本發(fā)明涉及細(xì)胞毒素分子，其被間隔基團(tuán)以某種方式修飾，從而使得在將有效負(fù)荷綴合到小分子、聚合物、肽、蛋白、抗體、抗體片段等時(shí)可以采用多種不同的連接物類型，從而可應(yīng)用多種不同的綴合方法。

背景技術(shù)：

源于天然產(chǎn)品的用于綴合的毒素種類，如阿霉素及其衍生物、海兔毒素及其衍生物、美登素及其衍生物、刺孢霉素及其衍生物、鵝膏覃堿及其衍生物，由于缺乏官能團(tuán)或者官能團(tuán)被使用而喪失生物活性，這些毒素通常難以綴合(F.Dosio et al.Toxins 2011,3,848-883 and citations therein)。相反，在微管溶素(tubulysins)及其合成類似物以及細(xì)胞溶素中存在兩個(gè)天然官能團(tuán)，一羧基和一羥基，通過在N末端的第三氨基基團(tuán)上移除甲基，可以使用第三官能團(tuán)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供新型細(xì)胞毒素分子，其在不同位置具有間隔系統(tǒng)，可用于通過使用不同綴合技術(shù)如本領(lǐng)域已知的化學(xué)綴合方法連接(BioPharm International 32-39,December 2003)，也可用于通過轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶、分選酶或其他酶進(jìn)行酶綴合，其也可用于本領(lǐng)域已知的通常記載的連接物系統(tǒng)的組合。

本發(fā)明提供一種或多種式(I)的化合物：

其中，

n是0或1；

X是O或S；

Y是CO基團(tuán)或者CH₂基團(tuán)或一鍵；

R²和R³分別為H或烷基、環(huán)烷基、雜烷基或雜環(huán)烷基，可選的，上述所有基團(tuán)可被取代，或者R²和R³一起是式(CH₂)_m其中m是2、3、4或5；

R⁴是H、烷基、環(huán)烷基、雜烷基或雜環(huán)烷基，可選的，上述所有基團(tuán)可以被取代；

R⁵是H、烷基、環(huán)烷基、雜烷基或雜環(huán)烷基，可選的，上述所有基團(tuán)可以被取代；

R⁶是H、烷基、烯基、炔基或雜烷基、芳烷基或雜芳烷基，可選的，上述所有基團(tuán)可以被取代；

R⁷是H、烷基、烯基、炔基或雜烷基、芳烷基或雜芳烷基，可選的，上述所有基團(tuán)可以被取代；

R⁸是H、烷基、雜烷基(例如-CO-烷基)、芳烷基或雜芳烷基，可選的，上述所有基團(tuán)可以被取代；

并且，

R¹是H、雜烷基或者式-X¹-L¹-A¹或-X¹-CH₂-CH₂-S-S-Py基團(tuán)，其中Py是2-吡啶基；以及

R⁹是H、OH、SH、CN、NH₂、NO₂、鹵素或者烷基、雜烷基(例如烷氧基、烷氨基、二烷氨基或者O-CO-烷基)、芳基(例如苯基)、雜芳基、芳氧基或雜芳氧基，可選的，上述所有基團(tuán)可被取代；以及

R¹⁰是OH、NH₂、NHNH₂、O-NH₂或者雜烷基(例如烷氧基、烷氨基、二烷氨基、O-烷氨基、O-二烷氨基或者O-CO-烷基)、雜芳基、芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基或者雜芳氧基，可選的，上述所有基團(tuán)可被取代；

或者

R¹是H、烷基或雜烷基，可選的，上述所有基團(tuán)可以被取代；

R⁹是H、OH、SH、CN、NH₂、NO₂、鹵素或者烷基、雜烷基(例如烷氧基、烷氨基、二烷氨基或者O-CO-烷基)、芳基(例如苯基)、雜芳基、芳氧基或雜芳氧基，可選的，上述所有基團(tuán)可被取代；以及

R¹⁰是式-X²-L²-A²或-X²-CH₂-CH₂-S-S-Py基團(tuán)，其中Py是2-吡啶基，或者如果Y是一個(gè)鍵的話，Py是雜芳基；

或者

R¹是H、烷基或雜烷基，可選的，上述所有基團(tuán)可以被取代；

R⁹是式-X³-L³-A³或-X³-CH₂-CH₂-S-S-Py基團(tuán)，其中Py是2-吡啶基；以及

R¹⁰是OH、NH₂、NHNH₂、O-NH₂或者雜烷基(例如烷氧基、烷氨基、二烷氨基、O-烷氨基、O-二烷氨基或者O-CO-烷基)、雜芳基、芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基或者雜芳氧基，可選的，上述所有基團(tuán)可被取代；

X¹是一個(gè)鍵或者-CO-O-、-CO-、-NH-或-NHCO-O-；

X²是-NH-NH-CO-O、-NH-NH-CO-S-、-NH-NH-CO-NH-、-NH-CO-、NHNH-、-O-、-O-NH-、-S-或NH-；

X³是-O-、-S-、-NH-、-O-NH-、-O-CO-NH-、-O-CO-、-NH-CO-、NHCO-O-、-NH-CO-NH-、-NHNHCO-O-、-NHNHCO-S-或者-NHNHCO-NH-；

L¹是線性的，可被取代的烯基，鏈中包含1-20(優(yōu)選1-12；進(jìn)一步優(yōu)選1-7)個(gè)碳原子，或者是線性的、可選被取代的雜烯基，鏈中包含1-50(例如1-20；優(yōu)選1-12；進(jìn)一步優(yōu)選1-7)個(gè)碳原子并且包含1-20(例如1-15，優(yōu)選1-10，進(jìn)一步優(yōu)選1-5)個(gè)氧原子、硫原子和/或氮原子(優(yōu)選是氧原子和/或氮原子)，其中該烯烴基或雜烯烴基可優(yōu)選的被一個(gè)或多個(gè)烷基、雜烷基、＝O、OH、NH₂基團(tuán)取代，并且其中該線性烯烴或雜烯烴基可包含一個(gè)或多個(gè)(尤其是一個(gè)或兩個(gè))亞芳基或者雜亞芳基；

L²是線性的，可被取代的烯基，鏈中包含1-20(優(yōu)選1-12；進(jìn)一步優(yōu)選1-7)個(gè)碳原子，或者是線性的、可選被取代的雜烯基，鏈中包含1-50(例如1-20；優(yōu)選1-12；進(jìn)一步優(yōu)選1-7)個(gè)碳原子并且包含1-20(例如1-15，優(yōu)選1-10，進(jìn)一步優(yōu)選1-5)個(gè)氧原子、硫原子和/或氮原子(優(yōu)選是氧原子和/或氮原子)，其中該烯烴基或雜烯烴基可優(yōu)選的被一個(gè)或多個(gè)烷基、雜烷基、＝O、OH、NH₂基團(tuán)取代，并且其中該線性烯烴或雜烯烴基可包含一個(gè)或多個(gè)(尤其是一個(gè)或兩個(gè))亞芳基或者雜亞芳基；

