面描述水熱條件。式(1)：其中，R0是強度系數(shù)，T(t)是以℃計的處理溫度以及t是以分鐘計的處理時間。產(chǎn)油微生物術語“產(chǎn)油微生物”是指產(chǎn)生脂質的微生物。因此，產(chǎn)油酵母是指產(chǎn)生脂質的微生物。當將產(chǎn)生脂質的微生物用于單細胞油生產(chǎn)時，微生物生物質是來自單細胞油生產(chǎn)過程的殘留生物質。本文所涉及的以及目前使用的產(chǎn)油酵母可以容易地累積脂質或被遺傳改性以累積脂質或改善脂質的累積。優(yōu)選地，使用能夠利用C6和C5糖的產(chǎn)油酵母。在本發(fā)明的背景下，產(chǎn)油酵母是指當在合適的條件下培養(yǎng)時能夠累積細胞間脂質使得脂質占酵母的總生物質的至少15％(w/w)(每細胞干重)的酵母。在一個優(yōu)選的實施方式中，產(chǎn)油微生物能夠累積微生物的總生物質的至少20％(w/w)(每細胞干重)。在一個更加優(yōu)選的實施方式中，產(chǎn)油酵母能夠累積酵母的總生物質的至少35％(w/w)(每細胞干重)。在又進一步的優(yōu)選的實施方式中，產(chǎn)油酵母能夠累積干重基礎上至少約40％(w/w)、或如例如干重基礎上至少約50％(w/w)、如例如干重基礎上至少約60％(w/w)、如例如干重基礎上至少約70％(w/w)、如例如干重基礎上至少約80％(w/w)總生物質(每細胞干重)的脂質。微生物脂質或脂質在本發(fā)明的背景下，“微生物脂質”、“脂質”或“細胞內(nèi)脂質”或“油產(chǎn)物”是指脂肪物質，其分子通常包含(作為一部分)溶解在非極性有機溶劑中但較差地溶于水中的脂肪族烴鏈。脂質是活細胞中的大分子的必需基團。脂質是例如脂肪、油、蠟、蠟酯、固醇、類萜、類異戊二烯、類葉紅素、聚羥基烷酸酯、核酸、脂肪酸、脂肪醇、脂肪醛、脂肪酸酯、磷脂、糖脂、鞘脂和甘油酯(acylglycerol，酰基甘油)如三-甘油酯、甘油二酯或甘油單酯。本發(fā)明中優(yōu)選的脂質是脂肪、油、蠟、甘油酯和脂肪酸及它們的衍生物，特別是三酰甘油酯和蠟酯。在本發(fā)明的背景下，通過在微生物中累積合成脂質(細胞內(nèi)脂質)。在本發(fā)明的另一個實施方式中，通過微生物合成脂質和通過微生物分泌脂質(細胞外脂質)。關于本發(fā)明，將單細胞油用作脂質和脂肪的同義詞。術語“甘油酯”是指甘油和脂肪酸的酯。甘油酯作為脂肪和脂肪油天然出現(xiàn)。甘油酯的實例包括三酰甘油酯(TAG，甘油三酯)、甘油二酯(甘油二酸酯)和甘油單酯(甘油單酸酯)。生物質在本發(fā)明的背景下，術語“生物質(biomass)”(或“細胞團(cellmass)”)是指源自活的有機體或非活的有機體的生物材料?！敖湍干镔|(yeastbiomass)”因此是指源自酵母的生物質?？梢杂山湍傅膯蝹€物種或酵母的不同物種的集合得到微生物生物質。酵母生物質可以以活的或非活的狀態(tài)存在。在本發(fā)明的背景下，已經(jīng)經(jīng)受水熱熱處理(HTT)的酵母生物質是非活的狀態(tài)。殘留的細胞團在本發(fā)明的背景下，“殘留的細胞團”或“殘留的生物質部分”是指固體、半固體或流動材料部分，其包含由其回收細胞內(nèi)脂質的微生物。干物質“DM”或“干重”在此處是指干物質并是當經(jīng)受基本除去材料中的水(即材料完全干燥)的處理時的材料的質量的測量。包含微生物生物質的含水懸浮液的水熱處理和后續(xù)加工可以水熱加工原樣(assuch)來自培養(yǎng)的包含生物質的含水懸浮液，或可以首先濃縮懸浮液。還可以在這時調節(jié)懸浮液的pH。更酸性的pH能夠更好地溶解固體材料，導致與在較高的pH下相比在更低的溫度下浮起(flotation)一些酵母。盡管pH調節(jié)不影響使這些酵母可過濾所需的強度系數(shù)。在本發(fā)明的一個實施方式中，步驟(i)中的含水懸浮液的pH值低于6、優(yōu)選地低于5。然而，在本發(fā)明的另一方面，不需要外部酸化使得添加酸性組分以調節(jié)或調整反應混合物的pH?？梢酝ㄟ^直接或間接加熱進行生物質懸浮液的水熱加工。在直接加熱中，可以用蒸汽加熱懸浮液。在間接加熱中，可以通過包含懸浮液的容器的壁或通過熱交換器的管或殼循環(huán)懸浮液加熱懸浮液?？