專利名稱：交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種醫(yī)用，特別是止血、防粘連用交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿及其制備方法。
背景技術(shù)：
手術(shù)后局部出血、組織粘連是一種常見的臨床現(xiàn)象，它的發(fā)生可能導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床并發(fā)癥。理想的止血、防粘連材料一般具有以下特征生物相容性好，無明顯毒副反應(yīng)； 生物可吸收性；體內(nèi)降解速率與傷口愈合同步；上血迅速，止血效果確切；具有良好組織粘附性；防止術(shù)后粘連效果好，能促進(jìn)創(chuàng)面迅速愈合，粘膜損傷輕。研究表明，透明質(zhì)酸(HA)被制成海綿或膜片后，其止血和防粘連效果較為理想， 專利申請(qǐng)CN 101912633A采用未交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽制備成的透明質(zhì)酸海綿，具有止血、 防粘連功能；國內(nèi)專利CN 1281816C中采用纖維素、殼聚糖和透明質(zhì)酸等天然多糖材料及膠原材料制成的生物紙，用于術(shù)后止血和防粘連；美國Xomed公司生產(chǎn)的MeroGel為透明質(zhì)酸酯化衍生物組成的止血海綿，用于耳鼻科術(shù)后止血和防粘連。但是，上述專利所涉及的或已經(jīng)在國外上市的產(chǎn)品，由于透明質(zhì)酸或是未經(jīng)修飾或是被修飾程度低，在體內(nèi)很容易被透明質(zhì)酸酶等降解，降解速率過快，對(duì)其防粘連效果有所影響。經(jīng)研究，使用一種交聯(lián)能力強(qiáng)的交聯(lián)劑來修飾或交聯(lián)透明質(zhì)酸，并制備成適合預(yù)期用途的材料，可彌補(bǔ)透明質(zhì)酸在體內(nèi)降解過快的不足。二乙烯基砜是一種研究較早的用于制備交聯(lián)透明質(zhì)酸的交聯(lián)試劑，其交聯(lián)能力強(qiáng)，若能控制其在產(chǎn)品中的含量，該試劑交聯(lián)的產(chǎn)品將適合用于多種臨床治療。國外專利(USP4582865、USP20050142152、USP20070036745 等)和國內(nèi)專利(CN 101056891、 CN 101036808A、CN101107270A和CN 1902232A)均涉及使用二乙烯基砜制備交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠的方法，并證實(shí)了該凝膠可安全用于軟組織填充等用途。有文獻(xiàn)(米鵬程等，二乙烯基砜交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的制備及其生物相容性，中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2008， 12(14) :26754678)(下文稱文獻(xiàn)A)闡述了二乙烯基砜為交聯(lián)劑制備交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的方法，并證實(shí)了二乙烯基砜交聯(lián)透明質(zhì)酸具有生物相容性，該文獻(xiàn)中二乙烯基砜交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的制備方法為往透明質(zhì)酸原料中直接加入堿性溶液，攪勻30min后，再加入交聯(lián)劑進(jìn)行反應(yīng)，這會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)物交聯(lián)程度不均勻。國外產(chǎn)品HylaSine為二乙烯基砜交聯(lián)透明質(zhì)酸組成凝膠制劑，臨床上用于鼻科手術(shù)或損傷后覆蓋鼻腔或鼻竇的粘膜表面，起止血和防粘連作用，但是止血效果并不太理想。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿及其制備方法，該海綿交聯(lián)劑含量低，生物相容性好，體內(nèi)降解周期與組織愈合周期一致，具有良好的止血、防粘連功能。本發(fā)明制備交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿的方法，其步驟為(1)透明質(zhì)酸原料溶脹于水中， 得到透明質(zhì)酸膠液；( 加堿調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸膠液為堿性后，加入交聯(lián)劑，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠；及( 清洗所述交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠后經(jīng)低溫冷凍干燥得到交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿。
