專利名稱：一種由茶枯中提取茶多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及農(nóng)產(chǎn)品深加工技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種由茶枯中提取茶多糖的方法。技術(shù)背景
茶多糖(Tea Polysaccharide)是一種類似靈芝多糖和人參多糖的一種高分子化合物(分子量4萬-10萬)，是一種酸性糖蛋白，并結(jié)合有大量的礦質(zhì)元素，稱為茶葉多糖復(fù)合物，簡稱為茶葉多糖或茶多糖。其蛋白部分主要由約20種常見的氨基酸組成，糖的部分主要由阿拉伯糖、木糖、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖等，礦質(zhì)元素主要由鈣、鎂、鐵、錳等及少量的微量元素，如稀土元素等組成。具有降血糖、降血脂、增強(qiáng)免疫力、降血壓、減慢心率、增加冠脈流量、抗凝血、抗血栓和耐缺氧等作用，近年來發(fā)現(xiàn)茶多糖還具有治療糖尿病的功效。 從20世紀(jì)70年代展開對(duì)多糖的研究始，發(fā)展很快。由于多糖多種多樣的生物活性功能以及在功能食品和臨床上廣泛使用，使多糖生物資源的開發(fā)利用和研究日益活躍，成為天然藥物、生物化學(xué)、生命科學(xué)的研究熱點(diǎn)。先期處理茶多糖主要來源是成品干茶。通過將茶葉粉碎，在一定的溫度下，先用酸性、中性或者弱堿性水浸提，再通過沉淀分離或柱層析分離，制備出粗品。目前，茶多糖的制備主要是由茶葉或油茶籽枯餅中提取，方法主要有以下二種
一是有機(jī)溶劑沉淀法茶多糖在有機(jī)溶劑中的溶解度較小，通過有機(jī)溶劑沉淀的方法可將茶多糖與其他成分初步分離；用到的有機(jī)溶劑主要有乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。
二是季銨鹽沉淀法在酸性、中性或弱堿性條件下，一些季銨鹽如溴代十六烷基三甲銨(CTAB)、十六烷基鹽酸吡啶(CPC)能與茶多糖形成不溶于水的鹽，以此把茶多糖與其他成分分離，再利用透析法得到較純品。
三是樹脂法茶多糖是一種酸性多糖，而酸性多糖一般都能被相關(guān)樹脂吸附，如 DEAE-纖維樹脂。然后通過不同的洗脫液可將茶多糖與其他成分分開。
中國專利(專利申請?zhí)枮?01010259131. 3) “油茶籽柏或茶葉籽柏中茶皂素、茶多糖的綜合提取方法”，是以脫脂油茶籽餅柏、茶葉籽餅柏為原料，研究茶皂素、茶多糖的綜合提取工藝；其提取方法為油茶籽柏或茶葉籽柏粉碎后經(jīng)水提醇沉或醇提水提得到粗茶皂素和茶籽多糖，水提后或醇提后的清液經(jīng)大孔吸附樹脂層析柱純化，樹脂吸附物先用堿、再用體積濃度逐漸增高的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，可得到高純度的茶皂素；本方法工藝簡單，生產(chǎn)成本低，不僅可制備高純度的茶皂素，同時(shí)還可得到另一活性產(chǎn)物茶多糖。又如中國專利(專利申請?zhí)枮?00710191396. 2)“從油茶籽柏中提取茶多糖的方法”，是將油茶籽 柏按IOkg比100-200升水的比例，在水中浸泡，然后加溫同時(shí)進(jìn)行攪拌，趁熱進(jìn)行過濾， 將過濾后的液體繼續(xù)加熱，使液體濃縮至1/4體積，在濃縮的溶液中加入的酵母，保持在 25-32°C溫度下，振動(dòng)發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間O. 5-3天后，停止振動(dòng)，使其沉淀，取上層清液加入清液體積3倍的乙醇進(jìn)行攪拌，然后放入冰箱內(nèi)冷凍，將冷凍液加水使其溶解分層沉淀， 取上層液體，將上層液體經(jīng)噴霧干燥得茶多糖；該發(fā)明解決了目前從油茶籽柏中提取茶多糖的方法，工藝復(fù)雜，生產(chǎn)設(shè)備多，成本高之不足。
