本發(fā)明是由美國國立衛(wèi)生研究院(NationalInstitutesofHealth)資助的在批準號R01CA136534和DA028821下由政府支持進行的。政府在本發(fā)明中具有一定權利。相關申請的交叉引用本申請要求于2014年5月5日提交的美國臨時申請?zhí)?1/988,332的優(yōu)先權，將該申請的全部內(nèi)容通過引用特此結合。背景對于非小細胞肺癌(NSCLS)來說總存活率約為16％，然而對于SCLC來說總存活率是6％。杰馬勒(Jemal)等人，臨床腫瘤雜志(CACancerJ.Clin.)，(2007)，57，43-66。克服肺癌對化放療或表皮生長因子受體(EGFR)靶向治療的耐藥性將證實是顯著的成就。B-細胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)是凋亡調(diào)節(jié)蛋白的Bcl-2家族的成員。Bcl-2在多種癌癥中廣泛表達，包括肺癌、白血病、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、頭/頸癌等。涉及癌癥對化療的耐藥性的一個主要因素是Bcl-2和Bcl-2樣蛋白的過度表達。已經(jīng)證實Bcl-2的BH4結構域是Bcl-2的抗凋亡功能所需的結構域，該抗凋亡功能和增加的癌癥化療耐藥性相關。Bcl-2在SCLC和NSCLC兩種細胞中都廣泛地表達。因為超過60％的NSCLC患者表達EGFR，已經(jīng)鑒定EGFR是NSCLC治療的重要治療性靶標。通過EGFR-酪氨酸激酶抑制劑(TKI)(即厄洛替尼或吉非替尼)的EGFR抑制代表肺癌療法的有前景的方法。不幸的是，起初從厄洛替尼療法中受益的患者在6-12個月之后發(fā)展出對厄洛替尼的獲得性耐藥性。該機制尚未完全了解但可以與EGFR非依賴性途徑的激活、另外的EGFR基因突變的發(fā)生或靶標的缺失相關。除作為抗凋亡蛋白起作用，Bcl-2還可以促進腫瘤血管生成。在低氧情況下，Bcl-2在黑色素瘤和乳腺癌中促進低氧誘導因子-1(HIF-1)介導的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達。參見特里肖利奧(Trisciuoglio)等人，細胞死亡與分化(CellDeathandDifferentiation)(2011)，1-12。在低氧情況下，在BH4結構域處的突變在人黑色素瘤細胞中和如結腸癌、卵巢癌和肺癌的其他人類腫瘤組織型中消除了Bcl-2誘導VEGF蛋白表達和轉錄活性的能力。BH4肽足以通過損害HIF-1α蛋白泛素化而增加HIF-1α蛋白半衰期并且增強VEGF在暴露于低氧下的黑色素瘤細胞中的分泌。HIF-1α在包括以下項的許多腫瘤類型中過度表達：結腸癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、皮膚癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、和腎癌。參見鐘(Zhong)等人的摘要，癌癥研究(CancerRes.)，1999，59(22)：5830，標題為“在常見人類癌癥及其轉移中低氧誘導因子1α的過度表達(Overexpressionofhypoxia-induciblefactor1alphaincommonhumancancersandtheirmetastases)”。還參見西門扎(Semenza)，國際醫(yī)學(InternMed.),2002，41(2)：79-83，標題為“低氧誘導因子1在人類癌癥中的參與(Involvementofhypoxia-induciblefactor1inhumancancer)”；鐘(Zhong)等人，生物化學和生物物理研究通訊(BiochemBiophysResCommun)，2001，284(2)：352-6，標題為“低氧誘導因子1α和1β蛋白在人前列腺癌細胞中共享通用信號傳導通路(Hypoxia-induciblefactor1alphaand1betaproteinssharecommonsignalingpathwaysinhumanprostatecancercells)”；皮(Pugh)等人，乳腺癌研究(BreastCancerRes)，2001，3(5)：313-7，標題為“在乳腺癌中的低氧和氧化應激(Hypoxiaandoxidativestressinbreastcancer)。低氧信號通路(Hypoxiasignallingpathways)”；以及嘉初馬娜拉基(Giatromanolaki)等人，英國癌癥雜志(BrJCancer.)，2001，85(6)：881-90，標題為“低氧誘導因子-1α和2α在可操作的非小細胞肺癌中與腫瘤的血管生成/分子特性及存活的相關(Relationofhypoxiainduciblefactor1alphaand2alphainoperablenon-smallcelllungcancertoangiogenic/molecularprofileoftumoursandsurvival)?！蹦承┒被祯苌锸茄苌梢种苿┎⑶乙驯惶嶙h作為潛在的抗癌藥物。參見塔卡諾(Takano)等人，藥理學與實驗治療學雜志(JournalofPharmacologyandExperimentalTherapeutics)，(1994)，271(2)，1027-33。還參見美國專利6,465,522、5,733,880、5,436,243、以及5,344,841。概述本披露涉及BH4抑制劑及其相關治療用途。在某些實施例中，本披露涉及治療或預防如肺癌的癌癥的方法，這些方法包括將治療有效量的、包括在此披露的化合物或藥學上可接受的鹽的藥用組合物給予至對其有需要的受試者。在某些實施例中，本披露涉及在此披露的任選地被一個或多個取代基取代的化合物或衍生物。在某些實施例中，本披露涉及具有化學式I的化合物，化學式I或其鹽，其中X是-(CR8R9)n-；Y是鹵素、NH、CH2、O、或S；Z是-(CR10R11)m-或橋聯(lián)芳基；n是1、2、3、或4；m是1、2、3、或4；R1是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲?；?、羧基、氨甲?；?、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；⒎蓟酋；⑻辑h(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R1任選地被一個或多個相同或不同的R12取代；R2是氫或烷基；或R1和R2形成任選地被一個或多個R12取代的雜環(huán)基；R3是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲酰基、羧基、氨甲?；⑼檠趸?、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺酰基、烷基磺?；?、芳基磺?；⑻辑h(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R3任選地被一個或多個相同或不同的R12取代；R8、R9、R10、和R11各自單獨且獨立地是氫、鹵素、或羥基；R12是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲?；Ⅳ然?、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺酰基、烷基磺?；?、芳基磺?；?、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R12任選地被一個或多個相同或不同的R13取代；R13是鹵素、硝基、氰基、羥基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲?；Ⅳ然?、氨甲?；€基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙?；?、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙?；被?、N-甲基氨甲?；?、N-乙基氨甲?；,N-二甲基氨甲酰基、N,N-二乙基氨甲?；-甲基-N-乙基氨甲?；⒓琢蚧?、乙硫基、甲基亞磺?；?、乙基亞磺?；⒓谆酋；?、乙基磺?；?、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺?；-乙基氨磺?；?、N,N-二甲基氨磺?；?、N,N-二乙基氨磺?；?、N-甲基-N-乙基氨磺?；?、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基。在某些實施例中，本披露涉及包括在此披露的化合物或藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的賦形劑的藥用組合物。在某些實施例中，這些藥用組合物進一步包括第二治療劑。在某些實施例中，本披露涉及治療或預防癌癥的方法，這些方法包括向被診斷患有癌癥、展現(xiàn)癌癥癥狀、或處于癌癥風險的受試者給予在此披露的藥用組合物。在某些實施例中，該癌癥選自下組，該組由以下各項組成：由白血病、黑色素瘤、宮頸癌、卵巢癌、結腸癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、皮膚癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、頭癌、頸癌、和腎癌。在某些實施例中，將藥用組合物與第二治療劑組合給藥，該第二治療劑例如但不限于吉非替尼、厄洛替尼、多西他賽、順鉑、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、替加氟、雷替曲塞、甲氨喋呤、阿糖胞苷、羥基脲、阿霉素、博萊霉素、多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、伊達比星、絲裂霉素C、放線菌素D和光輝霉素、長春新堿、長春堿、長春地辛、長春瑞濱紫杉醇、泰索帝、依托泊苷、替尼泊苷、安吖啶、拓撲替康、喜樹堿、硼替佐米、阿那格雷、他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、吲哚昔芬氟維司群、比卡魯胺、氟他胺、尼魯米特、環(huán)丙孕酮、戈舍瑞林、亮丙瑞林、布舍瑞林、甲地孕酮、阿那曲唑、來曲唑、伏氯唑、依西美坦、非那雄胺、馬立馬司他、曲妥珠單抗、西妥昔單抗、達沙替尼、伊馬替尼、貝伐單抗、考布他汀、沙利度胺、和/或來那度胺，或其組合。在某些實施例中，本披露涉及在此披露的治療方法，其中藥用組合物是在放射療法之前、之后或期間給藥。在某些實施例中，本披露涉及治療肺癌的方法，這些方法包括將EGFR抑制劑和BH4抑制劑(如在此披露的那些)組合給藥。在某些實施例中，該BH4抑制劑是1-((3-(二乙氨基)-2-羥丙基)氨基)-4-(環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮、1,4-雙((環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮、1-((2-(二甲氨基)乙基)氨基)-4-((環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮、1-((2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙基)氨基)-4-((環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮，其鹽或衍生物，該BH4抑制劑任選地每天以0.01mg每kg和0.1mg每kg之間、每天以0.1mg每kg和1.0mg每kg之間、每天以1mg每kg和5mg每kg之間、或受試者每天以5mg每kg之間和30mg每kg之間給藥。在某些實施例中，本披露涉及治療癌癥的方法，這些方法包括將有效量的mTOR抑制劑和BH4抑制劑(如在此披露的那些)組合給藥。在某些實施例中，mTOR抑制劑是西羅莫司、依維莫司、地磷莫司、替西羅莫司、或其衍生物。在某些實施例中，本披露涉及在此披露的化合物在生產(chǎn)治療或預防癌癥的藥物中的應用。在某些實施例中，本披露涉及制備在此披露的化合物的方法，這些方法包括在形成化合物的條件下混合在此披露的起始材料和試劑。附圖簡要說明圖1展示了某些實施例的化學結構。圖2展示了某些實施例的化學結構。圖3展示了某些實施例的化學結構。圖4示出指示BDA-2(改名為BDA-366)在體內(nèi)抑制肺癌的數(shù)據(jù)。將帶有H460肺癌異種移植物的Nu/Nu小鼠用遞增劑量的BDA-366(0mg/kg/d、10mg/kg/d、20mg/kg/d和30mg/kg/d)處理14天。每組包括8只小鼠。每2天測量一次腫瘤體積。在14天后，將小鼠處死并且將腫瘤移除并進行分析。圖5示出指示BDA-366在衍生自SCLC患者的異種移植物中抑制腫瘤生長的數(shù)據(jù)。將攜帶衍生自難治性SCLC患者的異種移植物的小鼠用BDA-366(20mg/kg/d)通過腹腔注射處理兩周。圖6示出本披露的某些實施例的腫瘤體積數(shù)據(jù)。將NSCLCH460異種移植物小鼠用20mg/kg的Bcl2BH4拮抗劑BDA-366或其類似物(CYD-2-81、CYD-2-84和CYD-2-88)通過腹腔注射處理兩周。圖7示出了指示用RAD001處理肺癌細胞或患者下調(diào)Bcl2的數(shù)據(jù)。將A549或H460細胞用遞增濃度的RAD001處理24小時。將Bcl-2和p-P70S6K用Western印跡分析。圖8示出指示BDA-366協(xié)同RAD001在抑制人類肺癌細胞生長中的數(shù)據(jù)。將H460細胞用RAD001(1nM)或BDA-366(100nM)單獨或組合處理72小時。細胞生長用磺酰羅丹明B比色測定進行分析。用以評估RAD001和BAD-366的協(xié)同作用的聯(lián)合指數(shù)(CI)值用CompuSyn軟件計算。圖9示出BAD-366和RAD001的組合在體內(nèi)協(xié)同地抑制肺癌。將帶有H460肺癌異種移植物的Nu/Nu小鼠用BDA-366、RAD001或其組合通過腹腔注射處理14天。圖10示出當人多發(fā)性骨髓瘤細胞系8226和U266(106個細胞/ml)用BDA2在不同濃度下(0、0.1、0.25、0.5μM)處理48小時時的數(shù)據(jù)。然后將細胞用AnnexinV染色以用于FACS分析。凋亡細胞死亡作為AnnexinV陽性細胞的百分比而呈現(xiàn)。將在處理中的活細胞數(shù)量在顯微鏡下用臺盼藍染色進行計數(shù)。詳細說明在更詳細地描述本披露之前，應理解的是本披露不限于所描述的具體實施例，因此這些當然可以改變。還應當理解，在此使用的術語僅是為了描述特定實施例的目的，而并不意圖是限制性的，因為本披露的范圍僅由所附權利要求限定。除非另外定義，在此所用的全部技術術語和科學術語具有與本披露所屬領域的普通技術人員通常所理解的相同意義。雖然與在此所述的那些方法和材料相似或等同的任意方法和材料也可以用于實施或測試本披露中，然而現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法和材料。在本說明書中引用的所有公開物和專利通過引用結合于此，就好像每個單獨的公開物或專利被確切地并單獨地指示為通過引用結合，并且通過引用結合于此從而結合引用的公開物披露和描述這些方法和/或材料。任何公開物的引用內(nèi)容是針對在提交日之前的披露，并且不能理解為承認因為先前披露而本披露不能獲得比這些公開物更早的申請日。此外，所提供的公開日期可能與實際的公開日期不同，實際的公開日期可能需要單獨地確認。如將對于本領域技術人員清楚的是，在閱讀本披露時，在此描述和展示的單獨實施例的每一個具有離散的組成部分和特征，這些組成部分和特征可以在不偏離本披露的范圍或精神的情況下易于與任何其他一些實施例的特征分離或組合?？梢园凑账鶖⑹龅氖录捻樞蚧虬凑者壿嬌峡尚械娜魏纹渌樞騺磉M行任何敘述的方法。除非另外說明，本披露的實施例將采用免疫學、醫(yī)學、有機化學、生物化學、分子生物學、藥理學、生理學等的技術，這些技術是在本領域的技術之內(nèi)。此類技術在文獻中得到充分解釋。必須指出，如在說明書和所附權利要求書中所使用，單數(shù)形式“一個/一種(a/an)”和“該(the)”包括復數(shù)指示物，除非上下文另外清楚地規(guī)定。在本說明書和以下權利要求書中，將參考應定義為具有下列含義的大量術語，除非明顯是相反的意圖。在描述各種實施例之前，提供以下定義并且應使用這些定義，除非另外指明。如在此使用的，“烷基”意指非環(huán)直鏈或分支的、不飽和的或飽和的烴，如包括從1到10個碳原子的那些，然而術語“低級烷基”或“C1-4烷基”具有和烷基相同的意義但包括從1到4個碳原子。術語“高級烷基”具有和烷基相同的意義但包括從7-20個碳原子。代表性飽和直鏈烷基包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基等；然而飽和支鏈烷基包括異丙基、仲丁基、異丁基、叔丁基、異戊基等。不飽和烷基類包含在相鄰碳原子之間的至少一個雙鍵或者三鍵(分別是指如“烯基”或者“炔基”)。代表性直鏈和支鏈烯基包括乙烯基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基等。而代表性直鏈和支鏈炔基包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基等。非芳香族單環(huán)或多環(huán)烷基在此被稱為“碳環(huán)”或“碳環(huán)基”基團。代表性的飽和碳環(huán)包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等；而不飽和碳環(huán)化合物包括環(huán)戊烯基和環(huán)己烯基等?！半s碳環(huán)”或“雜碳環(huán)基”基團是可能飽和或不飽和(但不為芳香族)、單環(huán)或多環(huán)的包含從1個到4個獨立地選自氮、氧和硫的雜原子的碳環(huán)，并且其中這些氮和硫雜原子可任選地被氧化，并且該氮雜原子可任選地被季銨化。雜碳環(huán)包括嗎啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、乙內(nèi)酰脲基、戊內(nèi)酰胺基、環(huán)氧乙烷基、氧雜環(huán)丁烷基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、四氫吡啶基、四氫嘧啶基、四氫苯硫基、四氫硫代吡喃基、四氫嘧啶基、四氫苯硫基、四氫硫代吡喃基等?！胺蓟币庵阜枷阕逄辑h(huán)單環(huán)或者多環(huán)環(huán)，諸如苯基或萘基。多環(huán)環(huán)系統(tǒng)可以(但不是必需)包含一個或多個非芳香族環(huán)，只要一個環(huán)是芳香族即可。如在此所用，“雜芳基”是指具有1至4個選自氮、氧和硫的雜原子并且包含至少1個碳原子的一個芳香族雜碳環(huán)，包括單環(huán)與多環(huán)環(huán)系統(tǒng)兩者。多環(huán)環(huán)系統(tǒng)可以(但不是必需)包含一個或多個非芳香族環(huán)，只要一個環(huán)是芳香族即可。