本發(fā)明方法的具體實(shí)施例中，步驟(1)的透明質(zhì)酸膠液經(jīng)4-10°C下溶脹1-5天得到。本發(fā)明方法的具體實(shí)施例中，使用堿溶液調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸膠液為堿性，所述堿溶液所選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀或碳酸鈉溶液；堿溶液加入量為，以加入后透明質(zhì)酸膠液體積計(jì)其濃度為0. 05M-2M。本發(fā)明方法的具體實(shí)施例中，步驟(2)中加堿調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸膠液的PH值為10-12。本發(fā)明方法的具體實(shí)施例中，加堿后透明質(zhì)酸膠液可先在室溫放置0. 5-3小時(shí)再加入交聯(lián)劑。本發(fā)明方法的具體實(shí)施例中，交聯(lián)劑可為二乙烯基砜，加入量為堿性透明質(zhì)酸膠液體積的1/500 1/2000 ；并且交聯(lián)反應(yīng)條件為反應(yīng)溫度30 45°C、反應(yīng)時(shí)間2 8小時(shí)。本發(fā)明方法的具體實(shí)施例中，加入交聯(lián)劑后的膠液可倒入反應(yīng)模具進(jìn)行所述交聯(lián)反應(yīng)，以得到所需形狀和尺寸的凝膠。本發(fā)明方法的具體實(shí)施例中，反應(yīng)模具為扁平狀，并將反應(yīng)得到的交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠的厚度控制在l_3mm，以形成薄層交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠。本發(fā)明方法的具體實(shí)施例中，用蒸餾水清洗交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠至中性，在-60°C下冷凍M-48小時(shí)后，再冷凍干燥機(jī)干燥36 60小時(shí)，以形成白色的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿。本發(fā)明還提供一種根據(jù)上述方法得到的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿。本發(fā)明制得的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿的透明質(zhì)酸酶降解消化慢，延長了在體內(nèi)的存留時(shí)間，使產(chǎn)品在體內(nèi)降解速率與組織愈合周期一致。本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿具有高吸水率，能夠快速止血和吸收術(shù)后滲出液體， 滲出液的減少有利于創(chuàng)傷愈合和減少粘連的發(fā)生，同時(shí)海綿吸收液體后形成的水凝膠具有隔離屏障作用，也可預(yù)防粘連形成。本產(chǎn)品可用于普通創(chuàng)傷、外科、耳鼻喉科手術(shù)等，起止血、防粘連作用。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明制備止血、防粘連用交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿的方法，其步驟為(1)透明質(zhì)酸原料溶脹于水中，得到透明質(zhì)酸膠液；( 調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸膠液為堿性，加入交聯(lián)劑，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠；C3)用水清洗凝膠，并經(jīng)冷凍干燥得到交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿。步驟(1)中透明質(zhì)酸原料可來源自細(xì)菌發(fā)酵或雞冠提取，分子量為80-200萬道爾頓。透明質(zhì)酸原料在水中的濃度為5-15% (重量體積比)，優(yōu)選為5-10%。溶脹透明質(zhì)酸的水可以是蒸餾水或去離子水。透明質(zhì)酸原料充分溶脹于水中是經(jīng)溫度4-10°C下放置1-5天得到。透明質(zhì)酸充分溶脹后肉眼觀察為無白點(diǎn)和/或纖維的均質(zhì)膠液。步驟O)中調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸膠液為堿性所使用的堿溶液選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀或碳酸鈉溶液，優(yōu)選碳酸鈉溶液。堿溶液加入量為，以加入后透明質(zhì)酸膠液體積計(jì)其濃度為0.05M-2M，優(yōu)選0. 1M-0. 5M。加入堿性溶液攪拌均勻后，透明質(zhì)酸膠液可為pH值彡10，優(yōu)選pH值10-12。