本發(fā)明涉及菌類(lèi)栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蘑菇菌種提純復(fù)壯的方法。

技術(shù)背景

隨著蘑菇工廠(chǎng)化栽培的快速發(fā)展，菌種質(zhì)量的控制愈見(jiàn)重要。連續(xù)的生產(chǎn)過(guò)程中蘑菇的原始母種容易出現(xiàn)病毒、細(xì)菌、真菌污染以種性退化現(xiàn)象，蘑菇菌種受到污染或退化后，會(huì)導(dǎo)致后期出菇的大量減產(chǎn)甚至絕產(chǎn)。目前針對(duì)蘑菇菌種污染及退化問(wèn)題，多采用尖端脫毒及斷橋脫毒的方法，在實(shí)際生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)尖端脫毒和斷橋脫毒能力有限，無(wú)法完全保障菌種的安全可靠，同時(shí)尖端脫毒和斷橋脫毒無(wú)法起到復(fù)壯蘑菇種性的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

根據(jù)上述不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種提純、復(fù)壯蘑菇菌種的方法，此方法能快速脫去菌種所帶病毒、細(xì)菌、真菌污染的同時(shí)還起到復(fù)壯菌種的作用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案在于：一種蘑菇菌種提純復(fù)壯的方法，包括以下步驟：

培養(yǎng)料制作：準(zhǔn)備2支大試管；稱(chēng)取1號(hào)培養(yǎng)料和2號(hào)培養(yǎng)料各65-78g混合；將稱(chēng)量好的培養(yǎng)料使用小一號(hào)的試管，分別推入大試管中央；大試管兩端分別塞入棉塞進(jìn)行密封處理；大試管放入高壓滅菌鍋中120-125℃滅菌25-35min待用；

所述1號(hào)培養(yǎng)料組成為：松木屑重量的百分比為95-97％，泥沙重量的百分比為3-5％，將上述混合物使用1％高錳酸鉀水溶液將含水率調(diào)節(jié)到50-58％之間；

所述2號(hào)培養(yǎng)料組成為：松木屑重量的百分比為95-97％，泥沙重量的百分比為3-5％，將上述混合物使用0.5％托布津水溶液含水率調(diào)節(jié)到50-58％之間；

提純復(fù)壯操作：在無(wú)菌操作臺(tái)中挑取綠豆粒大小菌塊接種在滅好菌裝有1號(hào)培養(yǎng)料的試管中；將接種好的試管放置在25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)4-6天，每隔12小時(shí)觀察一次；當(dāng)1號(hào)培養(yǎng)料的蘑菇菌絲穿透1號(hào)培養(yǎng)基到達(dá)另一端時(shí)，挑取未接種端的菌絲在無(wú)菌操作下接入滅好菌的2號(hào)培養(yǎng)料的一端；接種好的帶2號(hào)培養(yǎng)料的試管，放置25℃下培養(yǎng)4-6天，每隔12小時(shí)觀察一次，當(dāng)菌絲穿透2號(hào)培養(yǎng)料時(shí)挑起未接種端的菌絲，接入普通PDA培養(yǎng)基；接入菌絲的普通PDA培養(yǎng)基，在25℃下培養(yǎng)4天，即成為無(wú)菌母種可用于生產(chǎn)或保存。

本發(fā)明的有益效果在于：

本發(fā)明采用兩種低毒的培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)兩次大試管培養(yǎng)可以脫去病毒、細(xì)菌、真菌污染，同時(shí)可以起到提純、復(fù)壯蘑菇菌種，解決了蘑菇原始母種容易出現(xiàn)病毒、細(xì)菌、真菌污染以致種性退化的問(wèn)題。本發(fā)明使得蘑菇原始母種的種性保留效果好，且配方簡(jiǎn)單，操作容易。本方法來(lái)源簡(jiǎn)單，周期短，準(zhǔn)確性高，快速脫去菌種所帶病毒、細(xì)菌、真菌污染同時(shí)起到復(fù)壯作用的菌種提純作用。本發(fā)明中利用高錳酸鉀強(qiáng)氧化作用、托布津溶液強(qiáng) 殺菌作用，分兩次交替殺滅母種中的病毒、細(xì)菌、霉菌，且松木屑培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)貧瘠培養(yǎng)基，能夠起到淘汰弱勢(shì)菌絲復(fù)壯菌種的作用。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例1

培養(yǎng)料制作：準(zhǔn)備2支大試管；稱(chēng)取1號(hào)培養(yǎng)料和2號(hào)培養(yǎng)料各65g，進(jìn)行混合；將稱(chēng)量好的培養(yǎng)料使用小一號(hào)的試管，分別推入大試管中央；大試管兩端分別塞入棉塞進(jìn)行密封處理；大試管放入高壓滅菌鍋中121℃滅菌30min待用；

1號(hào)培養(yǎng)料：松木屑重量的百分比為97％，泥沙重量的百分比為3％，將上述混合物使用1％高錳酸鉀水溶液將含水率調(diào)節(jié)到58％；

2號(hào)培養(yǎng)料：松木屑重量的百分比為97％，泥沙重量的百分比為3％，將上述混合物使用0.5％托布津水溶液含水率調(diào)節(jié)到58％之間；

