本發(fā)明屬于海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種長(zhǎng)牡蠣原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)必不可少的過(guò)程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)得到大量的細(xì)胞或其代謝產(chǎn)物。因?yàn)樯锂a(chǎn)品都是從細(xì)胞得來(lái)，所以可以說(shuō)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中最核心、最基礎(chǔ)的技術(shù)。

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：能長(zhǎng)期傳代，保持活性，便于監(jiān)控檢測(cè)結(jié)構(gòu)功能和生命活動(dòng)。培養(yǎng)條件可以人為的控制便于研究細(xì)胞代謝、物理、化學(xué)、生物因素的影響。可用于各種觀察和檢測(cè)手段研究活細(xì)胞的變化（變異、分化），可從細(xì)胞水平開展亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和代謝分子的表達(dá)。研究范圍和細(xì)胞來(lái)源廣泛，選擇性廣。不同代次細(xì)胞可長(zhǎng)期保存，既可開展同代次不同條件和方法研究，又可觀察不同代次的動(dòng)態(tài)變化。耗資少、經(jīng)濟(jì)、成本低、可大量培養(yǎng)，利于生物制品的生產(chǎn)。

因此，海洋生物的研究也越來(lái)越多的用到細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于上述研究，本發(fā)明旨在提供一種長(zhǎng)牡蠣原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法。

一種長(zhǎng)牡蠣原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法，包括如下步驟：

（1）剪取牡蠣鰓組織，于含抗生素的滅菌海水中浸泡，其中青霉素55mg/l；鏈霉素100mg/l；慶大霉素100mg/l，每半小時(shí)換一次海水，清洗5-6次；

（2）剪碎組織，加入l15培養(yǎng)基，抗生素濃度同海水，移入15ml離心管中1200rpm5min，棄掉液體，清洗4-5次，直到培養(yǎng)基不再混濁；

（3）均勻分散剪碎的組織于6孔培養(yǎng)板中，每孔加入2mll15培養(yǎng)基，置于26℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，過(guò)夜游離細(xì)胞；

（4）吸取6孔板中游離細(xì)胞，于15ml離心管中1200rpm5min收集細(xì)胞，加入新鮮l15培養(yǎng)基重新清洗一次；

（5）加入l15培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻分散至6孔板內(nèi)，每孔l15培養(yǎng)基2ml，平均每孔10⁵-10⁶個(gè)細(xì)胞。

本發(fā)明的長(zhǎng)牡蠣原代細(xì)胞培養(yǎng)方法，操作簡(jiǎn)單，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)好，完全可以滿足后續(xù)試驗(yàn)要求。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。

一種長(zhǎng)牡蠣原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法，包括如下步驟：

（1）剪取牡蠣鰓組織，于含抗生素的滅菌海水中浸泡，其中青霉素55mg/l；鏈霉素100mg/l；慶大霉素100mg/l，每半小時(shí)換一次海水，清洗5-6次；

（2）剪碎組織，加入l15培養(yǎng)基，抗生素濃度同海水，移入15ml離心管中1200rpm5min，棄掉液體，清洗4-5次，直到培養(yǎng)基不再混濁；

（3）均勻分散剪碎的組織于6孔培養(yǎng)板中，每孔加入2mll15培養(yǎng)基，置于26℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，過(guò)夜游離細(xì)胞；

（4）吸取6孔板中游離細(xì)胞，于15ml離心管中1200rpm5min收集細(xì)胞，加入新鮮l15培養(yǎng)基重新清洗一次；

（5）加入l15培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻分散至6孔板內(nèi)，每孔l15培養(yǎng)基2ml，平均每孔10⁵-10⁶個(gè)細(xì)胞。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種長(zhǎng)牡蠣原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法，包括如下步驟：（1）剪取牡蠣鰓組織，于含抗生素的滅菌海水中浸泡，每半小時(shí)換一次海水，清洗5-6次；（2）剪碎組織，加入L15培養(yǎng)基，移入15ml離心管中1200rpm?5min，棄掉液體，清洗4-5次，直到培養(yǎng)基不再混濁；（3）均勻分散剪碎的組織于6孔培養(yǎng)板中，每孔加入2ml?L15培養(yǎng)基，置于26℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，過(guò)夜游離細(xì)胞；（4）吸取6孔板中游離細(xì)胞，于15ml離心管中1200rpm?5min收集細(xì)胞，加入新鮮L15培養(yǎng)基重新清洗一次；（5）加入L15培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻分散至6孔板內(nèi)，每孔L15培養(yǎng)基2ml，平均每孔105-106個(gè)細(xì)胞。本發(fā)明的長(zhǎng)牡蠣原代細(xì)胞培養(yǎng)方法，操作簡(jiǎn)單，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)好，完全可以滿足后續(xù)試驗(yàn)要求。

技術(shù)研發(fā)人員：褚方強(qiáng)
受保護(hù)的技術(shù)使用者：青島清泉生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：2015.12.25
技術(shù)公布日：2017.07.04