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一種重組鴿圓環(huán)病毒Cap蛋白的桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)及該蛋白的應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):11936779閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種鴿圓環(huán)病毒Cap基因,其特征在于,所述Cap基因如SEQ ID NO.1所示。

2.一種重組鴿圓環(huán)病毒Cap蛋白,其特征在于,該Cap蛋白是將所述序列為SEQ ID NO.1所示的Cap基因克隆到昆蟲(chóng)細(xì)胞桿狀病毒系統(tǒng)中表達(dá)而得到的。

3.一種鴿圓環(huán)病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因重組質(zhì)粒,其特征在于,所述重組質(zhì)粒的保藏號(hào)為CGMCC NO.11184;保藏時(shí)間:2015年9月7日;保藏地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào),中國(guó)科學(xué)院微生物研究所;保藏單位:中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。

4.一種表達(dá)權(quán)利要求2的重組鴿圓環(huán)病毒Cap蛋白的方法,其特征在于,包括以下步驟:

對(duì)包括鴿圓環(huán)病毒PiCV-zj1的全基因組核苷酸序列設(shè)計(jì)引物及權(quán)利要求3所述的鴿圓環(huán)病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因重組質(zhì)粒為模板的反應(yīng)體系進(jìn)行PCR反應(yīng)處理,得到含有鴿圓環(huán)病毒Cap基因的PCR產(chǎn)物;

將所述含有鴿圓環(huán)病毒Cap基因的PCR產(chǎn)物克隆到昆蟲(chóng)細(xì)胞桿狀病毒系統(tǒng)中,得到用于表達(dá)重組鴿圓環(huán)病毒Cap蛋白的重組桿狀病毒。

5.如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述的將所述含有鴿圓環(huán)病毒Cap基因的PCR產(chǎn)物克隆到昆蟲(chóng)細(xì)胞桿狀病毒系統(tǒng)中,得到用于表達(dá)的鴿圓環(huán)病毒Cap蛋白的重組桿狀病毒的步驟包括:

利用所述含有鴿圓環(huán)病毒Cap基因的PCR產(chǎn)物構(gòu)建得到含有Cap基因片段重組質(zhì)粒,對(duì)所述重組質(zhì)粒進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染和篩選后,得到具有Cap基因片段的重組桿粒;

將具有Cap基因片段的重組桿粒轉(zhuǎn)染到昆蟲(chóng)細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),并進(jìn)行重組病毒滴度測(cè)定試驗(yàn)及鑒定所述表達(dá)得到的產(chǎn)物后,得到正常表達(dá)重組鴿圓環(huán)病毒Cap蛋白的重組桿狀病毒。

6.如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述引物如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示,具體為:

Cap-F:5’-TAAGAATTCCGCTTTATTCACTTTCC-3’

Cap-R:5’-ATACTCGAGCGTCGCAAGGACAAG-3’。

7.如權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,所述昆蟲(chóng)細(xì)胞選自sf9、sf21中的一種。

8.如權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,所述的能夠正常表達(dá)重組Cap蛋白的重組桿狀病毒的滴度為1×105

9.一種如權(quán)利要求2所述的重組鴿圓環(huán)病毒Cap蛋白用于制備鴿圓環(huán)病毒亞單位疫苗的用途。

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