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蛋白質(zhì)的制作方法與工藝

文檔序號(hào):11807142閱讀:來(lái)源:國(guó)知局
蛋白質(zhì)的制作方法與工藝

技術(shù)特征:
1.用于生成糖脂酰基轉(zhuǎn)移酶變體的方法,包括:(a)選擇特征為包含氨基酸序列基序GDSX的脂酰基轉(zhuǎn)移酶作為親本酶,其中X是下列氨基酸殘基中的一個(gè)或多個(gè):L、A、V、I、F、Y、H、Q、T、N、M或S;(b)更改一個(gè)氨基酸以生成脂?;D(zhuǎn)移酶變體;(c)在半乳糖脂底物,和任選磷脂底物和/或任選甘油三酯底物上測(cè)試脂?;D(zhuǎn)移酶變體的轉(zhuǎn)移酶活性,和任選水解活性;(d)選擇對(duì)半乳糖脂的活性比親本酶升高的酶變體;并任選(e)制備一定量的酶變體;其中所述方法還包括下列步驟:結(jié)構(gòu)同源性定位或序列同源性對(duì)比;其中結(jié)構(gòu)同源性定位包括下列步驟:a)將親本序列與通過(guò)P10480晶體結(jié)構(gòu)坐標(biāo)與1IVN.PDB進(jìn)行的結(jié)構(gòu)對(duì)比而獲得的P10480結(jié)構(gòu)模型相對(duì)比;b)選擇活性位點(diǎn)中以甘油分子中央碳原子為中心的范圍內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基;c)測(cè)定依照步驟(b)選擇的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是否是高度保守的;和d)更改所述親本序列中依照步驟(b)選擇的一個(gè)或多個(gè)氨基酸,排除依照步驟(c)鑒定的保守區(qū);其中序列同源性對(duì)比包括下列步驟:i)選擇第一種親本脂?;D(zhuǎn)移酶;ii)鑒定具有期望活性的第二種相關(guān)脂?;D(zhuǎn)移酶;iii)對(duì)比所述第一種親本脂?;D(zhuǎn)移酶與所述第二種相關(guān)脂?;D(zhuǎn)移酶;iv)鑒定兩種序列間不同的氨基酸殘基;v)測(cè)定依照步驟(iv)選擇的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是否是高度保守的;和vi)更改所述親本序列中依照步驟(iv)鑒定的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基,排除依照步驟(v)鑒定的保守區(qū),其中生成的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體的一個(gè)下列氨基酸殘基與親本序列相比被更改:S18M或T;Y30G、I、L、S、E、M、A或R;G40L、R、M、Q或V;N80R、D、P、G或E;N87R、D、E、M、C或G;N88W;Y179V、E、R、N或Q;H180T、K、Q或I;M209Y、L、K或M;L210N、D、H、R、E、A、Q、P、K、G、T、W、I、V、S或M;R211G、Q、K、D或T;N215H、L、G、V、R或Y,其中氨基酸殘基的編號(hào)是通過(guò)對(duì)比變體序列與SEQIDNo.2參考序列而獲得的,并且其中所述親本序列獲自殺鮭氣單胞菌(Aeromonassalmonicida)并且由SEQIDNO.29的核苷酸序列編碼。2.依照權(quán)利要求1的方法,其中所述方法包括:i)用半乳糖脂底物測(cè)試脂酰基轉(zhuǎn)移酶變體的轉(zhuǎn)移酶活性,和ii)用磷脂底物測(cè)試脂?;D(zhuǎn)移酶變體的轉(zhuǎn)移酶活性;并選擇對(duì)半乳糖脂的轉(zhuǎn)移酶活性與對(duì)磷脂的轉(zhuǎn)移酶活性之比率比親本酶升高的酶變體。3.依照權(quán)利要求2的方法,其中對(duì)半乳糖脂的轉(zhuǎn)移酶活性與對(duì)磷脂的轉(zhuǎn)移酶活性之比率至少是3。4.依照上述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法,包括:a)用半乳糖脂底物測(cè)試脂?;D(zhuǎn)移酶變體的轉(zhuǎn)移酶活性,和b)用半乳糖脂底物測(cè)試脂?;D(zhuǎn)移酶變體的水解活性;并選擇對(duì)半乳糖脂的轉(zhuǎn)移酶活性與對(duì)糖脂的水解活性比率比親本酶升高的酶變體。5.依照權(quán)利要求4的方法,其中對(duì)半乳糖脂的轉(zhuǎn)移酶活性與對(duì)半乳糖脂的水解活性比率至少是1.5。6.依照權(quán)利要求1-3和5任一項(xiàng)的方法,其中親本酶由SEQIDNo.28所示氨基酸序列組成。7.依照權(quán)利要求1-3和5任一項(xiàng)的方法,其中GDSX基序中的X是L。8.特征為包含氨基酸序列基序GDSL的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體,其中所述酶變體相對(duì)于親本序列在N80的氨基酸殘基處包含氨基酸更改N80D,所述親本序列是包含氨基酸基序GDSL的脂酰基轉(zhuǎn)移酶,其中,氨基酸殘基的編號(hào)是通過(guò)對(duì)比變體序列與SEQIDNo.2所示參考序列而獲得的,所述親本脂?;D(zhuǎn)移酶由核苷酸序列SEQIDNo.29編碼。9.