技術(shù)內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能夠從茶枯中提取茶多糖的方法，具有提取純度較高的特點(diǎn)。
為實(shí)現(xiàn)其目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是發(fā)明一種由茶枯中提取茶多糖的方法，其提取過程如下
A、預(yù)處理選擇無霉壞的茶枯，粉碎成粒度為10_35mm的茶枯碎粒，然后，投入發(fā)酵容器中，再加入占茶枯碎粒重量30-50%的清水，攪勻，成為茶枯漿，備用；
B、混合酶配制
將下列重量份的原料
糖化酶5-10 水解蛋白酶4-8面粉5-10
纖維素酶3-5小麥粉10-15 多酌·氧化酶3-5
混合，成為混合酶，備用；
所述的糖化酶、水解蛋白酶、纖維素酶和多酚氧化酶分別是α-1，4-葡萄糖水解酶、BA13ZXDBM水解蛋白酶、GFDS-23纖維素酶和Ε0145多酚氧化酶；
C、酶處理向備用的茶枯漿中，加入占茶枯碎粒重量6-10%的混合酶，加溫至 20-40 0C，攪勻，密封處理4-6天，成為酶處理茶枯漿，備用；
D、壓榨向備用的酶處理茶枯漿中，加入占茶枯碎粒重量10-30%的40_65°C溫水， 攪勻，在常溫下，進(jìn)行壓榨處理，收集榨出的液體，成為酶處理液，備用；
E、一次干燥將備用的酶處理液加熱至70_100°C，保溫處理6-10小時(shí)，再加入食用酒精，使酶處理液酒精的體積濃度達(dá)到50%，然后，在4-12°C冷藏10-15小時(shí)，過濾，收集混合液體；再將混合液體在40-90°C真空濃縮，濃縮時(shí)間為2-3. 5小時(shí)，得濃縮液；再經(jīng)噴霧干燥，得干粉，備用；
F、洗脫向備用的干粉中加入占干粉重量1-2倍、體積濃度為95%的極性有機(jī)溶劑，攪勻后靜置2-4小時(shí)，過濾，分離出極性有機(jī)溶劑，如此處理兩次；然后，再向余渣加入占余渣重量1-2倍、體積濃度為95%以上(或者為純?nèi)軇?的低極性有機(jī)溶劑，攪勻后靜置 1-2小時(shí)，過濾，如此處理三次，收集處理渣，備用；
所述的極性有機(jī)溶劑是乙醇、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇中的一種或二種或多種，當(dāng)是兩種以上時(shí)，各組成成份的配比為等額或其它比例；
所述的低極性有機(jī)溶劑是正己烷或石油醚或兩者的混合物，當(dāng)是兩種時(shí)，兩者的配比為等額或其它比例；
G、沉淀向備用的處理渣中加入占處理渣重量20-40%、體積濃度為95%的甲醇，再加入占處理渣重量5-12%的飽和硫酸鉛水溶液，處理8-12小時(shí)；然后再加入占處理渣重量 3_5%、濃度為10-25%的硫酸鐵水溶液，處理0. 8-1. 2小時(shí)，過濾，分離出液體，收集沉淀，備用；
H、堿溶向備用的沉淀中，加入沉淀重量0. 5-1. 5倍、濃度為1. 5-2. 4%的弱堿溶液，溶解20-40min ;然后，再加入3_5倍沉淀重量的60-85 °C溫水，浸泡提取，過濾，收集水溶液，備用；
所述的弱堿溶液是脂肪酸鈉或碳酸氫鈉或碳酸鈉溶液；
