專利名稱：mPEG修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬金納米粒子的制備領(lǐng)域，特別是涉及一種mPEG修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法。
背景技術(shù)：
貴重金屬納米粒子(NPs)，如Au NPs和Ag NPs由于其獨(dú)特的光學(xué)、電子和量子尺寸相關(guān)的性能，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用引起了相當(dāng)大的科學(xué)和技術(shù)上的關(guān)注，尤其是在生物傳感、疾病的診斷、光熱療法以及藥物和基因傳遞領(lǐng)域。在眾多的以聚合物輔助合成的Au DENPs的實(shí)例中，以樹狀大分子為模板或穩(wěn)定劑合成的納米粒子已經(jīng)引起人們大量的關(guān)注。 這主要是由于這種新型的、高度支化的和單分散的合成性樹狀大分子的獨(dú)特結(jié)構(gòu)和性能。 樹狀大分子可定制的表面化學(xué)性能，容許研究者輕松地在其表面修飾用于不同生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的生物功能團(tuán)。例如，端基為氨基的樹狀大分子包裹的金納米顆粒(Au DENPs)可以進(jìn)一步用染料(如熒光素染料)和靶向配體分子(如葉酸、RGD多肽)官能化，用于特異性地檢測(cè)癌細(xì)胞(Shi et al·，Small 2007，3，1245-1252)。一股情況下，以樹狀大分子為模板或穩(wěn)定劑功能化金或銀納米顆粒往往涉及兩個(gè)步驟1)功能化樹狀大分子；幻合成金屬納米顆粒。這兩個(gè)步驟的順序可以根據(jù)與顆粒膠體穩(wěn)定性和復(fù)合物的最終應(yīng)用有關(guān)的技術(shù)過程顛倒過來。在某些特殊情況下，顆粒的功能化和合成可通過一個(gè)步驟同時(shí)實(shí)現(xiàn)。據(jù)了解，預(yù)先功能化的樹狀大分子可以用來作為模板來包裹金納米顆粒(Au DENPs) (Shukla et al. ,Soft Matter 2008，4，2160-2163)。對(duì)于聚酰胺-胺(PAMAM)樹狀大分子作為模板形成的Au DEWs來說，由于PAMAM末端的大量氨基的存在使得材料帶有正電性，具有一定的生物毒性。最近的報(bào)導(dǎo)表明，乙?；腁u DEWs可以作為醫(yī)用造影劑用于活體成像，但是，乙酰化在消除PAMAM材料正電性的同時(shí)降低了 PAMAM對(duì)Au的穩(wěn)定作用， 使得Au DENPs在Au/PAMAM > 50時(shí)，穩(wěn)定性大幅下降，需要加入額外的保護(hù)劑才能很好的存儲(chǔ)，在一定程度上限制了 Au DEWs的應(yīng)用。這意味著，如何通過適當(dāng)?shù)匦揎棙錉畲蠓肿颖砻妫蛊鋵?duì)Au Ws達(dá)到很好的模板和穩(wěn)定作用，從而提高材料的穩(wěn)定性，降低成本和生物毒性是目前需要解決的關(guān)鍵問題。PEG(聚乙二醇)由于其獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)受到了人們廣泛的關(guān)注。近年來，PEG 系列產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于藥劑的制備中，其中相對(duì)分子量較低的聚乙二醇可用作溶劑、助溶劑、o/w型乳化劑和穩(wěn)定劑，用于制作水懸劑、乳劑、注射劑等，也用作水溶性軟膏基質(zhì)和栓劑基質(zhì)，相對(duì)分子量高的固體蠟狀聚乙二醇常用于增加低分子量液體的粘度和成固性。對(duì)于水中不易溶解的藥物，由于PEG具有很好的水溶性，也能溶于多種有機(jī)溶劑，可被用作增溶劑。同時(shí)，PEG可作固體分散劑的載體，以達(dá)到固體分散目的。在細(xì)胞工程中普遍認(rèn)為PEG 分子能改變各類細(xì)胞的生物膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組， 由于兩細(xì)胞接口處雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用，在近代微生物細(xì)胞融合技術(shù)中常被用作細(xì)胞融合劑。目前mPEG (聚乙二醇單甲醚)修飾的不同摩爾配比的聚酰胺_胺樹狀大分子包裹的金納米粒子的制備方法還未見相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種mPEG修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法，該方法提高了金和樹狀大分子之間的摩爾比，降低了材料的成本，同時(shí)提高了金納米粒子的穩(wěn)定性，并成功地應(yīng)用于小鼠的活體成像；本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和， 易于操作，具有產(chǎn)業(yè)化實(shí)施的前景。