代表性的雜芳基是呋喃基、苯并呋喃基、苯硫基、苯并苯硫基、吡咯基、吲哚基、異吲哚基、氮雜吲哚基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、噁唑基、異噁唑基、苯并噁唑基、吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噻唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、酞嗪基、以及喹唑啉基。所考慮的是，術語“雜芳基”的使用包括N-烷基化衍生物，諸如1-甲基咪唑-5-基取代基。如在此所用，“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”是指具有1至4個選自氮、氧以及硫的雜原子并且包含至少1個碳原子的單環(huán)和多環(huán)環(huán)系統(tǒng)。這些單環(huán)和多環(huán)環(huán)系統(tǒng)可以是芳香族、非芳香族或芳香族與非芳香族環(huán)的混合物。雜環(huán)包括雜碳環(huán)、雜芳基等?！巴榱蚧笔侵竿ㄟ^硫橋附接的具有指定數(shù)目的碳原子的如上所定義的烷基。烷硫基的一個實例是甲硫基(即-S-CH3)?！巴檠趸笔侵竿ㄟ^氧橋附接的具有指定數(shù)目的碳原子的如上所定義的烷基。烷氧基的實例包括，但并不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基以及仲戊氧基。優(yōu)選的烷氧基是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基以及叔丁氧基。“烷氨基”是指通過氨基橋附接的具有指定數(shù)目的碳原子的如上所定義的烷基。烷氨基的一個實例是甲氨基(即-NH-CH3)?！巴轷；笔侵竿ㄟ^羰基橋連接的具有指定數(shù)目的碳原子的如上文所定義的烷基(即-(C＝O)烷基)?！巴榛酋；笔侵竿ㄟ^磺?；鶚蚋浇拥木哂兄付〝?shù)目的碳原子的如上所定義的烷基(即-S(＝O)2烷基)，諸如甲磺?；?，并且“芳基磺?；笔侵竿ㄟ^磺?；鶚蚋浇拥姆蓟?即-S(＝O)2芳基)?！巴榛酋０贰笔侵竿ㄟ^氨磺?；鶚蚋浇拥木哂兄付〝?shù)目的碳原子的如上所定義的烷基(即-NHS(＝O)2烷基)，并且“芳基磺酰胺”是指通過氨磺?；鶚蚋浇拥姆蓟?即-NHS(＝O)2芳基)?！巴榛鶃喕酋；笔侵竿ㄟ^亞磺?；鶚蜻B接的具有指定數(shù)目的碳原子的如上文所定義的烷基(即-S(＝O)烷基)。“氧膦基”是指具有羥基、硫醇基、烷基、烷氧基、烷硫基或組合中的兩個另外取代的磷?；?-P＝O)或磷酸硫醇基(-P＝S)(即-P(＝O)(烷基)2、-P(＝S)(OH)2、-P(＝O)(烷基)(烷氧基))。術語“被取代”是指其中至少一個氫原子被取代基置換的一個分子。當被取代時，一個或多個基團是“取代基”。該分子可被多重取代。在氧代取代基(“＝O”)的情況下，兩個氫原子被置換。這種情形中的示例取代基可包括鹵素、羥基、烷基、烷氧基、硝基、氰基、氧代、碳環(huán)基、碳環(huán)烷基、雜碳環(huán)基、雜碳環(huán)烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、-NRaRb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)NRaNRb、-NRaC(＝O)ORb、-NRaSO2Rb、-C(＝O)Ra、-C(＝O)ORa、-C(＝O)NRaRb、-OC(＝O)NRaRb、-ORa、-SRa、-SORa、-S(＝O)2Ra、-OS(＝O)2Ra以及-S(＝O)2ORa。這種情形中的Ra和Rb可以相同或不同并且獨立地為氫、鹵素、羥基、烷基、烷氧基、烷基、氨基、烷氨基、二烷氨基、碳環(huán)基、碳環(huán)烷基、雜碳環(huán)基、雜碳環(huán)烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基以及雜芳基烷基。如在此所用的術語“任選地被取代”意指取代是任選的并且因此指定原子有可能未被取代。如在此所用的“鹽”指披露的化合物的衍生物，其中母體化合物通過制備其酸或堿的鹽來修飾。鹽的例子包括但不限于堿性殘基(如胺、烷基胺、或二烷基胺)的礦鹽或有機酸鹽；酸性殘基如羧酸的堿金屬鹽或有機鹽；等等。在優(yōu)選的實施例中，這些鹽是常規(guī)的非毒性的藥學上可接受的鹽，其包括所形成的母體化合物和非毒性無機酸或有機酸的季銨鹽。優(yōu)選的鹽包括衍生自無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的那些；以及制備自有機酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、對氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羥乙磺酸等的鹽?！笆茉囌摺笔侵溉魏蝿游?，優(yōu)選人類患者、牲畜、或家養(yǎng)寵物。術語“前藥”是指在體內(nèi)被轉化為生物活性形式的藥物。前藥經(jīng)常是有用的，因為在一些情況下，它們可以比母體化合物更容易給予。例如，它們可以通過口服給藥而成為生物可利用的，而母體化合物卻不行。前藥還可以在藥用組合物中具有改進的超過母體藥物的溶解性。前藥可以通過包括酶促過程和代謝水解的各種機制轉化為母體藥物。如在此所用的術語“預防”和“防止”包括復發(fā)、擴散或發(fā)作的預防。并不旨在將本披露限制為完全預防。在一些實施例中，該發(fā)作被延緩，或該疾病的嚴重性被降低。如在此所用的術語“治療(treat)”和“治療(treating)”并不限于受試者(如患者)被治愈并且疾病被根除的情況。相反，本披露的實施例還考慮了僅減輕癥狀和/或延緩疾病發(fā)展的治療。如在此所用，當用于描述與一種另外的治療一起給予時，術語“與組合”意指該藥劑可以在該另外的治療之前、與其一起、或之后、或其組合被給予。如在此所用，術語“衍生物”是指保留所鑒別類似物的足夠功能特征的結構上類似的化合物。該衍生物可能是結構上類似的，因為缺乏一個或多個原子、被取代、呈鹽形式、呈不同的水合/氧化狀態(tài)，或因為分子內(nèi)的一個或多個原子被轉換，如(但不限于)氧原子被硫原子置換或氨基被羥基置換。該衍生物可以是前藥。衍生物可通過在合成或有機化學教科書中所呈現(xiàn)的任何種類的合成方法或適當改動來制備，諸如馬奇的高等有機化學：反應、機理以及結構(March'sAdvancedOrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure)，威利出版社(Wiley)，第6版(2007)；邁克爾(MichaelB.)史密斯(Smith)或有機合成中的多米諾反應(DominoReactionsinOrganicSynthesis)，威利出版社(Wiley)(2006)盧茨F.蒂策(LutzF.Tietze)中所提供的那些，這些化學教科書通過引用結合在此。“癌癥”指任何具有表征為細胞增殖的惡性腫瘤的各種細胞疾病。并不意圖病變細胞必須實際入侵周圍組織并轉移到新的身體部位。癌癥可以涉及身體的任何組織并且在每個身體部位有許多不同的形式。在某些實施例的背景中，是否“癌癥被減弱”可以通過本領域技術人員已知的許多診斷方式鑒定，這些方式包括但不限于觀察到腫瘤塊的大小或數(shù)量的降低或是否觀察到癌細胞的凋亡增加，如與沒有該化合物的對照相比對于樣品化合物是否觀察到在癌細胞凋亡中具有超過5％的增加。它還可以通過相關的生物標志物或基因表達譜的改變來鑒定，如針對前列腺癌的PSA、針對乳腺癌的HER2、或其他?；衔镌谀承嵤├?，本披露考慮了根據(jù)下文化學式I的化合物?；瘜W式I或其鹽，其中X是-(CR8R9)n-；Y是鹵素、NH、CH2、O、或S；Z是-(CR10R11)m-或橋聯(lián)芳基；n是1、2、3、或4；m是1、2、3、或4；R1是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲?；?、羧基、氨甲?；?、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺?；?、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R1任選地被一個或多個相同或不同的R12取代；R2是氫或烷基；或R1和R2形成任選地被一個或多個R12取代的雜環(huán)基；R3是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；⒎蓟酋；⑻辑h(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R3任選地被一個或多個相同或不同的R12取代；R8、R9、R10、和R11各自單獨且獨立地是氫、鹵素、或羥基；R12是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲?；Ⅳ然?、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺?；?、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R12任選地被一個或多個相同或不同的R13取代；R13是鹵素、硝基、氰基、羥基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲?；Ⅳ然?、氨甲?；€基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙?；?、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲酰基、N-乙基氨甲?；,N-二甲基氨甲?；?、N,N-二乙基氨甲?；?、N-甲基-N-乙基氨甲?；?、甲硫基、乙硫基、甲基亞磺酰基、乙基亞磺?；⒓谆酋；⒁一酋；?、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺?；-乙基氨磺?；?、N,N-二甲基氨磺?；?、N,N-二乙基氨磺?；?、N-甲基-N-乙基氨磺?；?、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基。在某些實施例中，R1是碳環(huán)基或雜環(huán)基。在某些實施例中，R1是環(huán)丙基。在某些實施例中，Y是NH或CH2。在某些實施例中，Y是鹵素。在某些實施例中，Z是-(CR10R11)m-。在某些實施例中，R10和R11中的至少一個是羥基。在某些實施例中，m是3。在某些實施例中，R3是任選地被一個或多個R12取代的碳環(huán)基或雜環(huán)基如雜碳環(huán)環(huán)氧乙烷基、吡咯烷、嗎啉基、吡咯烷酮、和哌嗪基。在某些實施例中，R3是被烷基取代的雜環(huán)基，其中該烷基被一個或多個鹵素或羥基取代。在某些實施例中，R3是任選地被一個或多個R12取代的烷基磺酰胺或芳基磺酰胺。在某些實施例中，R3是二烷氨基。在某些實施例中，R3是任選地被一個或多個R12取代的氨基。在某些實施例中，R1是雜環(huán)基。在某些實施例中，n是1或3。在某些實施例中，Z是橋聯(lián)苯基。在某些實施例中，具有化學式I的化合物具有化學式IA，化學式IA或其鹽，其中A是任選地被一個或多個R12取代的雜環(huán)；X是-(CR8R9)n-；Y是NH或CH2；Z是-(CR10R11)m-；n是1、2、3、或4；m是1、2、3、或4；R1是羥基、碳環(huán)基或雜環(huán)基，其中R1任選地被一個或多個相同或不同的R12取代；R7是氫、鹵素或羥基；R8、R9、R10、和R11各自單獨且獨立地是氫、鹵素、或羥基；R12是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲?；?、羧基、氨甲?；⑼檠趸?、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R12任選地被一個或多個相同或不同的R13取代；R13是鹵素、硝基、氰基、羥基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲?；?、羧基、氨甲?；€基、氨磺?；?、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙?；⒁阴Ｑ趸?、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙?；被-甲基氨甲?；?、N-乙基氨甲?；,N-二甲基氨甲?；?、N,N-二乙基氨甲酰基、N-甲基-N-乙基氨甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亞磺?；?、乙基亞磺?；⒓谆酋；⒁一酋；?、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺?；?、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基。在某些實施例中，具有化學式I的化合物具有化學式IB，化學式IB或其鹽，其中A是任選地被一個或多個R12取代的雜環(huán)；U是CH2或O；X是-(CR8R9)n-；Y是NH或CH2；Z是-(CR10R11)m-；n是1、2、3、或4；m是1、2、3、或4；R7是氫、鹵素或羥基；R12是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲?；?、羧基、氨甲?；⑼檠趸?、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；?、芳基磺酰基、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R12任選地被一個或多個相同或不同的R13取代；R13是鹵素、硝基、氰基、羥基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲?；Ⅳ然?、氨甲酰基、巰基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙?；?、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙?；被?、N-甲基氨甲?；?、N-乙基氨甲?；,N-二甲基氨甲?；,N-二乙基氨甲?；-甲基-N-乙基氨甲?；⒓琢蚧?、乙硫基、甲基亞磺?；⒁一鶃喕酋；?、甲磺?；⒁一酋；?、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺?；?、N,N-二甲基氨磺?；?、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基。在某些實施例中，具有化學式I的化合物具有化學式IC，化學式IC或其鹽，其中B是任選地用一個或多個R12取代的雜環(huán)；X是-(CR8R9)n-；Y是NH或CH2；Z是-(CR10R11)m-或橋聯(lián)芳基；n是1、2、3、或4；m是1、2、3、或4；R3是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲酰基、羧基、氨甲?；?、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；?、芳基磺?；?、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R3任選地被一個或多個相同或不同的R12取代；R8、R9、R10、和R11各自單獨且獨立地是氫、鹵素、或羥基；R12是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲酰基、羧基、氨甲?；?、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；?、芳基磺?；?、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R12任選地被一個或多個相同或不同的R13取代；R13是鹵素、硝基、氰基、羥基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲?；Ⅳ然?、氨甲?；?、巰基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙?；⒁阴Ｑ趸?、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲?；-乙基氨甲?；,N-二甲基氨甲?；?、N,N-二乙基氨甲酰基、N-甲基-N-乙基氨甲?；?、甲硫基、乙硫基、甲基亞磺?；?、乙基亞磺?；?、甲磺?；?、乙基磺?；?、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺?；?、N-乙基氨磺?；?、N,N-二甲基氨磺?；,N-二乙基氨磺?；-甲基-N-乙基氨磺?；?、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基。在某些實施例中，該化合物選自下組：1-((環(huán)丙基甲基)氨基)-4-((3-嗎啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((3-嗎啉代丙基)氨基)-4-((3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((2,3-二羥丙基)氨基)-4-((3-嗎啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基)氨基)-4-((3-嗎啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)-4-((3-嗎啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((3-嗎啉代丙基)氨基)-4-((環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((2-((2-羥乙基)氨基)乙基)氨基)-4-((3-嗎啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；1,4-雙((2-羥基-3-嗎啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((2-羥基-3-嗎啉代丙基)氨基)-4-((環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-羥丙基)氨基)-4-((環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙基)氨基)-4-((環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((2-(二甲氨基)乙基)氨基)-4-((環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((環(huán)丙基甲基)氨基)-4-((2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((3-(4-乙?