1、離心將備用的水溶液經(jīng)5000-10000轉(zhuǎn)/min的高速離心機(jī)離心，得離心液，備用；
J、過柱1:將備用的離心液經(jīng)混合柱過濾處理，控制流速為50_70L/h，收集濾液， 備用;
K、過柱I1:將備用的濾液經(jīng)極性大孔樹脂過柱處理，控制流速為15_25L/h，收集過柱液，備用；
所述極性大孔樹脂的型號(hào)為D301 ；
L、沉渣將備用的過柱液在70-100°C真空濃縮至1/3，成為過柱濃縮液，然后逐漸加入與水混溶的有機(jī)溶劑，讓與水混溶的有機(jī)溶劑的濃度達(dá)到70-95%時(shí)為止，拌勻，再加入體積為過柱濃縮液1-2倍、與水不溶的有機(jī)溶劑，攪拌處理20-36小時(shí)，靜置、分層，收集下層不溶物，備用；
所述與水混溶的有機(jī)溶劑是乙醇或甲醇；
所述與水不溶的有機(jī)溶劑是乙酸乙酯或正己烷或石油醚；
M、溶解將備用的不溶物用1-3倍的常溫水溶解,過濾,收集溶解液,備用；
N、二次干燥將備用的溶解液，噴霧干燥，得茶多糖成品；
第J步驟中的混合柱為中性活性炭或石英砂或硅藻土或吸附樹脂中的二種或多種混合物。
其優(yōu)化的技術(shù)方案一所述混合酶是由將下列重量份的原料混合而成
糖化酶5水解蛋白酶8面粉5
纖維素酶3小麥粉15多酚氧化酶5。
其優(yōu)化的技術(shù)方案二 所述混合酶是由將下列重量份的原料混合而成
糖化酶10 水解蛋白酶4面粉10
纖維素酶5小麥粉10多酚氧化酶3。
其優(yōu)化的技術(shù)方案三所述混合酶是由將下列重量份的原料混合而成
糖化酶8水解蛋白酶6面粉8
纖維素酶4小麥粉12多酚氧化酶4。
本發(fā)明的由茶枯中提取茶多糖的方法，是采用壓榨過油茶籽油后的茶枯作為原料，采用預(yù)處理、混合酶配制、酶處理、壓榨、一次干燥、洗脫、沉淀、堿溶、離心、過柱1、過柱I1、沉渣、溶解、二次干燥等步驟，有效地提出了茶枯中所含的茶多糖，并去除了茶多糖成品中的雜質(zhì)，因而，其成品中的茶多糖含量達(dá)到95%以上，純度較高。同時(shí)，通過茶多糖的提取，擴(kuò)大茶枯的應(yīng)用領(lǐng)域，提高了茶枯利用的價(jià)值。
下面的表I是按照本發(fā)明方法提取的茶多糖與采用常規(guī)方法提取的茶多糖的主要成份含量的檢測數(shù)據(jù)對(duì)照。
表I茶多糖的主 要成份含量的檢測對(duì)照表
權(quán)利要求
1.一種由茶枯中提取茶多糖的方法，其特征在于提取過程如下A、預(yù)處理選擇無霉壞的茶枯，粉碎成粒度為10-35mm的茶枯碎粒，然后，投入發(fā)酵容器中，再加入占茶枯碎粒重量30-50%的清水，攪勻，成為茶枯漿，備用；B、混合酶配制將下列重量份的原料糖化酶5-10 水解蛋白酶4-8面粉5-10纖維素酶3-5小麥粉10-15 多酚氧化酶3-5混合,成為混合酶,備用；C、酶處理向備用的茶枯漿中，加入占茶枯碎粒重量6-10%的混合酶，加溫至20-40°C， 攪勻，密封處理4-6天，成為酶處理茶枯漿，備用；D、壓榨向備用的酶處理茶枯漿中，加入占茶枯碎粒重量10-30%的40-65°C溫水，攪勻，在常溫下，進(jìn)行壓榨處理，收集榨出的液體，成為酶處理液，備用；E、一次干燥將備用的酶處理液加熱至70-100°C，保溫處理6-10小時(shí)，再加入食用酒精，使酶處理液酒精的體積濃度達(dá)到50%，然后，在4-12°C冷藏10-15小時(shí)，過濾，收集混合液體；再將混合液體在40-90°C真空濃縮，濃縮時(shí)間為2-3. 