本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種乳酸菌在調(diào)制青貯飼料及預(yù)防奶牛乳房炎的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
青貯是指在密封條件下使青綠飼料發(fā)酵以能夠在相當長的時間內(nèi)保持其質(zhì)量相對穩(wěn)定的一種保鮮技術(shù)。
乳酸菌青貯添加劑，是專門用于飼料青貯的一類微生物添加劑，主要作用是有目的地調(diào)節(jié)青貯料內(nèi)微生物，調(diào)控青貯發(fā)酵過程，促進多糖與粗纖維的轉(zhuǎn)化，從而有效地提高青貯飼料的質(zhì)量。因此，在青貯過程中添加乳酸菌青貯添加劑是非常必要的。
乳酸菌制劑是人工擴大青貯原料中乳酸菌群體的方法，當原料表面附著乳酸菌數(shù)量少時，通過添加乳酸菌制劑包裝發(fā)酵所需的乳酸菌數(shù)量，取得早期進入乳酸發(fā)酵優(yōu)勢是非常有效的。乳酸菌制劑的添加效果與可溶性碳水化合物含量、緩沖能、干物質(zhì)含量以及細胞成分變化有關(guān)。研究表明乳酸菌的添加明顯促進了pH值的降低和乳酸含量的增加，使乳酸在青貯飼料中占主導(dǎo)地位。乳酸菌迅速繁殖成為青貯飼料中的優(yōu)勢菌，在適宜的溫度、酸度、濕度環(huán)境中大量繁殖經(jīng)過糖酵解作用產(chǎn)生大量乳酸，乳酸可部分轉(zhuǎn)化為醋酸、丙酸及丁酸，使pH值進一步下降，以致于遏制了乳酸菌的生成，逐漸形成一個穩(wěn)定的狀態(tài)，即相對穩(wěn)定期。由于存在大量的乳酸菌和乳酸，形成了一個相對穩(wěn)定的平衡狀態(tài)，乳酸菌分泌乳酸可以保持飼料不受其他因素影響而變質(zhì)，同時又限制了乳酸菌的過量繁殖，乳酸菌在乳酸不足時又繼續(xù)生長分泌乳酸，微生態(tài)如此循環(huán)。
國外對青貯添加劑技術(shù)的研究，主要集中在兩個方面，一是外加防腐劑研究，以停止青飼料中微生物的活動，從而達到保存目的；二是微生物青貯技術(shù)的研究，即在青貯過程中，人為添加微生物制劑(包括活菌體、酶)。我國在青貯微生物添加劑領(lǐng)域的研究才剛剛起步，近幾年一些單位篩選或從國外引進了一些菌株進行研究，但由于青貯過程中微生物菌群反應(yīng)的復(fù)雜性和微生物制劑生產(chǎn)工藝的技術(shù)程度，到目前鮮有同類產(chǎn)品問世。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種乳酸菌在調(diào)制青貯飼料及預(yù)防奶牛乳房炎的應(yīng)用，以解決上述背景技術(shù)中所提到的問題。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
一種乳酸菌在調(diào)制青貯飼料中的應(yīng)用。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述乳酸菌為嗜酸乳桿菌。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述嗜酸乳桿菌用作青貯添加劑。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述嗜酸乳桿菌的發(fā)酵條件為：MRS液體培養(yǎng)基，初始pH值為2.15～8.9，接種量為0.1mL，發(fā)酵溫度為37℃。
一種乳酸菌在制備預(yù)防奶牛乳房炎的藥物中的應(yīng)用。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述乳酸菌為嗜酸乳桿菌。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述嗜酸乳桿菌用作預(yù)防奶牛乳房炎的抑菌劑。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述奶牛乳房炎的致病菌包括大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：
作為理想的青貯添加劑的乳酸菌必須滿足的條件有：
1、生長旺盛，能夠與其他區(qū)系競爭而且占統(tǒng)治地位；
2、具有同型發(fā)酵途徑，快速產(chǎn)生乳酸；
3、耐酸，并盡快降低pH，至少使最終pH達到4.0；
4、能發(fā)酵多種糖，能發(fā)酵葡萄糖、果糖、蔗糖、果聚糖、尤其是戊糖；
5、不使蔗糖產(chǎn)生葡聚糖；
6、不使果糖產(chǎn)生甘露醇；
7、不降解有機酸；
8、具有一定的生長溫度，其范圍可延伸至50℃左右；
9、能夠在經(jīng)過萎蔫的低水分材料草上生長；
10、必須能被制成粉末或顆粒的形式，而且能以這種形式穩(wěn)定保存。
本發(fā)明采用嗜酸乳桿菌作為青貯添加劑，可以提高青貯飼料的質(zhì)量，同時該嗜酸乳桿菌具有增強免疫作用，可用于預(yù)防奶牛乳房炎等疾病的發(fā)生。
具體實施方式
下面將結(jié)合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
本發(fā)明實施例中，一種乳酸菌在調(diào)制青貯飼料及預(yù)防奶牛乳房炎的應(yīng)用，主要研究內(nèi)容是篩選出產(chǎn)酸能力強的菌株，并對其發(fā)酵條件進行優(yōu)化。具體的研究從以下具體實施步驟進行試驗：
1、菌株選?。哼x取嗜酸乳桿菌(LB-1)、丙酸桿菌(PP-1)。
2、培養(yǎng)
