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技術領域

本文所述的發(fā)明涉及用于治療糖尿病、脂肪肝疾病、纖維化疾病如肝和肺纖維化、及肝細胞癌的化合物、組合物及方法。

背景及發(fā)明概述

糖尿病(DM)，通常稱為糖尿病(diabete)，是一組以長期高血糖水平為特征的代謝疾病。如果不經(jīng)治療，則糖尿病可導致許多并發(fā)癥，包括急性并發(fā)癥，如糖尿病性酮酸中毒和非酮癥性高滲性昏迷，以及嚴重的長期并發(fā)癥，如心血管疾病、中風、腎衰竭、足部潰瘍及對眼睛的損傷。糖尿病一般是因胰腺不能產(chǎn)生足夠的胰島素或體細胞不能對所產(chǎn)生的胰島素適當?shù)刈鞒龇磻隆?/p>

存在三種主要類型的糖尿病。1型DM，也稱為胰島素依賴性糖尿病(IDDM)或幼年型糖尿病，是由胰島素產(chǎn)生不足引起。2型DM，也稱為非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM)或成人發(fā)作型糖尿病，一般是從胰島素抗性開始，其中細胞未能適當?shù)貙σ葝u素作出反應。2型DM可導致1型DM。妊娠期糖尿病，3型，是當不具有糖尿病既往史的孕婦出現(xiàn)高血糖水平時發(fā)生。

據(jù)估計全世界有3.87億人患有糖尿病，其中2型糖尿病占約90％的病例。據(jù)估計糖尿病每年導致2百萬至5百萬例死亡。另外，據(jù)報道患有糖尿病的人群數(shù)量預計將逐年持續(xù)地上升。糖尿病的全球經(jīng)濟成本據(jù)估計超過6千億美元，其中美國的糖尿病成本達2千億美元。

胰島素是調(diào)節(jié)葡萄糖從血液攝入大部分體細胞中的重要激素，特別是肝臟、肌肉及脂肪組織。胰島素缺乏癥和/或胰島素受體不敏感在所有形式的糖尿病中都起著重要作用。身體通過以下途徑獲得葡萄糖：食物的腸吸收、儲存在肝臟中的糖原的分解、及糖異生作用，即在體內(nèi)由非碳水化合物來源生成葡萄糖。胰島素通過抑制糖異生作用和/或糖原分解來平衡體內(nèi)的葡萄糖水平。胰島素還刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運到脂肪和肌細胞中，并且刺激葡萄糖以糖原形式儲存在肝臟中。

通常在吃飯之后，響應于升高的血糖水平，由胰腺的胰島中所見的β-細胞釋放胰島素到血液中。降低的葡萄糖水平導致胰島素從β-細胞中的釋放減少并且出現(xiàn)胰高血糖素介導的糖原向葡萄糖的分解。因此，如果可利用的胰島素不足，那么細胞由于胰島素不敏感或胰島素抗性而對胰島素的作用反應較差，或者如果胰島素本身有缺陷，那么葡萄糖不能被適當?shù)匚栈蜻m當?shù)貎Υ嬖诟闻K和肌肉中。凈效應是持續(xù)高水平的血糖、不良的蛋白質(zhì)合成、酸中毒及其它代謝障礙，包括糖尿、多尿和體液喪失增加、血容量喪失、脫水及多飲。

在很多情況下，糖尿病是脂肪肝疾病(FLD)的共病，包括例如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。然而，受試者群不是共存的(co-extensive)。

FLD，也稱為脂肪肝，是一種可逆性病狀，其中甘油三酯脂肪的大空泡經(jīng)由脂肪變性過程積聚在肝細胞中，這是脂質(zhì)在細胞內(nèi)的異常保留。盡管FLD具有多個病因，但兩種主要病因包括過量的酒精攝入和肥胖，伴隨或不伴隨共病胰島素抗性。據(jù)報道FLD還與其它疾病如脂肪代謝障礙一起發(fā)生。形態(tài)學上，不管什么病因，包括酒精性FLD和非酒精性FLD，F(xiàn)LD一般都示出在不同的階段中微泡和大泡脂肪的變化。

雖然FLD本身可為可逆性的，但脂肪的積聚還可伴隨有進行性肝炎，即一般稱為脂肪性肝炎的肝臟炎癥并且導致更嚴重的非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)和更嚴重的NASH。在其中過量的酒精攝入是促成因素的一些情況下，F(xiàn)LD也可稱為酒精性脂肪變性，或更嚴重形式的酒精性脂肪性肝炎(ASH)。

NASH是進行性形式且一般是嚴重形式的NAFLD，其中過量的脂肪積聚(脂肪變性)與肝細胞損傷、炎癥及纖維化共存，這最終導致了肝硬化和肝細胞癌。

一般而言，F(xiàn)LD的病理學是甘油三酯(中性脂肪)的胞質(zhì)內(nèi)積聚。在疾病的早期，肝細胞在細胞核周圍呈現(xiàn)小脂肪空泡(脂質(zhì)體)(微泡脂肪變化)。肝細胞中充滿多個脂肪滴，其沒有取代位于中心處的細胞核。在后期，空泡尺寸增加，將細胞核推向細胞的外圍，出現(xiàn)了特征性印戒(signet ring)樣外觀(大泡性脂肪變化)。這些囊泡輪廓清晰并且在光學上為“空的”，因為脂肪在組織加工期間溶解。大空泡可聚結(jié)并產(chǎn)生脂肪囊腫及其它不可逆的病變。據(jù)報道大泡性脂肪變性是最常見的FLD形式并且通常與酒精、糖尿病、肥胖及皮質(zhì)類固醇有關。妊娠期急性脂肪肝和雷氏綜合征(Reye's syndrome)是由微泡脂肪變化所引起的嚴重肝病的實例。一般而言，當肝臟中的脂肪超過5-10重量％時，作出脂肪變性的診斷。

FLD可為一個或多個潛在原因的結(jié)果，包括酒精和代謝綜合征、糖尿病、高血壓、肥胖及血脂異常；代謝因素，如無β脂蛋白血癥、糖原儲存疾病、韋貝爾克里期琴病(Weber-Christian disease)、妊娠期急性脂肪肝及脂肪代謝障礙；營養(yǎng)因素，如營養(yǎng)不良、完全腸胃外營養(yǎng)、嚴重重量減輕、再喂養(yǎng)綜合征、空腸回腸旁路術、胃旁路術及伴有細菌過度生長的空腸憩室病；藥物和毒素因素，如一旦暴露或用胺碘酮、氨甲蝶呤、地爾硫卓、過期四環(huán)素、高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法、糖皮質(zhì)激素、他莫昔芬及環(huán)境肝毒素像磷或毒蕈中毒處理時可能發(fā)生的；以及其它因素，如炎性腸病、HIV、丙型肝炎(包括第3基因型)、及α1-抗胰蛋白酶缺乏癥、及其組合。

脂肪酸代謝的缺陷還可以是FLD發(fā)病機理的原因，這可能是由于能量消耗及其燃燒的不平衡，導致脂質(zhì)儲存，或者可為對胰島素的外周阻力的結(jié)果，借此增加脂肪酸從脂肪組織向肝臟的轉(zhuǎn)運。據(jù)報道控制負責脂肪酸的氧化和合成的酶的受體分子(PPAR-α、PPAR-γ及SREBP1)的損傷或抑制也有助于脂肪積聚。另外，據(jù)報道酒精中毒損傷線粒體及其它細胞結(jié)構(gòu)，從而進一步削弱細胞能量機制。非酒精性FLD可由肝細胞中未發(fā)生代謝的能量過量而引起。據(jù)報道肝脂肪變性是可逆性的并且在某種程度上是非進行性的，如果潛在因素減少或被除去的話。

在很多情況下，NASH是糖尿病的共病，但受試者群不是共存的。

據(jù)報道脂肪性肝炎向酒精性脂肪性肝炎(ASH)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的進展取決于刺激因素的耐久性或嚴重性。在兩個病狀中的病理損傷是相似的。然而，炎性反應的程度廣泛變化且不一定與脂肪積聚程度有關。脂肪變性(脂質(zhì)的保留)和脂肪性肝炎的發(fā)作可代表FLD進展中的連續(xù)階段。

伴有廣泛性炎癥和高度脂肪變性的肝臟疾病常常進展成更嚴重形式的疾病。不同程度的肝細胞氣球樣變和壞死常常在此階段出現(xiàn)。肝細胞死亡和炎性反應導致肝星形細胞的活化，這在肝臟纖維化中起重要作用。纖維化程度廣泛地變化。據(jù)報道竇周纖維化是最常見的，特別在成人中，并且在圍繞末梢肝靜脈的3區(qū)中占優(yōu)勢。

至肝硬化的進一步進展可受脂肪的量和脂肪性肝炎的程度并且受到多種其它致敏因素的影響。在酒精性FLD中，充分地記載了與長期酗酒有關的向肝硬化的轉(zhuǎn)變，但非酒精性FLD中所涉及的過程不太清楚。

最終，未經(jīng)治療的脂肪肝疾病(包括NASH)常常發(fā)展成肝細胞癌(HCC)。據(jù)報道非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)在現(xiàn)代社會中是極其普遍的(15％至45％)。另外，據(jù)報道10％至25％的那些病例發(fā)生肝纖維化，導致肝硬化、晚期肝病或HCC。迄今為止，單一療法未被批準用于治療NAFLD或NASH。因此，對于新型化合物、其藥物組合物及使用其來治療患有脂肪肝疾病的患者的方法存在需要。

肺纖維化或肺瘢痕化是過量的纖維結(jié)締組織(纖維化)在肺中的形成或發(fā)展。肺纖維化涉及以纖維化組織逐漸交換正常的肺實質(zhì)。用瘢痕組織替代正常的肺造成氧彌散量不可逆性減少。另外，降低的順應性使得肺纖維化成為限制性肺病。它是肺實質(zhì)所固有的限制性肺病的主要原因。全世界有五百萬人受到肺纖維化的影響。據(jù)報道，肺纖維化有大范圍的發(fā)病率和患病率。

肺纖維化可為其它疾病的繼發(fā)效應。這些疾病大多數(shù)被分類成間質(zhì)性肺病。實例包括自身免疫病癥、病毒感染或?qū)Ψ蔚钠渌鼑^損傷。然而，肺纖維化也可為特發(fā)性的，并且在沒有任何已知的原因下出現(xiàn)。大部分特發(fā)性病例被診斷為特發(fā)性肺纖維化。這是被稱為尋常型間質(zhì)性肺炎(UIP)的組織/病理學特點的特征集合的排除性診斷。在任一情況下，都有越來越多的證據(jù)表明在患者亞組中的遺傳傾向性。例如，已發(fā)現(xiàn)表面活性蛋白C(SP-C)中的突變存在于具有肺纖維化病史的一些家族中。

可引起作為繼發(fā)效應的肺纖維化的疾病和病狀包括環(huán)境和職業(yè)污染物的吸入，如石棉沉著病、矽肺病及對某些氣體的暴露；過敏性肺炎，最常由吸入被細菌、真菌或動物制品污染的灰塵引起；吸煙；結(jié)締組織病，如類風濕性關節(jié)炎、SLE及硬皮??；累及結(jié)締組織的疾病，如結(jié)節(jié)病和韋格納氏(Wegener's)肉芽腫?。灰约案腥?。

作為繼發(fā)效應的肺纖維化還可由某些藥物引起，如胺碘酮、博來霉素(平陽霉素)、白消安、氨甲蝶呤及呋喃妥因。作為繼發(fā)效應的肺纖維化還可由對胸部的放射療法引起。

肺纖維化產(chǎn)生瘢痕組織。瘢痕化一旦開始發(fā)展便是永久性的。因此，治療一般限于減緩進展并通過除去或限制潛在原因進行預防。用于特發(fā)性肺纖維化的治療選擇極其受限。雖然研究試驗正在進行中，但是沒有證據(jù)顯示有藥物可以顯著治療此病狀。肺移植是嚴重病例中可用的唯一治療選擇。由于一些類型的肺纖維化可以對皮質(zhì)類固醇(如強的松)和/或抑制身體免疫系統(tǒng)的其它藥物有反應，所以有時開出這類藥物的處方以試圖減緩導致纖維化的過程。盡管如此，目前不存在已知的用于特發(fā)性肺纖維化的治療或治愈選擇。因此，需要新的治療選擇。

本文描述了以上用于治療患有糖尿病的宿主動物的化合物、其藥物組合物及方法和用途。本文還描述了以上用于治療患有FLD的宿主動物的化合物、其藥物組合物及方法和用途。本文還描述了以上用于治療患有肺纖維化和/或肝纖維化的宿主動物的化合物、其藥物組合物及方法和用途，包括預防性治療肺纖維化和/或肝纖維化。本文還描述了以上用于預防性治療處于患上HCC的風險中的宿主動物的化合物、其藥物組合物及方法和用途。