L³是線性的，可被取代的烯基，鏈中包含1-20(優(yōu)選1-12；進(jìn)一步優(yōu)選1-7)個(gè)碳原子，或者是線性的、可選被取代的雜烯基，鏈中包含1-50(例如1-20；優(yōu)選1-12；進(jìn)一步優(yōu)選1-7)個(gè)碳原子并且包含1-20(例如1-15，優(yōu)選1-10，進(jìn)一步優(yōu)選1-5)個(gè)氧原子、硫原子和/或氮原子(優(yōu)選是氧原子和/或氮原子)，其中該烯烴基或雜烯烴基可優(yōu)選的被一個(gè)或多個(gè)烷基、雜烷基、＝O、OH、NH₂基團(tuán)取代，并且其中該線性烯烴或雜烯烴基可包含一個(gè)或多個(gè)(尤其是一個(gè)或兩個(gè))亞芳基或者雜亞芳基；

A¹是OH、SH、NH₂、N₃或者NH-C_1-6烷基、式-NH-CO-CH₂-NH-(CO-CH₂-NH-)_wCO-CH₂-NH₂基團(tuán)，或者C₂-C₆炔基或者可選被取代的雜芳基或者可選被取代的雜環(huán)烷基或者可選被取代的雜烷基環(huán)烷基或者可選被取代的雜芳烷基或者可選被取代的芳基或者可選被取代的芳烷基，其中w是1-5中的整數(shù)；并且

A²是OH、SH、NH₂、N₃或者NH-C_1-6烷基、式-NH-CO-CH₂-NH-(CO-CH₂-NH-)_wCO-CH₂-NH₂基團(tuán)，或者C₂-C₆炔基或者可選被取代的雜芳基或者可選被取代的雜環(huán)烷基或者可選被取代的雜烷基環(huán)烷基或者可選被取代的雜芳烷基或者可選被取代的芳基或者可選被取代的芳烷基，其中w是1-5的整數(shù)；

A³是OH、SH、NH₂、N₃或者NH-C_1-6烷基、式-NH-CO-CH₃-NH-(CO-CH₂-NH-)_wCO-CH₂-NH₂基團(tuán)，或者C₂-C₆炔基或者可選被取代的雜芳基或者可選被取代的雜環(huán)烷基或者可選被取代的雜烷基環(huán)烷基或者可選被取代的雜芳烷基或者可選被取代的芳基或者可選被取代的芳烷基，其中w是1-5的整數(shù)；

或它們藥理學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。

術(shù)語烷基是指飽和的直鏈或支鏈烴基，其優(yōu)選包含1-20個(gè)碳原子、更優(yōu)選的1-12個(gè)碳原子、尤其是1-6(例如1、2、3或4)個(gè)碳原子，例如甲基(Me)、乙基、丙基、異丙基、異丁基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2,2二甲基丙基、2-甲基丁基、正己基、2,2二甲基丁基或2,3二甲基丁基。

術(shù)語烯基和炔基是指至少部分未飽和的直鏈或支鏈烴基，其優(yōu)選包含2-20個(gè)碳原子，更優(yōu)選2-12個(gè)碳原子，尤其是2-6個(gè)碳原子(例如2、3或4個(gè)碳原子)，例如是乙烯基、丙烯基、乙炔基、炔丙基、異平基或2-己烯基。優(yōu)選的，烯基具有一個(gè)或兩個(gè)(尤其優(yōu)選是一個(gè))雙鍵，炔基具有一個(gè)或兩個(gè)(尤其優(yōu)選是一個(gè))三鍵。

而且，術(shù)語烷基、烯基和炔基是指基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)氫原子(例如1、2或3個(gè)氫原子)被鹵素原子(優(yōu)選F或Cl)取代，例如，2,2,2-三氯乙基或三氟甲基基團(tuán)。

術(shù)語雜烷基是指烷基、烯基或炔基基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)(優(yōu)選1、2、3、4或5個(gè))碳原子被氧、氮、磷、硼、硒、硅或硫原子(優(yōu)選是氧、硫或氮原子)或者SO或SO₂基團(tuán)取代。術(shù)語雜烷基還指羧酸或由羧酸衍生的基團(tuán)，例如?；?烷基-CO-)、酰烷基、烷氧羰基、酸氧基、酸氧烷基、羧基烷基酰胺或烷氧基羰氧基。而且，術(shù)語雜烷基是指基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)氫原子被鹵素原子(優(yōu)選F或Cl)取代。

優(yōu)選的，雜烷基包含1-12個(gè)碳原子和1-4個(gè)雜原子，雜原子選自氧、氮和硫(尤其是氧和氮)。尤其優(yōu)選的，雜烷基包含1-6個(gè)(例如1、2、3或4個(gè))碳原子和1、2或3個(gè)(尤其是1或2個(gè))雜原子，雜原子選自氧、氮和硫(尤其是氧和氮)。

術(shù)語C₁-C₈雜烷基是指基團(tuán)中包含1-8個(gè)碳原子和1、2或3個(gè)雜原子，雜原子選自O(shè)、S和/或N(尤其是O和/或N)。術(shù)語C₁-C₆雜烷基是指基團(tuán)中包含1-6個(gè)碳原子和1、2或3個(gè)雜原子，雜原子選自O(shè)、S和/或N(尤其是O和/或N)。而且，術(shù)語雜烷基是指基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)氫原子被鹵素原子(優(yōu)選F或Cl)取代。

示例性雜烷基具有以下公式：R^a-O-Y^a-,R^a-S-Y^a-,R^a-N(R^b)-Y^a-,R^a-CO-Y^a-,R^a-O-CO-Y^a-,R^a-CO-O-Y^a-,R^a-CO-N(R^b)-Y^a-,R^a-N(R^b)-CO-Y^a-,R^a-O-CO-N(R^b)-Y^a-,R^a-N(R^b)-CO-O-Y^a-,R^a-N(R^b)-CO-N(R^c)-Y^a-,R^a-O-CO-O-Y^a-,R^a-N(R^b)-C(＝NR^d)-N(R^c)-Y^a-,R^a-CS-Y^a-,R^a-O-CS-Y^a-,R^a-CS-O-Y^a-,R^a-CS-N(R^b)-Y^a-,R^a-N(R^b)-CS-Y^a-,R^a-O-CS-N(R^b)-Y^a-,R^a-N(R^b)-CS-O-Y^a-,R^a-N(R^b)-CS-N(R^c)-Y^a-,R^a-O-CS-O-Y^a-,R^a-S-CO-Y^a-,R^a-CO-S-Y^a-,R^a-S-CO-N(R^b)-Y^a-,R^a-N(R^b)-CO-S-Y^a-,R^a-S-CO-O-Y^a-,R^a-O-CO-S-Y^a-,R^a-S-CO-S-Y^a-,R^a-S-CS-Y^a-,R^a-CS-S-Y^a-,R^a-S-CS-N(R^b)-Y^a-,R^a-N(R^b)-CS-S-Y^a-,R^a-S-CS-O-Y^a-,R^a-O-CS-S-Y^a-,其中R^a是氫原子、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基；R^b是氫原子、C₁-C₆烷基,、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基；R^c是氫原子、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基；R^d是氫原子、C₁-C₆烷基,、C₂-C₆烯基或C₂-C₆炔基，并且Y^a是直接鍵,C_1-C₆烯烴基、C₂-C₆亞烯基或C₂-C₆亞炔基,其中每個(gè)雜烷基包含至少一個(gè)碳原子，并且一個(gè)或多個(gè)氫原子可被鹵素原子(例如F或Cl原子)取代。