；哙?1-基)-2-羥丙基)氨基)-4-((3-嗎啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；1-((環(huán)丙基甲基)氨基)-4-((環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；以及1-((環(huán)丙基甲基)氨基)-4-((3-(二乙氨基)-2-羥丙基)氨基)蒽-9,10-二酮，或其中該化合物任選地被一個或多個取代基取代。用于肺癌治療的小分子Bcl2BH4拮抗劑Bcl-2是Bcl-2家族的創(chuàng)始成員，其抑制在各種應激后的凋亡。涉及到抑制Bcl-2存活功能的機制將促使癌細胞經(jīng)歷凋亡。Bcl-2家族成員具有集群在四個保守的Bcl-2同源性(BH)結構域內(nèi)的同源性：BH1、BH2、BH3和BH4，其中抗凋亡蛋白，如Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-w和A1，具有NH2-末端BH4結構域。鑒于BH4結構域通過和不同蛋白的相互作用涉及到許多細胞功能，這指示BH4結構域代表潛在的治療靶標。BH4結構域靶向劑(BDA)抑制Bcl-2和其他具有BH4結構域的Bcl-2樣蛋白。我們的發(fā)現(xiàn)指示大多數(shù)人類肺癌細胞系對BDA2比對ABT-737更敏感，ABT-737是一種高度親和地與Bcl-2和Bcl-xL結合的擬BH3小分子抑制劑。在某些實施例中，本披露涉及在此披露的化合物治療癌癥和其他表達包含BH4的Bcl-2家族蛋白的惡性腫瘤的用途。對于Bcl-2的存活活性來說，需要BH4結構域，并且該結構域的移除可以將Bcl-2從存活分子轉變?yōu)闅⒑Ψ肿樱砻鰾H4結構域構成了用于破壞Bcl-2的存活功能或將Bcl-2轉化為死亡分子的有前景的基于結構的靶標。已經(jīng)鑒定了靶向BH4結構域并且與之前的BH3模擬物不同的一類Bcl2拮抗劑(如BDA-2，改名為BAD-366)。BDA-366直接與純化的Bcl-2蛋白選擇性地于BH4結構域上以高親和性并以在納摩爾水平上的抑制常數(shù)(Ki)值結合。BDA-366不能和其他Bcl-2家族成員(即Bcl-XL、Mcl-1和Bfl-1/A1)結合，證實Bcl2/BDA-366結合的特異性。BDA-366和BH4結構域的結合導致了在體外和在體內(nèi)Bcl-2構象改變以及BH3結構域的暴露。BAD-366證實了在衍生自肺癌細胞系或源自患者的SCLC腫瘤的肺癌異種移植物中有力的抗腫瘤活性。劑量反應實驗揭示在10mg/kg/d和30mg/kg/d劑量之間的BDA-366有力地抑制肺癌在體內(nèi)的生長，而沒有血小板降低或其他顯著的正常組織毒性，表明該劑量在鼠類肺癌模型中應該是有效和安全的。因為BDA-366有效地抑制來源于難治性SCLC患者的PDX的生長，BDA-366可以在患者中提供臨床應用是一個好的可能。過表達Bcl2的癌細胞對mTOR抑制劑具有耐藥性，而Bcl2的下調(diào)恢復了對mTOR抑制的敏感性。由RAD001對mTOR的抑制導致Bcl2在用RAD001處理的肺癌細胞系和在來自NSCLC患者的腫瘤組織中上調(diào)。由mTOR抑制劑療法誘導的Bcl-2表達可以負面地影響mTOR抑制劑在肺癌療法中的效力是可能的。這可以幫助解釋為什么RAD001在肺癌患者中僅具有有限效力。Bcl2和mTOR抑制的組合的應該具有超過單獨每個藥劑的優(yōu)越的治療益處。和RAD001組合的BDA-366在體外和體內(nèi)展現(xiàn)出對抗肺癌的強的協(xié)同活性，沒有顯著的正常組織毒性。共靶向Bcl2和mTOR提供了用于肺癌治療的更有效策略。BDA-366是選擇性地靶向Bcl-2的BH4結構域的Bcl-2拮抗劑。BDA-2和BH4結構域的結合通過暴露BH3死亡結構域的構象改變而導致了Bcl2從抗凋亡分子轉化為死亡蛋白。BH4拮抗劑BDA-366在體內(nèi)展現(xiàn)出對抗人類肺癌的有力的效力，沒有血小板下降。BH4拮抗劑作為抗癌藥劑的開發(fā)指示了一種用于癌癥治療的組合mTOR策略。在某些實施例中，mTOR抑制劑是西羅莫司、依維莫司、地磷莫司、替西羅莫司、或其衍生物。在某些實施例中，考慮具有下列化學式的衍生物，或其鹽，其中，虛線各自單獨地代表單鍵或雙鍵；Y是橋聯(lián)基團＝CH-CH＝CH-CH＝CH-；X是-(CHR8)n-；n是1或2R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、和R14各自在每次存在時單獨和獨立地是相同或不同的，是氫、烷基、烯基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲?；?、羧基、烷?；?、氨甲?；⑼檠趸?、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；?、芳基磺?；?、氧膦基、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中每個R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、和R14任選地被一個或多個相同或不同的R20取代。R20是烷基、鹵素、硝基、氰基、羥基、氨基、巰基、甲?；Ⅳ然?、烷?；奔柞；⑼檠趸?、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亞磺?；?、烷基磺酰基、芳基磺?；?、氧膦基、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基，其中R20任選地被一個或多個相同或不同的R21取代；并且R21是鹵素、硝基、氰基、羥基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲?；?、羧基、氨甲酰基、巰基、氨磺?；⒓谆?、乙基、甲氧基、乙氧基、乙?；?、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲?；?、N-乙基氨甲?；?、N,N-二甲基氨甲酰基、N,N-二乙基氨甲?；?、N-甲基-N-乙基氨甲?；?、甲硫基、乙硫基、甲基亞磺?；?、乙基亞磺?；?、甲磺?；?、乙基磺?；?、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺?；?、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺?；?、N,N-二乙基氨磺?；?、N-甲基-N-乙基氨磺?；?、碳環(huán)基、芳基、或雜環(huán)基。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)用厄洛替尼處理肺癌細胞導致Bcl-2/Bcl-XL的上調(diào)，這可以部分貢獻于肺癌對厄洛替尼的耐藥性。組合的EGFR和Bcl-2抑制可以克服厄洛替尼耐藥性。用BDA-366和厄洛替尼的組合處理肺癌細胞協(xié)同性地誘導了凋亡并且增強了生長抑制。本披露考慮組合的EGFR和Bcl-2抑制是用于克服厄洛替尼耐藥性并且改進肺癌預后的策略。組合療法在此披露的癌癥治療可以作為單獨的療法應用或可以涉及常規(guī)的外科手術或放射療法或化學療法。這樣的化學療法可以包括以下類別的抗腫瘤劑中的一個或多個：(i)如在內(nèi)科腫瘤學中使用的抗增殖/抗腫瘤藥物及其組合，如烷基化劑(例如順鉑、卡鉑、環(huán)磷酰胺、氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安和亞硝基脲)；抗代謝物(例如抗葉酸劑如氟嘧啶，像5-氟尿嘧啶和吉西他濱、替加氟、雷替曲塞、甲氨喋呤、阿糖胞苷和羥基脲)；抗腫瘤抗生素(例如蒽環(huán)類，像阿霉素、博來霉素、多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、伊達比星、絲裂霉素-C、放線菌素D和光輝霉素)；抗有絲分裂劑(例如長春花生物堿，像長春新堿、長春堿、長春地辛和長春瑞濱以及紫杉烷(像紫杉醇和泰索帝))；以及拓撲異構酶抑制劑(例如表鬼臼毒素，像依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、拓撲替康和喜樹堿)；以及蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米)；以及藥劑阿那格雷以及藥劑α-干擾素(ii)細胞生長抑制劑，如抗雌激素藥(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬及吲哚昔芬(iodoxyfene))，雌激素受體負調(diào)節(jié)物(例如氟維司群)，抗雄激素藥(例如比卡魯胺、氟他胺、尼魯米特及醋酸環(huán)丙孕酮)，LHRH拮抗劑或LHRH激動劑(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)，孕激素(例如醋酸甲地孕酮)，芳香酶抑制劑(例如，如阿那曲唑、來曲唑、伏氯唑(vorazole)及依西美坦)以及5α-還原劑的抑制劑(如非那雄胺)；(iii)抑制癌細胞侵染的藥劑(例如金屬蛋白酶抑制劑(像馬立馬司他)和尿激酶纖維蛋白溶酶原激活劑受體功能的抑制劑)；(iv)生長因子功能的抑制劑，例如此類抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體(例如抗-Her2抗體曲妥珠單抗和抗-表皮生長因子受體(EGFR)抗體西妥昔單抗)、法尼基轉移酶抑制劑、酪氨酸激酶抑制劑以及絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑，例如表皮生長因子家族的抑制劑，例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制劑，如：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(厄洛替尼)和6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI1033)，例如血小板衍生的生長因子家族的抑制劑以及例如肝細胞生長因子家族的抑制劑，例如磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的抑制劑和例如促分裂原活化蛋白激酶激酶(MEK1/2)抑制劑以及例如蛋白激酶B(PKB/Akt)的抑制劑，例如Src酪氨酸激酶家族和/或阿貝爾森(Abelson)(AbI)酪氨酸激酶家族的抑制劑如達沙替尼(BMS-354825)和甲磺酸伊馬替尼(GleevecTM)；以及修飾STAT信號傳導的任何藥劑；(v)抗血管生成劑，如抑制血管內(nèi)皮生長因子的作用的那些,(例如抗-血管內(nèi)皮細胞生長因子抗體貝伐單抗[AvastinTM])以及通過其他機制起作用的化合物(例如利諾胺、整合素ocvβ3功能的抑制劑和血管抑素)；(vi)血管損傷劑，如考布他汀A4；(vii)反義療法，例如針對上文列出的靶標的那些，如抗-RAS反義療法；以及(viii)免疫療法途徑，包括例如用于增加患者腫瘤細胞的免疫原性的離體和體內(nèi)途徑，如用細胞因子(如白介素2、白介素4或粒細胞巨噬細胞集落刺激因子)進行轉染，用于降低T細胞失能的途徑，使用轉染的免疫細胞(如細胞因子轉染的樹突細胞)的途徑，使用細胞因子轉染的腫瘤細胞系的途徑和使用抗個體基因型抗體的途徑，以及使用免疫調(diào)節(jié)藥物沙利度胺和來那度胺的途徑。配制品在此披露的藥用組合物可以呈藥學上可接受的鹽類的形式，通常如以下所描述的。適合的藥學上可接受的有機和/或無機酸的某些優(yōu)選但不限定的實例是鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、乙酸以及檸檬酸，連同其他本身已知的藥學上可接受的酸(在以下提到的引用文件中進行引用)。當本披露的這些化合物包含一個酸基和一個堿基的時候，本披露的這些化合物還可能形成一個內(nèi)鹽，并且這類化合物在本披露的范圍內(nèi)。當化合物包含一個給氫的雜原子(例如NH)的時候，考慮到鹽涵蓋通過將該氫原子在該分子內(nèi)轉移到一個堿基或原子上而形成的異構體。這些化合物的藥學上可接受的鹽類包括該酸加成以及它的堿性鹽類。適合的酸加成鹽由形成無毒的鹽的酸形成。實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯碳酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、硼酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)己烷氨基磺酸鹽、乙二磺酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、六氟磷酸鹽、羥苯酰苯酸鹽、鹽酸化物/氯化物、氫溴化物/溴化物、氫碘化物/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘酚鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、撲酸鹽、磷酸鹽/磷酸/磷酸二氫鹽、焦谷氨酸鹽、糖質酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽、三氟乙酸鹽以及xinofoate鹽類。適合的堿鹽從形成無毒鹽的堿形成。實例包括鋁、精氨酸、芐星青霉素G、鈣、膽堿、二乙胺、二乙醇胺、甘胺酸、細胞溶素、鎂、甲基葡胺、環(huán)匹羅司乙醇胺、鉀、鈉、氨丁三醇以及鋅鹽。酸類和堿類的半鹽也可能形成，例如半硫酸鹽和半鈣鹽。作為適合的鹽類的一個綜述，參見斯特爾(Stahl)和韋穆特(Wermuth)所著的藥用鹽手冊：特性、選擇以及使用(威利-VCH，2002)，通過引用結合在此。在此描述的這些化合物能以藥物前體的形式給予。一種前藥可以包括一個共價結合的載體，該載體當給予一個哺乳動物受試者時釋放該活性母體藥物。前藥可以通過修飾存在于這些化合物中的功能基團制備，其方式是使得這些修飾在常規(guī)操作中或者在體內(nèi)是可裂解的，以形成這些母體化合物。例如，前藥包括羥基結合到任意基團的化合物，當給予到一個哺乳動物受試者中時，羥基裂解以形成一個自由的羥基。前藥的實例包括，但不限于，在這些化合物中的醇功能基團的乙酸鹽、甲酸鹽以及苯甲酸鹽衍生物類。將一種化合物構建為前藥的示例可以在特斯塔(Testa)和卡納(Caner)的書，藥物的水解和前藥新陳代謝(DrugandProdrugMetabolism)，威利(2006)中找到，該書通過引用特此結合。典型的前藥通過水解酶轉化前藥，酰胺、內(nèi)酰胺、肽、羧酸酯、環(huán)氧化合物的水解，或者無機酸類酯的切割形成活性代謝產(chǎn)物。典型地，藥用組合物包括有效量的化合物和適合的藥學上可接受的載體。這些制劑能以本身已知的方式制備，該方式通常涉及將根據(jù)本披露所述的至少一種化合物與一種或多種藥學上可接受的載體混合，并且，如果是所希望的，與其他藥用活性化合物組合，此時有必要在無菌條件下進行。參考美國專利號6,372,778，美國專利號6,369,086，美國專利號6,369,087，美國專利號6,372,733以及以上提及的進一步的參考，連同標準手冊，例如最新版本的雷明頓制藥科學(Remington'sPharmaceuticalSciences)。眾所周知，酯前藥容易在體內(nèi)降解釋放相應的醇。參見例如今井(Imai)，藥物代謝藥代動力學(DrugMetabPharmacokinet)(2006)21(3):173-85，標題為“人類羧酸酯酶同工酶：催化特性和合理藥物設計(Humancarboxylesteraseisozymes:catalyticpropertiesandrationaldrugdesign)”。通常來說，對于藥物使用，這些化合物可以被配制為一種藥物制劑，該藥物制劑包括至少一種化合物以及至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑和/或佐劑，以及任選地一種或多種另外的藥用活性化合物。被披露的這些藥物制劑優(yōu)選以一種單位劑型的形式，并且可以被適當?shù)胤庋b，例如在一個盒子、泡罩、小瓶、瓶子、小藥囊、針劑或者任意其他適合的單劑量或者多劑量的保持器或者容器中(可以被適當?shù)貥擞?；可任選地具有一個或多個包含產(chǎn)品信息和/或使用說明的宣傳單。通常來說，這類單位劑量將包含1mg至1000mg，并且通常在5mg至500mg之間的本披露的至少一種化合物，例如每單元劑量約10mg、25mg、50mg、100mg、200mg、300mg或者400mg。這些化合物可以通過多種途徑給予，包括口服、眼睛、直腸、經(jīng)皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或者鼻內(nèi)途徑，主要取決于所使用的具體制劑。通常來說，該化合物將以“有效量”給予，由此意味著在適當?shù)慕o藥下，一種化合物的任意量足夠在它給予的受試者中達到所希望的治療或者預防效果。通常，取決于待預防或者治療的情況以及給藥的途徑，這種有效量將通常為每天每千克患者體重0.01mg至1000mg之間，更經(jīng)常在0.1mg至500mg之間，如1mg至250mg，例如每天每千克患者體重大約5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、150mg、200mg或250mg，該劑量可以作為被劃分成一個或多個日常劑量的單一的日常劑量。給予的量、給藥的途徑以及進一步的治療方案可能由治療的臨床醫(yī)師決定，取決于多種因素，如年齡、性別、以及患者的一般情況以及待治療的疾病/癥狀的性質和嚴重性。參考美國專利號6,372,778，美國專利號6,369,086，美國專利號6,369,087，美國專利號6,372,733以及以上提及的進一步的參考，連同標準手冊，例如最新版本的雷明頓制藥科學(Remington'sPharmaceuticalSciences)。包含一種或多種在此所描述的化合物的配制品可以使用由認為安全且有效的材料組成的藥學上可接受的載體進行制備，并且可以在不導致不希望的生物學副作用或不想要的相互作用的情況下給予至個體。該載體是除了一種或多種活性成分外的存在于藥物配制品中的所有組分。如在此通常所用的“載體”包括但不限于稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、填充劑、pH修飾劑、防腐劑、抗氧化劑、溶解度增強劑、和包衣組合物。載體還包括包衣組合物的所有組分，其可以包括增塑劑、顏料、著色劑、穩(wěn)定劑、和助流劑。延遲釋放、延長釋放、和/或脈沖式釋放配制品可以根據(jù)在標準參考中描述的那樣制備，如“藥物劑型片劑(Pharmaceuticaldosageformtablets)，”利伯曼(Liberman)等人編(紐約，馬塞爾·德克爾公司(MarcelDekker,Inc.)