本發(fā)明的一種mPEG修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法，包括(1)用IOmL的二甲亞砜溶液溶解干重為20 30mg的樹狀大分子，然后邊攪拌邊滴加溶于5mL 二甲亞砜溶液的干重為30. 94 46. 4Img的mPEG_MAL，反應(yīng)60 80h，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用透析膜在緩沖溶液和超純水中透析，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得固體；(2)取步驟(1)所得固體，用甲醇或水將其溶解后，再加入氯金酸溶液，然后在室溫下攪拌20 40min，加入NaBH4溶液，在室溫下攪拌反應(yīng)1. 5 2. 5h ；接著再加入三乙胺， 攪拌混合20 40min后向反應(yīng)液中加入乙酸酐，在室溫下攪拌反應(yīng)20 ^h，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用透析膜在緩沖溶液和超純水中透析，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得到mPEG修飾的樹狀大分子/金納米粒子。所述步驟(1)中的mPEG-MAL為一端被馬來酰亞胺活化的聚乙二醇單甲醚；樹狀大分子為第5代聚酰胺-胺型PAMAM樹狀大分子(Dendritech Inc.，Midland, MI, USA)； mPEG-MAL/樹狀大分子(摩爾比)=20 1 ；透析膜為纖維素透析膜(MWC0 = 10000)；緩沖溶液為PBS (磷酸鹽)緩沖溶液。所述步驟(1)或O)中透析的過程為逐次在PBS緩沖溶液4L中透析2 4次和超純水4L中透析2 4次，每次6-10h，透析3天。所述步驟⑵中的氯金酸溶液為lOmg/mL的HAuCl4甲醇溶液或10mg/mL的HAuCl4 水溶液。所述步驟O)中加入的NaBH4溶液中NaBH4的摩爾量與金的摩爾量之比為5/1， NaBH4溶液為NaBH4WH2CVCH3OH溶液，H2O與CH3OH體積比的為2 1 ；所加入的三乙胺與樹狀大分子的摩爾比為陽0 1，所加入的乙酸酐與樹狀大分子的摩爾比為550 1。所述步驟O)中的透析膜為纖維素透析膜(MWC0 = 10000)，緩沖溶液為PBS緩沖溶液。所述步驟⑵得到mPEG修飾的樹狀大分子/金納米粒子為{(Au0) n_G5. NHAc-PEG} DENPs，其中η選自50 400的整數(shù)。所述步驟⑵得到mPEG修飾的樹狀大分子/金納米粒子為{(Au0) n_G5. NHAc-PEG} DENPs，其中 η 為 50、100、150、200、250、300、350 或 400。本發(fā)明的一種mPEG修飾的樹狀大分子/金納米粒子用于CT成像。本發(fā)明使用介質(zhì)輔助的激光脫附離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-T0F)、核磁共振譜 (NMR)、紫外-可見分光光度計(jì)(UV-Vis)、透射電子顯微鏡(TEM)測(cè)量等方法表征本發(fā)明制備的樹狀大分子或納米顆粒，同時(shí)用Micro-CT測(cè)試來檢驗(yàn)PEG修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子包裹的金納米粒子的小鼠活體成像效果，具體測(cè)試結(jié)果如下(1)介質(zhì)輔助的激光脫附離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-T0F)
通過MALDI-T0F分析，發(fā)現(xiàn)mPEG修飾的第5代聚酰胺-胺樹狀大分子(G5. NH2-mPEG)的分子量為58650，和原材料G5. NH2的分子量(25860)相比，每個(gè)樹狀大分子表面取代了 16.4個(gè)PEG。見附圖1。(2) NMR if核磁共振氫譜結(jié)果證實(shí)了 {(Au°)n-G5. NHAc-mPEG} DENPs的結(jié)構(gòu)正確，見附圖2。(3)紫外-可見光分光光度計(jì)的測(cè)試結(jié)果在水溶液中合成的{(Au°)n-G5. NHAc-mPEG} DENPs在510nm左右都有一個(gè)特征吸收峰，這是由于金納米顆粒的表面等離子體共振峰，參見附圖3 ；mPEG修飾的樹狀大分子包裹的Au NPs能穩(wěn)定分散在水中，即使在乙?；揎椇?，材料在不同的pH值(pH = 5. 0-8. 