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玻璃海鞘粗提物的制備方法與流程

文檔序號:12707259閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種玻璃海鞘粗提物的制備方法,其特征在于,步驟如下:

(1)將采集的冷凍玻璃海鞘融化,控干海水,用淡水沖洗干凈,控干水分,收集個體;將收集的玻璃海鞘用粉碎機粉碎,紗布過濾后,加入適量純水用數顯高速分散勻質機勻漿,勻漿時間不宜過長;

(2)將勻漿液于4℃、10000rpm離心20min,去除泥沙雜質及不溶性物質,收集上清液,收集離心后的上清可置于-80℃保存?zhèn)溆茫?/p>

(3)將玻璃海鞘粉碎上清液加熱到70℃,孵育30min;

(4)將上清液用EDMAN高速離心機離心,轉速10000rpm,時間20min,收集上清液備用,棄沉淀;

(5)上清液加入三倍體積的丙酮溶劑,使玻璃海鞘粗提液成為70%的丙酮溶液,進行分離純化;整個過程丙酮應緩慢加入,邊加入邊攪拌,防止局部丙酮濃度過大,引起蛋白過度沉淀;

(6)4℃靜置過夜;

(7)用虹吸管引流,移除丙酮上清液;沉淀用EDMAN高速離心機離心,轉速10000rpm,時間20min,棄上清,留沉淀備用;

(8)沉淀放入通風廚,12小時左右盡量除去沉淀中殘留的丙酮;

(9)將沉淀溶解于超純水中,溶液用EDMAN高速離心機離心,轉速10000rpm,時間20min,棄沉淀,取上清備用;

(10)上清液通過milipore公司的超濾儀,用5KDa的濾膜進行超濾截留,保留大于5KDa的部分;采用BCA法測定蛋白濃度后,MTT試驗檢測組份活性,將活性組份置于-20℃保存。

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