本發(fā)明大體上涉及在個人護理調(diào)配物中用作抗氧化劑的化合物和組合物。所述化合物含有硝酮和酚官能團兩者。

背景技術(shù)：

個人護理組合物對于大多數(shù)消費者而言是重要的產(chǎn)品。個人護理組合物含有為組合物提供大量益處的多種添加劑。

抗氧化劑在通常用于個人護理組合物的添加劑中。抗氧化劑幫助保護皮膚免受由各種環(huán)境應(yīng)激(如暴露于UV線)引起的自由基的損傷影響。自由基包括例如單線態(tài)氧。自由基引起對皮膚的損傷，其中最終結(jié)果為皮膚彈性的失去和皺紋的出現(xiàn)，導(dǎo)致皮膚過早老化。

基于老化過程的生理機制，由于特別是由生理應(yīng)激或太陽紫外輻射引起的提高的反應(yīng)性氧物質(zhì)(ROS)的水平的氧化應(yīng)激可促進皮膚老化。有證據(jù)表明，內(nèi)部老化和外部老化(即，光老化)具有若干疊加的生物化學(xué)和分子機制。I型膠原蛋白構(gòu)成皮膚結(jié)締組織的主要結(jié)構(gòu)組分，并且提供具有拉伸強度和穩(wěn)定性的真皮。在真皮中的膠原蛋白的降解已在內(nèi)部老化和光老化的皮膚中報告。另外，有助于通過ROS的光老化的主要信號傳導(dǎo)路徑為基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)的上調(diào)，這導(dǎo)致皮膚膠原蛋白的降解，這與老化斑點和皺紋相關(guān)聯(lián)。因此，需要更強的抗氧化劑作為潛在抗老化成分以提供保護。

已研究的一種此類抗氧化劑，如公開于WO 2012/150370中的為白藜蘆醇(3,5,4'-三羥基-反-二苯乙烯)。白藜蘆醇為天然存在的多酚化合物，其見于葡萄和其它水果的皮中。在其潛在化學(xué)預(yù)防特性的情形下，已經(jīng)探究抵抗來自UV曝露的皮膚損傷和抵抗與大腦功能、心臟病和癌相關(guān)聯(lián)的ROS誘導(dǎo)損傷。然而，白藜蘆醇的天然豐度低，并且因此非常昂貴。

因此，存在開發(fā)用于個人護理的新型抗氧化劑組合物，包括減緩膠原蛋白在皮膚中的降解的組合物的需要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

現(xiàn)在我們已發(fā)現(xiàn)，具有側(cè)鏈二苯乙烯基團的硝酮在較低濃度下具有與自由基清除劑相等的功效(如按抗氧化劑保護的持續(xù)時間測量)，或在與常規(guī)抗氧化劑相比相等濃度下更高功效(較小氧化損傷和/或更長的抗氧化劑保護)。另外，已發(fā)現(xiàn)硝酮的性能不可通過簡單地添加兩種不同的抗氧化劑(例如，一種具有酚官能團并且另一種具有硝酮官能團)實現(xiàn)。相反地，在相同分子中存在兩種官能團為其有利的性能的重要方面。

因此，本發(fā)明的一個方面提供式I化合物：

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵獨立為H、-OH、C₁-C₆烷氧基、-COOH、-COO^-M⁺或-O^-M⁺，其中M⁺為鈉離子、鉀離子或銨離子，并且R⁶、R⁷、R⁸、R⁹和R¹⁰獨立為H、-OH、C₁-C₆烷氧基、-COOH、-COO^-M⁺或-O^-M⁺，其中M⁺鈉離子、鉀離子或銨離子或式II取代基：

其中R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴和R¹⁵獨立為H、-OH、C₁-C₆烷氧基、-COOH、-COO^-M⁺或-O^-M⁺，其中M⁺為鈉離子、鉀離子或銨離子，其限制條件是R⁶、R⁷、R⁸、R⁹和R¹⁰中的一個為式II取代基。