梢栽诿荛]的連續(xù)或間歇系統(tǒng)中進行加熱。含水懸浮液一般具有至少3％、優(yōu)選地至少10％如15至35％的干物質含量。水熱加工之后，可以通過多種方法如離心或過濾從液體中分離包含油的固體材料。在本發(fā)明的一個實施方式中，通過離心執(zhí)行分離步驟(iii)或分離步驟(iii)包括離心的步驟。在另一個實施方式中，通過過濾執(zhí)行分離步驟(iii)或分離步驟(iii)包括過濾的步驟。過濾是優(yōu)選的，因為使用壓濾機可以得到最高達70％的固體材料的高干物質含量。在本發(fā)明的一個實施方式中，由分離步驟(iii)得到的酵母生物質部分具有至少50％、如至少60％的干物質含量。在一個優(yōu)選的實施方式中，由步驟(iii)得到的酵母生物質部分具有至少65％的干物質含量。在另一個優(yōu)選的實施方式中，由步驟(iii)得到的酵母生物質部分具有至少70％的干物質含量。使用水洗滌收獲的濕潤生物質以進一步減少提取的油的雜質(參見實施例9)。因此，在一個實施方式中，在提取步驟(v)之前，使由水熱處理步驟得到的酵母生物質部分經(jīng)受水洗步驟。在使用烴溶劑、最優(yōu)選地己烷提取之前，將固體材料干燥至>90％的干物質含量。在本發(fā)明的一個實施方式中，干燥的生物質部分(步驟(iv)的)具有至少90％、優(yōu)選地至少95％的干物質含量?？梢允褂萌魏我阎母稍锛夹g，但是選擇可以影響提取的油的質量(參見實施例9)。發(fā)現(xiàn)通過在油提取步驟之前優(yōu)化生物質的干燥可以調節(jié)提取的微生物油中的雜質的量，尤其是氮的量。在本發(fā)明的一個實施方式中，在低于100℃、優(yōu)選地低于90℃的溫度下進行干燥步驟(iv)。在本發(fā)明的一個實施方式中，在低于90℃、優(yōu)選地低于50℃的溫度下進行提取步驟(v)。在另一個實施方式中，在真空中以及在低于90℃、優(yōu)選地低于70℃的生物質的溫度下進行干燥步驟(iv)。在一個進一步的實施方式中，在低于90℃、優(yōu)選地低于70℃的溫度下進行提取步驟(v)。在本發(fā)明的一個實施方式中，使用烴溶劑，如包含低級烷烴、優(yōu)選地脂肪族C2-C8烷烴的烴溶劑，進行提取步驟(v)。可以使用任何已知的提取技術進行提取步驟。提取過程產(chǎn)生原始微生物油(rawmicrobialoil)和提取出油的殘留生物質，在進一步使用之前需要去溶劑。通過本發(fā)明的方法可得到的微生物脂質如本文提到的，發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)通過包括在160℃以上的溫度下水熱處理酵母生物質和隨后溶劑提取的方法回收的脂質包含非常少的量的磷和金屬雜質。相應地，本發(fā)明的進一步的方面涉及通過本發(fā)明的方法可得到的微生物脂質。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)如果通過本方法得到微生物脂質，元素磷的量減少。相應地，本發(fā)明的一個實施方式涉及通過本發(fā)明的方法可得到的微生物脂質，其中，元素磷的濃度不多于20mg/kg的微生物脂質、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg元素磷/kg微生物脂質。發(fā)明人進一步發(fā)現(xiàn)如果通過本方法得到微生物脂質，則元素氮的量減少。相應地，本發(fā)明的一個實施方式涉及通過本發(fā)明的方法可得到的微生物脂質，其中，元素氮的濃度不多于600mg元素氮/kg微生物脂質、更優(yōu)選地不多于200mg/kg、最優(yōu)選地不多于100mg元素氮/kg微生物脂質。