本文還描述了含有一種或多種本文所述的化合物的藥物組合物，包括單位劑量和單位劑型。一方面，所述組合物包含治療有效量的所述一種或多種用于治療患有糖尿病、FLD、纖維化疾病和/或HCC的宿主動物(包括預防性治療肺或肝纖維化和/或預防性治療HCC)的化合物。應理解的是，所述組合物可包含其它組分和/或成分，包括但不限于其它治療活性化合物和/或一種或多種載體、稀釋劑、賦形劑等、及其組合。在另一實施方案中，本文還描述了使用化合物和藥物組合物治療患有糖尿病、FLD、纖維化疾病和/或HCC的宿主動物的方法，包括預防性治療肺或肝纖維化和/或預防性治療HCC。一方面，所述方法包括向患有糖尿病、FLD、纖維化疾病和/或HCC的宿主動物施用本文所述的一種或多種化合物和/或組合物的步驟，包括預防性治療肺或肝纖維化和/或預防性治療HCC。另一方面，所述方法包括施用治療有效量的本文所述的一種或多種化合物和/或組合物用于治療患有糖尿病、FLD、纖維化疾病和/或HCC的宿主動物，包括預防性治療肺或肝纖維化和/或預防性治療HCC。在另一實施方案中，本文還描述了本文所述的化合物和組合物在制造治療患有糖尿病、FLD、纖維化疾病和/或HCC的宿主動物(包括預防性治療肺或肝纖維化和/或預防性治療HCC)的藥劑中的用途。一方面，所述藥劑包含治療有效量的本文所述的一種或多種化合物和/或組合物用于治療患有糖尿病、FLD、纖維化疾病和/或HCC的宿主動物，包括預防性治療肺或肝纖維化和/或預防性治療HCC。

應理解的是，用于治療糖尿病、FLD、纖維化疾病和/或HCC的化合物、組合物及方法和用途可聯(lián)合其它治療一起使用，包括治療潛在病因，如減少酒精的過量消耗、和/或延長含有具有高比例的來自脂質(zhì)和/或碳水化合物的卡路里的食物的膳食、施用減輕胰島素抗性、高脂血癥和/或誘發(fā)重量減輕以改善肝功能的藥物。還應理解的是，用于治療肺纖維化的化合物、組合物及方法和用途可聯(lián)合其它治療一起使用，包括治療潛在病因，如減少對可能導致肺纖維化的物質(zhì)和材料的暴露、或除去可能導致肺纖維化的條件和情況。本文中還應理解的是，本文所述的化合物可單獨或與適用于治療這類疾病的其它化合物組合使用，包括可通過相同或不同作用模式在治療上有效的那些化合物。另外，在本文中應理解本文所述的化合物可與為治療這類疾病的其它癥狀而施用的其它化合物，如為治療肥胖等而施用的化合物組合使用。

附圖簡述

圖1示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的肝臟重量。

圖2示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的全血葡萄糖水平。

圖3示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的血清乳糜微粒水平。

圖4示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的血清VLDL-膽固醇水平。

圖5示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的血清HDL-膽固醇水平。

圖6示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的血清甘油三酯水平。

圖7示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的血漿MIF水平。

圖8示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的NAFLD活性評分(NAS)。

圖9示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的天狼猩紅陽性區(qū)域。

圖10示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的G6pc mRNA表達水平。

圖11示出了在正常的、媒介物治療及索利霉素治療的測試動物中的FBP酶mRNA表達水平。

發(fā)明詳述

已出人意料地發(fā)現(xiàn)本文所述的化合物、組合物及方法適用于治療糖尿病、FLD、纖維化疾病和/或HCC，包括預防性治療肺或肝纖維化和/或預防性治療HCC。

本文所述的化合物、組合物、方法及用途出人意料地降低宿主動物中的全血葡萄糖水平。本文所述的化合物、組合物、方法和用途出人意料地減輕患有FLD的宿主動物中的肝重量和/或減小肝臟與體重的比率。本文所述的化合物、組合物、方法及用途出人意料地抑制肝臟中的脂肪積聚，這可能導致在患有FLD的宿主動物中肝臟的淺黃色著色。本文所述的化合物、組合物、方法及用途出人意料地減少、預防或減緩患有FLD的宿主動物中的肝纖維化的發(fā)病。本文所述的化合物、組合物、方法及用途出人意料地減少、預防或減緩患有FLD的宿主動物中的肝癌如HCC的發(fā)病。本文所述的化合物、組合物、方法及用途出人意料地減少、預防或減緩宿主動物中的肺纖維化的發(fā)病。

在本發(fā)明的一個說明性實施方案中，化合物、其組合物、及使用上述而進行的治療方法在本文中描述用于糖尿病。在另一實施方案中，化合物、其組合物、及使用上述而進行的治療方法在本文中描述用于治療FLD。在另一實施方案中，F(xiàn)LD選自NAFLD、ASH及NASH、或其組合。在另一實施方案中，F(xiàn)LD為NASH。在另一實施方案中，化合物、其組合物、及使用上述而進行的治療方法在本文中描述用于治療糖尿病。在另一實施方案中，糖尿病是1型DM。在另一實施方案中，糖尿病是2型DM。在另一實施方案中，糖尿病是妊娠期DM。在另一實施方案中，化合物、其組合物、及使用上述而進行的治療方法在本文中描述用于治療纖維化疾病。在另一實施方案中，化合物、其組合物、及使用上述而進行的治療方法在本文中描述用于預防性治療HCC。在另一實施方案中，化合物、其組合物、及使用上述而進行的治療方法在本文中描述用于預防和/或延遲HCC的發(fā)病。

根據(jù)本文所述的方法，所述化合物可直接或作為可包含一種或多種載體、稀釋劑或賦形劑、或其組合的藥物組合物、單位劑量或單位劑型的一部分施用。另外，本文所述的化合物、組合物、單位劑量及單位劑型適用于治療上述疾病，并且用于制造供治療上述疾病之用的藥劑。

還觀察到本文所述的化合物在肝臟組織中積聚。本文所述的化合物出人意料地不引起肝損傷，并且甚至被患有輕度、中度或甚至重度肝功能不全的宿主動物(包括人類)良好地耐受。因此，因為本文所述的化合物可靶向肝臟，所以其適用于治療肝臟疾病，包括所有類型的FLD。因此，應理解本文所述的發(fā)明不包括在治療劑量下展現(xiàn)高肝毒性的化合物，如可能在高劑量的紅霉素或克拉霉素下所發(fā)生的。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物的功效并不歸因于抗細菌作用，如對腸微生物群落的抗細菌作用。例如，本文所述的化合物不影響革蘭氏陰性腸道菌，如腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、革蘭氏陰性厭氧菌、或產(chǎn)內(nèi)毒素細菌，并且對腸道菌群具有最小的影響。

還出人意料地發(fā)現(xiàn)，在人類研究中，本文所述的化合物及其組合物在肺中積聚并且在肺中、上皮襯液中以及肺巨噬細胞中實現(xiàn)高濃度。在另一實施方案中，化合物、其組合物、及使用上述而進行的治療方法在本文中描述用于治療肺纖維化。在另一實施方案中，化合物、其組合物、及使用上述而進行的治療方法在本文中描述用于預防性治療，如用于預防和/或延遲肺纖維化的發(fā)病。應當理解，在某些情況下，提前注意到宿主動物將暴露于可能導致肺纖維化的條件或材料。在那些情況下，本文所述的化合物、組合物及方法可用于預防性治療宿主動物以減輕肺纖維化可能發(fā)生的程度，或另外，預防這類暴露于引起肺纖維化的條件或材料之后的肺纖維化的發(fā)生。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信這類預防性治療可減小可能在這類暴露于引起肺纖維化的條件或材料之后發(fā)生的炎癥的量或程度。

在另一實施方案中，化合物、其組合物、及使用上述而進行的治療方法在本文中描述用于預防性治療免疫抑制的宿主動物(包括人類)中的肺纖維化。例如，可向經(jīng)歷或計劃接受肺移植的患者施用免疫抑制劑以對抗移植組織的排斥。這類排斥據(jù)報道是在炎癥和/或纖維化之前或引起炎癥和/或纖維化。本文所述的化合物和組合物可在移植手術之前或與移植手術一起向那些患者施用以預防纖維化。

在另一實施方案中，化合物、組合物及方法在本文中描述用于治療宿主動物中的細支氣管炎，包括泛細支氣管炎、彌漫性泛細支氣管炎(DPB)、支氣管擴張等。

本發(fā)明的若干說明性實施方案是通過以下條款來描述：

一種組合物、單位劑量或單位劑型，其包含一種或多種下式的化合物

或其藥學上可接受的鹽、或其羥基或氨基前藥；其中：

X為選自由以下組成的組的二價基團：

其中X在每個(*)原子處連接；

W¹¹為羥基或其衍生物；W¹²為H、或羥基或其衍生物；或者W¹¹和W¹²與所連接的碳原子一起形成含氧和/或含氮的雜環(huán)，其中每個都任選地被取代；

Q為O或(NR,H)；其中R為氫或任選取代的烷基；或者R和W11一起形成縮醛胺醚，如任選取代的1,3-噁嗪；并且Q¹為羥基或其衍生物或氨基或其衍生物；

R^A為羥基或羥基衍生物、或連接在氧處的糖；并且Z為氫；或者R^A和Z與所連接的碳一起形成C＝O基團。

R^B為含有氨基的糖；

R^C為羥基或其衍生物；或

R^C和Q一起形成烯醇醚；或

R^C和W¹²和Q一起形成縮酮；并且

R^F為H或F。

前述條款的組合物、單位劑量或單位劑型，其中至少一種化合物具有下式

或其藥學上可接受的鹽。

前述條款的組合物、單位劑量或單位劑型，其中至少一種化合物具有下式

或其藥學上可接受的鹽；其中

其中C為H或烷基、烯基、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、芳基烷基或雜芳基烷基，其中每個都任選地被取代；

B為鍵，或者B為任選取代的雜芳基；并且

A為鍵，或者A為由O、C(O)、CR、CR₂及NR、及其組合形成的任選的接頭，其中每個R在各情況下獨立地選自不存在以形成雙鍵或三鍵、氫或任選取代的烷基。

前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型，其中至少一種化合物具有下式

或其藥學上可接受的鹽。

一種用于治療宿主動物的糖尿病的方法，所述方法包括向所述宿主動物施用有效量的前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型的步驟。

一種用于治療宿主動物的FLD的方法，所述方法包括向所述宿主動物施用有效量的前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型的步驟。

一種用于治療宿主動物的NASH的方法，所述方法包括向所述宿主動物施用有效量的前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型的步驟。

一種用于治療宿主動物的肝纖維化的方法，所述方法包括向所述宿主動物施用有效量的前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型的步驟。

一種用于預防性治療宿主動物的肝纖維化的方法，所述方法包括向所述宿主動物施用有效量的前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型的步驟。

一種用于預防性治療宿主動物的HCC的方法，所述方法包括向所述宿主動物施用有效量的前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型的步驟。

一種用于治療宿主動物的肺纖維化的方法，所述方法包括向所述宿主動物施用有效量的前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型的步驟。

一種用于預防性治療宿主動物的肺纖維化的方法，所述方法包括向所述宿主動物施用有效量的前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型的步驟。

前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型在制造用于治療宿主動物的糖尿病的藥劑中的用途。

前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型在制造用于治療宿主動物的FLD的藥劑中的用途。

前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型在制造用于治療宿主動物的NASH的藥劑中的用途。

前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型在制造用于治療或預防性治療宿主動物的肝纖維化的藥劑中的用途。

前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型在制造用于預防性治療宿主動物的HCC的藥劑中的用途。

前述條款中任一項的組合物、單位劑量或單位劑型在制造用于治療或預防性治療宿主動物的肺纖維化的藥劑中的用途。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中Z為H且R^A為羥基或其衍生物。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中Z為H且R^A為羥基或酰氧基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中Z為H且R^A為克拉定糖基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中Z為H且R^A不是克拉定糖基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中Z和R^A與所連接的碳一起形成C＝O。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為德糖胺基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B不是德糖胺基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為德糖胺基衍生物。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中與德糖胺基相比，德糖胺基衍生物具有改性的氫鍵。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中與德糖胺基相比，德糖胺基衍生物具有改性的堿度。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中與德糖胺基相比，德糖胺基衍生物的氮具有改性的氫鍵。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中與德糖胺基相比，德糖胺基衍生物的氮具有改性的堿度。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中與德糖胺基相比，德糖胺基衍生物的氧具有改性的氫鍵。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為O-酰基德糖胺基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為O-烷基德糖胺基。

前述條款的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述烷基為C₂-C₁₈烷基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為德糖胺基-N-氧化物或脫甲基德糖胺基-N-氧化物。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為脫甲基德糖胺基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為N-酰基脫甲基德糖胺基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為N取代的脫甲基德糖胺基，其中所述取代基為乙基、羥乙基、丙基、異丙基、羥丙基、丁基、異丁基、仲丁基、羥基仲丁基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基甲基或炔丙基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為N取代的雙脫甲基德糖胺基，其中所述取代基為乙基、羥乙基、丙基、異丙基、羥丙基、丁基、異丁基、仲丁基、羥基仲丁基、環(huán)丁基、環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基甲基或炔丙基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述取代基為異丙基、異丁基、環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基甲基或環(huán)丁基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述取代基為異丙基、環(huán)丁基、2-羥丙基、或2-羥基-2-甲基丙基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為N-烷基脫甲基德糖胺基，其中所述烷基為C₂-C₁₈烷基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為脫甲基德糖胺基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為N-乙基脫甲基德糖胺基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為N-(2-羥乙基)脫甲基德糖胺基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為N-炔丙基脫甲基德糖胺基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^B為下式的基團

其中每個R^N1在各情況下獨立地選自H和酰基、及烷基、環(huán)烷基、芳基烷基及雜芳基烷基，其中每個都任選地被取代，條件是至少一個R^N1不為甲基；或者兩個R^N1與所連接的氮一起形成含氮的雜環(huán)；并且R^O為H或酰基、或烷基、環(huán)烷基、芳基烷基及雜芳基烷基，其中每個都任選地被取代；或者R^O和一個R^N1與所連接的原子一起形成含氧和含氮的雜環(huán)。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中雜環(huán)為5至7元環(huán)雜環(huán)。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^N1和R^O一起形成噁唑烷酮或下式的亞氨基噁唑烷酮