加入堿性溶液攪拌均勻后，可以再室溫放置0. 5-3小時(shí)，使透明質(zhì)酸膠液堿性更均勻，pH可以在此時(shí)測(cè)定。交聯(lián)劑可以使用前述文獻(xiàn)中使用的各種交聯(lián)劑，優(yōu)選為二乙烯基砜。交聯(lián)劑的加入量為堿性透明質(zhì)酸膠液體積的1/500 1/2000。交聯(lián)反應(yīng)條件為反應(yīng)溫度30 45°C， 反應(yīng)時(shí)間2 8小時(shí)。為得到所需形狀和大小的凝膠，加入交聯(lián)劑攪拌均勻后將混有交聯(lián)劑的膠液倒入反應(yīng)模具進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)。反應(yīng)模具為扁平狀，可為正方形、長方形或圓形，優(yōu)選正方形或長方形。反應(yīng)模具材質(zhì)選自不銹鋼、玻璃或聚四氟乙烯等。將混有交聯(lián)劑的透明質(zhì)酸凝膠倒入反應(yīng)模具時(shí)，可將凝膠的的厚度控制在l_3mm。在模具中進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)的結(jié)果為形成了薄層交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠。步驟(3)中用水清洗交聯(lián)凝膠至中性或接近中性。例如，用蒸餾水對(duì)交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠進(jìn)行清洗(如浸泡)，直至清洗液PH值為6-8。冷凍干燥過程為低溫冷凍干燥。具體可以為將清洗后交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠在低溫 (如_60°C )下冷凍M-48小時(shí)后，再移至冷凍干燥機(jī)干燥36 60小時(shí)，形成了白色的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿。得到的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿，可對(duì)其進(jìn)行裁切、內(nèi)包裝后，最后使用Y射線滅菌。本發(fā)明制備的制備方法或得到的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明在制備交聯(lián)透明質(zhì)酸時(shí)，先用水溶脹(溶解)透明質(zhì)酸，再調(diào)節(jié)PH值為堿性，避免了透明質(zhì)酸分子鏈長時(shí)間處于堿環(huán)境而被堿降解，這意味著僅需添加較少量交聯(lián)劑即可獲得交聯(lián)程度較高的產(chǎn)物。透明質(zhì)酸分子在pH值10以上的堿性條件下，被降解為N-乙酰氨基葡糖的還原末端的半縮醛和醛，醛基上的α-氫原子在強(qiáng)堿條件下很不穩(wěn)定，糖苷鍵很容易斷裂，進(jìn)一步降解，形成含有還原末端的葡糖醛酸。所以透明質(zhì)酸分子長時(shí)間暴露于堿性環(huán)境下，很容易被降解成葡糖醛酸。但是制備交聯(lián)透明質(zhì)酸的交聯(lián)反應(yīng)必須在堿性條件下進(jìn)行。所以，為了既保證交聯(lián)反應(yīng)正常進(jìn)行又減少透明質(zhì)酸被堿降解，本發(fā)明先用蒸餾水溶解透明質(zhì)酸， 之后再將溶液調(diào)節(jié)為堿性。(2)本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿能夠耐受透明質(zhì)酸酶的降解，延長了其在體內(nèi)的存留時(shí)間，使產(chǎn)品在體內(nèi)降解速率與組織愈合周期一致。這是由于本發(fā)明方法中⑴透明質(zhì)酸的堿降解程度低、交聯(lián)程度高，(ii)得到交聯(lián)凝膠后未經(jīng)破碎而直接冷凍干燥形成海綿，有利于保存產(chǎn)品的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。(3)本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿具有高吸水率，能夠快速止血和吸收術(shù)后滲出液體，滲出液的減少有利于創(chuàng)傷愈合和減少粘連的發(fā)生，同時(shí)海綿吸收液體后形成的水凝膠具有隔離屏障作用，也可預(yù)防粘連形成。本產(chǎn)品可用于普通創(chuàng)傷、外科、耳鼻喉科手術(shù)等，起止血、防粘連作用。(4)本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿產(chǎn)品在體內(nèi)存留一段時(shí)間后，最后被機(jī)體完全降解，最終降解產(chǎn)物為(X)2和水，具有生物可降解性；(5)本發(fā)明方法中加入交聯(lián)劑量少，是終產(chǎn)品中交聯(lián)劑含量低的前提，采用氣相色譜法檢測(cè)顯示，本發(fā)明方法得到的海綿中交聯(lián)劑含量低于0. 