在一個進一步的實施方式中，微生物油中的元素鐵、鈉、硅、鈣、鎂、錳或鉀的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油中的元素鐵的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油中的元素鈉的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油中的元素硅的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油中的元素鈣的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油中的元素鎂的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油中的元素錳的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油中的元素鉀的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。又進一步的方面涉及微生物油產(chǎn)品。在本發(fā)明的實施方式中，微生物油產(chǎn)品中的元素磷的濃度不多于20mg/kg的微生物脂質、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg元素磷/kg微生物油產(chǎn)物。在本發(fā)明的第二實施方式中，微生物油產(chǎn)物中的元素氮的濃度不多于600mg元素氮/kg微生物脂質、更優(yōu)選地不多于200mg/kg、最優(yōu)選地不多于100mg元素氮/kg微生物油產(chǎn)物。在一個進一步的實施方式中，微生物油產(chǎn)物中的元素鐵、鈉、硅、鈣、鎂、錳或鉀的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油產(chǎn)品中的元素鐵的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油產(chǎn)品中的元素鈉的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油產(chǎn)品中的元素硅的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油產(chǎn)品中的元素鈣的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油產(chǎn)品中的元素鎂的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油產(chǎn)品中的元素錳的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。例如，微生物油產(chǎn)品中的元素鉀的濃度不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg。通過以下非限制性項目示出本發(fā)明。項目1.一種用于從產(chǎn)油酵母生物質中回收微生物脂質的方法，所述方法包括以下步驟：(i)提供包含含有產(chǎn)油酵母生物質的發(fā)酵肉湯的含水懸浮液，(ii)在高于5巴的壓力下在至少160℃的溫度下使所述懸浮液經(jīng)受水熱處理1秒至360分鐘，(iii)使水熱處理的懸浮液經(jīng)受分離步驟以得到液體部分和酵母生物質部分，(iv)使酵母生物質部分經(jīng)受干燥步驟以得到干燥的酵母生物質部分，(v)用液體溶劑使干燥的生物質部分經(jīng)受提取步驟以產(chǎn)生包含微生物脂質的液體部分和包含殘留的酵母生物質部分的固體部分，(vi)從步驟(v)的液體部分中回收微生物脂質，(vii)可選地，從步驟(v)的產(chǎn)物中分離殘留的生物質部分。項目2.根據(jù)項目1的方法，其中，由在包含木質纖維素材料的培養(yǎng)介質中的產(chǎn)油酵母的培養(yǎng)得到發(fā)酵肉湯。項目3.根據(jù)項目1的方法，其中，由在包含木質纖維素水解產(chǎn)物的培養(yǎng)介質中的產(chǎn)油酵母的培養(yǎng)得到發(fā)酵肉湯。項目4.根據(jù)項目1-3中任一項的方法，其中，由分離步驟得到的酵母生物質部分具有至少50％、優(yōu)選地至少60％的干物質含量。項目5.根據(jù)項目1-4中任一項所述的方法，其中，干燥的生物質部分具有至少90％、優(yōu)選地至少95％的干物質含量。項目6.根據(jù)項目1-5中任一項的方法，其中，在密閉容器中進行熱處理。項目7.