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^C為羥基或烷氧基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^C為羥基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^C為甲氧基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中R^F為F。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中Q¹為羥基或其衍生物或氨基或其衍生物。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中Q¹為羥基或其衍生物。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中Q¹為羥基或酰氧基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中W¹¹和W¹²都為羥基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中W¹¹和W¹²一起形成碳酸酯。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中W¹¹為OH；且W¹²為H。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中W¹¹和W¹²與所連接的碳原子一起形成氨基甲酸酯，其中其氮被式C-B-A-的基團取代，其中C為H或烷基、烯基、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、芳基烷基或雜芳基烷基，其中每個都任選地被取代；B為鍵，或者B為任選取代的雜芳基；并且A為鍵，或者A為由O、C(O)、CR、CR₂及NR、及其組合形成的任選的接頭，其中每個R在各情況下獨立地選自不存在以形成雙鍵或三鍵、氫或任選取代的烷基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中A為亞烷基，如C₃-C₅亞烷基、或C₄亞烷基、或(CH₂)₄。前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中B為咪唑基團。前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中B為1,2,3-三唑基團。前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中C為任選取代的雜芳基或任選取代的雜芳烷基。前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中C為任選取代的苯基。前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中C為氨基取代的苯基，如3-氨基取代的苯基。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物為14-環(huán)大環(huán)。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物為15-環(huán)大環(huán)。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物選自由以下組成的組：索利霉素、羅紅霉素、阿奇霉素、氟紅霉素及地紅霉素、及其藥學上可接受的鹽、及其組合。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物為羅紅霉素或其藥學上可接受的鹽。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物為索利霉素或其藥學上可接受的鹽。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物針對紅霉素敏感細菌具有約4或更大的平均MIC₅₀。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物針對紅霉素敏感細菌具有約8或更大的平均MIC₅₀。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物針對紅霉素敏感細菌具有約16或更大的平均MIC₅₀。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物針對紅霉素敏感細菌具有約32或更大的平均MIC₅₀。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物基本上是非抗細菌性的或不具有臨床上顯著的抗細菌活性或功效。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物展現(xiàn)低肝毒性。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物不展現(xiàn)陰性QT效應，如QT和/或tQT延長。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物未將丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)增至臨床上顯著水平。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物未將天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)增至臨床上顯著水平。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物減少血清乳糜微粒。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物減少血清VLDL-膽固醇。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物減少血清LDL-膽固醇。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述化合物增加血清HDL-膽固醇。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成全血葡萄糖水平降低。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成高血糖減輕。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成肝臟糖異生作用受抑制。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成肝臟糖異生作用受抑制和/或炎癥減輕。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成葡萄糖-6-磷酸酶(G6pc)的表達(mRNA水平)或水平降低。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成果糖1,6二磷酸酶(FBP酶)的表達(mRNA水平)或水平降低。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成肝臟中的脂肪沉積減少。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成肝臟的淺黃色著色受抑制。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成肝臟重量減輕。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成肝臟與體重的比率減小。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成氣球樣變減少、肝臟氣球樣變性減輕和/或氣球樣變評分降低。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成氣球樣變減少約50％、約70％、約80％、約90％、約95％或更多。應當理解，氣球樣變可以評分0-10來表示，且因此，上述改善百分比是以相應的評分來表示，如1、2、3、4或5等評分的變化。然而，應理解當氣球樣變減少了僅僅單一指數(shù)，如從10至9、從5至4、或從2至1等等時，確立治療功效。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成氣球樣變的基本上完全不存在。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成脂肪變性減輕。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成肝纖維化減輕。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成血漿MIF增加。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成肺纖維化減輕。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法造成嗜中性粒細胞浸潤減少。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述宿主動物具有肝功能不全。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述治療對于將經(jīng)歷或正在經(jīng)歷暴露于放射(如放射療法)的宿主動物是預防性或治療性的。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述治療對于將經(jīng)歷或正在經(jīng)歷暴露于放射(如放射療法)的癌癥患者是預防性或治療性的。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信肺實質(zhì)性炎癥伴隨放射療法發(fā)生。因此，本文所述的化合物、組合物及方法可在這類治療之前并在治療后使用。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述治療對于將經(jīng)歷免疫抑制療法和/或肺移植的宿主動物是預防性或治療性的。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述方法不對總動物體重造成負面影響。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述施用步驟包括約0.1-10、0.1-5或0.3-2mg/kg bid的劑量。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述施用步驟包括約1-600、約5-500、約10-400、約100-400、約200-400、約150-350、約50-300、約100-300、約150-250、約50-200或約100-200mg的日劑量，q.d.或b.i.d施用。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述施用步驟包括約500、約450、約400、約350、約300、約250、約200、約150或約100mg的日劑量，q.d.或b.i.d施用。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述施用步驟包括約300、約275、約260、約240、約225、約200、約175、約150或約125mg的日劑量，q.d.或b.i.d施用。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述施用步驟為每日兩次(b.i.d.)。

前述條款中任一項的單位劑量、單位劑型、方法、用途或組合物，其中所述施用步驟為每日一次(q.d)。

在本文中應了解并理解，患有NASH的患者可遭受因NASH所致的心血管死亡而引起的死亡。因此，應理解，需要還具有不引起有害的心血管效應如QT效應的附加特點的化合物。

在另一實施方案中，本文所述的化合物和方法不必聯(lián)合脂質(zhì)管理療法一起使用，如共同施用他汀類等等。

在本文中已發(fā)現(xiàn)NASH可通過在某些條件下減輕肝臟的炎癥來治療。在本文中還發(fā)現(xiàn)本文所述的化合物減輕肝臟炎癥。因此，雖然不希望受理論約束，但在本文中據(jù)信化合物在治療NASH中的功效至少部分是由根據(jù)本文所述的組合物和方法施用的化合物的抗炎效應引起。

在本文中還發(fā)現(xiàn)本文所述的化合物在肝臟組織中積聚。應當理解，在許多治療領域中，由于治療劑的積聚而對肝臟產(chǎn)生副作用的可能性，肝清除是不太需要的途徑。然而，已發(fā)現(xiàn)在用于治療本文所述的疾病的治療性劑量下，本文所述的化合物充分地積聚在肝臟中的程度是有效的而不會高到引起顯著副作用的水平。

已發(fā)現(xiàn)本文所述的化合物具有有效的抗炎活性。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物、組合物、方法及用途的功效至少部分是由于這種抗炎特性。同樣不希望受理論約束，在本文中據(jù)信炎癥可在引起或加重FLD中所觀察到的肝損傷中發(fā)揮重要作用。在本文中應理解，選擇性抗炎作用可特別有用。

在每個上述和每個下述實施方案及條款中，應理解的是，結(jié)構(gòu)式不僅包括并代表化合物的所有藥學上可接受的鹽，而且包括化合物結(jié)構(gòu)式的任何及所有水合物和/或溶劑化物。應理解，某些官能團，如羥基、氨基及類似基團與水和/或各種溶劑形成復合物和/或配位化合物，呈化合物的各種物理形式。因此，應理解以上結(jié)構(gòu)式是對這類水合物和/或溶劑化物(包括藥學上可接受的溶劑化物)的描述。

在每個上述和每個下述實施方案及條款中，還應理解結(jié)構(gòu)式包括并代表每個可能的異構(gòu)體，如立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體，單獨地以及在任何及所有可能的混合物中。在每個上述和每個下述實施方案中，還應理解的是，結(jié)構(gòu)式包括并代表化合物的任何及所有結(jié)晶形式、部分結(jié)晶形式、以及非結(jié)晶和/或無定形形式。

說明性衍生物包括但不限于可由本文所述的化合物以合成方式制備的那些化合物，以及可以與本文所述的那些類似(但在起始材料的選擇上不同)的方式制備的那些化合物。應理解的是，這類衍生物可包括本文所述的化合物的前藥、包含一個或多個保護基的本文所述的化合物，包括在制備本文所述的其它化合物中使用的化合物。

應理解的是，每個上述和下述實施方案及條款可以化學上相關方式組合以產(chǎn)生本文所述的實施方案的亞組。因此，進一步應理解所有這類亞組也是本文所述的發(fā)明的說明性實施方案。

在列舉上述和下述實施方案及條款時，應理解的是，描述特點的所有可能的組合、及所有可能的亞類和亞組合。

本文所述的化合物可含有一個或多個手性中心，或可另外能夠作為多個立體異構(gòu)體存在。應理解，在一個實施方案中，本文所述的發(fā)明不限于任何特定的立體化學要求，并且所述化合物、以及包含它們的組合物、方法、用途及藥劑可為光學純的，或者可為多種立體異構(gòu)體混合物中的任一種，包括對映異構(gòu)體的外消旋及其它混合物、非對映異構(gòu)體的其它混合物等等。還應理解，立體異構(gòu)體的這類混合物可包括在一個或多個手性中心處的單一立體化學構(gòu)型，同時包括在一個或多個其它手性中心處的立體化學構(gòu)型的混合物。

類似地，本文所述的化合物可包括幾何中心，如順式、反式、E和Z雙鍵。應理解的是，在另一實施方案中，本文所述的發(fā)明不限于任何特定的幾何異構(gòu)體要求，并且所述化合物、以及包含它們的組合物、方法、用途及藥劑可為純的，或者可為多種幾何異構(gòu)體混合物中的任一種。還應理解，幾何異構(gòu)體的這類混合物可包括在一個或多個雙鍵處的單一構(gòu)型，同時包括在一個或多個其它雙鍵處的幾何結(jié)構(gòu)的混合物。

如本文所用，術語“烷基”包含碳原子鏈，其任選地為支鏈。如本文所用，術語“烯基”和“炔基”各自包含碳原子鏈，其任選地為支鏈并且分別包含至少一個雙鍵或三鍵。應理解，炔基也可包含一個或多個雙鍵。進一步應理解，在某些實施方案中，烷基有利地具有有限的長度，包括C₁-C₂₄、C₁-C₁₂、C₁-C₈、C₁-C₆及C₁-C₄、和C₂-C₂₄、C₂-C₁₂、C₂-C₈、C₂-C₆及C₂-C₄等等。示例性地，這類特別有限長度的烷基可被稱為低級烷基，包括C₁-C₈、C₁-C₆及C₁-C₄、和C₂-C₈、C₂-C₆及C₂-C₄等等。進一步應理解，在某些實施方案中，烯基和/或炔基可各自有利地具有有限的長度，包括C₂-C₂₄、C₂-C₁₂、C₂-C₈、C₂-C₆及C₂-C₄、和C₃-C₂₄、C₃-C₁₂、C₃-C₈、C₃-C₆及C₃-C₄等等。示例性地，這類特別有限長度的烯基和/或炔基可被稱為低級烯基和/或炔基，包括C₂-C₈、C₂-C₆及C₂-C₄、和C₃-C₈、C₃-C₆及C₃-C₄等等。在本文中應理解，較短的烷基、烯基和/或炔基可向化合物添加更少的親油性且因此將具有不同的藥代動力學行為。在本文所述的發(fā)明的實施方案中，應理解，在各情況下，引述烷基是指如本文中所定義的烷基，且任選地低級烷基。在本文所述的發(fā)明的實施方案中，應理解，在各情況下，引述烯基是指如本文中所定義的烯基，且任選地低級烯基。在本文所述的發(fā)明的實施方案中，應理解，在各情況下，引述炔基是指如本文中所定義的炔基，且任選地低級炔基。說明性烷基、烯基、及炔基是，但不限于，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、3-戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等等，以及含有一個或多個雙鍵和/或三鍵的相應基團，或其組合。

如本文所用，術語“亞烷基”包含二價碳原子鏈，其任選地為支鏈。如本文所用，術語“亞烯基”和“亞炔基”包含二價碳原子鏈，其任選地為支鏈并且分別包含至少一個雙鍵或三鍵。應理解，亞炔基也可包含一個或多個雙鍵。進一步應理解，在某些實施方案中，亞烷基有利地具有有限的長度，包括C₁-C₂₄、C₁-C₁₂、C₁-C₈、C₁-C₆及C₁-C₄、和C₂-C₂₄、C₂-C₁₂、C₂-C₈、C₂-C₆及C₂-C₄等等。示例性地，這類特別有限長度的亞烷基可被稱為低級亞烷基，包括C₁-C₈、C₁-C₆及C₁-C₄、和C₂-C₈、C₂-C₆及C₂-C₄等等。進一步應理解，在某些實施方案中，亞烯基和/或亞炔基可各自有利地具有有限的長度，包括C₂-C₂₄、C₂-C₁₂、C₂-C₈、C₂-C₆及C₂-C₄、和C₃-C₂₄、C₃-C₁₂、C₃-C₈、C₃-C₆及C₃-C₄等等。示例性地，這類特別有限長度的亞烯基和/或亞炔基可被稱為低級亞烯基和/或亞炔基，包括C₂-C₈、C₂-C₆及C₂-C₄、和C₃-C₈、C₃-C₆及C₃-C₄等等。在本文中應理解，較短的亞烷基、亞烯基和/或亞炔基可向化合物添加更少的親油性且因此將具有不同的藥代動力學行為。在本文所述的發(fā)明的實施方案中，應理解，在各情況下，引述亞烷基、亞烯基和亞炔基是指如本文中所定義的亞烷基、亞烯基和亞炔基，且任選地低級亞烷基、亞烯基和亞炔基。說明性烷基是，但不限于，亞甲基、亞乙基、亞正丙基、亞異丙基、亞正丁基、亞異丁基、亞仲丁基、亞戊基、1,2-亞戊基、1,3-亞戊基、亞己基、亞庚基、亞辛基等等。