，1989)，“雷明頓-藥學的科學和實踐(Pharmaceuticaldosageformtablets)，”第20版，利平科特威廉斯威爾金斯出版公司(LippincottWilliams&Wilkins)，巴爾的摩(Baltimore)，MD，2000，以及“藥物劑型和藥物遞送系統(tǒng)(Pharmaceuticaldosageformsanddrugdeliverysystems)，”第6版，安森(Ansel)等人，(梅迪(Media)，PA：威廉斯威爾金斯出版公司(WilliamsandWilkins)，1995)。這些參考文獻提供了關于用于制備片劑和膠囊以及片劑、膠囊、和顆粒的延遲釋放劑型的載體、材料、設備和方法。合適的包衣材料的示例包括但不限于纖維素聚合物如鄰苯二甲酸乙酸纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯和醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯；聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯，丙烯酸聚合物和共聚物，和在商品名尤特奇(羅斯制藥公司(RothPharma)，威特斯塔(Westerstadt)，德國)下可商購的甲基丙烯酸樹脂，玉米醇溶蛋白，蟲膠，以及多糖。另外，包衣材料可以包含常規(guī)的載體，諸如增塑劑、顏料、著色劑、助流劑、穩(wěn)定劑、成孔劑以及表面活性劑。存在于含藥片劑、珠粒、顆?；蛄Ｗ又械娜芜x的藥學上可接受的賦形劑包括但不限于，稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、穩(wěn)定劑以及表面活性劑。稀釋劑(也被稱為“填充劑”)是典型必需的以增加固體劑型的體積，這樣使得提供一種實際大小用于壓縮片劑或形成珠粒和顆粒劑。適合的稀釋劑包括但不限于，二水磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素、微晶纖維素、高嶺土、氯化鈉、干淀粉、水解淀粉、預膠化淀粉、二氧化硅、氧化鈦、硅酸鋁鎂以及糖粉。使用粘合劑為固體劑量配制品賦予粘合品質，并且因此保證片劑或珠粒或顆粒劑在形成該劑型后保持完整。適合的粘合劑材料包括但不限于，淀粉、預膠化淀粉、明膠、糖(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖及山梨醇)、聚乙二醇、蠟、天然和合成樹膠(諸如阿拉伯樹膠、黃芪膠、海藻酸鈉)、纖維素(包括羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、乙基纖維素及維格姆(veegum))、以及合成聚合物(諸如丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物、聚丙烯酸/聚甲基丙烯酸及聚乙烯吡咯烷酮)。使用潤滑劑有助于片劑生產(chǎn)。適合的潤滑劑的示例包括但不限于硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、山崳酸甘油酯、聚乙二醇、滑石、以及礦物油。崩解劑用于在給藥后幫助劑型崩解或“瓦解”，并且通常包括但不限于淀粉、淀粉乙醇酸鈉、羧甲基淀粉鈉、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、預膠化淀粉、粘土、纖維素、藻蛋白堿、膠或交聯(lián)聚合物如交聯(lián)PVP(來自GAF化學公司的PolyplasdoneXL)。穩(wěn)定劑用于抑制或減緩藥物分解反應，此類反應例如包括氧化反應。表面活性劑可以是陰離子、陽離子、兩性或非離子表面活性劑。適合的陰離子表面活性劑包括但不限于包含羧酸根、磺酸根和硫酸根離子的那些。陰離子表面活性劑的示例包括鈉、鉀、銨的長鏈烷基磺酸鹽和烷基芳基磺酸鹽，如十二烷基苯磺酸鈉；二烷基琥珀酸磺酸鈉，如十二烷基苯磺酸鈉；二烷基磺基琥珀酸鈉，如雙-(2-乙基亞硫酰)-磺基琥珀酸鈉；以及烷基硫酸鹽如十二烷基硫酸鈉。陽離子表面活性劑包括但不限于季銨化合物，諸如苯扎氯銨、芐索氯銨、西曲溴銨、硬脂酰二甲基芐基氯化銨、聚氧乙烯以及椰油胺。非離子表面活性劑的示例包括乙二醇單硬脂酸酯、丙二醇豆蔻酸酯、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、聚甘油基-4-油酸酯、山梨醇酐?；?、蔗糖酰化物、PEG-150月桂酸鹽、PEG-400單月桂酸酯、聚氧乙烯單月桂酸酯、聚山梨醇酯、聚氧乙烯辛基苯基醚、PEG-1000十六烷基醚、聚氧乙烯十三烷基醚、聚丙二醇丁醚、泊洛沙姆401、硬脂酰單異丙醇酰胺、和聚氧乙烯氫化牛脂酰胺。兩性表面活性劑的示例包括N-十二烷基-.β.-丙氨酸鈉、N-月桂基-.β.-亞胺二丙酸鈉、豆蔻?；鶅尚砸宜猁}、月桂基甜菜堿和月桂基硫代甜菜堿。如果期望的話，片劑、珠粒、顆粒、或粒子還可以包括少量的無毒輔助物質如潤濕劑或乳化劑、染料、pH緩沖劑、或防腐劑。在此描述的組合物可以是用于進行改變的或控制的釋放的配制品?？刂漆尫艅┬偷膶嵗ㄑ娱L釋放劑型、延遲釋放劑型、脈沖釋放劑型及其組合。延長釋放配制品通常制備為擴散或滲透系統(tǒng)，例如，如描述于“雷明頓-藥學科學與實踐”(“Remington-Thescienceandpracticeofpharmacy”)(第20版，利平科特·威廉斯(LippincottWilliams)和威爾金斯(Wilkins)，巴爾的摩，馬里蘭州，2000))中。典型地，擴散系統(tǒng)由兩類型的裝置，貯存室和基質組成，并且在本領域中眾所周知并且被描述。通常地，基質裝置通過將藥物和緩慢溶解性聚合物載體壓縮成片劑形式而制備。用在基質裝置制備中的三種主要材料類型是不溶性塑料、親水性聚合物、和脂類化合物。塑料基質包括但不限于，丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、和聚乙烯。親水聚合物包括但不限于，纖維素聚合物(諸如甲基和乙基纖維素)、羥烷基纖維素(諸如羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素)、羧甲基纖維素鈉、以及卡波姆(Carbopol)934、聚環(huán)氧乙烷及其混合物。脂類化合物包括但不限于各種蠟(加諾巴蠟和三硬脂酸甘油酯)以及蠟型物質(包括氫化蓖麻油或氫化植物油)、或其混合物。在某些優(yōu)選的實施例中，塑料材料是藥學上可接受的丙烯酸聚合物，包括但不限于丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯共聚物、乙氧基乙基甲基丙烯酸酯、氰乙基甲基丙烯酸酯、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸)(酐)、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚(甲基丙烯酸酐)、和甲基丙烯酸縮水甘油酯共聚物。在某些優(yōu)選實施例中，該丙烯酸聚合物由一種或多種銨基甲基丙烯酸酯共聚物組成。銨基甲基丙烯酸酯共聚物在本領域中是熟知的，并且在NFXVII中被描述為丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯與低含量的季銨基的完全聚合的共聚物。在一個優(yōu)選的實施例中，丙烯酸聚合物是丙烯酸樹脂漆，例如從羅姆制藥公司在商標名尤特奇下可商購的那個。在另外的優(yōu)選實施例中，丙烯酸聚合物包括兩種從羅姆制藥公司分別在商標名尤特奇RL30D和尤特奇RS30D下可商購的丙烯酸樹脂漆的混合物。尤特奇RL30D和尤特奇RS30D是丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯與低含量的季銨基的共聚物，銨基相對于剩余的中性(甲基)丙酸烯的摩爾比例在尤特奇RL30D中是1:20并且在尤特奇RS30D中是1:40。平均分子量是約150,000。尤特奇S-100和尤特奇L-100也是優(yōu)選的。代碼名稱RL(高滲透性)和RS(低滲透性)指這些物質的滲透特性。尤特奇RL/RS的混合物在水中和消化液中是不可溶的。然而，所形成的、包括所述混合物的多顆粒系統(tǒng)在水溶液和消化液中是可膨脹且可滲透的。為了最終獲得具有期望的溶解特性的緩釋配制品，上述的聚合物如尤特奇RL/RS可以按任何期望的比例混合到一起。期望的緩釋多顆粒系統(tǒng)可以從例如100％尤特奇RL、50％尤特奇RL和50％尤特奇RS、以及10％尤特奇RL和90％尤特奇90％RS中獲得。本領域普通技術人員將意識到還可以使用其他丙烯酸聚合物，諸如例如尤特奇L?？商娲?，延長釋放配制品可以通過使用滲透系統(tǒng)或通過將半透包衣應用到劑型上而制備。在后者的情況中，期望的藥物釋放特性可以通過將低滲透和高滲透包衣材料以合適的比例組合而實現(xiàn)。具有以上描述的不同藥物釋放機制的裝置可以被組合在包括單或多單元的最終劑型中。多單元的實例包括但不限于包含片劑、珠粒或顆粒劑的多層片劑和膠囊。可以通過以下手段將即刻釋放部分添加到延長釋放型系統(tǒng)中：使用包衣或壓縮方法將即刻釋放層應用到延長釋放型芯頂上，或在例如包含延長釋放型和即刻釋放型珠粒的膠囊的多單元系統(tǒng)中。包含親水聚合物的延長釋放片劑通過本領域的公知技術(諸如直接壓片、濕法制?；蚋煞ㄖ屏?來制備。其配制品通常摻入聚合物、稀釋劑、粘合劑和潤滑劑以及活性藥物成分。通常的稀釋劑包括惰性粉狀物質，例如淀粉、粉狀纖維素(尤其是結晶和微晶纖維素)、糖(如果糖、甘露醇和蔗糖)、麥面粉和類似的食用粉。典型的稀釋劑包括例如不同類型的淀粉、乳糖、甘露醇、高嶺土、磷酸鈣或硫酸鹽、無機鹽(諸如氯化鈉)以及糖粉。粉狀纖維素衍生物也是有用的。典型的片劑粘合劑包括以下物質，諸如淀粉、明膠和糖(諸如乳糖、果糖和葡萄糖)。還可以使用天然和合成樹膠，包括阿拉伯樹膠、海藻酸鹽、甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮。聚乙二醇、親水聚合物、乙基纖維素以及蠟也可以作為粘合劑。潤滑劑在片劑配制品中是必須的以防止片劑和沖床在模具中粘連。潤滑劑選自這樣光滑的固體如滑石、硬脂酸鎂和硬脂酸鈣、硬脂酸和氫化植物油。包含蠟材料的延長釋放片劑通常使用本領域已知的方法(諸如直接共混法、凝結法和水分散法)來制備。在凝結法中，將藥物和蠟材料混合并且進行噴射凝結或凝結、篩選和處理。延遲釋放配制品是通過將固體劑型用一種聚合物膜包衣來產(chǎn)生的，該聚合物膜在胃的酸性環(huán)境中是不可溶的，并且在小腸的中性環(huán)境中是可溶的。延遲釋放劑型單元可以例如通過用選擇的包衣材料對藥物或包含藥物的組合物進行包衣而制備。包含藥物的組合物可以是例如并入膠囊的片劑、在“包芯”劑型中用作內(nèi)核的片劑、或用于并入片劑或膠囊的多個包含藥物的珠粒、粒子或顆粒。優(yōu)選的包衣材料包括可生物溶蝕的、逐漸水解的、逐漸溶于水的、和/或可酶促降解的聚合物，并且可以是常規(guī)的“腸溶”聚合物。如將被本領域的普通技術人員所理解的，腸溶聚合物在胃腸道下部的較高pH環(huán)境中變得可溶或當該劑型穿過胃腸道時緩慢溶蝕，然而可酶促降解的聚合物通過存在于胃腸道下部(特別是結腸)中的細菌酶降解。用于影響延遲釋放的適合的包衣材料包括但不限于纖維素聚合物，例如羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、甲基纖維素、乙基纖維素、醋酸纖維素、醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯、醋酸纖維素偏苯三酸酯和羧甲基纖維素鈉；優(yōu)選地從丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯和/或甲基丙烯酸乙酯形成的丙烯酸聚合物和共聚物，以及其他在商標名尤特奇.(羅姆制藥公司，威特斯塔，德國)下可商購的甲基丙烯酸樹脂，包括尤特奇L30D-55和L100-55(在pH5.5及以上可溶)、尤特奇L-100(在pH6.0及以上可溶)、尤特奇S(在pH7.0及以上可溶，因為更高程度的酯化作用)、以及尤特奇NE、RL和RS(具有不同程度滲透性和可擴展性的水不溶物性聚合物)；乙烯基聚合物和共聚物如聚乙烯吡咯烷酮、醋酸乙烯酯、醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、醋酸乙烯丁烯酸共聚物和乙烯-醋酸乙烯酯共聚物；可酶促降解的聚合物，諸如偶氮聚合物、果膠、殼聚糖、直鏈淀粉及瓜爾膠；玉米醇溶蛋白以及蟲膠。還可以使用不同包衣材料的組合。還可以應用使用不同聚合物的多層包衣。對于特殊的包衣材料，優(yōu)選的包衣重量可以輕易地由本領域的技術人員通過評價用不同量的各種包衣材料制備的片劑、珠粒和顆粒的各自的釋放特性而確定。本申請的材料、方法和形式的組合產(chǎn)生了僅能從臨床研究中確定的期望的釋放特征。包衣組合物可以包括常規(guī)的添加劑，如增塑劑、顏料、著色劑、穩(wěn)定劑、助流劑等。增塑劑通常存在以降低包衣的脆性，并且通常相對聚合物的干重占約10wt.％至50wt.％。典型的增塑劑的實例包括聚乙二醇、丙二醇、三乙酸甘油酯、鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、檸檬酸三乙酯、檸檬酸三丁酯、乙酰檸檬酸三乙酯、蓖麻油以及乙?；膯胃视王?。優(yōu)選使用一種穩(wěn)定劑以穩(wěn)定分散體中的粒子。典型的穩(wěn)定劑是非離子乳化劑如脫水山梨醇酯、聚山梨醇酯和聚乙烯吡咯烷酮。推薦助流劑以在膜形成和干燥期間降低粘連影響，并且通常在包衣溶液中代表約25wt.％至100wt.％的聚合物重量。一種有效的助流劑是滑石。還可以使用其他助流劑，諸如硬脂酸鎂和單硬脂酸甘油酯。也可以使用顏料如二氧化鈦。還可以在包衣組合物中添加少量的消泡劑，如硅酮(如西甲硅油)?？商娲兀撃z囊內(nèi)的每個劑量單位都可以包括多個含藥珠粒、顆?；蛄Ｗ?。如在本領域已知的，含藥“珠?！笔侵赣盟幬锖鸵环N或多種賦形劑或聚合物制備的珠粒。含藥珠?？梢酝ㄟ^將藥物應用到惰性載體(例如涂有藥物的惰性糖珠粒)中而生產(chǎn)，或通過制造包括藥物和一個或多個賦形劑這兩者的“芯”而生產(chǎn)。還正如所已知的，包含藥物的“顆?！焙汀傲Ｗ印卑梢园ɑ虿话ㄒ环N或多種另外的賦形劑或聚合物的藥物粒子。與含藥珠粒相對比，顆粒和粒子不包含惰性支持體。顆粒通常包括藥物粒子并且需要進一步加工。通常，粒子比顆粒小，并且不被進一步加工。盡管可以配制珠粒、顆粒和粒子來提供即刻釋放，但是通常利用珠粒和顆粒來提供延遲釋放。實驗使用競爭熒光偏振測定在體外對BH4結構域拮抗劑(BDA)對Bcl2蛋白的結合親和性分析。熒光偏振測定的原則是基于以下觀察，當相對小的快速滾轉的熒光素標記肽用平面偏振光激發(fā)時，發(fā)射光相對偏振平面是隨機的，導致更低的毫偏振(mP)值。一旦肽結合至更大的分子(在這種情況中是Bcl2)，復合物滾轉更慢并且發(fā)射光發(fā)生偏振，導致更高的mP值。這樣，mP的改變反應了在熒光素標記肽和Bcl2蛋白之間的相互作用?？梢詫?shù)據(jù)(即mP值)輸入Prism3.0以針對每個肽測定解離常數(shù)(Kd)和結合范圍。Bcl2的BH4結構域直接與c-Myc在其MBII結構域處相互作用。發(fā)現(xiàn)衍生自c-Myc的Bcl2結合結構域的FITC標記肽QDCMWSGFSA(SEQIDNO:1)以高親和力(Kd：19.32±2.86nM)結合至Bcl2蛋白。在Bcl2和肽之間的相互作用形成了熒光偏振測定的基礎。為了測量BDA對Bcl2蛋白的結合親和性，使用競爭熒光偏振測定，如在王(Wang)等人，美國國家科學院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)(2000)，97，7124-7129；張(Zhang)等人，分析生物化學(Anal.Biochem.)，(2002)，307，70-75；以及布龍克(Bruncko)等人，醫(yī)藥化學雜志(J.Med.Chem.)，(2007)，50，641-662中描述的或合適地修飾的，將全部文獻通過引用特此結合。將FITC-QDCMWSGFSA肽(3nM)在遞增濃度(即0.1nM-1μM)的BDA存在或不存在的情況下，在標準緩沖條件下，在96孔測定板中與純的人類Bcl2蛋白(6nM)孵育。將板在振動器上混合1分鐘，并且在室溫下再孵育15分鐘。將定義為mP單位的極化在室溫下用熒光酶標儀(華萊士公司(Wallace)，CA)測量。用陰性對照(DMSO，3nM肽和測定緩沖液)和陽性對照(DMSO，3nM肽，6nMBcl2和測定緩沖液)確定測定范圍。抑制百分比用(1-[(良好陰性對照的mP值)/范圍)]×100％來確定。抑制常數(shù)(Ki)值使用MicrosoftExcel計算。結果示出BDA以高親和力結合至Bcl2蛋白(BDA1：Ki＝0.89±0.07nM；BDA2：Ki＝0.93±0.08nM；BDA3：Ki＝1.22±0.12nM；BDA4：Ki＝1.31±0.10nM)。合成方法。方案1.化合物A1-8的合成化合物A1-8(圖1)可以如在方案1中概述的合成。可商購的1,4-二氨基-9,10-蒽二酮(1)和表氯醇在冰醋酸中的反應將產(chǎn)生雙-氯乙醇2(姜(Jiang)等人，醫(yī)藥化學雜志(J.Med.Chem.)，(1992)，35，4259-4263，通過引用特此結合)。將2用哌嗪中間體在Et3N的存在下處理將產(chǎn)生氯乙醇醌3。在堿的存在下，3的閉環(huán)將以與化合物BDA2的合成類似的方式產(chǎn)生A1-4。起始材料1的一個氨基的根據(jù)已報道方法(邦格(Bonger)等人，ChemMedChem，2009，4，2098-2102，通過引用特此結合)的單-Boc-保護將產(chǎn)生中間體4。接下來將4用(溴甲基)環(huán)丙烷的烷基化會產(chǎn)生5，接下來是基于用TFA處理的Boc-脫保護。產(chǎn)生化合物A5-8的剩余步驟和產(chǎn)生A1-4的那些步驟是類似的。1,4-雙(((S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-84)。將(S)-表氯醇(194.0mg，20.98mmol)立刻全加到70℃的1,4-二氨基蒽醌(500mg，2.09mmol)于冰醋酸(10mL)中的溶液中。將反應混合物在75℃下攪拌2小時，并且將揮發(fā)物在真空中去除。將產(chǎn)生的混合物進一步用開管柱色譜法純化(CH2Cl2，具有直到2％的甲醇梯度)以提供所希望的化合物CYD-2-79(480mg，54％)的藍色固體。1HNMR(300MHz,DMSO)δ10.95(t,J＝5.6Hz,2H),8.25(dd,J＝5.8,3.3Hz,2H),7.80(dd,J＝5.8,3.5Hz,2H),7.52(s,2H),5.71(d,J＝4.2Hz,3H),3.78–3.57(m,10H)。13CNMR(75MHz,DMSO)δ181.29,181.29,146.54,146.54,134.30,134.30,132.85,132.85,126.20,126.20,125.12,125.12,109.12,109.12,69.79,69.79,47.77,47.77,45.91,45.91。將KOH于EtOH中的溶液(6mL，0.5M)添加至CYD-2-79(226mg，0.52mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中。