0) 和不同溫度-50°C )范圍內(nèi)均具有非常好的穩(wěn)定性，說明mPEG修飾的PAMAM不僅允許我們大大提高了 Au/PAMAM的摩爾比，還對(duì)生成的AuNPs起到了非常好的穩(wěn)定作用，參見附圖4和附圖5;(4)透射電子顯微鏡測(cè)量在水中合成的{(Au°)n-G5. NHAc-mPEG} DENPs的TEM圖片和粒度分布直方圖(參見附圖6)，表明形成的{(Au0) n-G5. NHAc-mPEG} DENPs納米顆粒相當(dāng)均勻，粒徑分布在較窄的范圍內(nèi)0-4nm)。同時(shí)也表明金納米顆粒尺寸大小可通過改變樹狀大分子/Au摩爾比來控制。{(Au0) 100-G5. NHAc-mPEG} DENPs的高分辨TEM圖片(見附圖7b)和選區(qū)電子衍射圖(SAED 模式)表明{(Au0) 100-G5. NHAc-mPEG} DENPs 金納米顆粒高度晶化。(111)、(200)、 (220)和(311)環(huán)說明{(Au°)1QQ-G5· NHAc-mPEG}DENPs金納米顆粒呈面心立方(FCC)晶體結(jié)構(gòu)(見附圖7c)。{(Au0) 100-G5. NHAc-mPEG} DENPs的EDS譜則證實(shí)金元素的存在；見附圖 7d。(5)小鼠活體血管成像將500 μ L 的{(Au0) 3(IQ-G5. NHAc-mPEG} DENPs ([Au] = 0. 5mol/L)尾部靜脈注射進(jìn)體重為30g的小鼠體內(nèi)，通過Micro-CT掃描檢測(cè)得到的圖片(圖8)，從圖中能夠清楚地看到小鼠的下腔靜脈和腎靜脈，且小鼠未發(fā)現(xiàn)死亡，證明本方法合成的{(Au°)n-G5. NHAc-mPEG}DENPs具有較低的生物毒性和較好的CT成像效果。通過用mPEG修飾第5代的樹狀大分子(G5 PAMAM)和氯金酸混合后，可在室溫下經(jīng)原位還原合成金納米顆粒，且乙?；揎椊档筒牧仙锒拘缘耐瑫r(shí)未對(duì)材料的穩(wěn)定性產(chǎn)生明顯影響，同時(shí)，生成的Au NPs尺寸分布較窄，形態(tài)均一，具有良好的穩(wěn)定性和CT成像效果，這一點(diǎn)對(duì)于用于不同醫(yī)學(xué)領(lǐng)域所需要的可定制的金屬納米顆粒表面功能化非常重要。有益效果(1)本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和，易于操作，具有產(chǎn)業(yè)化實(shí)施的前景；(2)本發(fā)明設(shè)計(jì)合成的mPEG協(xié)助樹狀大分子包裹穩(wěn)定化的金納米顆粒的材料，很大程度上提高了金和樹狀大分子之間的摩爾比，降低了材料的成本，同時(shí)提高了金納米粒子的穩(wěn)定性，并成功地應(yīng)用于小鼠的活體成像。(3)本發(fā)明的樹狀大分子/金納米粒子能夠長(zhǎng)時(shí)間地分散在溶液中，沒有團(tuán)聚現(xiàn)象發(fā)生，所合成的納米顆粒的尺寸大小可控制，且具有較低的生物毒性、較高的X-射線衰減強(qiáng)度和較好的CT成像效果，使它們具有了應(yīng)用于各種生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的前景。


圖1為本發(fā)明制備的G5. NHAc-mPEG樹狀大分子的MALDI-T0F譜圖。圖2 為本發(fā)明制備的 G5. NH2-mPEG 樹狀大分子(a)禾Π {(Au0) 3(1Q-G5· NHAc-mPEG} DENPs (b)的核磁共振氫譜圖。圖 3 為本發(fā)明制備的{(Au°) n-G5. NHAc-mPEG} DENPs (η = 50、100、150、200、250、 300,350,400)在25°C、pH = 6. 0時(shí)的紫外吸收光譜圖。圖 4 為本發(fā)明制備的{(Au0)n-G5. NHAc-mPEG}DENPs (η = 50(1), 100(2), 150(3), 200 (4)，250 (5)，300 (6)，350 (7) ,400(8))在不同 pH 值時(shí)的紫外吸收光譜圖(a)pH = 5. 0 ； (b)pH = 7. 0 ； (c)pH = 8. 0。圖 5 為本發(fā)明制備的{(Au°) n-G5. NHAc-mPEG} DENPs (η = 50(1)，100(2)，150(3)， 200 (4)，250 (5)，300 (6)，350 (7)，400 (8))在不同溫度時(shí)的紫外吸收光譜圖(a) 4 °C ； (b)37°C ； (c) 50 °C ο圖 6 為本發(fā)明制備的{(Au°)n-G5. NHAc-mPEG} DENPs (η = 100 (a)、200 (c)、300 (e)、 400(g))的 TEM 圖片和粒徑分布直方圖(η = 100 (b)、200 (d)、300 (f)、400 (h))。圖7為本發(fā)明制備的{(Au°) 1QQ-G5. NHAc-mPEG}DENPs的(a)TEM圖片(b)高分辨率 TEM圖片；(c)選區(qū)電子衍射圖；(d)能量分散(EDS)譜。圖 8. 500 μ L 的{(Au0) 3。。