1 μ g/g，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于交聯(lián)劑產(chǎn)生細(xì)胞毒性的濃度水平，確保了產(chǎn)品的生物安全性。測(cè)試方法1.凝膠的水膨脹度試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^測(cè)定凝膠在水中膨脹度，可以推算交聯(lián)產(chǎn)物的交聯(lián)程度，交聯(lián)度越高，凝膠的水膨脹度越低。試驗(yàn)方法交聯(lián)反應(yīng)得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠后，在未使用蒸餾水清洗之前，直接稱取凝膠塊Ig(Wl)置于大量蒸餾水中浸泡M小時(shí)以使凝膠塊充分吸收水分而膨脹。取出， 使用紗紙除去凝膠塊表面上殘余水，稱重凝膠塊得到W2。凝膠塊在水中的膨脹度P (%)根據(jù)下列公式計(jì)算P(%) = (W2-W1)/W1X1002.透明質(zhì)酸酶消化率試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^測(cè)定透明質(zhì)酸酶消化率，可以了解產(chǎn)品的抗酶解能力，間接反映產(chǎn)品在體內(nèi)存留時(shí)間的長短，產(chǎn)品抗酶消化能力越強(qiáng)，體內(nèi)存留時(shí)間越長。試驗(yàn)方法稱取0. 5g冷凍前的交聯(lián)凝膠塊或20mg交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿懸浮在含有 300U/ml透明質(zhì)酸酶的30ml PBS緩沖液(pH = 7. 2)中，于37°C下培養(yǎng)M小時(shí)。過濾并收集酶解液，煮沸30分鐘以去除透明質(zhì)酸酶活性。使用咔唑分析酶消化液中透明質(zhì)酸濃度， 推算凝膠塊和海綿的消化率。3.交聯(lián)劑含量的測(cè)定試驗(yàn)?zāi)康挠捎诮宦?lián)劑對(duì)機(jī)體有一定毒性，產(chǎn)品應(yīng)用于臨床領(lǐng)域時(shí)，必須嚴(yán)格控制在產(chǎn)品中的含量，產(chǎn)品中交聯(lián)劑含量越低，安全性越高。試驗(yàn)方法稱取交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿于含有透明質(zhì)酸酶1000U/ml的生理平衡液中， 37°C恒溫箱放置至透明質(zhì)酸海綿完全降解后，使用氣相色譜法檢測(cè)降解液中的交聯(lián)劑含量，然后推算出海綿中交聯(lián)劑含量。4.細(xì)胞毒性試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康募?xì)胞毒性是評(píng)估材料安全性的一項(xiàng)常用方法，根據(jù)國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，作為體內(nèi)植入材料，要求其細(xì)胞毒性不得大于1級(jí)。試驗(yàn)方法按照國家GB16886系列標(biāo)準(zhǔn)的方法，采用MTT法、浸提液方式，檢測(cè)產(chǎn)品的細(xì)胞毒性。5.體內(nèi)降解試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康捏w內(nèi)降解試驗(yàn)可直接反應(yīng)產(chǎn)品在體內(nèi)存留時(shí)間的長短。試驗(yàn)方法按照國家GB16886系列標(biāo)準(zhǔn)的方法，將試驗(yàn)產(chǎn)品植入至動(dòng)物皮下，觀察產(chǎn)品在植入的第3周和第6周時(shí)的降解情況。6.止血試驗(yàn) 試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證產(chǎn)品的止血效果。 試驗(yàn)方法在小白鼠的后肢制造2cmX Icm大小的出血?jiǎng)?chuàng)面，分別用不同的止血材料敷壓止血，記錄止血時(shí)間。每種止血材料平行做3例，計(jì)算其平均止血時(shí)間。
6
7.防粘連試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證產(chǎn)品的防粘連效果。試驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SD大鼠，體重220士40g，雌雄不分，每組動(dòng)物10只。實(shí)驗(yàn)大鼠均使用2%無巴比妥鈉腹腔注射進(jìn)行麻醉，麻醉后開腹手術(shù)，逐層切開，暴露腹腔，距回腸部5cm處選取3cm回腸段，用干紗布來回摩擦20次，腸管充血并有點(diǎn)狀出血點(diǎn)，空白對(duì)照組不加任何材料直接關(guān)腹，試驗(yàn)組在摩擦主要部位放置3cmX 3cm試驗(yàn)海綿輕輕按壓后關(guān)腹。各組在相同條件下飼養(yǎng)，術(shù)后3周全部處死動(dòng)物。參照粘連等級(jí)分級(jí)法，腹腔內(nèi)粘連情況進(jìn)行評(píng)定分級(jí)。