雜烷基的具體實(shí)例是甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、叔丁氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、-CH₂CH₂OH、-CH₂OH、-CH₂CH₂SH、-CH₂SH、-CH₂CH₂SSCH₂CH₂NH₂、-CH₂CH₂SSCH₂CH₂COOH、甲氧基乙基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、異丙基乙氨基、甲氨基甲基、乙氨基甲基、二異丙氨基乙基、烯醇醚、二甲氨基甲基、二甲氨基乙基、乙?；⒈；?、丁酰氧基、乙酰氧基、甲氧羰基、乙氧羰基、N-乙基-N-甲基氨基甲?；蛘逳-甲基氨基甲酰。雜烷基的進(jìn)一步的例子是腈、異腈、氰酸酯、硫氰酸酯、異氰酸酯、異硫氰酸酯和烷基腈基團(tuán)。

術(shù)語環(huán)烷基是指飽和或部分未飽和(例如環(huán)烯基)環(huán)基團(tuán)，其包含一個(gè)或多個(gè)環(huán)(優(yōu)選1或2個(gè))，并包含3-14個(gè)環(huán)碳原子，優(yōu)選是3-10(尤其是3、4、5、6或7)個(gè)環(huán)碳原子。術(shù)語環(huán)烷基還指基團(tuán)中一個(gè)或多個(gè)氫原子被F、Cl、Br或I原子取代或被OH、＝O、SH、＝S、NH₂、＝NH、N₃或NO₂基團(tuán)取代，例如環(huán)酮類，例如環(huán)己酮、2-環(huán)己烯酮或環(huán)戊酮。環(huán)烷基的進(jìn)一步的具體實(shí)例是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、螺[4,5]癸烷基(spiro[4,5]decanyl)、降莰基、環(huán)己基、環(huán)戊烯基、環(huán)己二烯基、十氫萘基(decalinyl)、雙環(huán)[4.3.0]壬基、四氫化萘、環(huán)戊基-環(huán)己基、氟代環(huán)己基或環(huán)己-2-烯基基團(tuán)。

術(shù)語雜環(huán)烷基是指上述定義的環(huán)烷基中的一個(gè)或多個(gè)(優(yōu)選1、2或3個(gè))環(huán)碳原子分別被氧、氮、硅、硒、磷或硫原子(優(yōu)選是氧、硫或氮原子)或者SO或SO₂基團(tuán)取代。雜環(huán)烷基優(yōu)選具有1或2個(gè)環(huán)，其包含3-10個(gè)(尤其是3、4、5、6或7個(gè))環(huán)原子(優(yōu)選選自C、O、N和S)。術(shù)語雜環(huán)烷基還指基團(tuán)被F、Cl、Br或I原子取代或被OH、＝O、SH、＝S、NH₂、＝NH、N₃或NO₂基團(tuán)取代。實(shí)例是哌嘧啶、脯氨酰、咪唑烷基、哌嗪基、嗎啉基、烏洛托品基(urotropinyl)、吡咯烷基、四氫噻吩基(tetrahydrothiophenyl)、四氫吡喃基、四氫呋喃基或2-吡唑啉基，以及內(nèi)酰胺、內(nèi)酯、環(huán)狀亞胺和環(huán)酐。

表述烷基環(huán)烷基指包含根據(jù)上文定義的環(huán)烷基以及烷基、烯基或炔基的基團(tuán)，例如烷基環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、烷基環(huán)烯基、烯基環(huán)烷基和炔基環(huán)烷基。烷基環(huán)烷基優(yōu)選包含環(huán)烷基和一個(gè)或兩個(gè)烷基、烯基或炔基，該環(huán)烷基包含一個(gè)或兩個(gè)環(huán)系統(tǒng)，該系統(tǒng)具有3-10(特別是3、4、5、6或7)個(gè)環(huán)碳原子，所述烷基、烯基或炔基具有1或2至6個(gè)碳原子。

表述雜烷基環(huán)烷基指如上文所定義的烷基環(huán)烷基中一個(gè)或多個(gè)(優(yōu)選1、2或3個(gè))碳原子各自獨(dú)立地被氧、氮、硅、硒、磷或硫原子(優(yōu)選被氧、硫或氮原子)取代。雜烷基環(huán)烷基優(yōu)選包含1或2個(gè)具有3-10(特別是3、4、5、6或7)個(gè)環(huán)原子的環(huán)系統(tǒng)，以及一個(gè)或兩個(gè)具有1或2至6個(gè)碳原子的烷基、烯基、炔基或雜烷基。這類基團(tuán)的實(shí)例為烷基雜環(huán)烷基、烷基雜環(huán)烯基、烯基雜環(huán)烷基、炔基雜環(huán)烷基、雜烷基環(huán)烷基、雜烷基雜環(huán)烷基以及雜烷基雜環(huán)烯基，所述環(huán)狀基團(tuán)是飽和的或者單、雙或三不飽和的。

表述芳基或Ar指芳香基團(tuán)，其包含一個(gè)或多個(gè)包含6-14個(gè)環(huán)碳原子、優(yōu)選6-10(特別是6)個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)。表述芳基(或Ar，分別地)還指基團(tuán)被氟、氯、溴或碘原子或者被0H、SH、NH₂、N₃或NO₂基團(tuán)代替。實(shí)例為苯基、萘基、聯(lián)苯基、2-氟苯基、苯胺基、3-硝基苯基或4-羥基苯基。

表述雜芳基指芳香基團(tuán)，其包含一個(gè)或多個(gè)包含5-14個(gè)環(huán)原子、優(yōu)選5-10(特別是5或6)個(gè)環(huán)原子的環(huán)，并且包含一個(gè)或多個(gè)(優(yōu)選1、2、3或4個(gè))氧、氮、磷或硫環(huán)原子(優(yōu)選0、S或N)。表述雜芳基還指被氟、氯、溴或碘原子或者被0H、SH、N₃、NH₂或NO₂基團(tuán)代替的基團(tuán)。實(shí)例為吡啶基(例如4-吡啶基)、咪唑基(例如2-咪唑基)、苯基吡咯基(例如3-苯基吡咯基)、噻唑基、異噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吲哚基、吲唑基、四唑基、吡嗪基、嘧啶基(pyrimidinyl)、噠嗪基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、四唑基、異噁唑基、吲唑基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、噠嗪基、喹啉基、異喹啉基、吡咯基、嘌呤基、咔唑基、吖啶基、嘧啶基(pyrimidyl)、2，3'-二呋喃基、吡唑基(例如3-吡唑基)以及異喹啉基。