-G5· NHAc-mPEG} DENPs ([Au] = 0. lmol/L)尾部靜脈注射進(jìn)小鼠體內(nèi)，通過Micro-CT掃描檢測(cè)得到的CT圖片圖9本發(fā)明反應(yīng)方程式簡(jiǎn)圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實(shí)施例1(1)用IOmL的DMSO溶液溶解干重為30. OOmg的G5PAMAM樹狀大分子，邊攪拌邊滴加溶于5mLDMS0溶液的干重為46. 4Img的mPEG_MAL，其中mPEG_MAL/樹狀大分子(摩爾比)=20 1，反應(yīng)72小時(shí)，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用纖維素透析膜(MWC0 = 10000)逐次在PBS 緩沖溶液4L中，透析3次和超純水4L中，透析3次，每次他，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得 G5. NH2-mPEG ；(2)取步驟(1)干燥后固體5. OOmg溶于甲醇中，取0. 176mL的10mg/mL的HAuCl4 甲醇溶液混合，在室溫下攪拌20min，溶液變成淺黃色，隨后加入0. 807mL的lmg/mL的NaBH4 溶液(H2O CH3OH(體積比)=2 1)，溶液瞬間變成深紅色，在室溫下攪拌反應(yīng)濁；向步驟O)的反應(yīng)液中加入7. 53 μ L三乙胺，攪拌反應(yīng)20min后向反應(yīng)液中加入4. 92 μ L乙酸酐，在室溫下攪拌反應(yīng)20h，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用纖維素透析膜(MWCO= 10000)逐次在PBS緩沖溶液4L中，透析3次和超純水4L中透析3次，每次他，透析3天，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得到mPEG修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子包裹的金納米粒子{(Au°)5(i-G5. NHAc-mPEG}DENPs。實(shí)施例2(1)用IOmL的DMSO溶液溶解干重為20. OOmg的G5PAMAM樹狀大分子，邊攪拌邊滴加溶于5mLDMS0溶液的干重為30. 94mg的mPEG_MAL，其中mPEG_MAL/樹狀大分子(摩爾比)=20 1，反應(yīng)72小時(shí)，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用纖維素透析膜(MWC0 = 10000)逐次在PBS 緩沖溶液4L中，透析4次和超純水4L中，透析2次，每次他，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得 G5. NH2-mPEG ；(2)取步驟(1)干燥后固體5. OOmg溶于水中，取0. 35ImL的10mg/mL的HAuCl4水溶液混合，在室溫下強(qiáng)力攪拌30min，溶液變成淺黃色，隨后加入1. 613mL的lmg/mL的NaBH4 溶液(H2O CH3OH(體積比)=2 1)，溶液瞬間變成深紅色，在室溫下強(qiáng)力攪拌反應(yīng)濁； 向步驟O)的反應(yīng)液中加入7. 53 μ L三乙胺，攪拌反應(yīng)30min后向反應(yīng)液中加入4. 92 μ L 乙酸酐，在室溫下強(qiáng)力攪拌反應(yīng)Mh，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用纖維素透析膜(MWCO= 10000)逐次在PBS緩沖溶液4L中透析2次和超純水4L中透析4次，每次他，透析3天，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得到mPEG修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子包裹的金納米粒子{(Au0) 100-G5. NHAc-mPEG}DENPs。實(shí)施例3(1)用IOmL的DMSO溶液溶解干重為20. OOmg的樹狀大分子，邊攪拌邊滴加溶于 5mLDMS0溶液的干重為30. 94mg的mPEG_MAL，其中mPEG_MAL/樹狀大分子(摩爾比)= 20 1，反應(yīng)60小時(shí)，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用纖維素透析膜(MWC0 = 10000)逐次在PBS緩沖溶液4L中，透析3次和超純水4L中，透析3次，每次10h，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得 G5. NH2-mPEG ；(2)取步驟(1)干燥后固體5. OOmg溶于甲醇中，取0. 702mL的10mg/mL的HAuCl4水溶液混合，在室溫下強(qiáng)力攪拌30min，溶液變成淺黃色，隨后加入3. 