根據(jù)項目1-6中任一項的方法，其中，在對應于至少3.5、優(yōu)選地至少3.9的強度系數(shù)LogR0的條件下進行水熱處理。項目8.根據(jù)項目1-7中任一項所述的方法，其中，酵母生物質具有按細胞團的重量計至少20％、優(yōu)選地至少30％、最優(yōu)選地至少35％的脂質含量。項目9.根據(jù)項目1-8中任一項所述的方法，其中，在提取步驟之前，使由水熱處理步驟得到的酵母生物質部分經(jīng)受水洗步驟。項目10.根據(jù)項目1-9中任一項的方法，其中，含水懸浮液具有至少3％、優(yōu)選地至少10％的干物質含量。項目11.根據(jù)項目1-10中任一項的方法，其中，酵母是紅冬孢酵母屬、薔薇色酵母屬、油脂酵母屬、隱球酵母屬或釀酒酵母屬。項目12.根據(jù)項目5-11中任一項的方法，其中，液體溶劑是烴溶劑，包括低級烷烴、優(yōu)選地脂肪族C2-C8烷烴。項目13.根據(jù)前述項目中任一項的方法，其中，通過離心執(zhí)行分離(iii)或分離(iii)包括離心步驟。項目14.根據(jù)前述項目中任一項的方法，其中，通過過濾執(zhí)行分離(iii)或分離(iii)包括過濾步驟。項目15.根據(jù)前述項目中任一項的方法，其中，在真空中并在低于90℃、優(yōu)選地低于70℃的生物質溫度下進行干燥步驟(iv)。項目16.根據(jù)前述項目中任一項的方法，其中，在低于90℃、優(yōu)選地低于70℃的溫度下進行提取步驟(v)。項目17.根據(jù)前述項目中任一項的方法，其中，步驟(i)中的含水懸浮液的pH值低于約6、優(yōu)選地低于約5。項目18.通過根據(jù)項目1-17中任一項的方法可得到的殘留生物質。項目19.一種用于生產(chǎn)微生物脂質的方法，該方法包括(a)提供培養(yǎng)介質，(b)通過在培養(yǎng)介質中接種產(chǎn)油酵母以提供發(fā)酵肉湯來產(chǎn)生產(chǎn)油酵母生物質，(c)孵育接種了所述產(chǎn)油酵母的所述介質使脂質能夠累積，(d)用根據(jù)項目1-18中任一項的方法由所述產(chǎn)油酵母生物質回收微生物脂質。項目20.根據(jù)項目19的方法，其中，將包含在由分離步驟得到的液體部分中的營養(yǎng)物再循環(huán)至培養(yǎng)介質。項目21.通過根據(jù)項目1-20中任一項的方法能夠得到的微生物脂質。項目22.一種微生物油產(chǎn)品，其中，油包含不多于20mg/kg的元素磷、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg的元素磷。項目23.根據(jù)項目22的微生物油產(chǎn)品，其中，油包含不多于600mg/kg的元素氮、更優(yōu)選地不多于200、最優(yōu)選地不多于100mg/kg的元素氮。項目24.根據(jù)項目22或23的微生物油產(chǎn)品，其中，油包含不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg的元素鐵、鈉、硅、鈣、鎂、錳或鉀中的任一種。本發(fā)明還涉及根據(jù)以下條款的具體實施方式：條款(article)1.一種用于從產(chǎn)油酵母生物質中回收微生物脂質的方法，所述方法包括以下步驟：(i)提供包含含有產(chǎn)油酵母生物質的發(fā)酵肉湯的含水懸浮液，(ii)在高于5巴的壓力下在至少160℃的溫度下使所述懸浮液經(jīng)受水熱處理1秒至360分鐘，(iii)使水熱處理的懸浮液經(jīng)受分離步驟以得到液體部分和酵母生物質部分，(iv)使酵母生物質部分經(jīng)受干燥步驟以得到干燥的酵母生物質部分，(v)用液體溶劑使干燥的生物質部分經(jīng)受提取步驟以產(chǎn)生包含微生物脂質的液體部分和包含殘留的酵母生物質部分的固體部分，(vi)從步驟(v)的液體部分中回收微生物脂質，(vii)可選地，從步驟(v)的產(chǎn)物中分離殘留的生物質部分。2.根據(jù)條款1的方法，其中，由在包含木質纖維素水解產(chǎn)物的培養(yǎng)介質中的產(chǎn)油酵母的培養(yǎng)得到發(fā)酵肉湯。3.根據(jù)條款1或2中任一項的方法，其中，由分離步驟得到的酵母生物質部分具有至少50％、優(yōu)選地至少60％的干物質含量。