表述芳烷基指包含按照上文定義的芳基以及烷基、烯基、炔基和/或環(huán)烷基的基團(tuán)，例如，芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、芳基環(huán)烷基、芳基環(huán)烯基、烷基芳基環(huán)烷基以及烷基芳基環(huán)烯基。芳烷基的具體實(shí)例為甲苯、二甲苯、均三甲苯(mesitylene)、苯乙烯、苯基氯、鄰氟甲苯、1H-茚、四氫化萘、二氫萘、2，3-二氫-I-茚酮、苯基環(huán)戊基、枯烯、環(huán)己基苯基、芴以及1，2-二氫化茚。芳烷基優(yōu)選包含一個(gè)或兩個(gè)芳香環(huán)系統(tǒng)(1或2個(gè)環(huán))以及一個(gè)或兩個(gè)烷基、烯基和/或炔基，和/或環(huán)烷基，所述芳香環(huán)系統(tǒng)包含6-10個(gè)碳原子，所述烷基、烯基和/或炔基包含1或2至6個(gè)碳原子，所述環(huán)烷基包含5或6個(gè)環(huán)碳原子。

表述雜芳烷基指如上文所定義的芳烷基，其中一個(gè)或多個(gè)(優(yōu)選1、2、3或4個(gè))碳原子各自獨(dú)立地被氧、氮、硅、硒、磷、硼或硫原子(優(yōu)選氧、硫或氮原子)取代，即指分別包含按照上文定義的芳基或雜芳基，以及烷基、烯基、炔基和/或雜烷基和/或環(huán)烷基和/或雜環(huán)烷基的基團(tuán)。雜芳烷基優(yōu)選包含一個(gè)或兩個(gè)芳香環(huán)系統(tǒng)(1或2個(gè)環(huán))以及一個(gè)或兩個(gè)烷基、烯基和/或炔基，和/或環(huán)烷基，所述芳香環(huán)系統(tǒng)包含5或6至10個(gè)環(huán)碳原子，所述烷基、烯基和/或炔基包含1或2至6個(gè)碳原子，所述環(huán)烷基包含5或6個(gè)環(huán)碳原子，其中這些碳原子中的1、2、3或4個(gè)被氧、硫或氮原子代替。

實(shí)例為芳基雜烷基、芳基雜環(huán)烷基、芳基雜環(huán)烯基、芳基烷基雜環(huán)烷基、芳基烯基雜環(huán)烷基、芳基炔基雜環(huán)烷基、芳基烷基雜環(huán)烯基、雜芳基烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、雜芳基雜烷基、雜芳基環(huán)烷基、雜芳基環(huán)烯基、雜芳基雜環(huán)烷基、雜芳基雜環(huán)烯基、雜芳基烷基環(huán)烷基、雜芳基烷基雜環(huán)烯基、雜芳基雜烷基環(huán)烷基、雜芳基雜烷基環(huán)烯基以及雜芳基雜烷基雜環(huán)烷基，所述環(huán)狀基團(tuán)是飽和的或者單、雙或三不飽和的。具體實(shí)例為四氫異喹啉基、苯甲酸基、2-或3-乙基吲哚基、4-甲基吡啶并、2-，3-或4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、2-，3-或4-羧基苯基烷基。

如前所述，表述環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、雜烷基環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳烷基還指基團(tuán)被F、Cl、Br或I原子取代或被OH、＝O、SH、＝S、NH₂、＝NH、N₃或NO₂基團(tuán)取代。

術(shù)語“可選被取代”指基團(tuán)可選的被F、Cl、Br或I原子取代或被OH、＝O、SH、＝S、NH₂、＝NH、N₃或NO₂基團(tuán)取代。該術(shù)語優(yōu)選還指基團(tuán)可專屬地或附加地被未飽和的C₁-C₆烷基,C₂-C₆烯基,C₂-C₆炔基或C₁-C₆雜烷基取代，或被包含6或10個(gè)環(huán)原子的芳基取代，或被包含5或6-9或10個(gè)環(huán)原子的雜芳基取代。

術(shù)語鹵素是指F、Cl、Br或I。

根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本文描述的所有的烷基、烯基、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、雜烷基環(huán)烷基、芳烷基和雜芳烷基可選擇性的被取代。

當(dāng)芳基、雜芳基、環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基、雜烷基環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳烷基或雜芳烷基包含超過1個(gè)的環(huán)時(shí)，這些環(huán)可通過單鍵或雙鍵結(jié)合，或者這些環(huán)可成環(huán)狀。

保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且例如P.J.Kocienski,Protecting Groups,Georg Thieme Verlag,Stuttgart,1994和T.W.Greene,P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1999所述。常見的氨基保護(hù)基團(tuán)例如叔丁氧基羰基(Boc)、叔丁基二甲基硅烷基(TBS)、芐氧基羰基(Cbz,Z)、芐基(Bn)、苯甲酰基(Bz)、茐基甲氧基羰基(Fmoc)、烯丙氧基羰基(Alloc)、三乙基甲硅烷基(TES)、三氯乙氧基羰基(Troc)、乙?；蛉阴；?。

式(I)、(II)、(III)和(IV)的化合物可以包含幾個(gè)手性中心，這取決于它們的取代模式。本發(fā)明涉及所有定義的對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體以及它們的所有比例的混合物。此外，本發(fā)明涉及通式(I)、(II)、(III)和(IV)的化合物的所有順式/反式異構(gòu)體以及它們的混合物。此外，本發(fā)明涉及通式(I)、(II)、(III)和(IV)的化合物的所有互變異構(gòu)形式。優(yōu)選的，式(I)、(II)、(III)和(IV)的化合物與自然產(chǎn)生的微管溶素A(tubulysin A)具有相同的立體化學(xué)。

優(yōu)選的，R²是H或C_1-6烷基；

進(jìn)一步優(yōu)選的，R³是H或C_1-6烷基；

尤其優(yōu)選的，R²和R³總共為式(CH₂)_m，其中m為3或4。尤其優(yōu)選的，m為4。

進(jìn)一步優(yōu)選的，R⁴是H。

更進(jìn)一步優(yōu)選的，R⁵是C_1-6烷基；尤其優(yōu)選的，R⁵是異丁基。

更進(jìn)一步優(yōu)選的，R⁷是C_1-6烷基；尤其優(yōu)選的，R⁷是異丙基。

更進(jìn)一步優(yōu)選的，n為1。

更進(jìn)一步優(yōu)選的，Y是CO基團(tuán)或者CH₂基團(tuán)(尤其是CO基團(tuán))；

更進(jìn)一步優(yōu)選的是式(II)的化合物：

其中R¹、R⁶、R⁸、R⁹、R¹⁰和X如上述式(I)化合物所定義的，或者是其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或水合物。