本發(fā)明的另一方面提供個人護理組合物，其包含(a)式I抗氧化劑化合物和(b)皮膚病學(xué)可接受的載劑。

在另一方面，本發(fā)明提供處理皮膚的化妝方法，其包含將如本文所述的組合物施用到皮膚。

在又一方面中，提供了一種用于抑制膠原蛋白降解的方法，所述方法包含將有效量的如本文所述的組合物表面給藥到皮膚。

在再一方面中，提供了一種用于降低老化的可見跡象的方法，所述方法包含將如本文所述的組合物施用到需要此類治療的皮膚。

具體實施方式

除非另外指明，否則數(shù)值范圍(例如，在“2到10”中時)包括界定所述范圍的數(shù)字(例如，2和10)。

除非另外指明，否則比率、百分比、份數(shù)等均以重量計。

如在本說明書中使用的“室溫”為環(huán)境溫度，例如20℃至25℃。

如在本說明書中使用的“烷基”涵蓋具有指定數(shù)目的碳原子直鏈和支鏈脂族烴基團。如果沒有指定數(shù)目，那么預(yù)期1至6個烷基碳。除非另外指明，否則烷基為任選地經(jīng)1個、2個或3個，優(yōu)選1個或2個，更優(yōu)選1個與本文所述的合成相容的取代基取代。此類取代基包括(但不限于)硝基、鹵素、羧酸(例如，C₀-C₆-COOH)、C₂-C₆烯烴、氰基、氨基和/或酯。除非另外指明，否則前述取代基自身不可進一步被取代。

如上所述，在一個方面中，本發(fā)明提供一種式I化合物。在另一方面，本發(fā)明提供一種包含式I化合物和皮膚病學(xué)可接受的載劑的組合物。

在一些實施例中，在式I化合物中的R¹、R²、R³、R⁴或R⁵中的至少一個為-OH。在一些實施例中，在式I化合物中的R¹、R²、R³、R⁴或R⁵中的至少兩個為-OH。

在一些實施例中，R⁶、R⁷、R⁸、R⁹或R¹⁰中的至少一個為-OH。在一些實施例中，R⁶或R¹⁰中的至少一個為-OH。

在一些實施例中，R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴或R¹⁵中的至少一個為-OH。在一些實施例中，R¹³為-OH。

在一些實施例中，R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴或R¹⁵中的至少一個為C₁-C₆烷氧基。在一些實施例中，R¹²或R¹⁴為甲氧基。

在本發(fā)明的組合物的一些實施例中，式I化合物如在表1中所示：

表1.指定的式I化合物

本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可經(jīng)由大體了解可適用領(lǐng)域以及其中需要的常規(guī)實驗的組合，容易地確定可用于特定組合物的式I抗氧化劑化合物的有效量，以便提供本文所述的益處(例如，清除自由基和抑制膠原蛋白降解)。以非限制性實例的方式，以組合物的總重量計，在本發(fā)明的組合物中式I化合物的量可在0.01重量％到5重量％，優(yōu)選地0.05重量％到3重量％，并且更優(yōu)選地0.1重量％到1重量％的范圍內(nèi)。

式I化合物可容易由本領(lǐng)域的技術(shù)人員使用已知的合成技術(shù)制備。舉例來說，所述化合物可通過二苯乙烯醛化合物(可能含有一個或多個羥基，如()-2-羥基-5-(4-羥基-3-甲氧基苯乙烯基)苯甲醛)與芐基羥基胺化合物(在苯基上還可能含有一個或多個羥基，如3,4-二羥基芐基羥基胺)的反應(yīng)來制備，接著分離和純化所期望的產(chǎn)物。

本發(fā)明的組合物還包括皮膚病學(xué)可接受載劑。此類材料通常表征為載劑或稀釋劑，所述載劑或稀釋劑不引起對皮膚明顯的刺激并且不抵消在組合物中(一種或多種)活性劑的活性和特性?？捎糜诒景l(fā)明的皮膚病學(xué)可接受載劑的實例包括(但不限于)乳液、乳膏、水溶液、油、軟膏、糊劑、凝膠、洗劑、奶、泡沫、懸浮液、粉末或其混合物。在一些實施例中，以組合物的總重量計，組合物含有約99.99重量％到約50重量％的皮膚病學(xué)可接受載劑。