如本文所用，術語“環(huán)烷基”包含碳原子鏈，其任選地為支鏈，其中鏈的至少一部分呈環(huán)狀。應理解，環(huán)烷基烷基是環(huán)烷基的亞組。應理解，環(huán)烷基可以是多環(huán)的。說明性環(huán)烷基包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、2-甲基環(huán)丙基、環(huán)戊基乙-2-基、金剛烷基等等。如本文所用，術語“環(huán)烯基”包含碳原子鏈，其任選地為支鏈，并且包含至少一個雙鍵，其中鏈的至少一部分呈環(huán)狀。應理解，一個或多個雙鍵可處于環(huán)烯基的環(huán)狀部分和/或環(huán)烯基的非環(huán)狀部分中。應理解，環(huán)烯基烷基和環(huán)烷基烯基各自是環(huán)烯基的亞組。應理解，環(huán)烷基可以是多環(huán)的。說明性環(huán)烯基包括但不限于環(huán)戊烯基、環(huán)己基乙烯-2-基、環(huán)庚烯基丙烯基等等。進一步應理解，形成環(huán)烷基和/或環(huán)烯基的鏈有利地具有有限的長度，包括C₃-C₂₄、C₃-C₁₂、C₃-C₈、C₃-C₆及C₅-C₆。在本文中應理解，分別形成環(huán)烷基和/或環(huán)烯基的較短的烷基和/或烯基鏈可向化合物添加更小的親油性且因此將具有不同的藥代動力學行為。

如本文所用，術語“雜烷基”包含含有碳和至少一個雜原子的原子鏈，并且任選地為支鏈。說明性雜原子包括氮、氧及硫。在某些變型中，說明性雜原子還包括磷和硒。如本文所用，包含雜環(huán)基和雜環(huán)的術語“環(huán)雜烷基”，包含含有碳及至少一個雜原子(如雜烷基)且任選為支鏈的原子鏈，其中鏈的至少一部分呈環(huán)狀。說明性雜原子包括氮、氧及硫。在某些變型中，說明性雜原子還包括磷和硒。說明性環(huán)雜烷基包括但不限于四氫呋喃基、吡咯啶基、四氫哌喃基、哌啶基、嗎啉基、哌嗪基、高哌嗪基、奎寧環(huán)基等等。

如本文所用，術語“芳基”包含單環(huán)和多環(huán)芳族碳環(huán)基團，其各自可任選被取代。本文所述的說明性芳族碳環(huán)基團包括但不限于苯基、萘基等等。如本文所用，術語“雜芳基”包含芳族雜環(huán)基團，其各自可任選被取代。說明性芳族雜環(huán)基團包括但不限于吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、四嗪基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、異噁唑基、異噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并異噁唑基、苯并異噻唑基等等。

如本文所用，術語“氨基”包括基團NH₂、烷基氨基及二烷基氨基，其中二烷基氨基中的兩個烷基可以相同或不同，即烷基烷基氨基。示例性地，氨基包括甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、甲基乙基氨基等等。另外，應理解當氨基修飾另一個術語或被另一個術語修飾時，如氨基烷基或酰氨基，術語氨基的以上變型包括在其中。示例性地，氨基烷基包括H₂N-烷基、甲基氨基烷基、乙基氨基烷基、二甲基氨基烷基、甲基乙基氨基烷基等等。示例性地，酰氨基包括?；谆被?、?；一被鹊?。

如本文所用，術語“氨基及其衍生物”包括如本文所述的氨基、以及烷基氨基、烯基氨基、炔基氨基、雜烷基氨基、雜烯基氨基、雜炔基氨基、環(huán)烷基氨基、環(huán)烯基氨基、環(huán)雜烷基氨基、環(huán)雜烯基氨基、芳基氨基、芳基烷基氨基、芳基烯基氨基、芳基炔基氨基、雜芳基氨基、雜芳基烷基氨基、雜芳基烯基氨基、雜芳基炔基氨基、酰氨基等等，其各自任選被取代。術語“氨基衍生物”還包括脲、氨基甲酸酯等等。

如本文所用，術語“羥基及其衍生物”包括OH、以及烷氧基、烯氧基、炔氧基、雜烷氧基、雜烯氧基、雜炔氧基、環(huán)烷氧基、環(huán)烯氧基、環(huán)雜烷氧基、環(huán)雜烯氧基、芳氧基、芳基烷氧基、芳基烯氧基、芳基炔氧基、雜芳氧基、雜芳基烷氧基、雜芳基烯氧基、雜芳基炔氧基、酰氧基等等，其各自任選被取代。術語“羥基衍生物”還包括氨基甲酸酯等等。

如本文所用，術語“硫基及其衍生物”包括SH、以及烷硫基、烯硫基、炔硫基、雜烷硫基、雜烯硫基、雜炔硫基、環(huán)烷硫基、環(huán)烯硫基、環(huán)雜烷硫基、環(huán)雜烯硫基、芳硫基、芳基烷硫基、芳基烯硫基、芳基炔硫基、雜芳硫基、雜芳基烷硫基、雜芳基烯硫基、雜芳基炔硫基、酰硫基等等，其各自任選被取代。術語“硫基衍生物”還包括硫代氨基甲酸酯等等。

如本文所用，術語“酰基”包括甲?；?、以及烷基羰基、烯基羰基、炔基羰基、雜烷基羰基、雜烯基羰基、雜炔基羰基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烯基羰基、環(huán)雜烷基羰基、環(huán)雜烯基羰基、芳基羰基、芳基烷基羰基、芳基烯基羰基、芳基炔基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基烯基羰基、雜芳基炔基羰基、酰基羰基等等，其各自任選被取代。

如本文所用，術語“羰基及其衍生物”包括基團C(O)、C(S)、C(NH)及其取代的氨基衍生物。

如本文所用，術語“羧酸及其衍生物”包括基團CO₂H及其鹽、及其酯和酰胺、以及CN。

如本文所用，術語“亞磺酸或其衍生物”包括SO₂H及其鹽、及其酯和酰胺。

如本文所用，術語“磺酸或其衍生物”包括SO₃H及其鹽、及其酯和酰胺。

如本文所用，術語“磺?；卑ㄍ榛酋；⑾┗酋；⑷不酋；?、雜烷基磺酰基、雜烯基磺?；㈦s炔基磺?；?、環(huán)烷基磺?；?、環(huán)烯基磺酰基、環(huán)雜烷基磺酰基、環(huán)雜烯基磺?；⒎蓟酋；⒎蓟榛酋；?、芳基烯基磺酰基、芳基炔基磺酰基、雜芳基磺酰基、雜芳基烷基磺酰基、雜芳基烯基磺?；?、雜芳基炔基磺?；?、?；酋；鹊龋涓髯匀芜x被取代。

如本文所用，術語“次膦酸或其衍生物”包括P(R)O₂H及其鹽、及其酯和酰胺，其中R為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜烷基、雜烯基、環(huán)雜烷基、環(huán)雜烯基、芳基、雜芳基、芳基烷基或雜芳基烷基，其各自任選被取代。

如本文所用，術語“膦酸或其衍生物”包括PO₃H₂及其鹽、及其酯和酰胺。

如本文所用，術語“羥氨基及其衍生物”包括NHOH，以及烷氧基NH烯氧基NH炔氧基NH雜烷氧基NH雜烯氧基NH雜炔氧基NH環(huán)烷氧基NH環(huán)烯氧基NH環(huán)雜烷氧基NH環(huán)雜烯氧基NH芳氧基NH芳基烷氧基NH芳基烯氧基NH芳基炔氧基NH雜芳氧基NH雜芳基烷氧基NH雜芳基烯氧基NH雜芳基炔氧基NH酰氧基等等，其各自任選被取代。

如本文所用，術語“肼基及其衍生物”包括烷基NHNH、烯基NHNH、炔基NHNH、雜烷基NHNH、雜烯基NHNH、雜炔基NHNH、環(huán)烷基NHNH、環(huán)烯基NHNH、環(huán)雜烷基NHNH、環(huán)雜烯基NHNH、芳基NHNH、芳基烷基NHNH、芳基烯基NHNH、芳基炔基NHNH、雜芳基NHNH、雜芳基烷基NHNH、雜芳基烯基NHNH、雜芳基炔基NHNH、?；鵑HNH等等，其各自任選被取代。

如本文所用的術語“任選取代的”包括在任選取代的基團上用其它官能團置換氫原子。這類其它官能團示例性地包括但不限于氨基、羥基、鹵基、硫醇、烷基、鹵烷基、雜烷基、芳基、芳基烷基、芳基雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基雜烷基、硝基、磺酸及其衍生物、羧酸及其衍生物等等。示例性地，氨基、羥基、硫醇、烷基、鹵烷基、雜烷基、芳基、芳基烷基、芳基雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基雜烷基和/或磺酸中的任一者任選被取代。

如本文所用，術語“任選取代的芳基”和“任選取代的雜芳基”包括在任選取代的芳基或雜芳基上用其它官能團置換氫原子。這類其它官能團，在本文中也分別稱為芳基取代基或雜芳基取代基，示例性地包括但不限于氨基、羥基、鹵基、硫基、烷基、鹵烷基、雜烷基、芳基、芳基烷基、芳基雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基雜烷基、硝基、磺酸及其衍生物、羧酸及其衍生物等等。示例性地，氨基、羥基、硫基、烷基、鹵烷基、雜烷基、芳基、芳基烷基、芳基雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基雜烷基和/或磺酸中的任一者任選被取代。

示例性取代基包括但不限于基團-(CH₂)_xZ^X，其中x為0-6的整數(shù)并且Z^X選自鹵素、羥基、烷酰氧基，包括C₁-C₆烷酰氧基、任選取代的芳酰氧基、烷基，包括C₁-C₆烷基、烷氧基，包括C₁-C₆烷氧基、環(huán)烷基，包括C₃-C₈環(huán)烷基、環(huán)烷氧基，包括C₃-C₈環(huán)烷氧基、烯基，包括C₂-C₆烯基、炔基，包括C₂-C₆炔基、鹵烷基，包括C₁-C₆鹵烷基、鹵烷氧基，包括C₁-C₆鹵烷氧基、鹵環(huán)烷基，包括C₃-C₈鹵環(huán)烷基、鹵環(huán)烷氧基，包括C₃-C₈鹵環(huán)烷氧基、氨基、C₁-C₆烷基氨基、(C₁-C₆烷基)(C₁-C₆烷基)氨基、烷基羰基氨基、N-(C₁-C₆烷基)烷基羰基氨基、氨基烷基、C₁-C₆烷基氨基烷基、(C₁-C₆烷基)(C₁-C₆烷基)氨基烷基、烷基羰基氨基烷基、N-(C₁-C₆烷基)烷基羰基氨基烷基、氰基及硝基；或Z^X選自-CO₂R⁴和-CONR⁵R⁶，其中R⁴、R⁵及R⁶在每次出現(xiàn)時各自獨立地選自氫、C₁-C₆烷基、芳基-C₁-C₆烷基及雜芳基-C₁-C₆烷基。

如本文所用的術語“前藥”一般指當向生物系統(tǒng)施用時由于一個或多個自發(fā)的化學反應、酶催化的化學反應和/或代謝化學反應或其組合而生成生物活性化合物的任何化合物。在體內(nèi)，前藥通常受到酶(如酯酶、酰胺酶、磷酸酶等)、簡單生化、或其它體內(nèi)過程的作用以釋放或再生出藥理學活性更強的藥物。此活化可通過內(nèi)源性宿主酶或在施用前藥之前、之后或期間向宿主施用的非內(nèi)源性酶的作用而發(fā)生。前藥使用的其它細節(jié)描述于美國專利號5,627,165中。應當理解，一旦實現(xiàn)了目標如靶向遞送、安全性、穩(wěn)定性等等，前藥便有利地轉(zhuǎn)化為原始藥物，然后接著快速消除形成前藥的基團的釋放的剩余部分。

前藥可通過將最終在體內(nèi)分解的基團連接至化合物上存在的一個或多個官能團如-OH-、-SH、-CO₂H、-NR₂而從本文所述的化合物制備。說明性前藥包括但不限于羧酸酯，其中基團為烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、酰氧基烷基、烷氧基羰基氧基烷基；以及羥基、硫醇和胺的酯，其中所連接的基團為?；?、烷氧羰基、氨基羰基、磷酸酯或硫酸酯。說明性酯，也稱為活性酯，包括但不限于1-茚滿基、N-氧基琥珀酰亞胺；酰氧基烷基，如乙酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基、β-乙酰氧基乙基、β-新戊酰氧基乙基、1-(環(huán)己基羰氧基)丙-1-基、(1-氨乙基)羰氧基甲基等等；烷氧基羰基氧基烷基，如乙氧基羰基氧基甲基、α-乙氧基羰基氧基乙基、β-乙氧基羰基氧基乙基等等；二烷基氨基烷基，包括二(低級烷基)氨基烷基，如二甲基氨基甲基、二甲基氨基乙基、二乙基氨基甲基、二乙基氨基乙基等等；2-(烷氧羰基)-2-烯基，如2-(異丁氧基羰基)戊-2-烯基、2-(乙氧羰基)丁-2-烯基等等；以及內(nèi)酯基團，如酞基、二甲氧基酞基等等。