式(I)和/或式(II)化合物的優(yōu)選實(shí)施方式：

優(yōu)選的，R⁶是C_1-6烷基或C_1-8雜烷基。

更優(yōu)選的，R⁶是C_1-6烷基、式-CH₂CH₂OH的基團(tuán)或者式CH₂OR⁶¹或CH₂OCOR⁶²的基團(tuán),其中R⁶¹是C_1-6烷基，R⁶²是C_1-6烷基、C₂-C₆烯基、苯基或者CH₂-苯基。

尤其優(yōu)選的，R⁶是C_1-6烷基、式-CH₂-O-C_1-6烷基或式-CH₂-O-CO-C_1-6烷基或者式-CH₂CH₂OH的基團(tuán)。

最優(yōu)選的，R⁶是C₁-C₆烷基(尤其是式-CH₂CH₂CH₃基團(tuán))。

更優(yōu)選的，R⁸是H、乙酰(-CO-CH₃)、-CH₂OCH₃或C_1-6烷基。

尤其優(yōu)選的，R⁸是C₁-C₆烷基(尤其是式-CH₂CH₂CH₃基團(tuán))。

進(jìn)一步優(yōu)選的，X是S。

進(jìn)一步優(yōu)選的，如果R¹不是式-X¹-L¹-A¹或-X¹-CH₂-CH₂-S-S-Py，則為氫、甲基或者式-CO-CH₂-NH-CH₃基團(tuán)；尤其優(yōu)選的是氫或甲基；最優(yōu)選的是甲基。

根據(jù)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式，R¹是雜烷基(尤其是式-CO-CH₂-NH-CH₃的基團(tuán))。

更優(yōu)選的，如果R⁹不是式–X³-L³-A³或-X³-CH₂-CH₂-S-S-Py基團(tuán)，則是H、OH、SH、F、CN、NH₂、苯基、甲基、甲氧基、CF₃,乙酰氧基(OAc)、NH甲基或N-二甲基(NMe₂)；尤其是H、OH或者F。

更優(yōu)選的，如果R¹⁰不是式–X²-L²-A²或-X²-CH₂-CH₂-S-S-Py基團(tuán)，則是OH、式O-C_1-6烷基、O-CH₂-苯基或者四唑基(尤其是5-四唑基)。

進(jìn)一步優(yōu)選的，如果R¹⁰不是式–X²-L²-A²或-X²-CH₂-CH₂-S-S-Py基團(tuán)并且如果n是0或1，并且Y是CO或CH₂，則R¹⁰是OH、式O-C_1-6烷基或O-CH₂-苯基(尤其是OH)。

更優(yōu)選的，如果R¹⁰不是式–X²-L²-A²或-X²-CH₂-CH₂-S-S-Py基團(tuán)，并且如果n是0，并且Y是一個(gè)鍵，則R¹⁰是四唑基(尤其是5-四唑基)。

進(jìn)一步優(yōu)選的，X¹是-CO-或-CO-O-(尤其是-CO-O-)。

更優(yōu)選的，X²是-NH-NH-CO-O-、-NH-NH-、-NH-或-NH-CO-(尤其是-NH-NH-CO-O-、-NH-NH-或-NH-)。最優(yōu)選的，X²是-NH-NH-CO-O-。

更優(yōu)選的，X³是-O-、-NH-、-NH-CO-或-O-CO-NH-(尤其是-O-或-NH-)。

更優(yōu)選的，L¹是線性的，可被取代的雜烯基，鏈中包含1-30(例如1-20；優(yōu)選1-12；尤其優(yōu)選1-7)個(gè)碳原子，并且包含1-15(優(yōu)選1-10，進(jìn)一步優(yōu)選1-5)個(gè)氧原子、和/或氮原子，其中該雜烯基可優(yōu)選的被一個(gè)或多個(gè)烷基、雜烷基、＝O、OH、NH₂基團(tuán)取代，并且其中該線性烯烴或雜烯烴基可包含一個(gè)或多個(gè)(尤其是一個(gè)或兩個(gè))亞芳基。

進(jìn)一步優(yōu)選的，L²是線性的，可被取代的雜烯基，鏈中包含1-30(例如1-20；優(yōu)選1-12；尤其優(yōu)選1-7)個(gè)碳原子，并且包含1-15(優(yōu)選1-10，進(jìn)一步優(yōu)選1-5)個(gè)氧原子、和/或氮原子，其中該雜烯基可優(yōu)選的被一個(gè)或多個(gè)烷基、雜烷基、＝O、OH、NH₂基團(tuán)取代，并且其中該線性烯烴或雜烯烴基可包含一個(gè)或多個(gè)(尤其是一個(gè)或兩個(gè))亞芳基。

更優(yōu)選的，L³是線性的，可被取代的雜烯基，鏈中包含1-30(例如1-20；優(yōu)選1-12；尤其優(yōu)選1-7)個(gè)碳原子，并且包含1-15(優(yōu)選1-10，進(jìn)一步優(yōu)選1-5)個(gè)氧原子、和/或氮原子，其中該雜烯基可優(yōu)選的被一個(gè)或多個(gè)烷基、雜烷基、＝O、OH、NH₂基團(tuán)取代，并且其中該線性烯烴或雜烯烴基可包含一個(gè)或多個(gè)(尤其是一個(gè)或兩個(gè))亞芳基。

進(jìn)一步優(yōu)選的，L¹是-(CH₂)_r-,-(CO-CH₂-NH)_v-CO-CH₂-或-(CH₂CH₂O)_g-CH₂CH₂-,其中r是1-10中的整數(shù)，v是1-10中的整數(shù)，并且其中g(shù)是0-12中的整數(shù)。

更優(yōu)選的，L²是-(CH₂)_s-,-(CO-CH₂-NH)_x-CO-CH₂-或-(CH₂CH₂O)_p-CH₂CH₂-,其中s是1-10中的整數(shù)，x是1-10中的整數(shù)，并且其中p是0-12中的整數(shù)。

進(jìn)一步優(yōu)選的，L³是-(CH₂)_o-,-(CO-CH₂-NH)_y-CO-CH₂-或-(CH₂CH₂O)_q-CH₂CH₂-,其中o是1-10中的整數(shù)，y是1-10中的整數(shù)，并且其中q是0-12中的整數(shù)。