依照權(quán)利要求8的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體,其中酶變體為SEQIDNo.28所示氨基酸序列,只是在下述氨基酸殘基處包含氨基酸更改:N80D;其中,氨基酸殘基的編號(hào)是通過(guò)對(duì)比變體序列與SEQIDNo.2所示參考序列而獲得的。10.依照權(quán)利要求8-9任一項(xiàng)的糖脂酰基轉(zhuǎn)移酶變體,其中所述酶變體對(duì)半乳糖脂與磷脂和/或甘油三酯的活性比率比親本酶升高。11.依照權(quán)利要求8-9任一項(xiàng)的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體,其中所述酶變體對(duì)半乳糖脂的轉(zhuǎn)移酶活性與對(duì)半乳糖脂的水解活性比率比親本酶高。12.依照權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體或通過(guò)依照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法獲得的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體用于在底物中制備溶血糖脂的用途,通過(guò)所述糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體處理糖脂生成部分水解產(chǎn)物。13.依照權(quán)利要求12的用途,其中底物是食品。14.制作食品的方法,所述方法包括向食品的一種或多種成分中添加依照權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體或通過(guò)依照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法獲得的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體。15.由生面團(tuán)制作焙烤產(chǎn)品的方法,所述方法包括向生面團(tuán)中添加依照權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體或通過(guò)依照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法獲得的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體。16.依照權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體或通過(guò)依照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法獲得的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體在處理蛋或基于蛋的產(chǎn)品以生成溶血磷脂的過(guò)程中的用途。17.使植物油或食用油酶促脫膠的方法,包括用依照權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體或通過(guò)依照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法獲得的糖脂酰基轉(zhuǎn)移酶變體處理食用油或植物油從而水解大部分極性脂質(zhì)。18.依照權(quán)利要求17的方法,其中所述極性脂質(zhì)是磷脂和/或糖脂。19.依照權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體或通過(guò)依照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法獲得的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體在用于降低食用油磷脂含量的過(guò)程中的用途,所述過(guò)程包括用所述糖脂酰基轉(zhuǎn)移酶變體處理油從而水解大部分磷脂,并由油分離含有經(jīng)水解磷脂的水相。20.依照權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體或通過(guò)依照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法獲得的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體在生物轉(zhuǎn)化極性脂質(zhì)以生成碳水化合物酯和/或蛋白質(zhì)酯和/或蛋白質(zhì)亞基酯和/或羥基酸酯中的用途。21.依照權(quán)利要求20的用途,其中所述極性脂質(zhì)是糖脂。22.依照權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)的或通過(guò)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法獲得的糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體,其中所述糖脂?;D(zhuǎn)移酶變體是固定的。
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