在常溫下攪拌15分鐘后，TLC分析示出起始材料消失。將反應混合物用二氯甲烷(40mL)稀釋，用水(20mL)洗滌并且用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝80:1的洗脫提供了呈藍色固體的所希望的產(chǎn)物CYD-2-84(130mg，69％)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ10.79(s,2H),8.36(dd,J＝5.9,3.4Hz,2H),7.73(dd,J＝5.8,3.3Hz,2H),7.36(s,2H),3.80(m,2H),3.60(m,2H),3.28(m,2H),2.88(m,2H),2.75(m,2H)。13CNMR(75MHz,CDCl3)δ183.19,183.19,146.21,146.21,134.38,134.38,132.38,132.38,126.18,126.18,123.63,123.63,110.51,110.51,51.27,51.27,45.04,45.04,44.02,44.02。方案2.化合物B1-4和C1-4的合成?；衔顱1-4和C1-4的合成在方案2中描繪。關鍵中間體8將從可商購的1-氨基-4-溴-蒽醌(7)通過用(溴甲基)環(huán)丙烷或表氯醇在Et3N存在下烷基化而制備。7和1-(2-氨乙基)吡咯烷(其根據(jù)報道的程序制備(波爾(Pors)等人，醫(yī)藥化學(Med.Chem.)，2005，48，6690-6695和波爾(Pors)等人，WO2008/062252，兩者都通過引用特此結合))在吡啶存在下的反應將提供所期望的化合物B1和B3。B1和B3用三苯基膦四氯化碳(常用的用于醇到相應鹵化物轉化的復合試劑)的氯化將提供目標分子B2和B4。8與N-Boc-保護的丁炔胺進行薗頭偶聯(lián)(赫什(Hirsh)等人，醫(yī)藥化學雜志(J.Med.Chem.)，2006，49，4098-4115)，隨后進行三鍵的還原和用TFA的Boc-脫保護，提供將關鍵中間體10。隨后10與合適的?；然蚧酋Ｂ仍贓t3N存在下的處理將產(chǎn)生目標分子C1-4。方案3.化合物D1-8的合成。如在方案3中概述的，中間體4與4-(3-溴丙基)-嗎啉(11)在吡啶存在下的烷基化將提供中間體12。12的Boc-脫保護和產(chǎn)生化合物D1-8的剩余步驟與產(chǎn)生A5-8的那些步驟是類似的。方案4.化合物E1-7和F1-4的合成?；衔顴1-7和F1-4可以如在方案4中概述的來合成。7用4-(3-溴丙基)-嗎啉(11)的烷基化將提供關鍵中間體14。14的薗頭偶聯(lián)和隨后產(chǎn)生關鍵中間體16的步驟與產(chǎn)生10的那些步驟是類似的。16用合適的酰基氯或磺酰氯處理將產(chǎn)生目標分子E1-6。16和4-氯代丁酰氯化物(17)在Et3N存在下的反應(瓦特(Ward)等人，醫(yī)藥化學雜志(J.Med.Chem.)，2010，53，5801-5812，通過引用特此結合)將產(chǎn)生E7。中間體18將根據(jù)蒂加登(Teegarden)等人，醫(yī)藥化學雜志(J.Med.Chem.)，2010，53，1923-1936(通過引用特此結合)而制備。14和18在碘化銅(I)和碳酸鉀存在下的偶聯(lián)(布拉德利(Bradley)等人，WO2007/107539通過引用特此結合)將提供目標分子F1-4。1-氟-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)-蒽醌。將3-嗎啉代丙胺(590mg，4.09mmol)在氮氣氣氛下添加到1,4-二氟代蒽醌(500mg，2.04mmol)于無水DMSO(6mL)中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌2小時。然后將該反應通過TLC用乙酸乙酯監(jiān)測，指示起始材料消失。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出紅色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用乙酸乙酯的洗脫提供呈紅色固體的所希望的化合物(600mg，80％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ9.93(s,1H),8.20(d,2H,J＝7.8Hz),7.71(m,2H),7.27(m,1H),7.08(m,1H),3.75(t,4H,J＝4.2Hz),3.37(m,2H),2.49(m,6H),1.90(m,2H)。1-(2-羥基-乙氨基)-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(CYD-2-39)。將乙醇胺(43.0mg，0.72mmol)添加至1-氟-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(132.0mg，0.35mmol)于無水DMSO(6mL)中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在110℃下加熱1小時，并且反應混合物的顏色由紅色轉變?yōu)樗{色。然后通過TLC監(jiān)測該反應，指示起始材料完全消失。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝40:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的產(chǎn)物(105mg，72％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.81(s,1H),10.65(s,1H),8.22(m,2H),7.62(m,2H),7.05(d,1H,J＝9.6Hz),6.96(d,1H,J＝9.6Hz),3.94(m,2H),3.74(m,4H),3.52(d,2H,J＝4.8Hz),3.34(m,2H),2.49(m,6H),1.89(t,2H,J＝7.2Hz).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.2,181.9,146.3,146.2,134.5,134.4,131.9,131.8,126.0(2C),123.3(2C),110.1,109.6,67.0,61.9,56.3,53.9,45.2,40.9,26.7。1-(環(huán)丙基甲基-氨基)-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(CYD-2-48)。將C-環(huán)丙基-甲胺(62.0mg，0.87mmol)添加至1-氟-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(160.0mg，0.43mmol)于無水DMSO(6mL)中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在110℃下加熱3小時，并且反應混合物由紅色轉變?yōu)樗{色。然后通過TLC監(jiān)測該反應，指示起始材料消失。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除，給出藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用EtOAc/MeOH＝60:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的產(chǎn)物CYD-2-48(110mg，60％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.7(m,2H),8.29(m,2H),7.64(dd,2H,J＝3.0Hz和6.0Hz),7.16(d,1H,J＝9.6Hz),7.09(d,1H,J＝10.2Hz),3.69(t,4H,J＝4.2Hz),3.39(m,2H),3.20(m,2H),2.44(m,6H),1.86(m,2H),1.20(m,1H),0.61(m,2H),0.30(m,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.1(2C),146.0,145.9,134.4(2C),131.8(2C),125.9(2C),123.4(2C),109.7,109.6,66.9,56.1,53.7(3C),47.6,40.7,26.6,10.8,3.7(2C)。1-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)-4-[3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-丙氨基]-蒽醌(CYD-2-45)。將N-(3-氨丙基)-2-吡咯烷酮(128.2mg，0.90mmol)添加至1-氟-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(160.0mg，0.43mmol)于無水DMSO(6mL)中的溶液中。在110℃下攪拌5小時后，通過TLC分析反應混合物示出起始材料消失。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除，產(chǎn)生藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝60:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的化合物CYD-2-45(130mg，61％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.75(m,2H),8.31(m,2H),7.67(m,2H),7.22(d,1H,J＝10.2Hz),7.15(d,1H,J＝10.2Hz),3.73(t,4H,J＝4.2Hz),3.42(m,8H),2.49(m,6H),2.38(t,2H,J＝8.4Hz),2.0(m,4H),1.91(m,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.3,182.1,175.2,146.1,145.7,134.4,134.3,131.9(2C),125.9,123.5,123.2,109.8,109.7,66.9,56.1,53.7(3C),47.3,40.7,40.6(2C),30.9,27.6,26.6,17.9。1-(2,3-二羥基-丙氨基)-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(CYD-2-49)。將(±)-3-氨基-1,2-丙二醇(79.7mg，0.87mmol)添加至1-氟-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(160.0mg，0.43mmol)于無水DMSO(6mL)中的溶液中。在110℃下攪拌3.5小時后，通過TLC分析反應混合物證實起始材料消失。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以產(chǎn)生藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝15:1洗脫，產(chǎn)生呈藍色泡沫的所希望的化合物CYD-2-49(120mg，62％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3/CD3OD)δ10.79(m,1H),10.69(m,1H),8.18(m,2H),7.59(m,2H),7.13(d,1H,J＝9.6Hz),7.07(d,1H,J＝9.6Hz),3.93(m,1H),3.68(m,5H),3.62(m,1H),3.46(m,1H),3.35(m,3H),2.46(m,6H),1.85(m,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3/CD3OD)δ178.2,177.9,142.3,142.1,130.3,130.2,128.1,128.0,121.9,121.8,119.7,105.8,105.4,66.7,62.9(3C),60.2,52.1,49.5,41.1,36.6,22.3。1-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙氨基]-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(CYD-2-50)。將2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)乙胺(119.3mg，0.93mmol)添加至1-氟-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(170.0mg，0.46mmol)于無水DMSO(6mL)中的溶液中。在110℃下攪拌5小時后，TLC分析示出起始材料消失。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除，給出藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝12:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的化合物CYD-2-50(106mg，48％)。1H-NMR(600MHz,CD3OD)δ8.05(m,2H),7.58(m,2H),6.80(q,2H,J＝10.2Hz和20.4Hz),3.67(t,4H,J＝4.2Hz),3.14(m,4H),3.04(m,1H),2.41(m,6H),2.31(s,3H),2.21(m,2H),2.02(m,2H),1.75(m,4H),1.53(m,2H).13C-NMR(150MHz,CD3OD)δ181.0,180.9,145.6,145.4,134.1(2C),131.3,125.4(2C),123.1,122.9,108.8,108.7,66.3,64.3,56.4,56.0,53.4(2C),40.2,39.8,39.3(2C),32.8,30.3,25.9,21.2。(S)-1-(3-氯-2-羥基丙氨基)-4-(3-嗎啉代丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-77-1)和1-(3-羥基-氮雜環(huán)丁烷-1-基)-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(CYD-2-77-2)。將Et3N(135.0mg，1.33mmol)添加至(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇鹽酸鹽(195.0mg，1.33mmol)于甲醇(8mL)中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌半小時，并且然后將溶劑去除以給出油狀殘余物。將堿化(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇添加至1-氟-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(464.4mg，1.27mmol)于DMSO(10mL)中的溶液中。在110℃下攪拌3.5小時后，TLC分析證實反應完成。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取3次。將合并的有機相用鹽水(15mL)洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝30:1洗脫，提供呈藍色固體的所希望的產(chǎn)物CYD-2-77-1(180mg，32％)和CYD-2-77-2(70mg，13％)。CYD-2-77-1:1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.74(t,1H,J＝6.0Hz),10.48(t,1H,J＝4.8Hz),8.10(dd,2H,J＝7.2Hz和19.8Hz),7.56(m,2H),6.79(d,1H,J＝9.6Hz),6.66(d,1H,J＝9.6Hz),4.16(brs,1H),4.15(s,1H),3.73(m,6H),3.50(m,1H),3.37(m,1H),3.16(m,2H),2.46(t,6H,J＝7.2Hz),1.84(m,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ181.7,181.1,145.8,145.6,134.1,133.9,131.7,131.5,125.7(2C),122.9,122.8,109.7,109.0,70.3,66.8(2C),56.1,53.6(2C),46.8,45.9,40.6,26.4。CYD-2-77-2:1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.32(s,1H),8.22(d,1H,J＝7.8Hz),8.12(d,1H,J＝6.6Hz),7.64(m,2H),6.97(s,1H),6.83(m,1H),4.66(s,1H),4.21(t,2H,J＝7.8Hz),3.74(s,7H),3.32(s,2H),2.48(d,6H,J＝5,4Hz),1.88(t,2H,J＝6.6Hz).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ183.2,181.0,146.8,144.5,134.6,134.2,132.1(2C),125.9,125.8,125.4,120.1,115.1,110.9,66.8(2C),63.2,61.6,56.2,53.6(3C),40.8,26.4。(S)-1-(3-嗎啉代丙氨基)-4-(環(huán)氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-80)。將KOH于EtOH中的溶液(3mL，0.5M)添加至CYD-2-77-1(118.0mg，0.25mmol)于1,4-二噁烷(4mL)中的溶液中。在常溫下攪拌15分鐘后，TLC分析證實起始材料消失。將反應混合物用二氯甲烷(20mL)稀釋，用水(10mL)洗滌并且用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用制備型TLC純化；用CH2Cl2/MeOH＝35:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的產(chǎn)物CYD-2-80(100mg，92％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.75(s,1H),10.69(s,1H),8.29(d,2H,J＝1.8Hz),7.67(d,2H,J＝3.0Hz),7.18(d,2H,J＝13.8Hz),3.73(s,5H),3.50(m,1H),3.39(s,2H),3.22(s,1H),2.84(s,1H),2.71(s,1H),2.47(t,6H,J＝6.6Hz),1.88(t,2H,J＝6.6Hz).