本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種用蘋(píng)果渣為原料異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法。
背景技術(shù)：
小球藻是一種具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的生物資源，有著巨大的應(yīng)用和開(kāi)發(fā)潛力。小球藻富含蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸、類(lèi)胡蘿卜素、葉黃素、蝦青素和多種維生素，具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和提高免疫力的功能。
蘋(píng)果渣是新鮮蘋(píng)果經(jīng)破碎壓榨提汁后的剩余物，含有可溶性糖、維生素、礦物質(zhì)及纖維素等豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是良好的飼料資源。經(jīng)測(cè)定在蘋(píng)果渣皮中，果皮果肉占96.2％，果籽占3.1％，果梗占0.7％，蘋(píng)果渣的無(wú)氮浸出物為61.5％其中總糖15.1％，粗脂肪6.8％，粗蛋白含量6.2％。粗纖維中除了少量的果殼，果梗為木質(zhì)素外，果肉、果皮多為半纖維素和纖維素。
現(xiàn)有技術(shù)主要將鮮蘋(píng)果渣加工成蘋(píng)果渣干粉用作配制全價(jià)料或顆粒料，如中國(guó)專(zhuān)利CN1363228A公開(kāi)了一種蘋(píng)果渣飼料及其制備方法，另外也有利用新鮮蘋(píng)果渣發(fā)酵做酒精的方法，如中國(guó)專(zhuān)利CN103160545A公開(kāi)了一種利用蘋(píng)果皮渣生產(chǎn)酒精的方法，雖然現(xiàn)有方法能夠有效的利用蘋(píng)果渣，但是依然有大量蘋(píng)果渣被浪費(fèi)，沒(méi)有充分利用。
目前異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻一般都采用人工配制培養(yǎng)液，也有利用生產(chǎn)加工廢棄物進(jìn)行培養(yǎng)的，如中國(guó)專(zhuān)利CN102746992B公開(kāi)了一種利用泥污水解液異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法，與本發(fā)明無(wú)關(guān)。查閱現(xiàn)有家屬未見(jiàn)關(guān)于利用蘋(píng)果渣異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述空缺，提供一種用蘋(píng)果渣為原料異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法，該方法通過(guò)水解蘋(píng)果渣然后添加其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，制作成小球藻異養(yǎng)培養(yǎng)液，即能夠消耗大量蘋(píng)果渣使其充分被利用，也克服了傳統(tǒng)異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻成本高的問(wèn)題。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的具體技術(shù)方案是：一種用蘋(píng)果渣為原料異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法，是按照以下步驟進(jìn)行的：
1)蘋(píng)果渣水解：將新鮮的蘋(píng)果渣干燥粉碎后加入水和纖維素酶進(jìn)行水解，得到的水解溶液經(jīng)過(guò)高溫滅酶后，得到蘋(píng)果渣水解液；
2)制做培養(yǎng)液：向步驟1)得到的蘋(píng)果渣水解液中添加微量元素和其它營(yíng)養(yǎng)元素，再加入堿液調(diào)節(jié)溶液pH至7.5～8.5，然后進(jìn)行高壓蒸汽消毒滅菌，得到小球藻異養(yǎng)培養(yǎng)液；
3)小球藻異養(yǎng)培養(yǎng)：將步驟2)得到的消毒滅菌后的培養(yǎng)液密封冷卻至室溫，然后再超凈工作臺(tái)中將小球藻按體積百分比15～20％接種到培養(yǎng)液中，振蕩培養(yǎng)100～150小時(shí)。
所述的一種用蘋(píng)果渣為原料異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法，其中步驟1)蘋(píng)果渣水解的pH值為4.5～5.5，溫度為55～65攝氏度，水解時(shí)間10～12小時(shí)，纖維素酶的濃度為20～30EGU/g。
所述的一種用蘋(píng)果渣為原料異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法，其中步驟1)高溫滅酶的方法是將水解溶液加熱至85～95攝氏度，保持溫度10～15分鐘使纖維素酶失活。
所述的一種用蘋(píng)果渣為原料異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法，其中步驟2)添加的微量元素是微量元素A5溶液，添加量為1mL/L，其他元素添加量為1mL/L。
所述的一種用蘋(píng)果渣為原料異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法，其中步驟2)添加的堿液可以是NaOH和Na2CO3/NaHCO3一種或幾種混合。
所述的一種用蘋(píng)果渣為原料異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法，其中步驟2)得到的培養(yǎng)液中蘋(píng)果渣水解液濃度為4～6g/L，其余為蒸餾水，培養(yǎng)液N/P是20。
所述的一種用蘋(píng)果渣為原料異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻的方法，其中步驟3)小球藻異養(yǎng)培養(yǎng)的條件是光照0lux，溫度25～30攝氏度，振蕩頻率100～150rpm。
本發(fā)明的有益效果是：
本發(fā)明以蘋(píng)果渣為原料，通過(guò)水解得到蘋(píng)果渣水解液，再向蘋(píng)果渣水解液中加入一定量的微量元素及其它元素，通過(guò)簡(jiǎn)單處理得到小球藻異養(yǎng)培養(yǎng)液急性小球藻培養(yǎng)，蘋(píng)果渣水解得到大量的三碳糖和五碳糖，為小球藻異養(yǎng)生長(zhǎng)提供充足的碳源，能夠節(jié)省小球藻的培養(yǎng)成本，為培養(yǎng)小球藻提供了廉價(jià)的原料，同時(shí)充分利用蘋(píng)果渣中的營(yíng)養(yǎng)成分，變廢為寶，減輕環(huán)境污染，實(shí)現(xiàn)蘋(píng)果渣的資源回收和利用。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
1)蘋(píng)果渣水解：將新鮮的蘋(píng)果渣干燥粉碎后加入一定量水和濃度為20EGU/g的纖維素酶，在pH值為5溫度60攝氏度條件下水解時(shí)間10小時(shí)，得到的水解溶液經(jīng)過(guò)90攝氏度恒溫10分鐘高溫滅酶后，得到蘋(píng)果渣水解液；
2)制做培養(yǎng)液：向步驟1)得到的蘋(píng)果渣水解液中添加1mL/L微量元素A5溶液，和1mL/L其它營(yíng)養(yǎng)元素，再加入NaOH調(diào)節(jié)溶液pH至8，然后進(jìn)行高壓蒸汽消毒滅菌，得到小球藻異養(yǎng)培養(yǎng)液，其中蘋(píng)果渣水解液濃度為5g/L，培養(yǎng)液N/P是20；
3)小球藻異養(yǎng)培養(yǎng)：將步驟2)得到的消毒滅菌后的培養(yǎng)液密封冷卻至室 溫，然后再超凈工作臺(tái)中將小球藻按體積百分比20％接種到培養(yǎng)液中，在0lux，25攝氏度150rpm振蕩培養(yǎng)150小時(shí)。
實(shí)施例2：本實(shí)施例與實(shí)施例1不同的是，步驟1)添加的纖維素酶濃度為30EGU/g，其它與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例3：本實(shí)施例與實(shí)施例1不同的是，步驟2)調(diào)節(jié)pH的堿液為Na2CO3溶液，其它與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例4：本實(shí)施例與實(shí)施例1不同的是，步驟2)調(diào)節(jié)pH的堿液為NaHCO3溶液，其它與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例5：本實(shí)施例與實(shí)施例1不同的是，步驟2)調(diào)節(jié)pH的堿液為Na2CO3/NaHCO3的混合溶液，其它與實(shí)施例1相同。