本發(fā)明的皮膚病學(xué)可接受載劑還可包括例如水、增稠劑、潤膚劑、乳化劑、潤濕劑、表面活性劑、懸浮劑、成膜劑、發(fā)泡劑、防腐劑、消泡劑、芳香劑、低級一元醇多元醇、高沸點溶劑、推進劑、著色劑、顏料、丙三醇、礦物油、硅觸感改性劑、防腐劑、潤膚劑或其混合物。

其它添加劑可包括在本發(fā)明的組合物中，如(但不限于)研磨劑、吸附劑、美感組分如芳香劑、顏料、著色劑(colorings)/著色劑(colorants)、精油、皮膚感知物、收斂劑(例如，丁香油、薄荷醇、樟腦、桉油、丁香酚、乳酸薄荷酯、金縷梅餾出物)、抗結(jié)塊劑、消泡劑、抗菌劑(例如，碘丙基氨基甲酸丁酯)、其它抗氧化劑、粘合劑、生物添加劑、緩沖劑、膨脹劑、螯合劑、化學(xué)添加劑、著色劑、化妝品收斂劑、化妝品殺生物劑、變性劑、藥品收斂劑、外用鎮(zhèn)痛劑、成膜劑或材料，例如用于輔助組合物的成膜特性和親和性的聚合物(例如，二十烯和乙烯基吡咯烷酮的共聚物)、乳濁劑、pH調(diào)節(jié)劑、推進劑、還原劑、螯合劑、皮膚漂白和亮白試劑(例如，對苯二酚、曲酸、抗壞血酸、抗壞血酸磷酸鎂、抗壞血酸葡糖胺)、皮膚調(diào)節(jié)劑(例如，保濕劑，包括混雜的和閉塞的)、皮膚舒緩和/或愈合試劑(例如，泛醇和衍生物(例如乙基泛醇)、蘆薈、泛酸和其衍生物、尿囊素、沒藥醇和甘草酸二鉀)、皮膚處理試劑、增稠劑和維生素(例如，維生素C)和其衍生物。

本發(fā)明的組合物可例如呈油、凝膠、固體棒、洗劑、乳膏、奶、氣溶膠、噴霧、泡沫、摩絲、軟膏或脂肪軟膏或粉末形式。

本發(fā)明的組合物可用于多種個人護理應(yīng)用，如在化妝品中和在皮膚護理(例如，洗劑、乳膏、油、表面藥品和防曬劑)中。

本發(fā)明的組合物可通過在本領(lǐng)域中眾所周知的方法制造，例如借助于常規(guī)混合、溶解、粒化、乳化、包封、包覆或凍干方法。

如上所述，含有式I化合物的本發(fā)明的組合物作為自由基清除劑是高效的。與用于個人護理應(yīng)用的先前已知的抗氧化劑相比，它們展現(xiàn)出顯著更好的抗氧化劑屬性。此外，已發(fā)現(xiàn)具有酚基的硝酮的性能不可通過簡單地添加兩種不同的抗氧化劑(一種具有酚官能團并且另一種具有硝酮官能團)實現(xiàn)。相反地，在相同分子中存在兩種官能團為其有利的性能的重要方面。