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.7,182.1,146.2,145.7,134.4,134.2,132.0,131.9,126.0,125.9,123.4,123.2,110.2,109.6,66.9(2C),56.1,53.7(2C),51.2,44.9,43.9,40.7，26.5。1-(2-(2-羥基乙氨基)乙氨基)-4-(3-嗎啉代丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-3-2)。將2-(2-氨基乙氨基)乙醇(96.8mg，0.93mmol)添加至1-氟-4-(3-嗎啉-4-基-丙氨基)蒽醌(170.0mg，0.46mmol)于無水DMSO(6mL)中的溶液中。在110℃下攪拌5小時后，TLC分析示出反應完成。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脫，提供呈藍色固體的所希望的化合物CYD-3-2(106mg，51％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.82(s,1H),10.68(s,1H),8.23(m,2H),7.62(m,2H),6.99(s,2H),3.73(s,6H),3.45(d,2H,J＝5.4Hz),3.35(d,2H,J＝6.0Hz),3.01(brs,4H),2.90(s,2H),2.48(m,6H),1.88(t,2H,J＝6.6Hz).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.0,181.8,146.0,145.8,134.3,134.2,131.8,125.9,125.8,123.3,123.1,109.8,109.5,66.9(2C),61.0,56.1,53.7(2C),51.2,48.3,42.4,40.7,26.6。1,4-雙(2-羥基-3-嗎啉代丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-46-1)和1-(3-氯-2-羥基丙氨基)-4-(2-羥基-3-嗎啉代丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-46)。將表氯醇(194.0mg，20.98mmol)立刻全加到70℃的1,4-二氨基蒽醌(500mg，2.09mmol)于冰醋酸(10mL)中的溶液中。將反應混合物在75℃下攪拌2小時，并且將揮發(fā)物在真空中去除。將產(chǎn)生的混合物進一步用開管柱色譜法純化(CH2Cl2，具有直到2％的甲醇梯度)以提供所希望的化合物1,4-雙-(3-氯-2-羥基-丙氨基)蒽醌(480mg，54％)的藍色固體。將嗎啉(143.2mg，1.64mmol)添加至1,4-雙-(3-氯-2-羥基-丙氨基)蒽醌(174.0mg，0.43mmol)于乙醇(15mL)中的溶液中。在80℃下攪拌72小時后，TLC分析示出大部分起始材料消失。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝30:1洗脫，提供呈藍色固體的所希望的產(chǎn)物CYD-2-46(80mg，41％)和呈藍色泡沫的CYD-2-46-1(40mg，40％)。CYD-2-46:1H-NMR(600MHz,CDCl3/CD3OD)δ8.19(m,2H),7.65(m,2H),7.07(m,2H),4.12(m,1H),4.07(m,1H),3.76(m,4H),3.70(m,2H),3.59(m,1H),3.46(m,2H),3.35(m,1H),2.65(m,2H),2.55(m,4H).13C-NMR(150MHz,CDCl3/CD3OD)δ181.7,181.5,146.0,145.8,134.0,133.9,131.7(2C),125.6,125.5,123.5,123.2,109.4,109.2,69.7,66.5(3C),66.2,62.1,53.6,46.3,46.2,45.1。1-(2-羥基-3-嗎啉代丙氨基)-4-(環(huán)氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-82)。將KOH于EtOH中的溶液(2mL，0.5M)添加至CYD-2-46(52.0mg，0.11mmol)于1,4-二噁烷(1mL)和甲醇(3mL)的混合物中的溶液中。在常溫下攪拌15分鐘后，TLC分析示出起始材料消失。將反應混合物用二氯甲烷(20mL)稀釋，用水(10mL)洗滌并且用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的產(chǎn)物CYD-2-82(48mg，100％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.84(s,1H),10.74(s,1H),8.30(d,1H,J＝1.8Hz),7.67(d,1H,J＝3.0Hz),7.20(m,1H),4.05(d,1H,J＝4.2Hz),3.72(s,5H),3.50(d,2H,J＝4.2Hz),3.41(m,1H),3.24(s,1H),2.85(s,1H),2.72(s,1H),2.67(s,2H),2.51(m,4H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.8,182.5,146.3,145.9,134.3,134.2,132.1,132.0,126.0(2C),123.4(2C),110.3,109.9,66.9(3C),65.6,62.0,53.6,51.2,46.3,44.9,43.9。(S)-叔丁基環(huán)氧乙烷-2-基甲基氨基甲酸酯。將二-叔丁基碳酸氫鹽(1.94g，8.90mmol)和三乙胺(1.36g，13.69mmol)溶解到二氯甲烷(20mL)中，并且將產(chǎn)生的溶液在冰浴中冷卻。將(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇鹽酸鹽的固體(1.0g，6.84mmol)分部分加入。移除冰浴并且將反應混合物在室溫下攪拌24小時。TLC分析證實反應完成。將白色漿液再在冰浴中冷卻，并且添加KOH于甲醇中的溶液。冰浴再次被移除并且攪拌持續(xù)另外的一小時。將溶劑甲醇去除，并且將殘余物溶解在乙酸乙酯(30mL)中，用水(15mL)洗滌并且用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝60:1洗脫，提供呈無色油狀物的所希望的產(chǎn)物(850mg，71％)。(S)-叔丁基3-(4-乙?；哙?1-基)-2-羥丙基氨基甲酸酯。將1-乙?；哙?555mg，4.33mmol)和(S)-叔丁基環(huán)氧乙烷-2-基甲基氨基甲酸酯(250.0mg，1.44mmol)的混合物在THF(5mL)中溶解。在55℃下攪拌24小時后，TLC分析顯示出反應完成。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余油狀物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脫，提供呈無色油狀物的所希望的產(chǎn)物(S)-叔丁基3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-羥丙基氨基甲酸酯(400mg，92％)。(S)-1-(3-氯-2-羥基丙氨基)-4-氟代蒽-9,10-二酮。將(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇鹽酸鹽(448.4mg，3.09mmol)和Et3N(621.4mg，6.14mmol)在氮氣氣氛下添加至1,4-二氟代蒽醌(500mg，2.04mmol)于無水DMSO(6mL)中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌3小時，并且然后在90℃下加熱另外的5小時。通過在乙酸乙酯中TLC分析來監(jiān)測該反應，指示反應完成。然后將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出紅色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用EtOAc/己烷＝1:2洗脫，提供呈紅色固體的所希望的化合物(S)-1-(3-氯-2-羥基丙氨基)-4-氟代蒽-9,10-二酮(300mg，44％)。1-((S)-3-(4-乙?；哙?1-基)-2-羥基丙氨基)-4-((S)-3-氯-2-羥基丙氨基)蒽-9,10-二酮。將TFA(1mL)在0℃下添加至(S)-叔丁基3-(4-乙?；哙?1-基)-2-羥丙基氨基甲酸酯(260mg，0.86mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌3小時。TLC分析示出反應混合物完成。將反應溶劑在真空下去除以產(chǎn)生油狀殘余物，將該殘余物溶解于甲醇(3mL)中并且用過量的飽和NaHCO3水溶液堿化。溶劑的去除產(chǎn)生油狀殘余物，將該殘余物溶解于二氯甲烷(2mL)和甲醇(2mL)的混合物中。將固體通過過濾去除，并且將濾液濃縮以產(chǎn)生作為油狀殘余物的所希望的化合物(S)-1-(4-(3-氨基-2-羥丙基)哌嗪-1基)乙酮，將該所希望的化合物不經(jīng)進一步的純化而直接用于下一步中。將制備好的(S)-1-(4-(3-氨基-2-羥丙基)哌嗪-1-基)乙酮添加至(S)-1-(3-氯-2-羥基丙氨基)-4-氟代蒽-9,10-二酮(191.7mg，0.57mmol)于無水DNSO(6mL)中的溶液中。在110℃下攪拌5小時后，TLC分析示出反應完成。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水(20mL)洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用EtOAc/MeOH/Et3N＝3:1:1洗脫提供了呈藍色泡沫的所希望的產(chǎn)物CYD-2-71-1(50mg，18％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3/CD3OD)δ8.24(dd,2H,J＝4.8Hz和9.0Hz),7.68(dd,2H,J＝3.6Hz和6.0Hz),7.16(s,2H),4.11(m,2H),3.66(m,5H),3.52(m,4H),3.40(m,1H),2.59(m,6H),2.10(s,3H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.0,181.9,169.6,146.1,145.9,134.1,134.0,131.9(2C),125.7(2C),123.6,123.4,109.6,109.4,69.8,66.5,61.4,53.3,52.9,46.3,46.0(2C),45.3,41.3,20.7。1-((S)-3-(4-乙?；哙?1-基)-2-羥基丙氨基)-4-((S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-90)。將KOH于EtOH中的溶液(2mL，0.5M)添加至CYD-2-77-1(40.0mg，0.077mmol)于1,4-二噁烷(6mL)中的溶液中。在常溫下攪拌15分鐘后，TLC分析示出起始材料消耗完。將反應混合物用CH2Cl2(20mL)稀釋，用水洗滌(10mL)并且用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝15:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的產(chǎn)物CYD-2-90(36mg，77％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.83(s,1H),10.73(s,1H),8.29(s,2H),7.67(s,2H),7.21(s,2H),4.05(s,1H),3.73(m,1H),3.63(d,2H,J＝19.2Hz),3.45(m,5H),3.23(s,1H),2.84(s,1H),2.72(s,1H),2.60(m,3H),2.47(m,3H),2.08(s,3H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.9,182.6,168.9,146.3,145.9,134.4,134.3,132.2,132.1,126.1(2C),123.4(2C),110.4,110.2,65.2,61.5,53.4,52.9,51.2,46.4,46.3,45.0,44.0,41.4,21.2。(S)-叔丁基2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙基氨基甲酸酯。將溶解于THF(5mL)中的哌啶(442.4mg，5.19mmol)和(S)-叔-丁基環(huán)氧乙烷-2-基甲基氨基甲酸酯(300.0mg，1.73mmol)的混合物在55℃下攪拌24小時。之后，TLC分析示出反應完成。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余油狀物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脫，提供呈無色油狀物的所希望的產(chǎn)物(S)-叔丁基2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙基氨基甲酸酯(400mg，89％)。(S)-1-氟-4-(2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)蒽-9,10-二酮。將TFA(1mL)在0℃下添加至(S)-叔丁基2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙基氨基甲酸酯(400mg，1.55mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌3小時。TLC分析示出反應混合物完成。將反應溶劑在真空下去除以產(chǎn)生油狀殘余物，將該殘余物溶解于甲醇(3mL)中并且用過量的飽和NaHCO3水溶液堿化。將溶劑再次去除以給出油狀殘余物，將該殘余物溶解于二氯甲烷(2mL)和甲醇(2mL)的混合物中。將固體通過過濾去除，并且將濾液濃縮以產(chǎn)生作為油狀殘余物的所希望的化合物(S)-1-氨基-3-(哌啶-1-基)丙烷-2-醇，將該所希望的化合物不經(jīng)進一步的純化而直接用于下一步。將制備好的(S)-1-氨基-3-(哌啶-1-基)丙烷-2-醇添加至1,4-二氟代蒽醌(378.0mg，1.55mmol)于無水DMSO(6mL)中的溶液中。在60℃下攪拌3小時后，TLC分析示出反應完成。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水(20mL)洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出紅色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝3:1洗脫，提供呈紅色泡沫的所希望的化合物(290mg，49％)。1-((S)-3-氯-2-羥基丙氨基)-4-((S)-2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-87-1)和(S)-1-(2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)-4-(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-87-2)。將(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇鹽酸鹽(221.4mg，1.51mmol)和Et3N(153.4mg，1.51mmol)添加至(S)-1-氟-4-(2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)蒽-9,10-二酮(290.0mg，0.75mmol)于無水DMSO(8mL)中的溶液中。在110℃下攪拌5小時后，TLC分析示出反應完成。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝10:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的化合物CYD-2-87-1(80mg，23％)和呈藍色泡沫的CYD-2-87-2(90mg，27％)。CYD-2-87-1:1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.99(s,1H),10.98(s,1H),8.24(s,2H),7.78(s,2H),7.51(m,2H),5.67(s,1H),4.99(brs,1H),3.95(s,1H),3.87(s,1H),3.66(m,3H),3.57(m,1H),3.46(m,1H),3.38(m,1H),2.38(m,5H),1.51(s,4H),1.37(s,2H).13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ185.9,185.6,151.6,151.2,139.1,139.0,137.6,137.3,131.1,130.6,130.2,129.7,113.8,113.5,74.6,72.0,67.8,60.0(2C),52.5,52.0,50.7,30.8(2C),29.1。CYD-2-87-2:1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.4(s,1H),8.24(d,1H,J＝6.6Hz),8.13(d,1H,J＝6.0Hz),7.63(m,2H),7.05(d,1H,J＝8.4Hz),6.84(d,1H,J＝9.0Hz),4.65(s,1H),4.20(s,2H),4.01(s,1H),3.75(d,2H,J＝7.8Hz),3.34(m,4H),2.61(s,2H),2.42(m,4H),1.58(s,4H),1.45(s,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ183.6,181.2,147.0,144.6,134.7,134.3,132.2(2C),126.0(2C),125.3,120.3,115.4,111.4,65.7,63.3,63.2,62.2,61.9,54.7,46.7,26.0(2C),24.2。