5小時(shí)，得濃縮液；再經(jīng)噴霧干燥，得干粉，備用；F、洗脫向備用的干粉中加入占干粉重量1-2倍、體積濃度為95%的極性有機(jī)溶劑，攪勻后靜置2-4小時(shí)，過濾，分離出極性有機(jī)溶劑，如此處理兩次；然后，再向余渣加入占余渣重量1-2倍、體積濃度為95%以上(或者為純?nèi)軇?的低極性有機(jī)溶劑，攪勻后靜置1-2小時(shí)，過濾，如此處理三次，收集處理渣，備用；G、沉淀向備用的處理渣中加入占處理渣重量20-40%、體積濃度為95%的甲醇，再加入占處理渣重量5-12%的飽和硫酸鉛水溶液，處理8-12小時(shí)；然后再加入占處理渣重量 3_5%、濃度為10-25%的硫酸鐵水溶液，處理O. 8-1. 2小時(shí)，過濾，分離出液體，收集沉淀，備用；H、堿溶向備用的沉淀中，加入沉淀重量O.5-1. 5倍、濃度為1. 5-2. 4%的弱堿溶液，溶解20-40min ;然后，再加入3_5倍沉淀重量的60-85°C溫水，浸泡提取，過濾，收集水溶液，備用；1、離心將備用的水溶液經(jīng)5000-10000轉(zhuǎn)/min的高速離心機(jī)離心，得離心液，備用；J、過柱1:將備用的離心液經(jīng)混合柱過濾處理，控制流速為50-70L/h，收集濾液，備用；K、過柱I1:將備用的濾液經(jīng)極性大孔樹脂過柱處理，控制流速為15-25L/h，收集過柱液，備用；L、沉渣將備用的過柱液在70-100°C真空濃縮至1/3，成為過柱濃縮液，然后逐漸加入與水混溶的有機(jī)溶劑，讓與水混溶的有機(jī)溶劑的濃度達(dá)到70-95%時(shí)為止，拌勻，再加入體積為過柱濃縮液1-2倍、與水不溶的有機(jī)溶劑，攪拌處理20-36小時(shí)，靜置、分層，收集下層不溶物，備用；M、溶解將備用的不溶物用1-3倍的常溫水溶解，過濾，收集溶解液，備用；N、二次干燥將備用的溶解液，噴霧干燥，得茶多糖成品；第J步驟中的混合柱為中性活性炭或石英砂或硅藻土或吸附樹脂中的二種或多種混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述由茶枯中提取茶多糖的方法，其特征在于所述混合酶是由將下列重量份的原料混合而成糖化酶5水解蛋白酶8面粉5纖維素酶3小麥粉15多酚氧化酶5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述由茶枯中提取茶多糖的方法，其特征在于所述混合酶是由將下列重量份的原料混合而成糖化酶10 水解蛋白酶4面粉10纖維素酶5小麥粉10多酚氧化酶3。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述由茶枯中提取茶多糖的方法，其特征在于所述混合酶是由將下列重量份的原料混合而成糖化酶8水解蛋白酶6面粉8纖維素酶4小麥粉12多酚氧化酶4。
全文摘要
本發(fā)明公開的一種由茶枯中提取茶多糖的方法，涉及農(nóng)產(chǎn)品深加工技術(shù)領(lǐng)域，其提取過程包括預(yù)處理、混合酶配制、酶處理、壓榨、一次干燥、洗脫、沉淀、堿溶、離心、過柱I、過柱II、沉渣、溶解、二次干燥等步驟；具有能夠從茶枯中提取茶多糖、且提取純度較高等特點(diǎn)，既可用于從茶枯中提取茶多糖，也可用于從茶葉籽或茶葉中提取茶多糖，還可用于從其它含有茶多糖的植物中提取茶多糖。
文檔編號(hào)C08B37/00GK103059156SQ20131000349
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月6日
發(fā)明者劉友佳, 唐艷萍, 陳勇, 陳素君 申請人:湖南金浩茶油股份有限公司