本發(fā)明的化妝品組合物可用于處理和保護皮膚免受例如由暴露于紫外光(如UVA和UVB線)，以及輻射的其它有害形式(如長波紅外線)引起的自由基。

因此，例如化妝品組合物可在用于抑制膠原蛋白降解的方法中使用。根據(jù)此類方法，可將有效量的組合物表面給藥到需要此類治療的皮膚。

該組合物還可在用于通過將所述組合物施用到需要此類治療的皮膚降低老化的可見跡象的方法中使用，所述老化的可見跡象可由自由基誘導(dǎo)的在皮膚中的膠原蛋白降解產(chǎn)生。老化的可見跡象可包括例如質(zhì)地不連續(xù)的發(fā)展，如皺紋和粗深皺紋、皮膚紋、裂隙、凸塊、大孔或不平坦性或粗糙度、減少細紋、失去皮膚彈性(功能皮膚彈性蛋白失去和/或失活)、下垂(包括在眼睛區(qū)域和下頜中的浮腫)、失去皮膚堅固性、失去皮膚緊致、失去皮膚從變形彈回、變色(包括黑眼圈)、皰、灰黃、色素過多皮膚區(qū)域，如老化斑和雀斑、角化病、異常分化、過度角質(zhì)化、彈性組織變性，以及在角質(zhì)層、真皮、表皮、皮膚血管系統(tǒng)(例如，毛細血管擴張癥或蜘蛛血管)以及底層組織，特別是接近于皮膚的那些組織中的其它組織學(xué)變化。

在實踐本發(fā)明的方法中，化妝品組合物一般通過將組合物涂敷或擴散到皮膚上表面給藥。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可容易確定化妝品組合物應(yīng)涂敷的頻率。該頻率可取決于例如在給定天中個體可能遇到的日光量和/或個體對日光的敏感度。以非限制性實例的方式，可期望以至少每天一次的頻率給藥。

現(xiàn)將在以下實例中詳細地描述本發(fā)明的一些實施例。

實例

實例1

合成肟前驅(qū)體3,4-二羥基苯甲醛肟(34DHBzOx)

100mL 3-頸燒瓶配備有磁力攪拌器、回流冷凝器、加料漏斗、熱電偶、冰浴和氮氣層。向燒瓶裝入13.81克(0.10摩爾)的3,4-二羥基苯甲醛和50mL的100％乙醇?；旌衔镌谑覝叵略诘獨庀聰嚢?，以得到澄清深棕色溶液。將溶液冷卻到<15℃。向加料漏斗裝入6.63克(0.10摩爾)的50wt.％羥胺水溶液。在約45分鐘的時間段內(nèi)將羥胺溶液添加到經(jīng)冷卻的醛溶液。在添加期間，反應(yīng)混合物溫度維持在<20℃。在完成添加羥胺溶液之后，在55℃下加熱反應(yīng)混合物直到GC分析示出基本上沒有醛(約7小時)。反應(yīng)混合物通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑以得到定量產(chǎn)率的呈棕色固體狀的肟。通過IR、NMR和GC/MS分析確認結(jié)構(gòu)。

使用Nicolet 560FTIR光譜儀來執(zhí)行IR分析。對于液體樣品，將小液滴流延為兩個KBr板之間的平整膜。對于固體樣品，按壓KBr分散體。在4cm^-1的光譜分辨率下，以透射模式獲取從4000cm^-1到400cm^-1的IR光譜。使用Happ-Genzel型切趾函數(shù)。

使用在4.7T下操作的Bruker 200NMR光譜儀獲取¹H和¹³C NMR光譜。使用8.2秒累積時間和2.0KHz掃描寬度獲得¹H光譜；在4.7秒累積時間和7.0KHz掃描寬度下獲得¹³C光譜。甲醇-d₄通常用作溶劑。使用對于¹H在3.30ppm下和對于¹³C在59.05ppm下的溶劑共振來參考化學(xué)位移。

使用具有以電離(EI)模式和以正化學(xué)電離(CI)模式操作的安捷倫(Agilent)質(zhì)量選擇性檢測器的Hewlett Packard型6890GC系統(tǒng)執(zhí)行GC/MS分析。EI模式的載氣為約1毫升/分鐘的氦氣。甲烷用作用于CI模式的載氣。柱為J&W科學(xué)(J&W Scientific)DB-5MS，30m×0.25mm×1μm膜。初始烘箱溫度為60℃，保持5分鐘的時間。溫度以10℃/分鐘的速度升高到220℃，其中保持2分鐘，并然后以20℃/分鐘的速度升高到290℃。注射器溫度為225℃。對于EI模式，樣品量為1μL，并且對于CI模式為1μL。分流比為50:1。