4.根據(jù)條款1-3中任一項的方法，其中，干燥的生物質部分具有至少90％、優(yōu)選地至少95％的干物質含量。5.根據(jù)條款1-4中任一項的方法，其中，在對應于至少3.5、優(yōu)選地至少3.9的強度系數(shù)LogR0的條件下進行水熱處理。6.根據(jù)條款1-5中任一項的方法，其中，酵母生物質具有按細胞團的重量計至少20％、優(yōu)選地至少30％、最優(yōu)選地至少35％的脂質含量。7.根據(jù)條款1-6中任一項的方法，其中，含水懸浮液具有至少3％、優(yōu)選地至少10％的干物質含量。8.根據(jù)條款1-7中任一項的方法，其中，酵母是紅冬孢酵母屬、薔薇色酵母屬、油脂酵母屬、隱球酵母屬或釀酒酵母屬。9.根據(jù)前述條款中任一項的方法，其中，通過離心執(zhí)行分離(iii)或分離(iii)包括離心步驟。10.根據(jù)前述條款中任一項的方法，其中，通過過濾執(zhí)行分離(iii)或分離(iii)包括過濾步驟。11.根據(jù)前述條款中任一項的方法，其中，在真空中并在低于90℃、優(yōu)選地低于70℃的生物質溫度下進行干燥步驟(iv)。12.根據(jù)前述條款中任一項的方法，其中，在低于90℃、優(yōu)選地低于70℃的溫度下進行提取步驟(v)。13.根據(jù)前述條款中任一項的方法，其中，步驟(i)中的含水懸浮液的pH值低于約6、優(yōu)選地低于約5。14.通過根據(jù)條款1-13中任一項的方法可得到的殘留生物質。15.通過根據(jù)條款1-13中任一項的方法可得到的微生物脂質。16.一種微生物油產(chǎn)品，包含不多于20mg/kg的元素磷、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg的元素磷。17.根據(jù)條款16的微生物油產(chǎn)品，其中，油包含不多于600mg/kg的元素氮、更優(yōu)選地不多于200、最優(yōu)選地不多于100mg/kg的元素氮。18.一種根據(jù)條款16或17的微生物油產(chǎn)品，其中，油包含不多于20mg/kg、優(yōu)選地不多于10mg/kg、更加優(yōu)選地不多于5mg/kg、最優(yōu)選地不多于1mg/kg的元素鐵、鈉、硅、鈣、鎂、錳或鉀中的任一種。實施例通過以下非限制性實施例示出本發(fā)明。本發(fā)明可以應用于除了實施例示出的那些之外的微生物。應理解在以上說明書和實施例中給出的實施方式僅用于示出目的，且各種變化和修改可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實施例1在純糖上培養(yǎng)紅冬孢酵母生物質用于熱收獲實驗在中試發(fā)酵罐(pilotfermentor)中在通風下使串珠狀紅冬孢酵母(Rhodosporidiumtoruloides)菌株CBS8587(或其他由公認的微生物菌種保藏中心容易獲得的串珠狀紅冬孢酵母菌株)生長。使用葡萄糖作為碳源作為批次進料發(fā)酵進行發(fā)酵。24h批次階段之后，在143h培養(yǎng)期間將葡萄糖漿定期添加到發(fā)酵罐中。用酵母提取物(8g/l)、(NH4)2SO4(3g/l)、MgCl2(2g/l)、K2HPO4(9g/l)和CaCl2(0,4g/l)以及微量礦物ZnSO4(0,0003g/l)、CuCl(0,0002g/l)和MnCl2(0,03g/l)補充生長介質。在培養(yǎng)結束時，生物質中的含油量是細胞的干重的46,8％。巴氏殺菌得到的生物質懸浮液并將其用于以下實施例中的熱收獲測試。實施例2在木質纖維素糖上培養(yǎng)紅冬孢酵母生物質用于熱收獲實驗批號1：在中試發(fā)酵罐中在通風下使串珠狀紅冬孢酵母菌株CBS8587(或其他由公認的微生物菌種保藏中心容易獲得的串珠狀紅冬孢酵母菌株)生長。使用木質纖維素水解產(chǎn)物糖漿作為碳源，作為批次進料發(fā)酵進行發(fā)酵。12h批次發(fā)酵之后，在144h培養(yǎng)期間定期將木質纖維素水解產(chǎn)物糖漿添加到發(fā)酵罐中。