更優(yōu)選的，L¹、L²或L³是下式基團(tuán)：

-(CH₂CH₂O)_g-CH₂CH₂-NH-CO-(CH₂)_b-；或

-(CH₂CH₂O)_g-CH₂CH₂-NH-CO-(CH₂)_d-CO-NH-CH₂-；

其中b是1-10中的整數(shù)，d是1-10中的整數(shù)，并且g是0-12中的整數(shù)。

進(jìn)一步優(yōu)選的，L¹、L²或L³是下式基團(tuán)：

其中優(yōu)選的，A¹、A²或A³結(jié)合至該基團(tuán)的右側(cè)。

更優(yōu)選的，L¹、L²或L³是下式基團(tuán)：

其中e是0-10中的整數(shù)(優(yōu)選1-5中的整數(shù))，并且其中優(yōu)選地，A¹、A²或A³結(jié)合至該基團(tuán)的右側(cè)。

更優(yōu)選的，L¹、L²或L³包含下式基團(tuán)：

優(yōu)選的，A¹是NH₂、N₃或者NH-C_1-6烷基、式-NH-CO-CH₂-NH-(CO-CH₂-NH-)_wCO-CH₂-NH₂基團(tuán)，或者C₂-C₆炔基或者可選被取代的雜芳基或者可選被取代的雜環(huán)烷基或者可選被取代的雜烷基環(huán)烷基或者可選被取代的雜芳烷基，其中w是1-5的整數(shù)。

進(jìn)一步優(yōu)選的，A²是NH₂、N₃或者NH-C_1-6烷基、式-NH-CO-CH₂-NH-(CO-CH₂-NH-)_wCO-CH₂-NH₂基團(tuán)，或者C₂-C₆炔基或者可選被取代的雜芳基或者可選被取代的雜環(huán)烷基或者可選被取代的雜烷基環(huán)烷基或者可選被取代的雜芳烷基，其中w是1-5的整數(shù)。

更優(yōu)選的，A³是NH₂、N₃或者NH-C_1-6烷基、式-NH-CO-CH₂-NH-(CO-CH₂-NH-)_wCO-CH₂-NH₂基團(tuán)，或者C₂-C₆炔基或者可選被取代的雜芳基或者可選被取代的雜環(huán)烷基或者可選被取代的雜烷基環(huán)烷基或者可選被取代的雜芳烷基，其中w是1-5的整數(shù)。

更優(yōu)選的，A¹是-NH₂、-N₃、-NH甲基或-C≡CH或馬來酰亞胺基或者下式基團(tuán)：

進(jìn)一步優(yōu)選的，A²是-NH₂、-N₃、-NH甲基或-C≡CH或馬來酰亞胺基或者下式基團(tuán)：

更優(yōu)選的，A³是-NH₂、-N₃、-NH甲基或-C≡CH或馬來酰亞胺基或者下式基團(tuán)：

尤其優(yōu)選的，基團(tuán)R¹選自下式基團(tuán)：

其中*表示結(jié)合至式(I)、(II)、(III)或(IV)的結(jié)合點(diǎn)。

更優(yōu)選的，基團(tuán)R¹⁰選自下式基團(tuán)：

(其中a為0-7)

其中*表示結(jié)合至式(I)、(II)或(IV)的結(jié)合點(diǎn)。

更優(yōu)選的，基團(tuán)R⁹選自下式基團(tuán)：

(其中a為0-7)

其中*表示結(jié)合至式(I)、(II)、(III)或(IV)的結(jié)合點(diǎn)。

更進(jìn)一步優(yōu)選的是式(III)的化合物：

其中n、x、R¹、R⁶、R⁸、R⁹如上述式(I)和(II)化合物所定義的，或者是其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或水合物。

尤其優(yōu)選的是式(III)的化合物，其中

R¹是氫、甲基或雜烷基(尤其是甲基)；

R⁶是C_1-6烷基、式-CH₂OR⁶¹或者式CH₂OR⁶²的基團(tuán),其中R⁶¹是C_1-6烷基，R⁶²是C_1-6烷基、C₂-C₆烯基、苯基或者CH₂-苯基。

R⁸是H、乙?；?、-CH₂OCH₃或C_1-6烷基；

R⁹是H、OH、SH、F、CN、NH₂、苯基、甲基、甲氧基、CF₃,乙酰氧基(OAc)、NH甲基或N-二甲基(NMe₂)；

n是0或1；并且

X是S。

更進(jìn)一步優(yōu)選的是式(IV)的化合物：

其中x、R¹、R⁶、R⁸、R⁹和R¹⁰如上述式(I)和(II)化合物所定義的，R²是C_1-6烷基，并且R³是C_1-6烷基，或者是其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或水合物。

尤其優(yōu)選的是(IV)的化合物，其中R²是甲基并且R³是式-CH(CH₃)CH₂CH₃基團(tuán)。

更優(yōu)選的是式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物，其中X是S，R⁶是C_1-6烷基(尤其是正丙基)并且R⁸是C_1-6烷基(尤其是正丙基)。

式(I)、(II)、(III)和/或(IV)的尤其優(yōu)選的化合物是：

優(yōu)選的，在國際申請(qǐng)PCT/EP2013/002790中公開的化合物排除在本申請(qǐng)或?qū)＠秶?。尤其?yōu)選的，下述化合物排除在本申請(qǐng)或?qū)＠秶猓?/p>

本發(fā)明的主題還包括式(I)、(II)、(III)和(IV)的化合物用于制備治療和/或預(yù)防癌癥或其他疾病的藥物(例如通過綴合制備)的用途。而且，本化合物對(duì)于預(yù)防和/或治療腫瘤疾病是有用的。

可以由本發(fā)明的化合物以及相應(yīng)的綴合物治療或預(yù)防的癌癥包括但不限于人肉瘤和癌，例如纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎瘤、維耳姆斯瘤、宮頸癌、睪丸腫瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜細(xì)胞瘤、松果體瘤、血管母細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤、腦膜瘤、黑素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；白血病，例如急性淋巴細(xì)胞白血病和急性粒細(xì)胞白血病(原始粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、粒-單核細(xì)胞、單核細(xì)胞和紅白血病)；慢性白血病(慢性粒細(xì)胞(粒細(xì)胞)白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血病)，以及真性紅細(xì)胞增多癥、淋巴瘤(霍奇金病和非霍奇金病)、多發(fā)性骨髓瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥和重鏈病。

白血病的其他實(shí)例包括急性和/或慢性白血病,例如淋巴細(xì)胞白血病(例如，如p388(小鼠)細(xì)胞系所示例)、大顆粒淋巴細(xì)胞白血病和原始淋巴細(xì)胞白血?。籘-細(xì)胞白血病，例如T-細(xì)胞白血病(例如，如CEM、Jurkat和HSB-2(急性)，YAC I(小鼠)細(xì)胞系所示例)、T-淋巴細(xì)胞白血病和T-原始淋巴細(xì)胞白血病；B細(xì)胞白血病(例如，如SB(急性)細(xì)胞系所實(shí)例)，和B-淋巴細(xì)胞白血病；混合型細(xì)胞白血病(mixed cellieukaemia),例如B和T細(xì)胞白血病以及B和T淋巴細(xì)胞白血??；髓性白血病，例如粒細(xì)胞白血病、髓細(xì)胞白血病(例如，如HL-60(早幼粒細(xì)胞)細(xì)胞系所示例)和髓細(xì)胞性白血病(例如，如K562(慢性)細(xì)胞系所示例)；中性粒細(xì)胞白血病；嗜酸性粒細(xì)胞白血??；單核細(xì)胞白血病(例如，如THP-1(急性)細(xì)胞系所示例)；粒-單核細(xì)胞白血??；內(nèi)格利型髓性白血??；以及非淋巴細(xì)胞白血病。白血病的其他實(shí)例描述于The Chemotherapy Sourcebook,MichaelC.Perry Ed.,Williams&WiIliams(1992)的第60章和Holland Frie Cancer Medicine 5th Ed.,Bast et al.Eds.,B.C.Decker Inc.(2000)的第36節(jié)。前述參考文獻(xiàn)整體援引加入本文。