實例2

合成羥胺前驅(qū)體4-((羥基氨基)甲基)苯-1,2-二醇(34DHBzHA)

125mL 3頸燒瓶配備有磁力攪拌器、燒結(jié)的玻璃鼓泡管、具有儀表的pH電極以及裝有熱電偶和出氣口的Claisen接頭。燒瓶裝入在上述實例1中制備的4.59克(0.03摩爾)3,4-二羥基苯甲醛肟(34DHBzOx)以及40mL甲醇。在室溫下攪拌混合物以得到澄清棕色溶液。然后，將氰基硼氫化鈉(1.89克，0.03摩爾)一次性添加到肟溶液中。將氯化氫氣體的壓縮氣瓶連接到鼓泡管，其中安全截留器在兩者之間。HCl瓶僅打開足以允許氣體慢慢移動充氣進入反應(yīng)混合物中。混合物的pH迅速從約7下降到<3。同時，反應(yīng)混合物劇烈起泡并且固體開始沉淀。停止用HCl的鼓泡，并且監(jiān)測pH。在pH已穩(wěn)定在≤3下1小時之后，過濾反應(yīng)混合物，并且用小部分甲醇洗滌在過濾器上的白色固體。在干燥之后，獲得1.38克的白色固體。合并濾液和甲醇洗滌液，并且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑以得到6.27克的米色固體。將這些固體與通過過濾獲得的固體合并，并且溶解于約25mL水中以得到pH為約5的澄清棕色溶液。通過添加飽和碳酸氫鈉水溶液，使pH增加到約8。此時，固體開始分離出。將混合物在冰浴中冷卻約1小時，然后過濾所述混合物。用部分水洗滌在過濾器上的固體。在真空下在55℃下干燥約1小時之后，呈深棕色固體的羥胺的產(chǎn)率為2.56克(55％產(chǎn)率)。使用在上述實例1中描述的程序通過IR和NMR分析確認結(jié)構(gòu)。

實例3

合成二苯乙烯醛前驅(qū)體(E)-2-羥基-5-(4-羥基-3-甲氧基苯乙烯基)苯甲醛(Sald)

燒瓶裝入在300mL無水DMF中的25g(0.166摩爾)的2-甲氧基-4-乙烯基苯酚。在攪拌下和在氮氣沖洗下按順序?qū)⒁韵禄衔锾砑拥剿萌芤海?4.94g(0.166摩爾)的3,5-溴代水楊醛，0.745g(0.0033摩爾)的乙酸鈀，0.201g(0.0006摩爾)的三鄰甲苯基膦以及34.64mL(0.249摩爾，1.5當量)三乙胺。將混合物在110℃下加熱30小時并且在室溫下通過硅藻土545填充的漏斗過濾。組合物用50mL的氯仿萃取，接著用100mL的水洗三次。有機層經(jīng)MgSO₄干燥。在真空下去除溶劑之后，二苯乙烯醛化合物通過硅膠柱色譜(氯仿)分離。所得油在2℃下通過5mL的乙酸乙酯和100mL的己烷結(jié)晶。所獲得純化產(chǎn)物的產(chǎn)率為16.23g(36.4％)。使用在上述實例1中描述的程序通過¹H-NMR、¹³C-NMR和MS分析確認結(jié)構(gòu)。

實例4

合成二苯乙烯側(cè)鏈硝酮N-(2-羥基-5-(4-羥基-3-甲氧基苯乙烯基)苯亞甲基)-1-苯基甲胺氧化物(Sald-BzHA)