用酵母提取物(17g/l)、(NH4)2SO4(2,1g/l)、(NH4)2HPO4(2,1g/l)MgCl2(3,3g/l)、K2HPO4(5g/l)和CaCl2(0,2g/l)以及微量礦物ZnSO4(0,0005g/l)、CuCl(0,0003g/l)和MnCl2(0,05g/l)補充生長介質。在培養(yǎng)結束時，生物質中的含油量是細胞的干重的34,6％。巴氏殺菌得到的生物質懸浮液并將其用于以下實施例中的熱收獲測試。批號2：在中試發(fā)酵罐中在通風下使串珠狀紅冬孢酵母菌株CBS8761(或其他由公認的微生物菌種保藏中心容易獲得的串珠狀紅冬孢酵母菌株)生長。使用木質纖維素水解產(chǎn)物糖漿作為碳源，作為批次進料發(fā)酵進行發(fā)酵。在154h培養(yǎng)期間定期將木質纖維素水解產(chǎn)物糖漿添加到發(fā)酵罐中。用酵母提取物(8.3g/l)、(NH4)2SO4(1.3g/l)、(NH4)2HPO4(2.0g/l)、MgCl2(1.7g/l)、KH2PO4(1.8g/l)以及微量礦物ZnSO4(0,0005g/l)、CuCl2(0,0003g/l)和MnCl2(0,05g/l)、Na2MoO4(0.0003g/l)補充生長介質。在培養(yǎng)結束時，生物質中的含油量是細胞的干重的47.7％。巴氏殺菌得到的生物質懸浮液并將其用于以下實施例中的熱收獲測試。實施例3在純糖上培養(yǎng)隱球酵母生物質用于熱收獲實驗將三個隱球酵母生物質批次用于熱收獲測試批號1：在中試發(fā)酵罐中在通風下使彎曲隱球酵母(Cryptococcuscurvatus)菌株CBS5324(或其他由公認的微生物菌種保藏中心容易獲得的彎曲隱球酵母菌株)生長。使用葡萄糖作為碳源作為批次進料發(fā)酵進行發(fā)酵。在119h培養(yǎng)期間定期將葡萄糖漿添加到發(fā)酵罐中。用酵母提取物(10g/l)、麥芽提取物(3g/l)、(NH4)2SO4(1,5g/l)、(NH4)2HPO4(1,5g/l)、MgCl2(1,8g/l)、KH2PO4(3g/l)、K2HPO4(1g/l)和CaCl2(0,4g/l)以及微量礦物ZnSO4(0,0003g/l)、CuCl(0,0002g/l)和MnCl2(0,03g/l)補充生長介質。在培養(yǎng)結束時，生物質中的含油量是細胞的干重的38,5％。巴氏殺菌得到的生物質懸浮液并將其用于以下實施例中的熱收獲測試。批號2：在中試發(fā)酵罐中在通風下使彎曲隱球酵母菌株CBS5324TKK突變體40(或其他由公認的微生物菌種保藏中心容易獲得的彎曲隱球酵母菌株)生長。使用葡萄糖作為碳源作為批次進料發(fā)酵進行發(fā)酵。在114h培養(yǎng)期間定期將葡萄糖漿添加到發(fā)酵罐中。用酵母提取物(6g/l)、(NH4)2SO4(1,8g/l)、(NH4)2HPO4(1,8g/l)、MgCl2(1,8g/l)、KH2PO4(3g/l)和CaCl2(0,3g/l)以及微量礦物ZnSO4(0,0003g/l)、CuCl(0,0002g/l)和MnCl2(0,03g/l)補充生長介質。在培養(yǎng)結束時，生物質中的含油量是細胞的干重的47,9％。巴氏殺菌得到的生物質懸浮液并將其用于以下實施例中的熱收獲測試。批號3：在中試發(fā)酵罐中在通風下使彎曲隱球酵母菌株CBS5324TKK突變體40(或其他由公認的微生物菌種保藏中心容易獲得的彎曲隱球酵母菌株)生長。使用葡萄糖作為碳源作為批次進料發(fā)酵進行發(fā)酵。在90h培養(yǎng)期間定期將葡萄糖漿添加到發(fā)酵罐中。用酵母提取物(6g/l)、(NH4)2SO4(1,8g/l)、(NH4)2HPO4(1,8g/l)、MgCl2(1,8g/l)、KH2PO4(3g/l)和CaCl2(0,3g/l)以及微量礦物ZnSO4(0,0003g/l)、CuCl(0,0002g/l)和MnCl2(0,03g/l)補充生長介質。在培養(yǎng)結束時，生物質中的含油量是細胞的干重的40.3％。巴氏殺菌得到的生物質懸浮液并將其用于以下實施例中的熱收獲測試。實施例4水熱處理對酵母生物質的過濾性的影響使用用于模擬從木質纖維素生物質提取糖類的強度系數(shù)表示熱處理條件(溫度和處理時間作為變量)。使用式(1)(PedersenandMeyer,2010)計算強度系數(shù)logR0。