分別將嗜酸乳桿菌(LB-1)、丙酸桿菌(PP-1)在MRS固體培養(yǎng)基上反復(fù)劃線，經(jīng)幾代純化，獲得純種的菌株；然后將純種的嗜酸乳桿菌(LB-1)菌株、丙酸桿菌(PP-1)菌株分別接種于MRS液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)30h，測定產(chǎn)酸率，從中篩選出產(chǎn)酸量高的菌株。
3、發(fā)酵條件的優(yōu)化
分別選擇不同的發(fā)酵液的初始pH(分別為1.5、2.0、2.15、3.0、3.2、4.0、5.0、5.4、6.8、8.1、8.9、9.0)，在接種量為0.1mL、發(fā)酵溫度為37℃條件下，通過測定菌落數(shù)，確定最佳培養(yǎng)條件。
3.1測定方法：
3.1.1用精密pH計在室溫下測定pH值；
3.1.2以酚酞為指示劑，用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液滴定，結(jié)果以乳酸百分含量表示：
乳酸(％)＝(NNaOH*VNaOH*0.09)/V樣品*100％；
其中，NNaOH為氫氧化鈉溶液的濃度，單位為mol/L；VNaOH為消耗的氫氧化鈉溶液的體積，單位為L；V樣品為樣品的體積，單位為L。
3.1.3采用平板菌落計數(shù)法進行菌落數(shù)的測定。
3.2耐酸堿的測定
以pH值為7.0的培養(yǎng)基為對照組，將活化好的嗜酸乳桿菌(LB-1)、丙酸桿菌(PP-1)分別接入上述不同pH值的培養(yǎng)基中，在37℃溫箱培養(yǎng)8h后，將試管內(nèi)培養(yǎng)液搖勻，用微量移液器分別吸取0.1mL，加入到pH值為7.0的各種菌的培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)18-24h，觀察菌的生長速度和培養(yǎng)基的渾濁度。
3.3抑菌活性的測定
在直徑為90mm培養(yǎng)皿中加入20mL滅菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，凝固后，用移液器分別吸取0.2mL指示菌大腸桿菌懸液、指示菌金黃色葡萄球菌懸液于平皿中的固體培養(yǎng)基上，用滅菌推棒涂抹均勻，在每個平皿中等距離放置牛津杯(直徑為8mm)4個，每個牛津杯中加入200μL的上述菌液的上清液，在37℃溫箱中培養(yǎng)18-24h，若在牛津杯周圍出現(xiàn)明顯抑菌圈，則表明菌液或菌的代謝產(chǎn)物具有抑菌活性，即可用游標卡尺測量抑菌圈的直徑。
4、結(jié)果
按照上述測定方法測定的結(jié)果，表明：嗜酸乳桿菌(LB-1)對指示菌大腸桿菌和指示菌金黃色葡萄球菌有抑制作用，而丙酸桿菌(PP-1)則對指示菌大腸桿菌和指示菌金黃色葡萄球菌沒有抑制作用；
丙酸桿菌(PP-1)分別在pH值4.0、5.0、5.4、8.1、9.0的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)8h后，再接種到pH值7.0的營養(yǎng)肉湯中，培養(yǎng)基變渾濁，可以繼續(xù)生長，說明該菌對酸堿有一定的耐受力。而接種到pH值1.5、2.0、3.2的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)8h后，再接種到pH值7.0的營養(yǎng)肉湯時，則不能生長。
嗜酸乳桿菌(LB-1)在pH值2.15的MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)2h、3h后，再接種到pH值6.8的MRS液體培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)時，培養(yǎng)基變渾濁，說明在該培養(yǎng)基中可生長。而在pH值2.15的MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)6h后，再接種到pH值6.8的MRS液體培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)時，在其中 不能生長。在pH值3.0、8.9的MRS液體培養(yǎng)基2h、3h、6h后，再接種到pH值6.8的MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，在其中均能生長。在pH值1.5的MRS液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)2h、3h、6h后，再接種到pH值6.8的MRS液體培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)時，在其中不能生長。以上說明嗜酸乳桿菌(LB-1)對酸堿具有一定的耐受力。
研究表明，嗜酸乳桿菌(LB-1)具有增強動物免疫力、提高動物抗病力、產(chǎn)生有益代謝產(chǎn)物、促進消化等生物活性；耐酸堿試驗，表明嗜酸乳桿菌(LB-1)符合青貯發(fā)酵的基本條件；且嗜酸乳桿菌(LB-1)對從患隱性乳房炎奶牛乳中分離的致病菌大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有抑制作用。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應(yīng)將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。
此外，應(yīng)當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。