25mL單頸燒瓶配備有磁力攪拌器和回流冷凝器。燒瓶裝有在上述實例3中制備的0.2705克(0.001摩爾)的二苯乙烯醛(Sald)前驅(qū)體以及7mL的甲苯和7mL的甲醇。攪拌混合物并升溫到50℃，直到獲得澄清琥珀色溶液。將量為0.1599克(0.001摩爾)的羥胺前驅(qū)體芐基羥胺鹽酸鹽和0.0590克(0.00056摩爾)的無水碳酸鈉以及2mL的水添加到單獨的小燒瓶。觀察到氣體的產(chǎn)生，并且形成白色懸浮液。將此懸浮液一次性添加到醛溶液中。黃色固體立即開始形成?；旌衔镌?0℃下保持4小時。所得混合物為黃色糊劑。將少量(約5mL)的水添加到混合物，并然后過濾混合物。用小部分水洗滌在過濾器上的黃色固體。將固體在55℃下在真空烘箱中干燥幾個小時以得到0.241克的黃色固體二苯乙烯側(cè)鏈硝酮產(chǎn)物。產(chǎn)率＝64.3％。使用在上述實例1中描述的程序通過IR、¹H-NMR和¹³C-NMR分析確認結(jié)構(gòu)。

實例5

合成二苯乙烯側(cè)鏈硝酮N-(2-羥基-5-(4-羥基-3-甲氧基苯乙烯基)苯亞甲基)-1-羥基苯基甲胺氧化物(Sald-pHBzHA)

25mL單頸燒瓶配備有磁力攪拌器和回流冷凝器。燒瓶裝有在上述實例3中制備的0.2694克(0.001摩爾)的二苯乙烯醛(Sald)前驅(qū)體以及7mL的甲苯和7mL的甲醇。攪拌混合物并升溫到50℃，直到獲得澄清琥珀色溶液。將量為0.1391克(0.001摩爾)的羥胺前驅(qū)體對羥基芐基羥胺(pHBzHA)一次性添加到醛溶液中?；旌衔镌?0℃下保持4.5小時。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫；從溶液分離黃色固體。將混合物在冰箱中冷卻幾個小時，然后過濾冷的混合物。用少量甲醇洗滌在過濾器上的固體。將產(chǎn)物在45℃下在真空烘箱中干燥約4小時以得到0.157克的二苯乙烯側(cè)鏈硝酮產(chǎn)物。產(chǎn)率＝40.1％。使用在上述實例1中描述的程序通過IR、¹H-NMR和¹³C-NMR分析確認結(jié)構(gòu)。

實例6

合成二苯乙烯側(cè)鏈硝酮N-(2-羥基-5-(4-羥基-3-甲氧基苯乙烯基)苯亞甲基)-1-(2,4-二羥基苯基)甲胺氧化物(Sald-24DHBzHA)

25mL單頸燒瓶配備有磁力攪拌器和回流冷凝器。燒瓶裝有在上述實例3中制備的0.2708克(0.001摩爾)的二苯乙烯醛(Sald)前驅(qū)體以及7mL的甲苯和7mL的甲醇。攪拌混合物并升溫到50℃，直到獲得澄清琥珀色溶液。一次性添加量為0.1551克(0.001摩爾)的羥胺前驅(qū)體2,4-二羥基芐基羥基胺(24DHBzHA)。混合物在50℃下保持4.5小時。在將混合物冷卻到室溫時沒有固體形成。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑以得到棕黃色固體。將該殘留物在55℃下在真空烘箱中干燥約4小時以得到0.3825克的二苯乙烯側(cè)鏈硝酮產(chǎn)物。產(chǎn)率＝94％。使用在上述實例1中描述的程序通過IR、¹H-NMR和¹³C-NMR分析確認結(jié)構(gòu)。

實例7

合成二苯乙烯側(cè)鏈硝酮N-(2-羥基-5-(4-羥基-3-甲氧基苯乙烯基)苯亞甲基)-1-(3,4-二羥基苯基)甲胺氧化物(Sald-34DHBzHA)

25mL單頸燒瓶配備有磁力攪拌器和回流冷凝器。燒瓶裝有在上述實例3中制備的0.2701克(0.001摩爾)的二苯乙烯醛(Sald)以及7mL的甲苯和7mL的甲醇。攪拌混合物并升溫到50℃，直到獲得澄清琥珀色溶液。一次性添加量為0.1547克(0.001摩爾)的羥胺前驅(qū)體3,4-二羥基芐基羥基胺(34DHBzHA)?；旌衔镌?0℃下保持4.5小時。將混合物漿液冷卻到室溫，并然后通過去除約一半的溶劑濃縮。過濾所得混合物，并且用少量的己烷洗滌在過濾器上的固體。將固體在55℃下在真空烘箱中干燥約3小時以得到0.2047克的二苯乙烯側(cè)鏈硝酮產(chǎn)物。收率＝50.3％。使用在上述實例1中描述的程序通過IR、¹H-NMR和¹³C-NMR分析確認結(jié)構(gòu)。