提純復(fù)壯操作：在無(wú)菌操作臺(tái)中挑取綠豆粒大小菌塊接種在滅好菌裝有1號(hào)培養(yǎng)料的試管中；將接種好的試管放置在25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)6天，每隔12小時(shí)觀察一次；當(dāng)1號(hào)培養(yǎng)料的蘑菇菌絲穿透1號(hào)培養(yǎng)基到達(dá)另一端時(shí)，挑取未接種端的菌絲在無(wú)菌操作下接入滅好菌的2號(hào)培養(yǎng)料的一端；接種好的帶2號(hào)培養(yǎng)料的試管，放置25℃下培養(yǎng)6天，每隔12小時(shí)觀察一次，當(dāng)菌絲穿透2號(hào)培養(yǎng)料時(shí)挑起未接種端的菌絲，接入普通PDA培養(yǎng)基；接入菌絲的普通PDA培養(yǎng)基，在25℃下培養(yǎng)4天，用于生產(chǎn)。

通過(guò)本次提純復(fù)壯后的蘑菇菌種，應(yīng)用于生產(chǎn)未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性感染現(xiàn)象。

實(shí)施例2

培養(yǎng)料制作：準(zhǔn)備2支大試管；稱(chēng)取1號(hào)培養(yǎng)料和2號(hào)培養(yǎng)料各78g，進(jìn)行混合；將稱(chēng)量好的培養(yǎng)料使用小一號(hào)的試管，分別推入大試管中央；大試管兩端分別塞入棉塞進(jìn)行密封處理；大試管放入高壓滅菌鍋中120℃滅菌30min待用；

1號(hào)培養(yǎng)料：松木屑重量的百分比為95％，泥沙重量的百分比為5％，將上述混合物使用1％高錳酸鉀水溶液將含水率調(diào)節(jié)到50％；

2號(hào)培養(yǎng)料：松木屑重量的百分比為95％，泥沙重量的百分比為5％，將上述混合物使用0.5％托布津水溶液含水率調(diào)節(jié)到50％之間；

提純復(fù)壯操作：在無(wú)菌操作臺(tái)中挑取綠豆粒大小菌塊接種在滅好菌裝有1號(hào)培養(yǎng)料的試管中；將接種好的試管放置在25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)4天，每隔12小時(shí)觀察一次；當(dāng)1號(hào)培養(yǎng)料的蘑菇菌絲穿透1號(hào)培養(yǎng)基到達(dá)另一端時(shí)，挑取未接種端的菌絲在無(wú)菌操作下接入滅好菌的2號(hào)培養(yǎng)料的一端；接種好的帶2號(hào)培養(yǎng)料的試管，放置25℃下培養(yǎng)4天，每隔12小時(shí)觀察一次，當(dāng)菌絲穿透2號(hào)培養(yǎng)料時(shí)挑起未接種端的菌絲，接入普通PDA培養(yǎng)基；接入菌絲的普通PDA培養(yǎng)基，在25℃下培養(yǎng)4天，用于生產(chǎn)。

經(jīng)過(guò)一輪提純?cè)俅谓臃N到PDA培養(yǎng)基中的蘑菇菌絲再未發(fā)現(xiàn)任何污染，用于生產(chǎn)效果良好。

實(shí)施例3

培養(yǎng)料制作：準(zhǔn)備2支大試管；稱(chēng)取1號(hào)培養(yǎng)料和2號(hào)培養(yǎng)料各70g，進(jìn)行混合；將稱(chēng)量好的培養(yǎng)料使用小一號(hào)的試管，分別推入大試管中央；大試管兩端分別塞入棉塞進(jìn)行密封處理；大試管放入高壓滅菌鍋中125℃滅菌30min待用；

1號(hào)培養(yǎng)料：松木屑重量的百分比為96％，泥沙重量的百分比為45％，將上述混合物使用1％高錳酸鉀水溶液將含水率調(diào)節(jié)到55％；

2號(hào)培養(yǎng)料：松木屑重量的百分比為96％，泥沙重量的百分比為4％，將上述混合物使用0.5％托布津水溶液含水率調(diào)節(jié)到55％之間；

提純復(fù)壯操作：在無(wú)菌操作臺(tái)中挑取綠豆粒大小菌塊接種在滅好菌裝有1號(hào)培養(yǎng)料的試管中；將接種好的試管放置在25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)5天，每隔12小時(shí)觀察一次；當(dāng)1號(hào)培養(yǎng)料的蘑菇菌絲穿透1號(hào)培養(yǎng)基到達(dá)另一端時(shí)，挑取未接種端的菌絲在無(wú)菌操作下接入滅好菌的2號(hào)培養(yǎng)料的一端；接種好的帶2號(hào)培養(yǎng)料的試管，放置25℃下培養(yǎng)5天，每隔12小時(shí)觀察一次，當(dāng)菌絲穿透2號(hào)培養(yǎng)料時(shí)挑起未接種端的菌絲，接入普通PDA培養(yǎng)基；接入菌絲的普通PDA培養(yǎng)基，在25℃下培養(yǎng)4天，用于保存。

通過(guò)本次提純復(fù)壯后的蘑菇菌種，應(yīng)用于生產(chǎn)未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性感染現(xiàn)象。