1.一種用于青枯菌的LAMP引物組合,其特征在于由正向外引物F3,反向外引物B3,正向內(nèi)引物FIP,反向內(nèi)引物BIP,各引物序列如下:
FIP:5’-TACGCCGTTTCATCGGCCAGGTACACGGCGCACAAGT-3’;
BIP:5’-ATCGTCACGTTCGACAAGGTGGAATGCCGGCTGCAACTG-3’;
F3:5’-CCTGTACGTGGTCGGCTAT-3’;
B3:5’-ACCGCAACACGGGATCA-3’。
2.權(quán)利要求1所述引物組合在檢測(cè)青枯菌中的應(yīng)用。
3.一種檢測(cè)青枯菌的LAMP試劑盒,其特征在于,包含以下成分:
(1)含權(quán)利要求1所述的引物組混合液,濃度分別為:正向外引物F3 1μM、反向外引物B3 1μM、正向內(nèi)引物FIP 8μM、反向內(nèi)引物FIP 8μM;
(2)反應(yīng)液及染料,包含:7mM dNTPs、100mM Tris-HCl,50mM KCl,50mM(NH4)2SO4,40mM MgSO4、0.5%Triton X-100、5M Betain、40U Bst DNA聚合酶,SYBR Green I;
(3)陽(yáng)性對(duì)照為青枯菌GMI1000的基因組DNA,陰性對(duì)照為不含目的基因的反應(yīng)混合液。
4.權(quán)利要求3所述的檢測(cè)青枯菌的LAMP試劑盒在檢測(cè)青枯菌中的應(yīng)用。
5.一種檢測(cè)青枯菌的方法,其特征在于:包括以DNA為模板,利用LAMP引物組或LAMP試劑盒進(jìn)行LAMP擴(kuò)增,觀察反應(yīng)溶液的顏色變化,顯示橙色表示檢測(cè)為陰性,不存在青枯菌,而顯示綠色的為陽(yáng)性,樣品中存在青枯菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)青枯菌的方法,其特征在于:提取待測(cè)樣品的總DNA,取1μL DNA溶液,加入5μL反應(yīng)液、5μL引物組混合液、14μL滅菌超純水進(jìn)行LAMP反應(yīng),反應(yīng)程序?yàn)?0~65℃,時(shí)間為30~50min,擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行顏色變化的觀察。