實例8

在實例1至7中合成的化合物的表征

對實例1至7中制備的化合物的熔點和產(chǎn)物純度進行表征。熔點使用Mel-Temp裝置測定，并且是未校正的。在合成反應(yīng)的進程后，通過GPC分析測定產(chǎn)物純度(使用PerkinElmer系列200HPLC執(zhí)行)。串聯(lián)使用兩個聚合物實驗室(Polymer Laboratories)pLgel柱：(1)300nm×7.5mm，3μ，以及(2)300mm×7.5mm，5μ，這兩個柱前面是保護柱。柱維持在35℃下。流動相為以2毫升/分鐘流動速率的100％THF。UV檢測為270nm。程序運行時間為10分鐘。熔點和產(chǎn)物純度在表2中列出。

表2.合成化合物的熔點和純度

實例9

抗氧化潛能

使用氧自由基吸收能力(ORAC)協(xié)議評估抗氧化劑潛能。ORAC為基于氫原子轉(zhuǎn)移(HAT)機制的化學(xué)體外方法(參見N.Re等人，《自由基生物學(xué)和醫(yī)學(xué)(Free Radical Biology&Medicine)》，26(9/10)，1231(1997))。ORAC測量過氧化氫自由基誘導(dǎo)的氧化的抗氧化抑制，并且因此反映通過H原子轉(zhuǎn)移的經(jīng)典的自由基鏈破壞抗氧化活性。在此分析中，過氧化氫自由基與熒光探針反應(yīng)以形成非熒光產(chǎn)物。這使用熒光測量定量。通過降低的速率和隨時間推移形成的產(chǎn)物的量確定抗氧化劑能力。此分析取決于自由基對熒光探針的損壞，產(chǎn)生其熒光強度的改變。熒光強度的改變?yōu)樽杂苫鶕p壞程度的指示。在抗氧化劑的存在下，自由基損壞的抑制反映在較高熒光強度中，并且可測量為抗自由基的抗氧化能力。ORAC分析的唯一性將反應(yīng)驅(qū)動完成。與在許多其它分析中的相對測量相反，這允許計算曲線下面積(AUC)并且產(chǎn)生抗氧化性的絕對定量。

如所提到，觀測熒光降低用時越長，抗氧化劑(AO)潛能越高。從對于給定抗氧化劑的AUC減去對于空白的AUC以得到其ORAC值。計算以得到與Trolox相同的AUC值需要的AO濃度，并且用于表示Trolox等效AO能力(TEAC)。Trolox為((±)-6-羥基-2,5,7,8-四甲基苯并二氫吡喃-2-羧酸，CAS#53188-07-1)，并且用作內(nèi)部對照。

用上表1的二苯乙烯側(cè)鏈硝酮化合物(本發(fā)明化合物)以及維生素C、維生素E以及以下比較化合物進行ORAC測試。

在ORAC測試溶液中的本發(fā)明二苯乙烯側(cè)鏈硝酮的濃度為100微摩爾，同時Trolox、維生素C、維生素E、BHT、PBN+BHT和VAL-IPHA的濃度為100微摩爾。由ORAC值計算的TEAC值在表3中列出。

表3.TEAC值

出人意料地，發(fā)現(xiàn)相比于已知的抗氧化劑維生素E或維生素C，本發(fā)明化合物顯示出顯著更高的ORAC值。同樣明顯的是，相比于本發(fā)明化合物的TEAC值，酚AO如BHT、非芳香族硝酮如VAL-IPHA，或芳香族硝酮如PBN的TEAC值不非常高。對于芳香族硝酮和酚AO的物理共混物(PBN+BHT)的TEAC值也相對小。