235mL的lmg/mL的NaBH4 溶液(H2O CH3OH(體積比)=2 1)，溶液瞬間變成深紅色，在室溫下強(qiáng)力攪拌反應(yīng)濁； 向步驟O)的反應(yīng)液中加入7. 53 μ L三乙胺，攪拌反應(yīng)30min后向反應(yīng)液中加入4. 92 μ L 乙酸酐，在室溫下強(qiáng)力攪拌反應(yīng)Mh，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用纖維素透析膜(MWCO= 10000)逐次在PBS緩沖溶液4L中透析3次和超純水4L中透析3次，每次他，透析3天，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得到mPEG修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子包裹的金納米粒子{(Au0) 200-G5. NHAc-mPEG}DENPs。實(shí)施例4(1)用IOmL的DMSO溶液溶解干重為20. OOmg的樹狀大分子，邊攪拌邊滴加溶于 5mLDMS0溶液的干重為30. 94mg的mPEG_MAL，其中mPEG_MAL/樹狀大分子(摩爾比)= 20 1，反應(yīng)78小時(shí)，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用纖維素透析膜(MWC0 = 10000)逐次在PBS緩沖溶液4L中，透析2次和超純水4L中，透析4次，每次他，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得 G5. NH2-mPEG ；(2)取步驟(1)干燥后固體5. OOmg溶于水中，取1. 053mL的10mg/mL的HAuCl4甲醇溶液混合，在室溫下攪拌30min，溶液變成淺黃色，隨后加入0. 484mL的10mg/mL的NaBH4 溶液(H2O CH3OH(體積比)=2 1)，溶液瞬間變成深紅色，在室溫下攪拌反應(yīng)濁；向步驟O)的反應(yīng)液中加入7. 53 μ L三乙胺，攪拌反應(yīng)30min后向反應(yīng)液中加入4. 92 μ L乙酸酐，在室溫下攪拌反應(yīng)Mh，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用纖維素透析膜(MWCO= 10000)逐次在PBS緩沖溶液4中透析3次和超純水4L中透析3次，每次他，透析3天，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得到mPEG修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子包裹的金納米粒子{(Au0) 300-G5. NHAc-mPEG} DENPs。實(shí)施例5(1)用IOmL的DMSO溶液溶解干重為20. OOmg的樹狀大分子，邊攪拌邊滴加溶于 5mLDMS0溶液的干重為30. 94mg的mPEG_MAL，其中mPEG_MAL/樹狀大分子(摩爾比)= 20 1，反應(yīng)80小時(shí)，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用纖維素透析膜(MWC0 = 10000)逐次在PBS緩沖溶液4L中，透析3次和超純水4L中，透析3次，共透析3天，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得 G5. NH2-mPEG ；(2)取步驟(1)干燥后固體5. OOmg溶于甲醇中，取1. 404mL的10mg/mL的HAuCl4甲醇溶液混合，在室溫下攪拌40min，溶液變成淺黃色，隨后加入0. 645mL的10mg/mL的NaBH4 溶液Ol2O CH3OH(體積比)=2 1)，溶液瞬間變成深紅色，在室溫下攪拌反應(yīng)池；向步驟 (2)的反應(yīng)液中加入7. 53 μ L三乙胺，攪拌反應(yīng)40min后向反應(yīng)液中加入4. 92 μ L乙酸酐， 在室溫下攪拌反應(yīng)^h，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用纖維素透析膜(MWC0 = 10000)逐次在PBS緩沖溶液4L中透析2次和超純水4L中透析4次，每次10h，透析3天，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得到mPEG修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子包裹的金納米粒子{(Au0) 400-G5. NHAc-mPEG} DENPs。
權(quán)利要求