附圖說明

圖1顯示了TAM375ADC-1和TAM375ADC-2對(duì)抗SK-BR-3人乳腺癌細(xì)胞系的體外細(xì)胞毒性的劑量響應(yīng)曲線。TAM-375ADC-1的IC50[M]為2.246e-010，TAM-375ADC-2的IC50[M]為1.257e-010。

具體實(shí)施方式

實(shí)例

根據(jù)PCT/EP2008/003762(WO 2008/138561)中的方法合成用于制備式(I)、(II)、(III)和(IV)化合物的各構(gòu)件(building block)(微管溶素和/或細(xì)胞溶素衍生物)。本文使用的術(shù)語細(xì)胞溶素是指合成的微管溶素的衍生物。

本文表述的所有化合物都通過¹H-NMR、¹³C-NMR和質(zhì)譜進(jìn)行表征。純度通過HPLC確定。

合成具有二硫化物間隔物的微管溶素/細(xì)胞溶素衍生物的一般方法：

合成微管溶素/細(xì)胞溶素-S-S-Py：

其中R是本技術(shù)領(lǐng)域已知的合適的保護(hù)基或?qū)嵗酗@示的微管溶素或細(xì)胞溶素衍生物的相應(yīng)部分。

在0℃下，在攪動(dòng)的微管溶素/細(xì)胞溶素或相應(yīng)的構(gòu)件和間隔物溶液中加入六氟磷酸酯(HBTU)和二異丙乙胺(DIEA)。在添加完成后，移除冷卻槽并通過TLC或HPLC檢測反應(yīng)混合物。在大約2-4小時(shí)后，顯示反應(yīng)完成，然后將混合物直接裝入柱子中并用純DCM(約700mL)以及隨后用梯度濃度為1-3％的甲醇：DCM進(jìn)行首次洗脫，以獲得得率為約65-85％的純化合物。

合成具有酰肼間隔物的微管溶素/細(xì)胞溶素衍生物的一般方法：

合成微管溶素/細(xì)胞溶素-NHNHCO-(O-CH₂-CH₂-O-)_n-N₃(酰肼間隔物)

在-15℃下，二異丙基乙胺和氯甲酸異丁酯通過注射器一起加入TAM424的無水乙酸乙酯溶液。在-15℃、氬氣環(huán)境下攪動(dòng)45分鐘后，將TAM422B的無水乙酸乙酯溶液(1.0mL)加入反應(yīng)混合物中。獲得的溶液在在-15℃、氬氣環(huán)境下攪動(dòng)15分鐘，然后在室溫下攪動(dòng)45分鐘，然后濃縮。剩余物通過急驟層析法(硅凝膠，DCM中甲醇為1-3％)純化，以獲得TAM426(59.5mg，HPLC檢測純度大于95％)53％的分離得率。

合成具有烷基疊氮化物間隔物的微管溶素/細(xì)胞溶素衍生物的一般方法：

合成微管溶素/細(xì)胞溶素-(CH₂)_n-N₃：

其中R是本技術(shù)領(lǐng)域已知的合適的保護(hù)基或?qū)嵗酗@示的微管溶素/細(xì)胞溶素衍生物的相應(yīng)部分，但不限于此。

在室溫下，將相應(yīng)的烷基疊氮化物添加至攪動(dòng)的微管溶素/細(xì)胞溶素和K₂CO₃溶液中。反應(yīng)混合物攪動(dòng)過夜并通過TLC或HPLC監(jiān)控。在反應(yīng)完成后，濃縮溶液，重溶于DCM中，并用飽和氯化銨提取。水相通過DCM提取，有機(jī)相合并然后在硫酸鈉中干燥。溶劑蒸發(fā)后，粗產(chǎn)物通過柱層析(甲醇：DCM為1-5％)純化。

合成具有乙烯氧基(ethylenoxy)間隔物的微管溶素/細(xì)胞溶素衍生物的一般方法：

合成微管溶素/細(xì)胞溶素-(CH₂-CH₂-O-)_n-N₃:

其中R是本技術(shù)領(lǐng)域已知的合適的保護(hù)基或?qū)嵗酗@示的微管溶素/細(xì)胞溶素衍生物的相應(yīng)部分，但不限于此。

在室溫下，將甲磺酰化(寡)-乙烯氧基疊氮化物間隔物加入至攪動(dòng)的微管溶素/細(xì)胞溶素或相應(yīng)的構(gòu)件和K₂CO₃溶液中，然后在60℃下加熱18h。反應(yīng)通過TLC或HPLC監(jiān)控。反應(yīng)完成后，將混合物過濾并濃縮。剩余物重溶于DCM中并使用飽和氯化銨提取。水相通過DCM提取，有機(jī)相合并然后用飽和鹽水洗滌，在硫酸鈉中干燥。除去溶劑后，產(chǎn)物通過柱層析(通常甲醇：DCM為1-5％)純化。

合成具有甘氨酸間隔物的微管溶素/細(xì)胞溶素衍生物的一般方法：

合成微管溶素/細(xì)胞溶素-(甘氨酸)n-NH₂：

其中R是本技術(shù)領(lǐng)域已知的合適的保護(hù)基(PG)或?qū)嵗酗@示的微管溶素/細(xì)胞溶素衍生物的相應(yīng)部分，但不限于此。

甘氨酸衍生物的數(shù)量為3-10。相應(yīng)的甘氨酸基團(tuán)使用本領(lǐng)域已知的合適的保護(hù)基團(tuán)；例如，在偶聯(lián)之前，將氨基作為FMOC或BOC衍生物進(jìn)行保護(hù)，羧基末端作為酯進(jìn)行保護(hù)，通過公知條件可將其脫去。通過公知的去保護(hù)條件，可在偶聯(lián)至微管溶素/細(xì)胞溶素或合適的構(gòu)件之前，脫去羧酸保護(hù)。