在1升壓力反應器(ParrInstruments)中在不同的強度下處理含水酵母懸浮液。在攪拌(500rpm)下加熱反應器并在某些強度LogR0值下取出樣品。用2um過濾器測試取出的樣品的過濾性(filterability)。HTT對酵母生物質懸浮液的過濾性的影響示于表1-3中。表1.實施例1的紅冬孢酵母生物質的過濾性固體DW5.93wt％，pH5.75表2.實施例2的批次1的紅冬孢酵母生物質的過濾性固體DW3.8wt％，pH5，9表3.實施例3的批次1的隱球酵母生物質的過濾性固體DW7.09wt％，pH5.5基于實施例4的結果，制造包含可過濾的酵母生物質的含水懸浮液的水熱處理(HTT)的所需要的強度系數(shù)取決于酵母種屬以及一定程度上取決于含水懸浮液的pH值。通常，需要HTT的LogR0>3.9的強度系數(shù)來制造包含可過濾的酵母生物質的含水懸浮液。實施例5水熱處理對微生物油的提取產(chǎn)率的影響。使實施例1的紅冬孢酵母懸浮液經(jīng)受不同的水熱處理以研究HTT強度對脂質的提取產(chǎn)率的影響。首先，用Sorvall離心機在10000rpm/20min下離心巴氏殺菌的(80℃，15min)生物質懸浮液以得到具有25％的固體干物質含量的懸浮液。將得到的固體材料干燥至98％固體干物質含量，因此生成在不使用水熱處理的情況下收獲的酵母生物質。這個實施例中的該生物質在表4中稱為“無HTT”。另外，使用不同的強度系數(shù)水熱處理實施例1的酵母懸浮液。通過在密閉的壓力反應器(1升Parr反應器，攪拌500rpm)中處理酵母生物質懸浮液針對確定的溫度和時間進行該水熱處理，冷卻至室溫。用布氏過濾器(Buchnerfiter)(2um過濾器)由處理的酵母生物質懸浮液過濾生物質固體，并將分離的固體干燥至95％的固體干物質含量。在Retch實驗室研磨機中將來自各個水熱處理的生物質固體研磨成粉末。在50℃下用庚烷提取研磨的固體(固體/庚烷比1:5w/w)1小時，離心以分離固體和溶劑-油相。另外用新鮮的庚烷洗滌固體，離心并將分離的溶劑-油相與來自提取步驟的溶劑-油相結合。蒸發(fā)溶劑以得到粗微生物油部分。表4中呈現(xiàn)了來自原始干燥的酵母生物質(稱為“無HTT”)和水熱處理的生物質的提取產(chǎn)率。從表4可以看出，由于無效的細胞破壞，來自原始干燥生物質的油產(chǎn)率低。在140℃/15min下處理生物質對于破壞細胞也是不夠的且油產(chǎn)率同樣不良。在足夠強的條件(logR0>3.6)下HTT之后，可以提取生物質中的所有油。當反應溫度是140℃時，壓力是約5巴。當溫度是160℃時，壓力是6.2巴至6.8巴。當溫度是180℃時，壓力是10.3巴至11.0巴。當溫度是210℃時，壓力是19.6巴。表4.不同的水熱處理、用庚烷提取油之后來自在純糖上生長的串珠狀紅冬孢酵母的油產(chǎn)率水熱處理強度，LogR0油產(chǎn)率(原始生物質中的油％)無HTT025％140℃/15min2,626％160℃/3h4,0101％180℃/30min4,0100％180℃/1h4,298％210℃/0min4,5103％*原始生物質中的油＝通過GC分析的總脂肪酸。實施例6水熱處理對從酵母生物質中提取的油的質量的影響由三組粗微生物油分析雜質。在第一比較實施例中，通過ICP分析從如之前的實施例5所描述的紅冬孢酵母生物質中提取的粗微生物油的雜質(金屬、磷)。在第二比較實施例中，針對相同的雜質分析來自如實施例3所描述的在純糖上生長并與實施例5中的紅冬孢酵母生物質類似地水熱處理的隱球酵母生物質批次1和2的粗微生物油。在第三比較實施例中，針對雜質分析來自如實施例2所描述的在木質纖維素糖上生長并與實施例5中的紅冬孢酵母生物質類似地水熱處理的紅冬孢酵母生物質批次1和2的粗微生物油。從水熱處理的生物質中提取的油具有與來自非水熱處理的生物質的油一樣良好的質量。在一些雜質(P、Ca、Mg和N)方面，從表5、6和7中呈現(xiàn)的分析結果可以看出，水熱處理的油甚至比沒有經(jīng)受水熱處理的微生物油更純。對于酵母隱球酵母和紅冬孢酵母兩者，熱收獲看起來在生產(chǎn)具有可忽略量的金屬和磷的油中是非常有效的，因此在將微生物油催化轉化為燃料或化學品之前需要最少的預處理。通過改變水熱處理條件，尤其是溫度，可以改變油質量。