其它說明性前藥含有化學部分如酰胺或磷基團，用于提高本文所述的化合物的溶解度和/或穩(wěn)定性。氨基的其它說明性前藥包括但不限于(C₃-C₂₀)烷?；?；鹵基-(C₃-C₂₀)烷?；?；(C₃-C₂₀)烯酰基；(C₄-C₇)環(huán)烷?；?；(C₃-C₆)-環(huán)烷基(C₂-C₁₆)烷?；?；任選取代的芳酰基，如未被取代的芳?；虮?至3個選自由以下組成的組的取代基取代的芳?；蝴u素、氰基、三氟甲磺酰氧基、(C₁-C₃)烷基及(C₁-C₃)烷氧基，其各自任選地進一步被1至3個鹵素原子中的一個或多個取代；任選取代的芳基(C₂-C₁₆)烷?；腿芜x取代的雜芳基(C₂-C₁₆)烷?；?，如未被取代的或被1至3個選自由以下組成的組的取代基取代的芳基或雜芳基：鹵素、(C₁-C₃)烷基及(C₁-C₃)烷氧基，其各自任選地進一步被1至3個鹵素原子取代；及任選取代的雜芳基烷?；湓陔s芳基部分中具有1至3個選自O、S及N的雜原子且在烷酰基部分中具有2至10個碳原子，如未被取代的或被1至3個選自由以下組成的組的取代基取代的雜芳基：鹵素、氰基、三氟甲磺酰氧基、(C₁-C₃)烷基及(C₁-C₃)烷氧基，其各自任選地進一步被1至3個鹵素原子取代。所說明的基團僅是示例性的，而非窮舉性的，并且可通過常規(guī)方法來制備。

應當理解前藥本身未必具有顯著的生物活性，但相反在體內(nèi)施用之后將經(jīng)歷一個或多個自發(fā)的化學反應、酶催化的化學反應和/或代謝化學反應、或其組合以產(chǎn)生本文所述的化合物，所述化合物具有生物活性或為生物活性化合物的前體。然而，應了解，在一些情況下，前藥具有生物活性。還應了解，前藥可經(jīng)常用來通過改善口服生物利用度、藥代動力學半衰期等等來改善藥物功效或安全性。前藥還指本文所述的化合物的衍生物，其包含只是掩蓋不合需要的藥物特性或改善藥物遞送的基團。舉例來說，本文所述的一種或多種化合物可展現(xiàn)不合需要的特性，該特性有利地被抑制或減至最小，其可能在臨床藥物應用中變成藥理學、制藥學或藥代動力學屏障，如低的口服藥物吸收、部位特異性的缺乏、化學不穩(wěn)定性、毒性、以及不良的患者接受度(不良的味道、氣味、注射部位處的疼痛等等)等等。在本文中應了解，前藥或使用可逆衍生物的其它策略可適用于優(yōu)化藥物的臨床應用。

如本文所用，術語“離去基團”是指在其所連接的原子上生成親電子位點以使得親核試劑可添加到原子上的親電子位點的反應性官能團。說明性離去基團包括但不限于鹵素、任選取代的苯酚、酰氧基、磺酰氧基等等。應理解，這類離去基團可在烷基、酰基等上。這類離去基團在本文中還可稱為活化基團，如當離去基團存在于?；蠒r。另外，常規(guī)的肽、酰胺、及酯偶合劑如但不限于PyBop、BOP-Cl、BOP、五氟苯酚、異丁基氯甲酸酯等等形成各種中間體，包括在羰基上的如本文所定義的離去基團。

應理解的是，在本文所公開的每個情況下，對于任何變量的整數(shù)范圍的引述表示所引述范圍、在該范圍內(nèi)的每個單獨成員、以及該變量的每個可能的子范圍。舉例來說，對n為0至8的整數(shù)的引述表示該范圍，0、1、2、3、4、5、6、7及8的單獨和可選值，如n為0，或n為1，或n為2等。另外，對n為0至8的整數(shù)的引述還表示每一個和每個子范圍，其各自可成為進一步的實施方案的基礎，如n為1至8、1至7、1至6、2至8、2至7、1至3、2至4等的整數(shù)。

如本文所用，術語“組合物”一般是指包含規(guī)定量的特定成分的任何產(chǎn)物，以及由規(guī)定量的特定成分的組合直接或間接地產(chǎn)生的任何產(chǎn)物。應理解的是，本文所述的組合物可由本文所述的分離的化合物或由本文所述化合物的鹽、溶液、水合物、溶劑化物及其它形式制備。還應理解，所述組合物可由本文所述化合物的各種無定形、非無定形、部分結(jié)晶、結(jié)晶和/或其它形態(tài)形式制備。還應理解，所述組合物可由本文所述化合物的各種水合物和/或溶劑化物制備。因此，引述本文所述化合物的這類藥物組合物應被理解為包括本文所述化合物的各種形態(tài)形式和/或溶劑化物或水合物形式中的每一種或任何組合。另外，應理解所述組合物可由本文所述化合物的各種共晶體制備。

示例性地，組合物可包含一種或多種載體、稀釋劑和/或賦形劑。本文所述的化合物、或含有其的組合物可以治療有效量，以適于本文所述方法的任何常規(guī)劑型被配制。本文所述的化合物、或含有其的組合物(包括這類制劑)可通過本文所述方法的廣泛多種常規(guī)途徑，且以廣泛多種劑量形式，利用已知操作(一般參見Remington:The Science and Practice of Pharmacy,(第21版,2005))來施用。

如本文所用的術語“治療有效量”是指在由研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師所尋求的組織系統(tǒng)、動物或人中引起生物或藥物反應(包括減輕所治療的疾病或病癥的癥狀)的活性化合物或藥劑的量。一方面，治療有效量是以可適于任何醫(yī)療的合理的效益/風險比治療或減輕疾病或疾病的癥狀的量。然而，應理解的是本文所述化合物和組合物的每日總使用量可由主治醫(yī)師在合理的醫(yī)學判斷范圍內(nèi)決定。對于任何具體患者的特定治療有效劑量水平將取決于多種因素，包括所治療的病癥和該病癥的嚴重性；所采用的特定化合物的活性；所用的特定組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食；所用特定化合物的施用時間、施用途徑及排泄速率；治療的持續(xù)時間；與所用的特定化合物組合或同時使用的藥物；以及為研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或一般技術的其它臨床醫(yī)師所熟知的類似因素。

還應了解治療有效量，不管是指單一療法或組合療法，都根據(jù)可能在本文所述的一種或多種化合物的施用期間出現(xiàn)的任何毒性或其它不希望的副作用而被有利地選擇。此外，應當理解，本文所述的共同治療可允許施用較低劑量的顯示這種毒性或其它不希望的副作用的化合物，其中那些較低劑量低于毒性閾值或與另外將在共同治療不存在下所施用的相比在治療窗中的下限。

除本文所述的說明性劑量和給藥方案之外，應理解本文所述化合物的任一種或混合物的有效量可由主診醫(yī)師或內(nèi)科醫(yī)師通過利用已知技術和/或通過觀察在類似情況下獲得的結(jié)果容易地確定。在確定有效量或劑量時，主診醫(yī)師或內(nèi)科醫(yī)師考慮了許多因素，包括但不限于哺乳動物的種類(包括人)、其體型大小、年齡及一般健康狀況、所涉及的特定疾病或病癥、疾病或病癥的受累程度或嚴重性、個體患者的反應、所施用的特定化合物、施用模式、所施用制劑的生物利用度特征、所選的給藥方案、同期藥物的使用、及其它有關狀況。

要求保護的組合的每種化合物的劑量取決于若干因素，包括：施用方法、所治療的病狀、病狀嚴重性、病狀是否將被治療或預防、以及有待治療的人的年齡、體重及健康狀況。另外，有關特定患者的藥物基因組學(基因型對治療劑的藥代動力學、藥效學或功效概況的影響)信息可影響所用的劑量。

應理解，在本文所述的方法中，共同施用或組合的單個組分可通過任何合適的方法，同時、共同、連續(xù)、單獨或以單一藥物制劑施用。當共同施用的化合物或組合物以單獨的劑型施用時，對于每種化合物每天施用的劑量數(shù)量可以相同或不同。所述化合物或組合物可經(jīng)由相同或不同的施用途徑施用。所述化合物或組合物可根據(jù)同時或交替的方案，在治療過程期間的相同或不同時間，以分開或單一形式同時施用。

如本文所用的術語“施用”包括將本文所述的化合物和組合物引入宿主動物中的所有手段，包括但不限于口服(po)、靜脈內(nèi)(iv)、肌內(nèi)(im)、皮下(sc)、經(jīng)皮、吸入、頰內(nèi)、眼部、舌下、陰道、直腸等等。本文所述的化合物和組合物可以含有常規(guī)無毒的藥學上可接受的載體、佐劑和/或媒介物的單位劑型和/或制劑施用。

用于口服的說明性形式包括片劑、膠囊、酏劑、糖漿劑等等。

用于腸胃外施用的說明性途徑包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、硬膜外、尿道內(nèi)、胸骨內(nèi)、肌內(nèi)和皮下、以及腸胃外施用的任何其它本領域認可的途徑。

示例性地，施用包括全身和局部使用，如當局部地施用于疾病、損傷或缺陷部位、或特定的器官或組織系統(tǒng)時。說明性局部施用可在開放手術期間或當疾病、損傷或缺陷部位可達時的其它操作期間進行?；蛘?，局部施用可使用腸胃外遞送進行，其中本文所述的化合物或組合物局部地沉積在所治療的宿主動物中的該部位而不會一般分配到多個其它非靶部位。進一步應了解，局部施用可直接在損傷部位中或局部地在周圍組織中。本文中還描述了關于局部遞送到特定的組織類型如器官等的類似變型。

取決于本文所述的疾病、施用途徑和/或化合物和/或組合物是否局部或全身施用，本文中考慮了大范圍的容許劑量，包括落在約1μg/kg至約1g/kg范圍內(nèi)的劑量。劑量可為單次或分次的，并且可根據(jù)廣泛多種方案施用，包括每天一次、每天兩次、每天三次、或甚至每隔一天一次、每周一次、每月一次、每季度一次等等。在這些情況的每一個中，應理解本文所述的治療有效量對應于施用實例，或可選地對應于總每日、每周、每月或每季度劑量，如由給藥方案所確定。

本文所述的化合物、組合物及使用本文所述的一種或多種化合物治療或改善FLD或肺纖維化的一個或多個效應的方法的有效用途可基于動物模型，如疾病的鼠、犬、豬及非人靈長類動物模型。舉例來說，應理解人的FLD或肺纖維化可以功能喪失和/或癥狀發(fā)展為特征，其各自都可在動物，如小鼠及其它替代測試動物(如本文所述的那些)中引發(fā)。

以下實施例進一步說明本發(fā)明的具體實施方案；然而，以下說明性實施例不應被解釋為以任何方式限制本發(fā)明。

實施例

實施例。在本文中使用以下縮寫：丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)；蘇木精和曙紅(HE)；高脂飲食(HFD)；鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶(MMLV-RT)；非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)；NAFLD活動性評分(NAS)；非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；標準偏差(SD)；不含特定病原體(SPF)；Stelic動物模型(STAM)；以及鏈脲霉素(STZ)。

實施例。示例性地，將測試化合物在媒介物中，如在0.5％甲基纖維素+0.2％80中配制，并且經(jīng)口施用，如以每劑量10mL/kg的體積。

實施例。NASH-HCC(STAM^TM)模型。C57BL/6(妊娠15日的雌性)小鼠是獲自Charles River Laboratories Japan(Kanagawa,Japan)。為研究選出雄性幼仔。通過在出生之后2天單次皮下注射200μg鏈脲霉素(STZ,Sigma-Aldrich,USA)溶液，然后從4周齡開始喂食HFD(57千卡％脂肪，目錄號：HFD32，CLEA Japan,Japan)在雄性小鼠中誘發(fā)NASH。在5周齡時，小鼠被分成對照組和一個或多個治療組(一般每組8只小鼠)。在9周齡時處死動物，并且進行生化、組織及基因表達分析。

研究中使用的所有動物都被圈養(yǎng)并根據(jù)當?shù)匾?guī)定來照料。將測試動物維持在SPF設施中的溫度(23±2℃)、濕度(45±10％)、光照(12小時的人造光暗周期；光照從8:00到20:00)及空氣交換的控制條件下。在實驗室中維持高壓(20±4Pa)。將測試動物圈養(yǎng)在聚碳酸酯籠KN-600(Natsume Seisakusho,Japan)中，每籠最多4只小鼠。滅菌的PULMASμ(Material Research Center,Japan)用于鋪墊并且每周更換一次。隨意供應滅菌的固體HFD，置于籠子之上的金屬蓋中。從配備有橡皮塞和吸管的水瓶中隨意供應純水。水瓶每周更換一次，清潔并在高壓滅菌器中滅菌并且重復利用。

一般而言，升高的NAFLD活動性評分(NAS)≥5，脂肪變性，并且升高的ALT到第6周時明顯，NASH到第7周時明顯，竇周纖維化到第9周時明顯，小結(jié)節(jié)到第12周時明顯，并且HCC到第16周時明顯。在本文中應理解，小鼠中的竇周纖維化為人中NASH的模型(Fujii等人,Med Mol Morphol 46:141-152(2013))。

在第5-9周期間(起始于第35±2天)，測試化合物以稀釋至10mL/kg的不同劑量并且根據(jù)不同的給藥方案施用(一般經(jīng)口)于治療組(每組8只小鼠)，而第二組(8只小鼠)僅施用媒介物。在第9周處死動物。

實施例。全血和血漿生化的測量。使用LIFE CHECK(EIDIA,Japan)在全血中測量非空腹血糖。對于血漿生化，在具有抗凝劑(Novo-Heparin,Mochida Pharmaceutical,Japan)的聚丙烯試管中收集血液并在4℃下在1,000xg下離心15分鐘。收集上清液并且在-80℃下儲存直到使用。通過FUJI DRI-CHEM 7000(Fujifilm,Japan)測量血漿ALT水平。血漿胰島素、MIF及IL-22分別通過超敏感的小鼠胰島素ELISA試劑盒(Morinaga Institute of Biological science,Japan)、小鼠巨噬細胞遷移抑制因子(MIF)ELISA(Kamiya Biomedical,USA)、Quantikine ELISA小鼠/大鼠IL-22免疫測定試劑盒(R&D Systems,USA)來量化。