粘連等級(jí)分級(jí)法具體為0級(jí)無粘連，回腸漿膜面完全修復(fù)；I級(jí)僅疏松少量粘連，易分離，無滲血，回腸漿膜大部修復(fù)；II級(jí)粘連較I級(jí)略密，分離時(shí)滲血，回腸漿膜修復(fù)一半左右；III級(jí)粘膜連成團(tuán)狀或與其他臟器廣泛粘連，但無梗阻，回腸漿膜少部分修復(fù)；IV級(jí)粘連廣泛，致密，有腸梗阻，近端腸管擴(kuò)張明顯。下面通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不局限于下列實(shí)例。材料下面例子所用的透明質(zhì)酸原料均來源于細(xì)菌發(fā)酵。實(shí)施例1稱取2g透明質(zhì)酸原料干粉于燒杯中，加入35ml蒸餾水，用玻棒攪拌均勻后，封口， 于4°C冰箱存放5天，透明質(zhì)酸在蒸餾水中充分溶脹后，加入2M碳酸鈉溶液5ml，攪拌均勻， 室溫放置0.證，測(cè)得溶液的pH值為11. 5，加入0. 05ml 二乙烯基砜，迅速攪拌均勻后，分別倒入玻璃盤中，厚度約為2mm，于40°C恒溫箱放置2小時(shí)，即可獲得不溶于水的交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠塊。將凝膠放到蒸餾水中進(jìn)行洗滌，清洗液PH值為6. 8時(shí)，浙干水分，將交聯(lián)凝膠塊轉(zhuǎn)移到冷凍盤，置于_60°C冰柜冷凍4 后使用冷凍干燥機(jī)對(duì)其進(jìn)行冷凍干燥48h，即可獲得交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿，用鋁箔紙包裝密封，Y射線滅菌。實(shí)施例2稱取2g透明質(zhì)酸原料干粉于燒杯中，加入35ml蒸餾水，用玻棒攪拌均勻后，封口， 于4°C冰箱存放1天，透明質(zhì)酸在蒸餾水中充分溶脹后，加入2M碳酸鈉溶液5ml，攪拌均勻， 室溫放置0.證，測(cè)得溶液的pH值為11. 2，加入0. 05ml 二乙烯基砜，迅速攪拌均勻后，分別倒入玻璃盤中，厚度約為2mm，于37°C恒溫箱放置4小時(shí)，即可獲得不溶于水的交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠塊。將凝膠放到蒸餾水中進(jìn)行洗滌，清洗液PH值為7. 1時(shí)，浙干水分，將交聯(lián)凝膠塊轉(zhuǎn)移到冷凍盤，置于_60°C冰柜冷凍4 后使用冷凍干燥機(jī)對(duì)其進(jìn)行冷凍干燥48h，即可獲得交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿，用鋁箔紙包裝密封，Y射線滅菌。對(duì)比例1 (使用強(qiáng)堿溶液溶解透明質(zhì)酸后制備交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿)稱取2g透明質(zhì)酸原料于燒杯中，加入40ml 0. 2M氫氧化鈉溶液，用玻棒攪拌均勻后，封口，于4°C冰箱存放5天，室溫放置Ih，測(cè)定溶液pH值為13. 7，加入0. 05ml 二乙烯基砜，迅速攪拌均勻后，分別倒入玻璃盤中，厚度約為2mm，于40°C恒溫箱放置2小時(shí)，即可獲得水不溶性交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠塊。將凝膠放到蒸餾水中進(jìn)行洗滌，清洗液PH值為7. 5時(shí)， 浙干水分，將交聯(lián)凝膠塊轉(zhuǎn)移到冷凍盤，置于_60°C冰柜冷凍4 后使用冷凍干燥機(jī)對(duì)其進(jìn)行冷凍干燥48h，即可獲得交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿，用鋁箔紙包裝密封，γ射線滅菌。對(duì)比例2 (參照背景技術(shù)提及文獻(xiàn)A的方法制備凝膠，再凍干成海綿)稱取2g透明質(zhì)酸原料，加入0. 2M的NaOH溶液40ml，攪拌均勻，0. 5h后，測(cè)定pH值為13. 2，加入0. 05ml 二乙烯基砜，攪拌均勻后于40°C恒溫箱放置3小時(shí)，即可獲得不溶于水的交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠塊。將凝膠放到蒸餾水中進(jìn)行洗滌，清洗液PH值為6. 8時(shí)，浙干水分，將交聯(lián)凝膠塊轉(zhuǎn)移到冷凍盤，置于_60°C冰柜冷凍4 后使用冷凍干燥機(jī)對(duì)其進(jìn)行冷凍干燥48h，即可獲得交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿，用鋁箔包裝密封，γ射線滅菌。對(duì)實(shí)施例1、實(shí)施例2、對(duì)比例1和對(duì)比例2中交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠塊和海綿分別測(cè)定其水膨脹度以及透明質(zhì)酸酶消化率，結(jié)果見表1。表 權(quán)利要求