1-((S)-2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)-4-((S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-88)。將KOH于EtOH中的溶液(2mL，0.5M)添加至CYD-2-87-1(65.0mg，0.13mmol)于1,4-二噁烷(4mL)中的溶液中。在常溫下攪拌15分鐘后，TLC分析示出起始材料消耗完。將反應混合物用二氯甲烷(20mL)稀釋，用水(10mL)洗滌并且用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝15:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的產(chǎn)物CYD-2-88(50mg，83％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.85(s,1H),10.7(s,1H),8.31(m,2H),7.67(m,2H),7.25(m,2H),4.00(brs,2H),3.73(d,1H,J＝12.6Hz),3.48(m,3H),3.23(s,1H),2.84(s,1H),2.71(s,1H),2.60(s,2H),2.44(s,2H),2.35(s,2H),1.44(s,4H),1.25(s,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ183.0,182.5,146.5,145.9,134.5,134.3,132.2,132.0,126.1,126.0,123.6,123.4,110.4,110.1,65.8,62.1,54.7,51.2,46.6,45.0,44.0,26.1(2C),24.2。(S)-1-(3-氯-2-羥基丙氨基)-4-(2-(二甲氨基)乙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-75)。將N,N-二甲基乙烷-1,2-二胺(72.8mg，0.82mmol)添加至(S)-1-(3-氯-2-羥基丙氨基)-4-氟代蒽-9,10-二酮(138.0mg，0.41mmol)于無水DNSO(6mL)中的溶液中。在110℃下攪拌3.5小時后，TLC分析示出起始材料消耗完。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水(20mL)洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝15:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的化合物CYD-2-75(72mg，43％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3/CD3OD)δ10.8(m,1H),10.6(m,1H),8.21(m,2H),7.65(m,2H),7.13(d,1H,J＝9.6Hz),7.03(d,1H,J＝9.6Hz),4.12(t,1H,J＝5.4Hz),3.70(d,2H,J＝4.8Hz),3.61(dd,1H,J＝4.8Hz),3.45(m,3H),2.67(m,2H),2.37(s,6H).13C-NMR(150MHz,CDCl3/CD3OD)δ182.1,181.9,145.8,145.6,134.1,134.0,131.9,131.8,125.7(2C),123.4,123.2,109.8,109.4,69.9,58.2,46.5，46.4，45.5，45.2，40.3。(S)-1-(2-(二甲氨基)乙氨基)-4-(環(huán)氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-81)。將KOH于EtOH中的溶液(1.8mL，0.5M)添加至CYD-2-75(50.0mg，0.12mmol)于1,4-二噁烷(4mL)中的溶液中。在常溫下攪拌15分鐘后，TLC分析示出起始材料消失。將反應混合物用二氯甲烷(20mL)稀釋，用水(10mL)洗滌并且用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用制備型TLC純化；用CH2Cl2/MeOH＝15:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的產(chǎn)物CYD-2-81(20mg，44％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.77(s,1H),10.69(s,1H),8.33(m,2H),7.68(m,2H),7.30(m,1H),7.22(m,1H),3.75(m,1H),3.57(m,1H),3.49(m,2H),3.25(m,1H),2.85(t,1H,J＝4.2Hz),2.73(m,1H),2.66(t,2H,J＝6.6Hz),2.34(s,6H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ183.1,182.5,146.0,145.8,134.4,134.2,132.1,132.0,126.1,126.0,123.5,123.3,110.5,109.9,58.5,51.2,45.6(2C),44.9,43.9,41.0。(S)-1-(環(huán)丙基甲氨基)-4-(2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-89)。將環(huán)丙基甲胺(38.0mg，0.53mmol)添加至(S)-1-氟-4-(2-羥基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)蒽-9,10-二酮CYD-2-86(98.0mg，0.25mmol)于無水DMSO(8mL)中的溶液中。在110℃下攪拌3小時后，TLC分析示出反應完成。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脫，提供呈藍色固體的所希望的化合物CYD-2-89(100mg，90％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.88(s,1H),10.74(s,1H),8.30(s,2H),7.64(s,2H),7.22(d,1H,J＝9.6Hz),7.08(d,1H,J＝8.4Hz),4.04(d,1H,J＝3.0Hz),3.93(brs,1H),3.42(m,2H),3.20(s,2H),2.63(s,2H),2.49(s,2H),2.42(s,2H),1.60(s,4H),1.45(s,2H),1.19(d,1H,J＝4.8Hz),0.64(d,2H,J＝5.4Hz),0.33(s,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.3,182.1,146.1,146.0,134.5,134.4,131.9,131.8,126.0,125.9,123.6,123.3,110.0,109.6,65.8,62.2,54.7,47.6,46.7,25.8(2C),24.0,10.8,3.77(2C)。(S)-1-(3-(4-乙?；哙?1-基)-2-羥基丙氨基)-4-(3-嗎啉代丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-85)。將溶解于THF(5mL)中的CYD-2-80(50mg，0.12mmol)和1-乙酰基哌嗪(45.6mg，0.35mmol)的混合物在55℃下攪拌24小時。之后，TLC分析示出反應完成。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的油狀殘余物用制備型TLC純化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脫，提供呈藍色固體的所希望的產(chǎn)物CYD-2-85(25mg，38％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.84(s,1H),10.68(s,1H),8.25(s,2H),7.61(s,2H),7.18(d,1H,J＝10.2Hz),7.13(d,1H,J＝9.6Hz),3.99(s,1H),3.61(m,6H),3.42(m,6H),2.54(m,3H),2.44(m,8H),2.02(s,3H),1.85(s,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.5,182.2,168.9,146.2,146.0,134.4,134.3,132.0,131.9,126.0,125.9,123.5,123.3,110.2,109.7,66.9(2C),66.2,61.5,56.1,53.7(2C),53.4,52.9,46.4,46.2,41.4,40.8,26.6,21.2。(S)-1-(3-氯-2-羥基丙氨基)-4-(環(huán)丙基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-91)。將環(huán)丙基甲胺(64.0mg，0.89mmol)添加至(S)-1-(3-氯-2-羥基丙氨基)-4-氟代蒽-9,10-二酮(120.0mg，0.36mmol)于無水DNSO(6mL)中的溶液中。在110℃下攪拌3小時后，TLC分析示出起始材料消耗完。將反應混合物用水(10mL)淬滅，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水(20mL)洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝40:1洗脫，提供呈藍色泡沫的所希望的化合物CYD-2-91(110mg，79％)。(S)-1-(環(huán)丙基甲氨基)-4-(環(huán)氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-93)。將KOH于EtOH中的溶液(4.28mL，0.5M)添加至CYD-2-91(110.0mg，0.28mmol)于1,4-二噁烷(6mL)中的溶液中。在常溫下攪拌15分鐘后，TLC分析示出起始材料消耗完。將反應混合物用二氯甲烷(20mL)稀釋，用水(10mL)洗滌并且用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝120:1洗脫，提供呈藍色固體的所希望的產(chǎn)物CYD-2-93(85mg，85％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.79(s,1H),10.74(s,1H),8.33(s,2H),7.69(d,2H,J＝1.8Hz),7.28(m,1H),7.20(d,1H,J＝9.0Hz),3.73(m,1H),3.58(m,1H),3.26(m,3H),2.84(s,1H),2.72(s,1H),1.23(m,1H),0.66(m,2H),0.34(s,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ183.1,182.5,146.2,145.8,134.6,134.3,132.2,132.0,126.1,126.0,123.6,123.4,110.5,109.7,51.3,47.7,45.0,44.0,10.8,3.79(2C)。(S)-1-(環(huán)丙基甲氨基)-4-(3-(二乙氨基)-2-羥基丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-94)。將溶解于THF(5mL)中的CYD-2-93(64.0mg，0.18mmol)和二乙胺(67.0mg，0.91mmol)的混合物在55℃下攪拌24小時。之后，TLC分析示出反應完成。將溶劑在真空中去除，并且將產(chǎn)生的油狀殘余物用制備型TLC純化；用CH2Cl2/MeOH＝30:1洗脫，提供呈藍色固體的所希望的產(chǎn)物CYD-2-94(46mg，59％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.95(s,1H),10.80(s,1H),8.35(m,2H),7.68(m,2H),7.32(d,1H,J＝9.6Hz),7.20(d,1H,J＝9.6Hz),3.95(m,1H),3.48(m,2H),3.27(m,2H),2.68(m,2H),2.58(m,4H),1.21(s,1H),1.05(t,6H,J＝7.2Hz),0.65(m,2H),0.34(m,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.6,182.4,146.2,146.1,134.5(2C),132.0,131.9,126.1,125,9,123.7,123.4,110.1,109.7,66.2,57.0,47.7,47.1(2C),46.7,11.9(2C),10.8,3.79(2C)。(S)-叔丁基3-(N-烯丙基甲基磺酰氨基)-2-羥丙基氨基甲酸酯(CYD-3-4)。將溶解于i-PrOH(6mL)中的烯丙胺(346.1mg，6.06mmol)和(S)-叔丁基環(huán)氧乙烷-2-基甲基氨基甲酸酯(350.0mg，2.02mmol)的混合物在60℃下攪拌4小時。之后，TLC分析示出反應完成。將溶劑在真空下去除，并且將產(chǎn)生的油狀殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝10:1洗脫，提供呈無色油狀物的所希望的產(chǎn)物CYD-3-3(320mg，68％)。將甲磺酰氯(172.1mg，1.50mmol)和Et3N(191.0mg，1.87mmol)在冰水浴中添加至CYD-3-3(288mg，1.25mmol)于二氯甲烷(6mL)中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌2小時。之后，TLC分析示出反應完成。將反應混合物用飽和NaHCO3水性溶液洗滌，隨后用鹽水洗滌并且用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除，并且將產(chǎn)生的殘余物用硅膠柱純化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脫，提供呈無色油狀物的所希望的產(chǎn)物CYD-3-4(385.0mg，100％)。N-烯丙基-N-((R)-3-(4-((S)-3-(N-烯丙基甲基磺酰氨基)-2-羥丙基氨基)-9,10-二氧代-9,10-二氫蒽-1-基氨基)-2-羥丙基)甲烷磺酰氨(CYD-3-6)。將TFA(1mL)在0℃下添加至CYD-3-4(386.0mg，1.25mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌3小時。TLC分析示出反應混合物完成。將反應溶劑在真空下去除以產(chǎn)生油狀殘余物，將該殘余物溶解于甲醇(3mL)中并且用過量的飽和NaHCO3水溶液堿化。溶劑的去除產(chǎn)生油狀殘余物，將該殘余物溶解于二氯甲烷(2mL)和甲醇(2mL)的混合物中。將固體通過過濾去除，并且將濾液濃縮以產(chǎn)生呈油狀殘余物的所希望的化合物CYD-3-5，將該所希望的化合物不經(jīng)進一步的純化而直接用于下一步中。將CYD-3-5(260mg，1.25mmol)和Et3N(127.3mg，1.25mmol)在氮氣氣氛下添加至1,4-二氟代蒽醌(157.7mg，0.64mmol)于無水DMSO(6mL)中的溶液中。將產(chǎn)生的混合物在110℃下攪拌10小時。之后，TLC分析示出起始材料完成，并且將反應混合物用水(10mL)淬滅并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。將合并的有機相用鹽水洗滌并用無水Na2SO4干燥。將溶劑在真空下去除以給出藍色殘余物，將該殘余物用硅膠柱純化；用乙酸乙酯洗脫，提供呈藍色固體的所希望的化合物CYD-3-6(200mg，50％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.59(s,2H),7.93(d,2H,J＝2.4Hz),7.55(d,2H,J＝2.4Hz),6.35(s,2H),5.94(m,2H),5.39(d,2H,J＝17.4Hz),5.33(d,2H,J＝9.6Hz),4.49(brs,2H),4.09(m,6H),3.40(m,4H),3.26(d,2H,J＝10.8Hz),3.12(d,2H,J＝6.0Hz),3.02(s,6H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ176.0(2C),141.2(2C),129.0(2C),127.6(2C),127.0(2C),120.9(2C),118.0(2C),115.2(2C),104.1(2C),64.2(2C),46.7(2C),45.9(2C),41.6(2C),34.3(2C)。靶向Bcl2的BH4結構域的小分子的篩選使用包含大約300,000個來自國家癌癥研究所(NCI)的小分子的文庫對接BH4結構域的結構口袋。將小分子根據(jù)它們的能量分數(shù)排序。選擇前200個小分子以用于通過磺酰羅丹明B(SRB)測定篩選在人類肺癌細胞中的細胞毒性。在這些小分子中，一種化合物對人類肺癌細胞具有最有力的活性。這個先導化合物是小分子Bcl2BH4結構域拮抗劑(BDA-2或BDA-A2)。BDA-2對細胞生長和凋亡的影響是在表達各種水平的內(nèi)源Bcl2的小細胞肺癌(SCLC)和非小細胞肺癌(NSCLC)細胞系中分別用SRB測定和膜聯(lián)蛋白V/PI結合來測量。結果指示表達相對較高水平的Bcl2的NSCLC細胞系(即H157、Calu-1、H358、H460以及H1975)和SCLC細胞系(即DMS53、DMS153、H146和H69)對BAD-2更敏感。相比之下，表達相對較低或不可檢測水平的內(nèi)源Bcl2的肺癌細胞系(即NSCLC細胞系：A549和H1299；SCLC細胞系：DMS114和H128)對BAD-2不太敏感。顯現(xiàn)出Mcl-1或Bcl-XL的表達水平并沒有顯著影響細胞對BDA-2的敏感性。BDA-2的凋亡響應可以依賴于Bcl2在肺癌細胞系中的表達水平。重要地，BDA-2示出對正常小氣道上皮細胞系(SAEC)更少的敏感性，指示和正常細胞相比針對癌細胞的相對選擇性。BDA-2選擇性地在BH4結構域處與Bcl2結合并且誘導細胞殺傷純化的重組WT和一組Bcl2BH結構域缺失突變體蛋白(即ΔBH1、ΔBH2、ΔBH3和ΔBH4)可商購于蛋白質X實驗室(ProteinXLab)。為了直接測量BDA-2/Bcl2結合，利用熒光Bak肽(5'-FAMGQVGRQLAIIGDDINR)進行熒光偏振測定。BDA-2以高結合親和力(Ki＝3.3±0.73nM)直接結合至Bcl2。從Bcl2蛋白中BH1、BH2和BH3的缺失并沒有顯著影響其BDA-2結合。然而，BH4結構域缺乏的Bcl2突變體蛋白(ΔBH4)不能結合BDA-2。