實施例。血清生化的測量。對于血清生化，在無抗凝劑的聚丙烯試管中收集血液并在室溫下孵育30分鐘，在4℃下1小時，然后在4℃下在1,000xg下離心15分鐘。收集上清液并且儲存在-80℃下直到使用。通過Skylight Biotech Inc.(Japan)的HPLC量化血清甘油三酯、HDL-膽固醇、LDL-膽固醇、VLDL-膽固醇以及乳糜微粒(ULDL)。

實施例。肝臟生化-肝臟甘油三酯含量的測量。肝臟總脂質(zhì)提取物是通過Folch方法(Folch J.等人,J.Biol.Chem.,1957；226:497)獲得。將肝臟樣品在氯仿-甲醇(2:1，v/v)中均化并在室溫下孵育過夜。在用氯仿-甲醇-水(8:4:3，v/v/v)洗滌之后，將提取物蒸發(fā)至干燥并溶于異丙醇中。肝臟甘油三酯(TG)和膽固醇含量分別通過甘油三酯E-測試和膽固醇E-測試(Wako Pure Chemical Industries,Japan)來測量。當甘油三酯含量超過檢測極限時，在異丙醇中將提取物稀釋2倍。

實施例。組織病理學分析。對于HE染色，對布安溶液(Bouin’s solution)中預固定的左側(cè)肝組織的石蠟塊進行切片并且用Lillie-Mayer蘇木精(Muto Pure Chemicals,Japan)和曙紅溶液(Wako Pure Chemical Industries)染色。根據(jù)Kleiner標準(Kleiner DE.等人,Hepatology,2005；41:1313)計算NAFLD活動性評分(NAS)。NAS≥5伴有脂肪變性和肝細胞氣球樣變一般被診斷為NASH。

實施例。為了目測膠原蛋白沉積(纖維化的量度)，使用苦天狼星紅溶液(Waldeck,Germany)染色布安固定的左側(cè)肝臟切片。

實施例。對于免疫組織化學(炎癥的量度)，從包埋在組織-Tek O.C.T.化合物中的冷凍的肝組織上進行切片并且固定于丙酮中。使用0.03％H₂O₂阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性5分鐘，然后用Block Ace(Dainippon Sumitomo Pharma,Japan)孵育10分鐘。將切片用抗F4/80抗體(BMA Biomedicals,Switzerland)的200倍稀釋液、抗CK-18抗體(LifeSpan BioSciences,USA)的50倍稀釋液或抗Gr-1抗體(培養(yǎng)上清液)在4℃下孵育過夜。F4/80是肝臟中的巨噬細胞和枯否(Kupffer)細胞的標記物；CK-18抗體測量受損的肝細胞中的細胞骨架；并且抗Gr-1抗體測量嗜中性粒細胞反應。在用二級抗體(HRP-山羊抗大鼠抗體，Invitrogen,USA)孵育之后，使用3,3’-二氨基聯(lián)苯胺/H2O2溶液(Nichirei,Japan)進行酶-底物反應。

實施例。對于纖維化區(qū)域的定量分析，使用數(shù)字照相機(DFC280；Leica,Germany)在200倍放大率下圍繞中央靜脈獲取天狼星紅染色切片的明場圖像，并且使用ImageJ軟件(美國國立衛(wèi)生研究院(National Institute of Health),USA)測量5個場/切片中的陽性區(qū)域。對于炎癥區(qū)域的定量分析，使用數(shù)字照相機(DFC280；Leica,Germany)在200倍放大率下圍繞中央靜脈獲取F4/80免疫染色切片的明場圖像，并且使用ImageJ軟件(美國國立衛(wèi)生研究院,USA)測量5個場/切片中的陽性區(qū)域。

實施例。統(tǒng)計檢驗。在GraphPad Prism 4(GraphPad Software,USA)或等效裝置上使用學生t檢驗進行統(tǒng)計分析。P值<0.05被認為是統(tǒng)計上顯著的。當單尾t檢驗恢復P值<0.10時，假定一種趨勢或傾向。結(jié)果表示為平均值±SD。媒介物治療組的統(tǒng)計顯著性一般是指與正常組的比較，視情況而定。用本文所述的化合物治療的組的統(tǒng)計顯著性一般是指與媒介物治療組的比較，視情況而定。

實施例。說明性劑量反應測試組。組1-正常。向八只正常小鼠隨意喂食正常飲食，沒有任何治療直到9周齡。組2-媒介物。向八只NASH小鼠經(jīng)口施用10mL/kg體積的媒介物(0.5％w/v甲基纖維素+0.2％80)，每天兩次，從5周齡至9周齡。組3-索利霉素5mg/kg。向八只NASH小鼠在早上經(jīng)口施用補充有5mg/kg劑量的索利霉素的媒介物且在傍晚經(jīng)口施用媒介物(5mg/kg/天)，從5周齡至9周齡。組4-索利霉素10mg/kg。向八只NASH小鼠經(jīng)口施用補充有10mg/kg劑量的索利霉素的媒介物，每天兩次(20mg/kg/天)，從5周齡至9周齡。組5-索利霉素25mg/kg。向八只NASH小鼠經(jīng)口施用補充有25mg/kg劑量的索利霉素的媒介物，每天兩次(50mg/kg/天)，從5周齡至9周齡。組6-索利霉素50mg/kg。向八只NASH小鼠經(jīng)口施用補充有50mg/kg劑量的索利霉素的媒介物，每天一次(50mg/kg/天)，從5周齡至9周齡。

實施例。平均體重。媒介物組顯示出與正常組相比處死當天平均體重的顯著減少。組4顯示出與媒介物組相比平均體重的顯著減少。在媒介物組與組3、5或6中的任一組之間在處死當天的平均體重上不存在顯著差異。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信組4中的平均體重的減少與劑量或測試化合物無關，反而，反映了治療組中的測試動物的低數(shù)目。

實施例。肝臟重量。媒介物組顯示出與正常組相比平均肝臟重量的顯著增加(p<0.001)。平均肝臟重量隨著劑量增加傾向于減小，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg組之間在肝臟重量上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。索利霉素10mg/kg和25mg/kg組與媒介物組相比在平均肝臟重量上顯示出顯著減小(分別為p<0.01和p<0.001)。觀察到索利霉素25mg/kg組的肝臟重量在數(shù)值上類似于正常組。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物能治愈此疾病癥狀。

實施例。肝臟與體重的比率(圖1)。媒介物組顯示出與正常組相比平均肝臟與體重比率的顯著提高(p<0.001)。平均肝臟與體重比率隨著劑量增加傾向于減小，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg或10mg/kg組之間在該比率上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。索利霉素25mg/kg組顯示出與媒介物組相比平均肝臟與體重比率的顯著降低(p<0.01)。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信減少的平均肝臟重量指示治療功效。

值是平均值±SD，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001

實施例。全血葡萄糖(圖2和表1)。媒介物組顯示出與正常組相比全血葡萄糖水平的顯著提高(p<0.001)。全血葡萄糖水平隨著劑量增加傾向于下降，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg或10mg/kg組之間在全血葡萄糖水平上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。索利霉素25mg/kg組顯示出與媒介物組相比全血葡萄糖水平的顯著降低(p<0.05)。另外，所觀察到的降低不伴隨胰島素的增加。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信沒有胰島素增加的全血葡萄糖水平的降低指示用于治療糖尿病的治療功效。

實施例。血漿ALT(表1)。據(jù)報道血漿ALT是肝損傷的指標。在媒介物組中的血漿ALT水平與正常組相比傾向于提高。在媒介物組與索利霉素組(組3-6)的任何劑量之間在血漿ALT水平上不存在顯著差異。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物對ALT不具有實質(zhì)性作用，這又將導致不希望的副作用。

實施例。血清乳糜微粒(圖3和表1)。媒介物組中的血清乳糜微粒水平與正常組相比顯著地提高(p<0.001)。血清乳糜微粒水平隨著劑量增加傾向于下降，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg或10mg/kg組之間在血清乳糜微粒水平上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。在索利霉素25mg/kg組中的血清乳糜微粒水平與媒介物組相比顯著降低(p<0.05)。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信降低的血清乳糜微粒水平指示治療功效。

實施例。血清VLDL-膽固醇(圖4和表1)。媒介物組中的血清VLDL-膽固醇水平與正常組相比顯著地提高(p<0.05)。血清VLDL-膽固醇水平隨著劑量增加傾向于下降，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg或10mg/kg組之間在血清VLDL-膽固醇水平上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。在索利霉素25mg/kg組中的血清VLDL-膽固醇水平與媒介物組相比顯著降低(p<0.05)。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信降低的血清VLDL-膽固醇水平指示治療功效。觀察到索利霉素25mg/kg組的血清VLDL-膽固醇水平在數(shù)值上類似于正常組。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物能治愈此疾病癥狀。

實施例。血清HDL-膽固醇(圖5和表1)。媒介物組中的血清HDL-膽固醇水平與正常組相比顯著地提高(p<0.05)。血清HDL-膽固醇水平隨著劑量增加傾向于上升，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg、10mg/kg或25mg/kg組之間在血清HDL-膽固醇水平上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信提高的血清HDL-膽固醇水平指示治療功效。

實施例。血清甘油三酯(圖6和表1)。媒介物組中的血清甘油三酯水平與正常組相比顯著地提高(p<0.05)。血清甘油三酯水平隨著劑量增加傾向于下降，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg或10mg/kg組之間在血清甘油三酯水平上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。在索利霉素25mg/kg組中的血清甘油三酯水平與媒介物組相比顯著降低(p<0.01)。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信降低的血清甘油三酯水平指示治療功效。觀察到索利霉素25mg/kg組的血清甘油三酯水平在數(shù)值上類似于正常組。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物能治愈此疾病癥狀。

實施例。肝臟甘油三酯含量(表1)。媒介物組中的肝臟甘油三酯含量與正常組相比顯著地增加(p<0.001)。肝臟甘油三酯含量隨著劑量增加傾向于下降，但是在媒介物組與索利霉素組的任何劑量(組3-6)之間在肝臟甘油三酯含量上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信降低的肝臟甘油三酯水平指示治療功效。

實施例。血漿胰島素(表1)。媒介物組中的血漿胰島素水平與正常組相比顯著地降低(p<0.01)。在媒介物組與索利霉素組的任何劑量之間在血漿胰島素水平上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物通過胰島素非依賴性過程，如通過抑制糖異生作用實現(xiàn)血糖水平的下降。

實施例。血漿MIF(圖7和表1)。在媒介物組與正常組之間在血漿MIF水平上不存在顯著差異。血漿MIF水平隨著劑量增加傾向于上升，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg或10mg/kg組之間在血漿MIF水平上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。在索利霉素25mg/kg組中的血漿MIF水平與媒介物組相比顯著提高(p<0.01)。據(jù)報道MIF是重要的先天免疫調(diào)節(jié)劑。在免疫應答中，白細胞將MIF釋放到血流中。循環(huán)的MIF結(jié)合至其它免疫細胞上的CD74以觸發(fā)急性免疫應答。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信MIF水平是炎癥發(fā)展和/或進展的陽性預后與診斷指標。另外，雖然不希望受理論約束，但在本文中據(jù)信MIF水平是纖維化(包括肝纖維化)發(fā)展和/或進展的陽性預后與診斷指標。另外，雖然不希望受理論約束，但在本文中據(jù)信MIF水平是HCC發(fā)展和/或進展的陽性預后與診斷指標。具體說來，據(jù)報道降低的MIF水平指示HCC的可能性或存在。另外，雖然不希望受理論約束，但在本文中據(jù)信本文中的數(shù)據(jù)支持以下結(jié)論：本文所述的治療方法通過延遲和/或預防纖維化(包括肝纖維化)的進展或其發(fā)展和/或進展的發(fā)生在預防性治療中是有效的。另外，雖然不希望受理論約束，但在本文中據(jù)信本文中的數(shù)據(jù)支持以下結(jié)論：本文所述的治療方法通過延遲和/或預防HCC的進展或發(fā)生在預防性治療中是有效的。

實施例。血漿IL-22(表1)。媒介物組中的血漿IL-22水平與正常組相比顯著地降低(p<0.01)。在媒介物組與索利霉素組的任何劑量之間在血漿IL-22水平上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。

表1.生化

值為平均值±SD，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001

實施例。組織學分析(圖8)。本文所述的化合物(包括索利霉素)顯著地降低STAM小鼠的NAS，如通過減輕脂肪變性、減少肝細胞氣球樣變以及減輕小葉炎癥所測量。因為NAS是用于評價NASH活動性的臨床終點之一，所以在治療組中觀察到的變化支持本文所述的化合物在臨床上作為抗NASH治療劑是有效的結(jié)論(Sanyal AJ.等人,Hepatology,2011；54:344)。評估HE染色切片的顯微照片。來自媒介物組的肝臟切片展現(xiàn)嚴重的微泡和大泡脂肪沉積、肝細胞氣球樣變及炎性細胞浸潤。與這些觀察一致，媒介物組中的NAS與正常組相比顯著地增加。組2(僅媒介物)中的所有小鼠都具有NAS>5。在媒介物組與組3之間在NAS上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。組4-6與媒介物組相比顯示肝細胞氣球樣變和炎性細胞浸潤的顯著改善，其中NAS顯著減少。索利霉素10mg/kg和25mg/kg組的NAS與媒介物組相比顯著地減少(分別為p<0.01和p<0.001)。

