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基于微流控芯片的三維血腦屏障模型的建立方法與流程

文檔序號:12584269閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種微流控芯片,其特征在于:該微流控芯片主要包括三層結構:主通道層(1)、膠原通道層(5)和玻璃底層(9);主通道層(1)包含細胞入口(2)、主通道(3)和廢液出口(4);細胞入口(2)和廢液出口(4)通過主通道(3)連接,膠原通道層(5)包含膠原入口(6)、膠原液池(7)和膠原通道(8),膠原入口(6)和膠原液池(7)通過膠原通道(8)連接;同時主通道(3)和膠原液池(7)上下直接聯(lián)通。

2.按照權利要求1所述的微流控芯片,其特征在于:所述微流控芯片的主通道層和膠原通道層為兩塊相同大小的PDMS聚合物,主通道層PDMS芯片厚度為0.8-2mm,主通道層中主通道寬度為1mm,膠原通道層PDMS芯片厚度為0.5-1mm,膠原液池的直徑為800μm,兩層PDMS芯片封接后,主通道可將膠原液池完全覆蓋;完全封接在一起的兩塊PDMS芯片再封接在潔凈玻璃上,構成完整的芯片。

3.按照權利要求1所述的微流控芯片,其特征在于:由于膠原通道層上的膠原入口與主通道層上的細胞入口和廢液出口互相聯(lián)通;因此,從主通道中灌注的液體滲入膠原通道中后可由膠原入口進行收集。

4.按照權利要求1所述的微流控芯片,其特征在于:整個芯片設計可并排封接在足夠大的潔凈玻璃底面以增加通量,個數可在1-100個之間。

5.一種基于權利要求1所述微流控芯片的三維血腦屏障模型的建立方法,其特征在于方法過程如下:

(1)膠原工作液的配制

將I型鼠尾膠原按照配方配制為終濃度為3-9mg/mL的工作液,用移液器將配制好的膠原工作液從膠原入口加入到膠原通道中,將整個芯片置于恒溫培養(yǎng)箱中孵育30-45分鐘,促使膠原由粘稠狀液體變?yōu)楣麅鰻钅z;

(2)芯片內細胞接種及血腦屏障模型的建立

將新生SD大鼠的原代腦星形膠質細胞和腦微血管內皮細胞消化為單細胞懸液,密度為5×105-1×106cells/mL;先從細胞入口向主通道中注入原代腦星形膠質細胞懸液,靜置8-10分鐘,再從細胞入口向主通道中注入原代腦微血管內皮細胞懸液,靜置8-10分鐘后,將整個芯片置于恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2-4天,每24小時換液一次。

6.按照權利要求5所述的基于微流控芯片的三維血腦屏障模型的建立方法,其特征在于:所述步驟(1)中,鼠尾膠原的工作液濃度優(yōu)選6mg/mL。

7.按照權利要求5所述的基于微流控芯片的三維血腦屏障模型的建立方法,其特征在于:所述步驟(2)中,所用的大鼠的原代腦腦星形膠質細胞和腦微血管內皮細胞均為未經傳代培養(yǎng)的原代細胞。

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