這些發(fā)現(xiàn)指示BDA-2通過BH4結構域選擇性地結合至Bcl2。重要地，BDA-2不結合至其他Bcl2家族成員(包括Bcl-XL、Mcl-1或Bfl-1/A1)，指示其結合Bcl2的特異性。通過電腦程序的結構建模分析揭示BDA-2與在BH4結構域中的8個氨基酸(即ASP10、ASN11、ARG12、GLU13、MET16、LYS17、HIS20和ASP31)相關聯(lián)。在BH4結構域內(nèi)在通過初始對接模擬鑒定的特定殘基處產(chǎn)生一組Bcl2突變體，包括D10A、N11A、R12A、E13A、M16A、K17A、H20A和D31ABcl2突變體。創(chuàng)造化合物Bcl2突變體D10A/N11A/R12A/E13A(AAAA)。產(chǎn)生這些突變體的重組蛋白，以用于使用競爭熒光偏振法進行BDA-2/Bcl2結合分析。研究指示在每個單獨的殘基處的單一突變并沒有顯著降低Bcl2結合BDA-2的能力，但是AAAABcl2突變體蛋白明顯降低了BDA-2結合。其次，將WT和所有Bcl22突變體在表達不可檢測水平的內(nèi)源Bcl2的H1299細胞中外源地過表達。結果指示在H1299細胞中外源WT或每個Bcl2突變體的過表達有力地抑制順鉑誘導的凋亡細胞死亡，指示這些Bcl2突變體保留標準的抗凋亡功能。然而，在細胞暴露于BDA-2時，在H1299細胞中外源WT和每個Bcl2單位點突變體的過表達不能延長細胞存活，并且展現(xiàn)出增強的對BDA-2的敏感性，指示BDA-2不僅克服了Bcl2的抗凋亡功能而且還可以將這些Bcl2蛋白轉化為死亡分子。相比之下，在細胞暴露于BDA-2時，化合物Bcl2AAAA突變體的過表達顯著延長細胞存活，表明在BDA-2結合殘基處的化合物突變(AAAA)導致了耐受BDA-2的表型。這表明BDA-2與在BH4結構域中的這四個氨基酸(D10、N11、R12和E13)的結合對于Bcl2的BDA-2調(diào)節(jié)和凋亡的誘導是重要的。為了在細胞水平確定Bcl-2是否是相關靶標以及細胞殺傷是否真的依賴于這種特定機制，在五種肺癌細胞系中使用靶向Bcl2基因中的不同區(qū)域的三種不同Bcl2shRNA來特異性地敲低Bcl2，這五種肺癌細胞系包括兩種NSCLC細胞系(H460和H157)和三種SCLC細胞系(DMS53、DMS153和H146)。Bcl2shRNA1、shRNA2或shRNA3在NSCLC和SCLC兩種細胞系中均有效地耗盡了內(nèi)源Bcl2。shRNA對Bcl2表達的影響是高度特異性的，因為對照shRNA沒有影響。將表達Bcl2shRNA1、shRNA2、shRNA3或對照shRNA的細胞用BDA-2(1μM)處理72小時。凋亡的細胞死亡水平是通過FACS分析膜聯(lián)蛋白-V/PI結合而確定。重要地，通過使用Bcl2shRNA1、shRNA2或shRNA3從這些肺癌細胞系中耗盡內(nèi)源Bcl2，導致了細胞對BDA-2顯著降低的敏感性。檢查外源Bcl2的表達是否可以恢復Bcl2沉默的肺癌細胞對BDA-2的敏感性以及BDA-2/BH4結合對于這種影響是否是重要的。將在pCIneo中的WT和BDA-2結合缺陷型D10A/N11A/R12A/E13A(AAAA)Bcl2突變體cDNA或僅有載體的對照轉染進表達Bcl2shRNA的H460或DMS53細胞中。已經(jīng)報道如果shRNA針對基因的3′UTR或5’UTR，shRNA1的影響可以通過使用野生型或突變體cDNA來異位表達蛋白而挽救。因為Bcl2shRNA1靶向內(nèi)源Bcl2的5’UTR，shRAN1對Bcl2表達的沉默影響可以通過外源WT或AAAABcl2突變體的轉染而挽救。在轉染后，將細胞用BDA-2或BH3模擬物ABT-199在指示的濃度下處理72小時。結果揭示外源WTBcl2的表達恢復了細胞對BDA-2和ABT-199兩者的敏感性，指示BDA-2和ABT-199均是選擇性Bcl2抑制劑。然而，AAAA的表達僅恢復了細胞對ABT-199的敏感性而沒有恢復對BDA-2的敏感性，指示在BH4結構域中的復合突變導致了對BDA-2的選擇性耐藥性，然而維持了對BH3模擬物(ABT-199)的敏感性。這些數(shù)據(jù)表明BDA-2而不是ABT-199充當獨特的BH4結構域抑制劑。BDA-2對肺癌細胞的凋亡影響需要它的BH4結合。為了測試BDA-2是否作為交聯(lián)劑和DNA反應，進行電泳遷移率變動測定(EMSA)。順鉑作為已知的DNA結合劑，被用作陽性對照。將質粒pUC19DNA與BDA-2或順鉑孵育。有趣地，順鉑而不是BDA-2可以結合至pUC19DNA以引起遷移率變動。這有助于排除BDA-2作為DNA結合劑的可能性。BDA-2誘導Bcl2構象改變并且消除Bcl2存活功能報道指示在核孤兒受體Nur77/TR3和Bcl2之間的相互作用或p53與Bcl2的結合引起了誘導Bcl2自身的BH3結構域“暴露”的Bcl2中的構象改變，這導致Bcl2的抗凋亡活性的損失。此外，通過半胱天冬酶3將BH4結構域從Bcl2中移除導致了Bcl-2從存活蛋白向Bax樣死亡分子的轉化。因為BDA-2是BH4結構域結合分子，它對BH4的結合可以導致在Bcl2中相似的構象改變以轉變它的功能。為了測試BDA-2是否直接誘導Bcl2的構象改變，使用體外無細胞測定。將純化的重組Bcl2蛋白與遞增濃度的BDA-2在裂解緩沖液中孵育，隨后使用抗-Bcl2/BH3結構域抗體進行免疫沉淀(IP)。結果指示BDA-366的添加增強了Bcl2/BH3結構域-特異性抗體結合Bcl2的能力，并且是以劑量依賴性方式發(fā)生。這些發(fā)現(xiàn)顯現(xiàn)，為BDA-366和BH4結構域的結合能夠轉變Bcl2的構象以導致Bcl2自身的BH3結構域的更大的暴露這一觀點提供了證據(jù)。因為只有BDA-366而不是化學治療劑(即VP-16或順鉑)可以直接在無細胞系統(tǒng)中誘導Bcl2構象改變，這示出BDA-366誘導這種構象改變的特異性。BDA-366誘導的Bcl2構象改變還可以通過使用Bcl2/BH3-結構域特異性抗體的免疫熒光法而證實。Bcl2免疫熒光在無處理的H460細胞中是低的或不可檢測的，而在用BDA-2處理的細胞中顯著增強。然而，用BDA-366處理H460細胞并未顯著影響B(tài)cl2表達水平。這些發(fā)現(xiàn)表明由BDA-366負調(diào)節(jié)Bcl2活性是通過構象改變而不是通過Bcl2的表達改變而發(fā)生的。因為用BDA-366處理H460細胞導致了線粒體功能障礙(即降低的MitoSOXTM紅色染色以及細胞色素C(Cytc)釋放)和凋亡(即PARP裂解)，BDA-366與BH4結構域的結合可以引起B(yǎng)cl2BH3結構域的暴露，這進而使Bcl2最終能夠激活Bax，導致凋亡。為了測試這種可能性，使用僅識別Bax的構象改變的活性形式的6A7Bax抗體。將純化的Bcl2用BDA-366在裂解緩沖液中處理1小時。然后將Bcl2/BDA-2的混合物與純化的重組Bax孵育另外2小時，隨后使用6A7抗體進行IP。結果指示BDA-366處理的Bcl2而不是單獨Bcl2增強了Bax結合6A7抗體的能力(圖2F，泳道4對比泳道5-7)，指示BDA-366處理的Bcl2可以誘導Bax構象改變從而導致Bax激活。BAM7是Bax激活劑，其可以直接通過結合至Bax觸發(fā)位點激活Bax。重要地，BAM7而不是BDA-366可以直接激活Bax。這些發(fā)現(xiàn)指示BDA-2不是直接的Bax激活劑，但可以誘導Bcl2依賴性Bax激活。為了測試BDA-366誘導的Bcl2構象改變是否增加Bcl2和Bax在細胞中的相互作用，在用BDA-366處理H460細胞后進行共-IP實驗。結果揭示BDA-2加強了和降低的Bcl2/Bim結合相關聯(lián)的Bcl2/Bax相互作用，表明由BDA-366誘導的BH3暴露的Bcl2可以具有和Bim相比更大的和Bax相互作用的能力，通過在癌細胞中的6A7構象改變導致了Bax的細胞殺傷功能的激活。為了進一步測試Bcl2的BH3結構域對于Bax的BDA-366激活是否是重要的，將純化的重組WT和BH3缺失(ΔBH3)突變體Bcl2蛋白與純化的Bax蛋白在BDA-366不存在或存在的情況下孵育，隨后用6A7抗體進行IP。結果指示，在BDA-366的存在下，WT而不是ΔBH3突變體Bcl2可以在無細胞系統(tǒng)中通過6A7構象改變而激活Bax。為了在細胞水平或線粒體水平對此進行測試，將WT、ΔBH3Bcl2突變體和空載體(pCIneo)轉染進表達不可檢測水平的內(nèi)源Bcl2但表達高水平的內(nèi)源Bax的H1299細胞中。將細胞或從這些細胞中分離的線粒體用BDA-2處理，隨后分別用Bcl2BH3或6A7抗體進行IP。結果指示在包含WtBcl2的細胞或分離的線粒體中而不是在表達ΔBH3Bcl2突變體或僅載體對照的細胞或分離的線粒體中，BDA-366誘導與Bax激活相關聯(lián)的Bcl2構象改變。這些結果表明由BAD-366誘導的Bcl2BH3結構域的暴露對于Bax的在細胞或分離的線粒體中的BDA-2激活是需要的。為了進一步測試BDA-366是否誘導Cytc從線粒體中以Bcl2依賴性方式釋放，將線粒體從表達WT、ΔBH3突變體Bcl2或僅載體對照的H1299細胞中分離。將分離的線粒體用BDA-366(1μM)在30℃下處理30分鐘。在離心后，將在上清液中的Cytc(即Cytc釋放)通過Western印跡來分析。結果揭示BDA-366誘導Cytc從由WtBcl2中而不是由ΔBH3和僅載體對照細胞中分離的線粒體中的釋放。這指示BDA-366誘導的Cytc釋放是以Bcl2依賴性方式發(fā)生，這也需要Bcl2中的BH3結構域。BDA-2以Bax依賴性方式誘導凋亡的細胞死亡BDA-366誘導的構象改變的Bcl2(即具有暴露的BH3結構域)可以激活Bax。為了進一步判定Bax對于凋亡的BDA-2誘導是否是重要的，在野生型(WT)和Bax敲除的(Bax-/-)MEF細胞中測試BDA-366的凋亡影響。Bax缺乏的MEF細胞和WTMEF細胞相比而言對BDA-366具有顯著耐藥性，指示由構象改變的Bcl2引起的Bax的激活對于由BDA-366進行的凋亡的最終誘導是重要的。BDA-366通過抑制Bcl2/IP3R相互作用而誘導鈣離子(Ca2+)釋放。已經(jīng)報道Bcl2通過和肌醇1,4,5-三磷酸(IP3)受體經(jīng)由BH4結構域的直接相互作用抑制了Ca2+驅動的凋亡。通過合成的BH4結合肽破壞BH4/IP3R關聯(lián)，導致增加的Ca2+釋放和凋亡。為了測試BDA-2/BH4結合是否影響IP3R/Bcl2相互作用和Ca2+釋放，將H460細胞用遞增濃度的BDA-366處理24小時。結果揭示BDA-366降低了和增加的Ca2+釋放相關聯(lián)的Bcl2/IP3R結合。這些發(fā)現(xiàn)可以揭示另外的機制，通過該機制BDA-366以BH4結合依賴性方式誘導凋亡。BDA-2誘導人類肺癌細胞的自噬性細胞死亡Bcl2直接和芐氯素-1相互作用并且抑制芐氯素-1依賴的自噬。由ABT-737進行的Bcl2的抑制不僅誘導凋亡也誘導自噬。重要地，報道指示從Bcl2蛋白中去除BH4結構域促進了損害腫瘤生長的自噬過程。為了測試由BDA-2造成的Bcl2BH4的破壞是否刺激自噬，將H460細胞用BDA-366(1μM)處理24小時。在用BDA-366處理后，觀察到增加的LC3-II水平。為了進一步定量自噬的水平，使用GFP-LC3構建體以指示自噬體。在用BDA-2處理后，GFP-LC3從在細胞質和細胞核中的彌漫型染色模式再分布為細胞質點狀結構，該點狀結構特異性地標記前-自噬體和自噬體膜(即GFP-LC3vac細胞)。和用DMSO對照相比，用BDA-366處理細胞顯著增加了GFP-LC3vac細胞的百分比。這些發(fā)現(xiàn)揭示了除了凋亡，BDA-366還可以通過在人類肺癌細胞中抑制Bcl2活性刺激自噬性細胞死亡。在動物模型中BDA-366通過凋亡誘導來抑制肺癌生長為了定義用于體內(nèi)實驗的合適劑量，對最大耐受劑量(MTD)進行確定。將Nu/Nu裸鼠以每劑量水平6組用遞增劑量的BDA-366(10-50mg/kg/d)腹腔注射地(i.p.)處理，持續(xù)長達12天。在6只小鼠中，40mg/kg/d和50mg/kg/d的劑量在8天或12天內(nèi)分別是統(tǒng)一致死的。對于長達12天的每天給藥，在10mg/kg/d和30mg/kg/d之間的劑量是可耐受的，沒有記錄到死亡。在正常C57BL/6小鼠中，對標準單劑量MTD處理進行測量。用300mg/kgi.p.的單劑量處理小鼠沒有引起體重減輕或其他毒性，包括血液的、肝和腎功能。然而，400mg/kg的單劑量在4天內(nèi)導致了小鼠的死亡。ALT和AST均顯著增強。所有器官的病理學分析指示在肝臟中的微脂肪變性和在脾中的白髓萎縮?；谶@些發(fā)現(xiàn)，在400mg/kg單劑量下小鼠也許主要死于肝臟損害。因此，BDA-366的單劑量MTD的范圍應在300mg/kg-400mg/kg之間。對于連續(xù)處理來說，10％的單劑量MTD通常可以被認為是最大處理劑量(30mg/kg-40mg/kg)。在某些實施例中，本披露考慮在10mg/kg/d和30mg/kg/d之間的給藥是相對安全的。為了測試BDA-366在體內(nèi)的效力，將衍生自H460細胞的肺癌異種移植物用遞增劑量的BDA-366(0mg/kg/d、10mg/kg/d、20mg/kg/d、30mg/kg/d)通過i.p.處理14天。結果示出用BDA-366處理小鼠導致了體內(nèi)肺癌的劑量依賴性抑制(圖4)。為了評價BDA-366是否在體內(nèi)通過凋亡誘導了腫瘤生長的抑制，對來自收獲的腫瘤組織的代表性樣品通過免疫組化法(IHC)針對活性半胱天冬酶3進行分析或通過TUNEL法進行分析。在用BDA-366處理后，觀察到劑量依賴性凋亡誘導(圖4C)。重要地，10mg/kg/d-30mg/kg/d的劑量不僅有力地抑制腫瘤生長而且還被很好地耐受，對小鼠沒有顯著的毒性。在用30mg/kg的劑量處理的小鼠中觀察到了體重減輕，但是在中性粒細胞、淋巴細胞、紅血細胞(RBC)和血小板(PLT)方面沒有減少。腎(BUN)和肝(ALT和AST)功能測試在正常范圍內(nèi)。在用10mg/kg/d-30mg/kg/d劑量處理后，收獲的正常組織(心臟、肝臟、肺、腦、脾、腎臟、腸等)的組織病理學沒有揭示正常組織毒性的證據(jù)。除NSCLC細胞系外，BDA-366也能有效地抑制SCLC細胞系的生長。為了評價BDA-2在體內(nèi)針對SCLC的抗腫瘤活性，建立衍生自患者的異種移植物(PDX)(沒有介入體外培養(yǎng)物)，以期望更好地概括SCLC腫瘤背景。將BDA-366(20mg/kg/d)的效力通過對從具有難治性SCLC的患者獲得的PDX中給藥兩周而測定。BDA-366有力地抑制SCLCPDX的生長，這通過在腫瘤組織中的凋亡而發(fā)生(圖5)。這些發(fā)現(xiàn)指示，在SCLC存在當前受限的治療選擇的情況下，BDA-2在患有SCLC的人類患者中可以是有效的。BDA-366在腫瘤組織中誘導Bcl2構象改變最近已經(jīng)開發(fā)了基于量子點的免疫組織熒光(QD-IHF)技術作為有價值的工具，以用于在甲醛固定的石蠟包埋(FFPE)組織中對多種生物標記的同時且并行的免疫染色，由此允許對在相同組織切片上的若干生物標記進行同時定量。為了判定BDA-366是否通過在腫瘤組織中暴露Bcl2BH3結構域而誘導Bcl2構象改變以及BH3結構域暴露的Bcl2是否激活Bax，將在Bcl2和Bax兩者中的構象改變通過QD-IHF在相同的組織切片上同時進行分析。在和發(fā)生在凋亡細胞中的膜插入相關聯(lián)的構象改變后，抗體6A7可以選擇性地識別Bax。QD圖像示出用BDA-366處理H460異種移植小鼠持續(xù)14天，導致在腫瘤組織中的Bcl2BH3結構域的劑量依賴性暴露。有趣地，BDA-366誘導的Bcl2構象改變與增加的6A7和Bax結合的水平(即Bax活性形式的水平的增加)相關聯(lián)，表明BH3暴露的Bcl2可以激活Bax導致在腫瘤組織中的凋亡。在BDA-366處理后，在腫瘤組織中在總的Bcl2和Bax水平中沒有顯著改變。mTOR抑制上調(diào)了在來自患NSCLC患者的肺癌細胞系和腫瘤組織中的Bcl2雷帕霉素和其衍生物RAD001(即依維莫司)是mTOP的有力變構抑制劑。RAD001是很好耐受的但是在肺癌患者中示出有限的抗腫瘤活性。之前的報告指示Bcl2的表達與癌細胞對mTOR抑制劑的耐藥性相關聯(lián)。為了進一步測試mTOR抑制是否調(diào)節(jié)Bcl2表達，將A549和H460細胞用遞增濃度的RAD001處理24小時。由RAD001造成的mTOR抑制導致了Bcl2以劑量依賴性方式在B549和H460肺癌細胞兩者中的上調(diào)(圖7A)。為了測試RAD001對Bcl2表達的類似影響是否發(fā)生在患者中，將Bcl2表達通過IHC在基線和從10名用RAD001(5或10mg/天)處理28天的NSCLC患者中獲得的處理后組織樣品中進行分析，作為在患有可切除NSCLC的患者中依維莫司的新輔助療法臨床研究的一部分。與基線樣品相比，在處理后腫瘤組織中具有增加的Bcl2表達。這些發(fā)現(xiàn)表明由mTOR抑制引起的Bcl2的上調(diào)可以負面影響肺癌對mTOR抑制劑的敏感性。因此，Bcl2的抑制可以增強mTOR抑制劑針對肺癌的效力。在體外和體內(nèi)的肺癌抑制中BDA-366與mTOR抑制劑協(xié)同作用為了測試組合的Bcl2和mTOR抑制是否示出針對肺癌細胞的協(xié)同活性，將H460細胞用BDA-366(100nM)、RAD001(1nM)或其組合進行處理。SRB測定示出單獨的RAD001或BDA-366部分地抑制肺癌細胞生長。有趣地，RAD001和BDA-366的組合顯著導致了更多的生長抑制(圖8)，指示組合的Bcl2和mTOR抑制比任何一個單獨藥劑在抑制肺癌細胞生長中具有更大的活性。為了更精確地分析RAD001和BDA-366之間的協(xié)同程度，計算復合指數(shù)(CI)值。CI值小于0.3(即0.278)，指示RAD001和BDA-366展現(xiàn)出強的協(xié)同的肺癌細胞生長抑制。為了測試共靶向Bcl2和mTOR是否也在體內(nèi)協(xié)同地抑制肺癌，將具有NSCLC(即H460)異種移植物的小鼠用RAD001(1mg/kg/d)、BDA-366(15mg/kg/d)或其組合處理14天。有趣地，BDA-366和RAD001的組合展現(xiàn)出比單獨BDA-366或RAD001在體內(nèi)抑制肺腫瘤生長中顯著更大的效力(圖9)，導致持續(xù)的腫瘤抑制。序列表<110>愛默蕾大學（EMORYUNIVERSITY）德克薩斯大學系統(tǒng)董事會（THEBOARDOFREGENTSOFTHEUNIVERSITYOFTEXASSYSTEM）鄧興明（Deng,Xingming）周嘉（Zhou,jia）丁春勇（Ding,Chunyong）<120>BH4拮抗劑及其相關方法<130>11078PCT<150>US61/988,332<151>2014-05-05<160>1<170>PatentIn3.5版<210>1<211>10<212>PRT<213>智人<400>1GlnAspCysMetTrpSerGlyPheSerAla1510當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3