1.一種聚乙二醇單甲醚修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法，包括(1)用IOmL的二甲亞砜溶液溶解干重為20 30mg的樹狀大分子，然后邊攪拌邊滴加溶于5mL 二甲亞砜溶液的干重為30. 94 46. 4Img的一端被馬來酰亞胺活化的聚乙二醇單甲醚，反應(yīng)60 80h，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用透析膜在緩沖溶液和超純水中透析，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得固體；(2)取步驟(1)所得固體，用甲醇或水將其溶解后，再加入氯金酸溶液，然后在室溫下攪拌20 40min，加入NaBH4溶液，在室溫下攪拌反應(yīng)1. 5 2. 5h ；接著再加入三乙胺，攪拌混合20 40min后向反應(yīng)液中加入乙酸酐，在室溫下攪拌反應(yīng)20 ^h，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用透析膜在緩沖溶液和超純水中透析，最后將純化后的產(chǎn)物冷凍干燥得到聚乙二醇單甲醚修飾的樹狀大分子/金納米粒子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚乙二醇單甲醚修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中的樹狀大分子為第5代聚酰胺-胺型樹狀大分子；一端被馬來酰亞胺活化的聚乙二醇單甲醚與樹狀大分子的摩爾比為20 1;透析膜為纖維素透析膜MWCO = 10000 ；緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚乙二醇單甲醚修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的氯金酸溶液為lOmg/mL的HAuCl4甲醇溶液或10mg/mL 的HAuCl4水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚乙二醇單甲醚修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法，其特征在于所述步驟O)中加入的NaBH4溶液中NaBH4的摩爾量與金的摩爾量之比為5/1 ,NaBH4溶液為NaBH4WH2CVCH3OH溶液，H2O與CH3OH體積比的為2 1 ；所加入的三乙胺與樹狀大分子的摩爾比為550 1，所加入的乙酸酐與樹狀大分子的摩爾比為550 1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚乙二醇單甲醚修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法，其特征在于所述步驟O)中的透析膜為纖維素透析膜MWCO= 10000，緩沖溶液為 PBS磷酸鹽緩沖溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚乙二醇單甲醚修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法，其特征在于所述步驟( 得到聚乙二醇單甲醚修飾的樹狀大分子/金納米粒子為 {(Au°)n-G5. NHAc-PEG}DENPs，其中 η 選自 50 400 的整數(shù)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的一種聚乙二醇單甲醚修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法，其特征在于所述步驟( 得到聚乙二醇單甲醚修飾的樹狀大分子/金納米粒子為{(Au°)n-G5. NHAc-PEG}DENPs，其中 η 為 50,100,15.、200、250、300、350 或 400。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種mPEG修飾的樹狀大分子/金納米粒子的制備方法，包括(1)用mPEG-MAL修飾樹狀大分子，透析，冷凍干燥得固體；(2)取上述固體，用甲醇或水將其溶解，再加入氯金酸溶液，攪拌后加入NaBH4溶液，室溫反應(yīng)；再加入三乙胺，乙酸酐，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)產(chǎn)物透析，冷凍即得。本發(fā)明提高了金和樹狀大分子之間的摩爾比，降低了材料的成本，同時(shí)提高了金納米粒子的穩(wěn)定性，并成功地應(yīng)用于小鼠的活體成像；本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和，易于操作，具有產(chǎn)業(yè)化實(shí)施的前景。
文檔編號(hào)C08K3/08GK102153871SQ20111004661
公開日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2011年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月25日
發(fā)明者史向陽, 彭琛 申請(qǐng)人:東華大學(xué)