通過降低溫度，更少的氮化合物引入到油中，盡管廢水中的氮的含量與在較高溫度下進行的熱處理一樣高。表5.由水熱處理的和非水熱處理的實施例5的糖生長的串珠狀紅冬孢酵母生物質提取的微生物油之間的比較表6.由水熱處理的和非水熱處理的實施例3的糖生長的彎曲隱球酵母生物質提取的微生物油之間的比較表7.由水熱處理的和非水熱處理的實施例2的木質纖維素生長的串珠狀紅冬孢酵母生物質提取的微生物油之間的比較實施例7水熱處理對于從酵母在木質纖維素水解產(chǎn)物上生長的水相中除去溶解的木質纖維素材料的影響在不同的強度下在實驗室規(guī)模中水熱處理實施例2的串珠狀紅冬孢酵母懸浮液批次1。該加工之后，通過過濾除去固體，因此生成上清液體流股。作為第一比較情況，在沒有水熱處理的情況下通過離心以及在沒有巴氏殺菌懸浮液(表8中的“無HTT”)的情況下從酵母懸浮液中回收液體上清液。作為第二比較情況，首先巴氏殺菌酵母懸浮液并在沒有水熱處理的情況下通過離心(表8中的“巴氏殺菌105C/5min”)從酵母懸浮液中回收液體上清液。表8示出了上清液的特征是怎樣被不同的加工條件改變的。在180℃/1h下水熱處理酵母懸浮液中，液體上清液的上清液化學需氧量(COD)降低了21％，以及在250℃/1h下的水熱處理中降低了47％。水熱處理的強度越高，在處理期間存在于培養(yǎng)介質中的越多溶解的材料固化，并可以通過過濾通過酵母生物質回收。相反，僅巴氏殺菌從生物質中釋放材料到液體，因此生成如表8所示的在名稱為“初始的DW-％”行中的更多溶解的材料。不是所有的溶解的材料轉化為作為溶解的材料的一部分的可分離的固體生物質部分，且生物質還在熱處理期間氣化。氣體的量是初始干物質的2-5％，且氣體大部分由一氧化碳、二氧化碳、氧和各種烴組成。表8.在不同的條件下水熱處理之后針對分離的上清液體的分析結果實施例8洗滌水熱處理的微生物生物質對提取的油的質量的影響如表9所示，該實施例示出了在油提取之前水洗水熱處理的酵母生物質降低油中的氮和金屬的量。這非常有利地和顯著地減少對于純化的需要且甚至可以消除在將粗微生物油轉化為燃料或化學品之前對預處理步驟的需要。表9.在具有或不具有水洗的情況下由水熱處理的生物質提取的酵母油之間的比較實施例10干燥和油提取溫度對提取的油的質量的影響發(fā)現(xiàn)可以通過在油提取步驟之前優(yōu)化生物質的干燥(表10)和通過優(yōu)化油提取溫度(表11)可以調節(jié)提取的微生物油中的雜質的量，尤其是氮的量。結果示出較低的干燥和提取溫度對于提取油的質量是有益的。表10.在使用不同的干燥條件之后使用正己烷從水熱處理的酵母生物質中提取的微生物油之間的比較表11.使用正庚烷作為溶劑在不同的提取溫度下從水熱處理的酵母生物質中提取的微生物油之間的比較該實施例的結果示出了通過在低于85℃的溫度下干燥水熱處理的生物質，可以顯著降低提取的微生物油中的氮的量。還示出通過在室溫下進行油提取，與在較高溫度下的提取相比，提取的微生物油中的氮的量進一步降低。實施例11pH調節(jié)對水熱收獲和提取的油的質量的影響在水熱收獲期間，看出懸浮液的pH自然降低，如從表12可以看出的。還可以在水熱收獲之前調節(jié)懸浮液的pH，這增加在加熱期間變得可溶于懸浮液的生物質的量。通過一些測試的酵母生物質，在HTT之前使生物質更酸性使得酵母細胞在較短的處理時間和較低的溫度下浮起(float)。盡管，該較早和較容易的浮起沒有改變使這些酵母可過濾所需的強度，且因此pH調節(jié)僅在認為必需通過離心分離酵母細胞時產(chǎn)生優(yōu)勢。應注意在這種情況下，強度系數(shù)不夠高以能夠有效地破壞細胞，并因此油產(chǎn)率保持較低。pH的調節(jié)也可以對最終的油的質量具有影響。在表13中，對于兩種生物質懸浮液的水熱處理的強度系數(shù)相同，但是在水熱處理之前將其他生物質懸浮液的pH調節(jié)為酸性。從后面的生物質中提取的油的氮含量稍微地較高。表12.在HTT之前生物質懸浮液(培養(yǎng)在糖上的串珠狀紅冬孢酵母)的pH調節(jié)對生物質至液相的溶解速率的影響表13.在HTT之前生物質懸浮液(在糖上培養(yǎng)的彎曲隱球酵母，批次2)的pH調節(jié)對油質量的影響。當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3