1.一種制備交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿的方法，其步驟為(1)透明質(zhì)酸原料溶脹于水中，得到透明質(zhì)酸膠液；(2)加堿調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸膠液為堿性后，加入交聯(lián)劑，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠 ’及(3)清洗所述交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠后經(jīng)低溫冷凍干燥得到交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(1)的透明質(zhì)酸膠液經(jīng)4-10°C下溶脹1-5天得到。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，使用堿溶液調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸膠液為堿性，所述堿溶液所選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀或碳酸鈉溶液；堿溶液加入量為，以加入后透明質(zhì)酸膠液體積計(jì)其濃度為0. 05M-2M。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟O)中加堿調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸膠液的PH值為 10-12。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，加堿后透明質(zhì)酸膠液先在室溫放置0.5-3小時(shí)再加入交聯(lián)劑。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，交聯(lián)劑為二乙烯基砜，加入量為堿性透明質(zhì)酸膠液體積的1/500 1/2000 ；并且交聯(lián)反應(yīng)條件為反應(yīng)溫度30 45°C、反應(yīng)時(shí)間2 8小時(shí)。
7.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其中，加入交聯(lián)劑后的膠液倒入反應(yīng)模具進(jìn)行所述交聯(lián)反應(yīng)，以得到所需形狀和尺寸的凝膠。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中，反應(yīng)模具為扁平狀，并將反應(yīng)得到的交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠的厚度控制在l_3mm，以形成薄層交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中，用蒸餾水清洗交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠至中性，在-60°C 下冷凍M-48小時(shí)后，再冷凍干燥機(jī)干燥36 60小時(shí)，以形成白色的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿。
10.一種交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿，通過權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的方法制備。
全文摘要
本發(fā)明提供一種制備交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿的方法、以及該方法得到的海綿。方法包括(1)透明質(zhì)酸原料溶脹于水中，得到透明質(zhì)酸膠液；(2)調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸膠液為堿性，加入交聯(lián)劑，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠；和(3)清洗所述交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠，并經(jīng)低溫冷凍干燥得到交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿。本發(fā)明方法制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸海綿，交聯(lián)劑含量低，生物相容性好，體內(nèi)降解周期與組織愈合周期一致，具有良好的止血、防粘連功能。
文檔編號(hào)C08J3/24GK102558600SQ201110393380
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2011年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月1日
發(fā)明者韓韋紅 申請(qǐng)人:上海白衣緣生物工程有限公司