在-15℃下，DIPEA和氯甲酸異丁酯一起通過注射器加入N-Boc-三甘氨酸的無水乙酸乙酯溶液。在-15℃、氬氣環(huán)境下攪動(dòng)45分鐘后，將TAM470的無水乙酸乙酯溶液(1.0mL)加入反應(yīng)混合物中。獲得的溶液在在-15℃、氬氣環(huán)境下攪動(dòng)15分鐘，然后在室溫下攪動(dòng)45分鐘，然后濃縮。剩余物通過急驟層析法(硅凝膠，DCM中甲醇為1-3％)純化，以獲得BOC保護(hù)的肼衍生物76％的分離得率。

將上述獲得的產(chǎn)物溶解在THF(1mL)中并在0℃下加入鹽酸化物THF溶液以脫去BOC基團(tuán)。在室溫下繼續(xù)攪拌該反應(yīng)混合物30min。反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋并用飽和氯化銨洗滌，干燥并濃縮至產(chǎn)生82mg游離胺TAM479(得率86％)。

通常而言，本發(fā)明的新分子在0.01-400nM顯示對(duì)抗幾種癌細(xì)胞系的活性。

本發(fā)明可能的化學(xué)和酶調(diào)節(jié)的化合物的綴合是例如胺調(diào)節(jié)的綴合、內(nèi)含肽或分選酶A調(diào)節(jié)的綴合、轉(zhuǎn)谷酰胺酶調(diào)節(jié)的綴合、硫醇調(diào)節(jié)的綴合和“點(diǎn)擊化學(xué)”調(diào)節(jié)的綴合，但并不限于這些。

本發(fā)明的目標(biāo)是提供微管溶素/細(xì)胞溶素衍生物，其通過修飾使得這類衍生物可直接用于或通過進(jìn)一步的合適連接物用于綴合至任意種類的運(yùn)輸工具上，不管是目標(biāo)分子或生物分子，例如蛋白、肽、小分子或可攜帶目標(biāo)成分的聚合載體。

上述衍生物具有氨基，可用于將有利于偶聯(lián)的合適的連接物如纈氨酸瓜氨酸馬來酰亞胺連接物連接至巰基。(G.M.Dubowchik et al.,Bioconjugate Chem 2002,13,855-869；S.C.Jeffrey et al.,J.Med.Chem.2005,48,1344-1358)。

合成馬來酰亞胺基-val-cit-PABOCO-微管溶素/細(xì)胞溶素-TAM461:

TAM461和TAM465在干燥條件下溶解在無水DMF中，獲得的溶液用HOBt和DIPEA處理。反應(yīng)在室溫下攪拌18h。濃縮反應(yīng)混合物，獲得的油通過柱層析使用甲醇：DCM為2-6％進(jìn)行純化，以獲得35mg(64％)的TAM467白色固體。ESI-MS:m/z＝1371[M+H].

合成馬來酰亞胺基-val-cit-PABOCO-微管溶素/細(xì)胞溶素-TAM470:

TAM470和TAM466在干燥條件下溶解在無水DMF中，獲得的溶液用HOBt和DIPEA處理。反應(yīng)在室溫下攪拌18h，然后使用TLC進(jìn)行分析，在表明反應(yīng)完成后，濃縮反應(yīng)混合物，獲得的油用甲醇：DCM(4-12％)通過柱層析進(jìn)行純化，以獲得56mg TAM471(產(chǎn)率62％)。ESI-MS:1384.6[M+1]。

抗體藥物的綴合物的合成可以使用合適的還原型抗體和TAM467或TAM471根據(jù)G.M.Dubowchik et al.,Bioconjugate Chem.2002,13,855-869中描述的方法進(jìn)行合成。

進(jìn)一步的實(shí)例：

微管溶素三肽TPM260和疊氮基-PEG-苯基丙氨酸肼TPM283：

將DIPEA(0.18ml,2.1當(dāng)量)、HO-At(72mg,1.1當(dāng)量)和EWG*HCl(97mg,1.05當(dāng)量)添加至溶于5mL干燥的DMF中的酸(TPM260,279mg,0.478mmol)溶液。溶液在室溫下攪拌15min，加入溶于1mL干燥的DMF中的胺(TPM283，232mg)溶液。在室溫下攪拌該混合物24個(gè)小時(shí)。反應(yīng)混合物用乙醚和鹽水稀釋。將有機(jī)相分離，并用鹽水再次洗滌。干燥合并的有機(jī)相(Na₂SO₄)并真空濃縮。粗產(chǎn)物進(jìn)行層析(二氧化硅，二氯甲烷：甲醇為97:3→96:4)。獲得279mgTPM285(69％得率)。

疊氮化物TPM285還原至胺TPM295：

在氬氣環(huán)境下，疊氮化物(TPM285,9.6mg)溶解于2ml干燥的乙醇中，添加10％Pd/C。將氬氣變?yōu)闅錃?1個(gè)大氣壓)，懸浮液在室溫下攪拌5h。Pd/C通過硅藻土墊進(jìn)行過濾，并用二氯甲烷進(jìn)行洗滌。真空濃縮獲得12mg TPM295。

具有初級(jí)氨基的上述相同衍生物可用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶通過酶偶聯(lián)至在合適位置具有谷氨酰胺的生物分子，例如抗體((G.Pasut,F.M.Veronese,State of the Art in PEGylation:The great versatility achieved after forty years of research,J.Control.Release(2012)161,461-472，參考文獻(xiàn)通過引用結(jié)合至本文)。

使用赫賽汀^TM和TAM375和轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的抗體藥物綴合物的合成可通過本領(lǐng)域已知的方法使用一種和兩種不同的藥物抗體比例(DAR)實(shí)現(xiàn)。

在本發(fā)明描述的具有疊氮化基團(tuán)的衍生物可用于利用所謂的點(diǎn)擊化學(xué)，憑借配對(duì)物具有炔烴基團(tuán)，進(jìn)行偶聯(lián)。具有相反順序的官能團(tuán)可使用同類化學(xué)過程，即微管溶素/細(xì)胞溶素上具有炔基間隔物，在待偶聯(lián)分子上具有疊氮基(J.M.Baskin et al.,PNAS,2007,104(43),16793–16797；E.M.Sletten et al.,2011Acc.Chem.Res.2011,44(9)666–676；M.K Schultz et al.,Org.Lett.2010,12,2398–401；F.Schoenebeck et al.,JACS 2009,131,8121–8133).

本發(fā)明中在微管溶素/細(xì)胞溶素的合適位置具有3-10個(gè)甘氨酸的甘氨酸標(biāo)記的衍生物可用于與待綴合分子上具有所需LPXTG順序的分選酶進(jìn)行酶偶聯(lián)(Lit.:G.Pasut,F.M.Veronese,State of the Art in PEGylation:The great versatility achieved after forty years of research,J.Control.Release(2012)161,461-472；M.W.-L.Popp,H.L.Ploegh,Making and Breaking Peptide Bonds:Protein Engineering Using Sortase,Ang.Chemie Int.Ed.2011,50,5024-5032)。

其他實(shí)例

下述化合物使用上述類似方法合成：