實施例。天狼星紅染色(圖9和表2)。評估肝臟的天狼星紅染色切片的顯微照片。來自媒介物組的肝臟切片顯示出與正常組相比在肝小葉的中心周圍區(qū)域中的膠原蛋白沉積增加。在媒介物組中纖維化區(qū)域的百分比(天狼星紅陽性區(qū)域)與正常組相比顯著地升高(p<0.001)。與媒介物組相比，纖維化區(qū)域在組4中傾向于減少，并且在組5和6中顯著地減少。纖維化區(qū)域隨著劑量增加傾向于下降，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg和10mg/kg組之間在纖維化區(qū)域上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。在索利霉素25mg/kg組中的纖維化區(qū)域與媒介物組相比顯著減小(p<0.05)。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信在治療組中觀察到的纖維化的適度減少是歸因于所有組中低的總體纖維化。在較長期的模型中，纖維化在疾病模型中將更加明顯。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信短期治療與未治療的對照相比在纖維化上顯示出一致的改善，然而纖維化在模型中在短時間內(nèi)并非廣泛的。然而，當纖維化隨著時間增加時，長期治療與未治療的對照相比顯示持續(xù)的改善。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信減小的纖維化區(qū)域指示治療功效。

表2

*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001

實施例。F4/80免疫組織化學(表2)。F4/80抗原是巨噬細胞限制的細胞表面糖蛋白，其中染色對于巨噬細胞有特異性。評估F4/80免疫染色切片的顯微照片。來自媒介物組的肝臟切片顯示與正常組相比肝小葉中的F4/80陽性細胞的數(shù)量和尺寸的增加。在媒介物組中F4/80陽性區(qū)域百分比與正常組相比顯著地增加(p<0.001)。在媒介物組與組3-6中任一組之間在F4/80陽性巨噬細胞區(qū)域上不存在顯著差異。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物對巨噬細胞不具有實質(zhì)性作用，這又將導致不希望的副作用。據(jù)報道索利霉素不影響巨噬細胞群。

實施例。作為嗜中性粒細胞標記物的Gr-1免疫組織化學(圖10)。評估Gr-1免疫染色切片的顯微照片。來自媒介物組的肝臟切片顯示與正常組相比肝小葉中的浸潤的Gr-1陽性細胞的增加。在索利霉素治療組的所有劑量中，與媒介物組相比，Gr-1陽性細胞減少。如本文所述，化合物似乎不能通過抑制巨噬細胞或介導TNFα表達來減少嗜中性粒細胞浸潤。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信嗜中性粒細胞浸潤減少指示治療功效，包括在肝和肺疾病中。

實施例。CK-18免疫組織化學。評估CK-18免疫染色切片的顯微照片。來自媒介物組的肝臟切片顯示與正常組相比在退行性肝細胞中針對CK-18的高強度的免疫染色。在媒介物組與索利霉素組的任何劑量之間在CK-18免疫染色上不存在明顯變化。CK-18是肝臟中的主要中間絲蛋白。增強的CK-18染色反映肝細胞損傷，特別是細胞凋亡。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物對細胞骨架不顯示副作用，如由CK-18免疫組織化學所證明。

實施例。定量RT-PCR。根據(jù)制造商說明書，使用RNAiso(Takara Bio,Japan)從肝臟樣品中提取總RNA。使用含有以下的反應混合物對1μg RNA進行逆轉(zhuǎn)錄：4.4mM MgCl2(Roche,Switzerland)、40U RNA酶抑制劑(Toyobo,Japan)、0.5mM dNTP(Promega,USA)、6.28μM隨機六聚體(Promega)、5x第一鏈緩沖液(Promega)、10mM二硫蘇糖醇(Invitrogen)以及200U MMLV-RT(Invitrogen)，最終體積為20μL。反應在37℃下進行1小時，然后在99℃下進行5分鐘。使用實時PCR DICE和SYBR預混合Taq(Takara Bio)進行實時PCR。為了計算相對mRNA表達水平，將每個基因的表達針對參照基因36B4(基因符號：Rplp0)歸一化。PCR引物組描述于共同待審的美國臨時申請?zhí)?2/086,911中，其公開內(nèi)容以引用的方式并入本文。

實施例。基因表達分析(表3)。

TNF-αmRNA表達水平在媒介物組中與正常組相比顯著地上調(diào)。在媒介物組與索利霉素組的任何劑量之間在TNF-αmRNA表達水平上不存在顯著差異。

MCP-1mRNA表達水平在媒介物組中與正常組相比顯著地上調(diào)(p<0.001)。MCP-1mRNA表達水平隨著劑量增加傾向于下降，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg、10mg/kg或25mg/kg組之間在MCP-1mRNA表達水平上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。在索利霉素50mg/kg q.d.組中MCP-1mRNA表達水平與媒介物組(歸一化的媒介物：1.00±0.42，索利霉素：0.64±0.14)相比在肝臟中MCP-1mRNA表達水平上顯示顯著的降低。如本文所述，化合物似乎不能通過抑制巨噬細胞或介導TNFα表達來減少MCP-1。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信MCP-1mRNA表達水平的減少指示治療功效，包括在肝和肺疾病中。

MMP-9mRNA表達水平在媒介物組中與正常組相比顯著地上調(diào)。MMP-9mRNA表達水平隨著劑量增加傾向于下降，但是在媒介物組與索利霉素5mg/kg、10mg/kg或25mg/kg組之間在MMP-9mRNA表達水平上不存在統(tǒng)計上顯著的差異。在索利霉素50mg/kg q.d.組中MMP-9mRNA表達水平與媒介物組(歸一化的媒介物：1.00±0.34，索利霉素：0.59±0.25)相比在肝臟中MMP-9mRNA表達水平上顯示顯著的降低。如本文所述，化合物似乎不能通過抑制巨噬細胞或介導TNFα表達來減少MMP-9。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信MMP-9mRNA表達水平的減少指示治療功效，包括在肝和肺疾病中。

1型膠原蛋白mRNA表達水平在媒介物組中與正常組相比顯著地上調(diào)。在媒介物組與索利霉素組的任何劑量之間在1型膠原蛋白mRNA表達水平上不存在顯著差異。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物對細胞骨架不顯示副作用，如由1型膠原蛋白mRNA表達水平所證明。

α-SMA mRNA表達水平在媒介物組中與正常組相比顯著地上調(diào)。在媒介物組與索利霉素組的任何劑量之間在α-SMA mRNA表達水平上不存在顯著差異。

TIMP-1mRNA表達水平在媒介物組中與正常組相比傾向于上調(diào)。在媒介物組與索利霉素組的任何劑量之間在TIMP-1mRNA表達水平上不存在顯著差異。

TGF-βmRNA表達水平在媒介物組中與正常組相比顯著地上調(diào)。在媒介物組與索利霉素組的任何劑量之間在TGF-βmRNA表達水平上不存在顯著差異。

Gck mRNA表達水平在媒介物組中與正常組相比顯著地下調(diào)。在媒介物組與索利霉素組的任何劑量之間在Gck mRNA表達水平上不存在顯著差異。

G6pc mRNA表達水平在媒介物組中與正常組相比顯著地上調(diào)(p<0.001)(圖10)。G6pc mRNA表達水平在索利霉素組的所有劑量中與媒介物組相比顯著下調(diào)，如表3所示。G6pc(葡萄糖-6-磷酸酶)是催化D-葡萄糖-6-磷酸水解成D-葡萄糖和正磷酸鹽的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的整合膜蛋白。G6pc是葡萄糖穩(wěn)態(tài)中，即糖異生和糖原分解中的關鍵酶。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信降低的G6pc mRNA表達水平指示治療功效。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信數(shù)據(jù)支持以下結(jié)論：本文所述的化合物抑制和/或減少糖異生，且因此有效治療糖尿病。觀察到索利霉素25mg/kg組的G6pc mRNA表達水平在數(shù)值上類似于正常組。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物能治愈此疾病癥狀。

Pck1mRNA表達水平在媒介物組中與正常組相比是顯著上調(diào)的。在媒介物組與索利霉素組的任何劑量之間在Pck1mRNA表達水平上不存在顯著差異。

與正常組相比，F(xiàn)BP酶mRNA表達水平在媒介物組中顯著上調(diào)(p<0.001)(圖11)。FBP酶mRNA表達水平在索利霉素組的所有劑量中與媒介物組相比顯著下調(diào)，如表3所示。FBP酶(果糖二磷酸酶)在糖異生中將果糖-1,6-二磷酸轉(zhuǎn)化為果糖6-磷酸，并且催化在糖酵解中由磷酸果糖激酶催化的反應的逆反應。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信降低的FBP酶mRNA表達水平指示治療功效。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信數(shù)據(jù)支持以下結(jié)論：本文所述的化合物抑制和/或減少糖異生，且因此有效治療糖尿病。觀察到索利霉素25mg/kg組的FBP酶mRNA表達水平在數(shù)值上類似于正常組。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物能治愈此疾病癥狀。

在媒介物組與正常組之間，Glut 2mRNA表達水平未顯著不同。在索利霉素10mg/kg組中Glut 2mRNA表達水平與媒介物組相比傾向于下調(diào)。在媒介物組與其它索利霉素組之間在Glut 2mRNA表達水平上不存在顯著差異。

表3.基因表達分析

對比媒介物組，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001

36B4：核糖體蛋白，大，P0

TNF-α：腫瘤壞死因子，

MCP-1：單核細胞趨化蛋白，趨化因子(C-C基序)配體，

MMP-9：基質(zhì)金屬肽酶9(Mmp9)，

α-SMA：肌動蛋白，α2，平滑肌，主動脈(Acta2)，

TIMP-1：金屬蛋白酶組織抑制劑1(Timp1)，轉(zhuǎn)錄變體1，

1型膠原蛋白：膠原蛋白，I型，α2(Col1a2)，

TGF-β：轉(zhuǎn)化生長因子，β1(Tgfb1)，

Gck：葡糖激酶(Gck)，

G6pc：葡萄糖-6-磷酸酶，催化(G6pc)，

Pck1：磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1，胞質(zhì)(Pck1)，

FBP酶：果糖二磷酸酶1(Fbp1)，

Glut 2：葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白，2型(Glut 2)TNF：腫瘤壞死因子，MCP：趨化因子(C-C基序)配體，MMP-9：基質(zhì)金屬肽酶9 36B4；核糖體蛋白，大，P0

實施例。在索利霉素治療下肉眼可見肝臟外觀得以改善。從測試動物中移除肝臟并目測評估腔壁側(cè)和內(nèi)臟側(cè)的著色和大體肉眼可見外觀。與正常組相比，媒介物治療組的肝臟在顏色上明顯發(fā)黃。黃色著色一般在肝臟的所有部分中大體均勻，并且在腔壁側(cè)和內(nèi)臟側(cè)上是相似的。隨著劑量的增加，索利霉素治療組的肝臟在顏色上黃度大體較低，并且黃色著色在最高的索利霉素劑量下幾乎不存在。在最高的索利霉素劑量組中，腔壁側(cè)與正常組幾乎相同顏色。在所有的索利霉素治療組中，腔壁側(cè)在顏色上比內(nèi)臟側(cè)的黃度稍微較低。

索利霉素治療顯著地降低全血葡萄糖水平和NAS，證實了其抗NASH作用。在NAS中，論證了索利霉素的劑量反應，25mg/kg(每天兩次)的索利霉素與10mg/kg(每天兩次，p<0.01)和5mg/kg(n.s.)的索利霉素相比顯示更好的效果(p<0.001)。然而，索利霉素不會顯著地影響血漿胰島素。因此，索利霉素用胰島素非依賴性機制糾正高葡萄糖。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信索利霉素調(diào)節(jié)糖異生。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信索利霉素的葡萄糖降低作用可歸因于肝臟中糖異生的抑制，且因此，索利霉素適用于治療糖尿病。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信索利霉素治療在此模型中經(jīng)由調(diào)節(jié)葡萄糖和脂質(zhì)代謝發(fā)揮抗NASH和抗纖維化作用。

小葉炎癥和肝細胞氣球樣變評分是索利霉素的抗NASH機制中突出的潛在因素。雖然F4/80和CK-18的區(qū)域在測試組之間看起來相似，但嗜中性粒細胞的浸潤通過索利霉素的治療而減少。

在索利霉素(25mg/kg，b.i.d.和50mg/kg，q.d.)下觀察到統(tǒng)計上顯著的血糖降低。在索利霉素(25mg/kg，b.i.d.)下觀察到統(tǒng)計上顯著的血清甘油三酯和VLDL-膽固醇水平降低。

在索利霉素(25mg/kg，b.i.d.)下觀察到在肝臟中G6pc和FBP酶mRNA表達水平的統(tǒng)計上顯著的降低。觀察到對于較低劑量(組3-5)的任一組，在TNF-α、MMP-9、Gck、Pck1、Glut 2的相對基因表達方面與媒介物治療的對照相比無顯著差異。觀察到對于較低劑量(組3-5)的任一組，在與纖維化調(diào)節(jié)相關的基因(TGF-β、1型膠原蛋白、α-SMA、TIMP-1)的相對基因表達方面與媒介物治療的對照相比無顯著差異。

在索利霉素(25mg/kg，b.i.d.)下觀察到統(tǒng)計上顯著減少的纖維化，如由天狼星紅染色所證明。

實施例。索利霉素在具有肝功能不全的人中的安全性。索利霉素經(jīng)測定當以高達800mg的劑量施用時在具有輕度、中度及甚至重度肝損傷的人中是充分耐受的。當與給予相同劑量的健康對照相比時，觀察到在安全性上無顯著差異。相比之下，其它大環(huán)內(nèi)酯如紅霉素和克拉霉素據(jù)報道對肝臟有毒性，且因此不適于治療肝臟疾病和或具有肝功能不全的宿主動物。

實施例。索利霉素在具有肝損傷的受試者中的安全性和藥代動力學。在具有輕度、中度及重度肝損傷的受試者中與具有正常肝功能的健康受試者(年齡、體重及性別相匹配)相比評估索利霉素的安全性、藥代動力學(PK)及蛋白結(jié)合。在1期、開放標記的、多劑量研究中，在具有輕度(Child-Pugh A類)、中度(Child-Pugh B類)及重度(Child-Pugh C類)肝損傷的受試者及具有正常肝功能的健康匹配的對照受試者中進行評價。所有受試者在第1天接受800mg的每日一次劑量，然后在第2至5天接受400mg。

招募33名受試者：8名具有輕度損傷(平均Child-Pugh分數(shù)5.625)，8名具有中度損傷(平均Child-Pugh分數(shù)7.375)，8名具有重度損傷(平均Child-Pugh分數(shù)10.625)，且9名健康對照具有正常的肝功能。在2次劑量之后，由于皮疹，一名受試者(健康對照)停止使用研究藥物；所有其它受試者(n＝32)完成了研究?？傮w上，在肝受損群組(輕度n＝1，中度n＝4，重度n＝4)中報告治療中出現(xiàn)的AE的受試者的數(shù)量不大于對照組(n＝4)。最常報告的AE是輕度腹瀉和輕度頭痛。

索利霉素施用5天之后，在第8天時肝功能測試的基線平均變化在任何群組中都沒有臨床顯著性并且在群組之間沒有顯著不同。對于ALT(IU/L)，群組的平均(±SD)變化：對照＝2.6±4.47，輕度＝4.0±8.00，中度＝7.8±6.92，重度＝6.3±14.61。對于AST(IU/L)，群組的平均(±SD)變化：對照＝-0.6±2.92，輕度＝0.4±5.93，中度＝0.1±10.56，重度＝5.8±22.44。對于直接膽紅素(mg/dL)，群組的平均(±SD)變化：對照＝0.00±0.053，輕度＝0.00±0.076，中度＝0.03±0.046，重度＝0.04±0.207。任何肝功能測試中基線的個體變化均不被視為臨床上顯著的。

在肝臟受損群組與對照組之間比較第5日的PK參數(shù)，并且計算幾何平均比率。

在第5天，在任何肝受損群組中都未注意到積聚，然而在重度組中觀察到半衰期(h)的增加(對照＝8.9，輕度＝10.2，中度＝10.4，重度＝15.7)。在第5天時平均血漿蛋白結(jié)合百分比C_max沒有受輕度或中度肝損傷的顯著影響，但在重度群組中稍微下降。

大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(像索利霉素)主要通過肝臟依賴性機制代謝和排泄；此研究評估具有慢性肝病的患者中索利霉素的安全性和PK。已觀察到大約78％的口服索利霉素被吸收。小于15％未變化的索利霉素排泄于糞便中。還觀察到約70％的口服索利霉素通過肝臟代謝和排泄。因此，觀察到高肝臟濃度。當向具有輕度、中度或重度肝損傷的患者施用索利霉素時，不需要劑量調(diào)整。索利霉素在此患者群中充分耐受并且注意到與健康對照相比在安全性上無顯著差異。

實施例。博來霉素誘發(fā)的肺損傷。通過博來霉素的單次氣管內(nèi)施用在雌性小鼠中誘發(fā)肺炎。將20只小鼠分成兩組。從第2天到第6天，一組施用媒介物且另一組施用測試藥物，如在100mg/kg的劑量下口服的索利霉素。在本文中應理解，小鼠中100mg/kg一般被認為等效于人中的450-500mg，如480mg劑量。在第7天處死動物。

無病原體的7周齡雌性C57BL/6J小鼠是獲自CLEA Japan(Tokyo,Japan)并且允許適應環(huán)境至少6天。在第0天，通過使用(Penn-Century,USA)單次氣管內(nèi)施用在0.9％鹽水中的硫酸博來霉素(BLM,Nippon Kayaku,Japan)(每只動物50μL體積)誘發(fā)20只小鼠發(fā)展肺纖維化。在實驗期間每天測量個體體重。每天監(jiān)測小鼠的存活率、臨床體征及行為。

此相同的模型可用預防性方案進行，如在炎癥誘發(fā)之前預先治療一段時間，例如2天。

實施例。索利霉素減輕由博來霉素誘發(fā)的肺損傷所引起的小鼠的炎癥。肺纖維化是在管理已接受尤其是用含有博來霉素(BLM)、氨甲蝶呤、環(huán)磷酰胺及許多新型試劑的方案的惡性腫瘤化療的患者中的問題。這些患者易患肺部感染以及來自肺損傷的炎癥。已發(fā)現(xiàn)索利霉素對細胞因子釋放顯示很強的作用及優(yōu)良的抗炎作用。索利霉素在預防肺炎及纖維化的能力上的作用描述于博來霉素誘發(fā)的肺炎及纖維化模型中。組1(BLM-媒介物)：從第2天(在BLM施用之前兩天)到第6天向十只BLM誘發(fā)的肺纖維化模型小鼠以10mL/kg的體積每天一次經(jīng)口施用媒介物(羧甲基纖維素)。組2(BLM-索利霉素)：從第2天到第6天向十只BLM誘發(fā)的肺纖維化模型小鼠以100mg/kg的劑量(溶于0.5％甲基纖維素+0.2％Tween 80媒介物中)每天一次經(jīng)口施用補充有索利霉素的媒介物。

通過用無菌PBS經(jīng)由氣管沖洗肺三次(每次0.8mL)收集BALF樣品。第一灌洗液保持與其它兩個分離。在4℃下，在1,000xg下離心BALF 3分鐘并且將上清液收集并儲存在-80℃下直到使用。將來自第一級分的細胞沉淀和灌洗液的剩余級分匯合。用血球計計數(shù)BALF的總細胞數(shù)目并且通過用Diff-Quick(Sysmex,Japan)染色細胞離心涂片(cytospin preparation)來測定細胞差異。對高達約200個細胞進行差示細胞計數(shù)。

通過小鼠總MMP-9Quantikine ELISA試劑盒(R&D Systems,USA)量化BALF中的MMP-9。免疫測定具有0.078ng/mL的檢測極限。

實施例。組織病理學分析。將預固定在10％中性緩沖的福爾馬林中的右肺組織切片并用于蘇木精和曙紅(HE)染色及馬森(Masson's)三色染色。使用用于定量組織分析的Ashcroft評分(4)來評估肺纖維化的程度。

實施例。定量RT-PCR。使用RNAiso(Takara Bio,Japan)從肺樣品中提取總RNA。使用含有以下的反應混合物對1μg RNA進行逆轉(zhuǎn)錄：4.4mM MgCl₂(Roche,Switzerland)、40U RNA酶抑制劑(Toyobo,Japan)、0.5mM dNTP(Promega,USA)、6.28μM隨機六聚體(Promega)、5x第一鏈緩沖液(Promega)、10mM二硫蘇糖醇(Invitrogen)以及200U MMLV-RT(Invitrogen)，最終體積為20μL。反應在37℃下進行1小時，然后在99℃下進行5分鐘。使用實時PCR DICE和SYBR預混合Taq(Takara Bio)進行實時PCR。為了計算相對mRNA表達水平，將每個基因的表達針對參照基因GAPDH的表達進行歸一化。

在媒介物組與索利霉素組之間，在任一天時且在處死當天在體重變化上不存在顯著差異。

BALF(支氣管肺泡灌洗液)分析。用血球計計數(shù)BALF中的細胞并且在用Diff-Quik(Sysmex,Japan)染色的細胞離心涂片中測定細胞差異。通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA；目錄號MMPT90,R&D Systems,USA)量化來自BALF的上清液中的MMP-9。根據(jù)標準方法進行肺切片的組織病理學測定。馬森三色染色及Ashcroft評分的估計包括HE染色。使用來自肺的總RNA的基因表達測定是使用針對TNF-α、MCP-1及MMP-9進行的實時RT-PCR分析而獲得。

在支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的細胞總數(shù)，特別是淋巴細胞、嗜中性粒細胞及嗜酸性粒細胞的總數(shù)，在索利霉素組中與媒介物組相比顯著減少。BALF在媒介物組與索利霉素組之間在巨噬細胞數(shù)量上不存在顯著差異。MMP-9水平在索利霉素組中顯示降低傾向(P<0.1)。

實施例。組織學分析：馬森三色染色和Ashcroft評分。在媒介物組中，馬森三色染色揭示肺的胞間隙中的局灶性纖維化病變。在媒介物組與索利霉素組(媒介物：1.6±0.2，索利霉素：1.4±0.5)之間在Ashcroft評分上不存在顯著差異。

實施例。HE-染色。在媒介物組中，HE染色顯示出肺泡壁變厚、彌散性肺泡損傷伴有肺泡腔的萎陷和閉塞、以及在肺的肺泡和胞間隙中的炎性細胞浸潤。在媒介物組與索利霉素組之間，在肺泡壁變厚、彌散性肺泡損傷以及炎性細胞浸潤上不存在明顯差異。

實施例。用媒介物或索利霉素50mg/kg q.d.治療的小鼠的BALF分析

不希望受理論約束，在本文中據(jù)信本文所述的化合物關于纖維化的功效可至少部分歸因于其減少嗜中性粒細胞計數(shù)、MMP-9表達和/或MCP-1表達中的一個或多個的能力。MCP-1和MMP-9參與了炎性細胞的募集。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信功效不取決于巨噬細胞抑制或TNFα表達的減少。不希望受理論約束，在本文中還據(jù)信本文所述的化合物關于纖維化的功效可至少部分歸因于其增加TNFα表達的能力。已報道TNFα經(jīng)由誘發(fā)炎性細胞的細胞凋亡來抑制疾病發(fā)展(Rodvold,K.A.,M.H.Gotfried,J.G.Still,K.Clark和P.Fernandes.“Comparison of plasma,epithelial lining fluid,and alveolar macrophage concentrations of solithromycin in healthy adult subjects.Antimicrob Agts Chemother.2012；56:5076-5081)。

用本文所述化合物的治療造成BALF中炎性細胞的減少。一個有效的終點是較低的白細胞計數(shù)。索利霉素治療上調(diào)TNF-α在肺中的表達，這可誘發(fā)炎性細胞的細胞凋亡。結(jié)果表明本文所述的化合物將有益于預防宿主動物中肺纖維化的疾病進展和發(fā)展。

實施例。硫芥子氣(SM)對培養(yǎng)中的細胞的毒性和在大鼠中的吸入毒性。麻醉的大鼠通過蒸汽吸入氣管內(nèi)暴露于SM。暴露之前一小時及此后的每二十四小時，用如在10、20或40mg/kg劑量下的測試藥物來治療大鼠。在用測試藥物治療的一天、三天或七天之后，評估由SM所引起癥狀。一個有效終點是對氣道上皮細胞及巨噬細胞的保護作用以免于SM誘發(fā)的細胞毒性。通過組織病理學來驗證該作用。另一有效終點是治療組中的氣管的劑量依賴性保護。此動物模型的其它細節(jié)通常描述于Gao(2007和Gao(2011)中。

實施例。FXR信號途徑。本文所述化合物的治療功效不取決于FXR信號途徑。在表達雜合FXR受體的報道子細胞測定(Indigo Biosciences,PA)中測試索利霉素。測量激動劑和拮抗劑活性。索利霉素從30μM開始測試并且以1:3稀釋液繼續(xù)。驚人地發(fā)現(xiàn)索利霉素(CEM-101)在人FXR測定中既未示出激動活性也未示出顯著的拮抗活性。索利霉素在拮抗劑測定中未示出細胞毒性的證據(jù)。不希望受理論約束，在本文中據(jù)信在治療本文所述的疾病中因活性對FXR途徑的依賴可導致增加的甘油三酯(TG)和低密度脂質(zhì)(LDL)作為不希望的副作用。舉例來說，具有不同形式的FLD的患者可處于心血管疾病的風險中，這可能通過甘油三酯和低密度脂質(zhì)的增加而加重。

實施例。本文所述的化合物(包括索利霉素)有效治療具有高心血管疾病風險的宿主動物。已經(jīng)出乎意料地發(fā)現(xiàn)，當經(jīng)口或靜脈內(nèi)給藥時，索利霉素未示出任何QT或tQT延長或者其它陰性的QT作用。PK分析顯示索利霉素實現(xiàn)高達2000-3000ng/mL的血漿水平。相比之下，紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素及泰利霉素中的每一個據(jù)報道是QT陽性的。

實施例。厭氧性腸道細菌的易感性。本文所述的化合物不影響革蘭氏陰性腸道菌，如腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、革蘭氏陰性厭氧菌、或產(chǎn)內(nèi)毒素細菌，并且對腸道菌群具有最小的影響。

化合物實施例

CEM-101(索利霉素，SOLI)

以下出版物，和本文中引用的其它出版物的每一篇以引用的方式并入本文：

Gao X，Ray R，Xiao Y，Barker PE，Ray P.Inhibition of sulfur mustard-induced cytotoxicity and inflammation by the macrolide antibiotic roxithro mycin in human respiratory epithelial cells.BMC Cell Biology 2007，http：//www.biomedcentral.com/1471-2121/8/17

Gao X，Anderson DR，Brown AW，Lin H，Amnuaysirikul J，ChuaAL，Holmes WW，and Ray P.Pathological studies on the protective effect of a macrolide antibiotic，roxithromycin，against sulfur mustard inhalation toxicity in a rat model pathological studies.Toxicol Pathol 2011；39：1056-1064.DOI：10.1177/0192623311422079