專利名稱：一種富集痕量氯霉素的高分子聚合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種富集食品中痕量氯霉素的 高分子聚合物的制備方法。
背景技術(shù)：
氯霉素(chlroamphenicol，簡(jiǎn)稱CAP)是由委內(nèi)瑞拉鏈霉菌 (Str印tomyces venezuelae)所產(chǎn)生的一種廣譜抗菌素，也是第一種采用化 學(xué)合成法生產(chǎn)的抗生素，它能夠抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，尤其對(duì)革蘭氏陰性 菌作用明顯。由于CAP對(duì)人體有很多的危害作用，現(xiàn)在許多國(guó)家嚴(yán)格禁止將 CAP應(yīng)用于食用性動(dòng)物飼養(yǎng)和治療，即食用性動(dòng)物組織和動(dòng)物源食品中CAP 的最大殘留限量(MRL)為0。目前對(duì)于CAP的檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫法 (ELISA)、放射免疫法(RIA)、微生物法和色譜法。ELISA和RIA分析方法 的檢測(cè)限一般為0. 1 lpg/kg，而且樣品前處理簡(jiǎn)單，檢測(cè)通量高，但存在 假陽(yáng)性結(jié)果；微生物法具有特異性差、靈敏度低等缺點(diǎn)；色譜法是國(guó)際上公 認(rèn)的氯霉素殘留定量(痕量)檢測(cè)方法，但存在著樣品前處理過(guò)程復(fù)雜、分 析速度慢的缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種富集痕量氯霉 素的高分子聚合物的制備方法，該高分子聚合物應(yīng)用到在線富集液相色譜聯(lián) 用技術(shù)上，最低檢出限為0.05pg/L，并且具有操作簡(jiǎn)單、快速穩(wěn)定等特點(diǎn)。
本發(fā)明采取的技術(shù)方案是-
一種富集痕量氯霉素的高分子聚合物的制備方法，其制備方法的步驟是-
(1) .將功能單體4-乙烯吡啶、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯溶解在致孔 劑四氫呋喃中，超聲處理5 10min，得到預(yù)聚溶液；
(2) .將預(yù)聚溶液混勻后加入引發(fā)劑偶氮二丁腈，超聲8 12min，充氮脫 氧6 12min，密封于容器中，置于恒溫水浴鍋中在50 7(TC下反應(yīng)20 25h， 制得塊狀聚合物；
(3) .將制得的塊狀聚合物用甲醇與冰乙酸的抽提液在索氏提取器中抽提 12 18h，以去除未反應(yīng)的試劑，然后在70 9(TC溫度條件下真空干燥7 9h， 取出后研缽磨碎，分級(jí)篩分級(jí)，即可得到各種粒徑的高分子聚合物成品。
而且，所述4-乙烯吡啶、乙二醇二甲基丙烯酸酯的摩爾比例為1:2. 5 3。 而且，所述引發(fā)劑偶氮二異丁腈的加入量為功能單體4-乙烯吡啶、交聯(lián) 劑乙二醇二甲基丙烯酸酯及致孔劑四氫呋喃的總質(zhì)量的0.8 1.2%。
而且，所述甲醇與冰乙酸抽提液中甲醇冰乙酸的體積比為4: 1。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是
1. 本發(fā)明采用固相萃取技術(shù)(SPE)適于固相基質(zhì)的分離和檢測(cè)，能夠 起到富集并降低檢測(cè)限的作用，簡(jiǎn)化了樣品預(yù)處理操作步驟，縮短了預(yù)處理 時(shí)間，所需有機(jī)溶劑少，減少雜質(zhì)引入，降低成本，并減輕有機(jī)溶劑對(duì)人身、 環(huán)境的影響。
2. 本發(fā)明制得的高分子聚合物經(jīng)濟(jì)實(shí)用且合成過(guò)程簡(jiǎn)單，可應(yīng)用于檢測(cè) 食品中氯霉素的前處理，為檢測(cè)領(lǐng)域提供了新型的富集材料，在實(shí)際應(yīng)用中 有很大的利用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明；下述實(shí)施例是說(shuō)明性的，不是 限定性的，不能以下述實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。 實(shí)施例1:
一種富集痕量氯霉素的高分子聚合物的制備方法，制備方法的步驟是 (D.準(zhǔn)確量取四氫呋喃5mL、 107uL4-乙烯吡啶、1891uL乙二醇二甲基丙 烯酸酯置于玻璃安培瓶中，超聲處理7min，得到預(yù)聚溶液；
(2) .將預(yù)聚溶液混勻后加入引發(fā)劑偶氮二丁腈(AIBN) 30mg，超聲10min， 充氮脫氧5min，密封在圓底容器中，置于恒溫水浴鍋中在60'C下反應(yīng)24小 時(shí)后制得塊狀聚合物。
(3) .將制得的塊狀聚合物用甲醇冰乙酸按4: 1配比制得的250mL混合 液在索氏提取器中抽提16h以去除未反應(yīng)的試劑；真空干燥8(TC， 8h。取出 后研缽磨碎，分級(jí)篩分級(jí)，得到不同粒徑的聚合物。
測(cè)定實(shí)例h
在一根1.5 cm x 4 rara的不銹鋼預(yù)富集柱兩端放置墊片，在其中均勻裝 填本發(fā)明所制備的高分子聚合物120 mg。裝不銹鋼預(yù)富集柱裝在HPLC六通 閥定量環(huán)的位置上，HPLC六通閥有兩個(gè)閥位"上樣位"和"進(jìn)樣位"。首先 在"上樣位"上用流動(dòng)注射儀上樣富集25 mL標(biāo)品或樣品，這時(shí)氯霉素就被 吸附在了富集材料上，多余的水將會(huì)通過(guò)廢液管排出，這時(shí)HPLC的流動(dòng)相是 不流過(guò)預(yù)富集柱的。上樣富集過(guò)程完成后把HPLC六通閥扳到它的"進(jìn)樣位" 閥位上，此時(shí)流動(dòng)相以1.0 mL min—'的流速反方向沖洗預(yù)富集柱80s，把吸 附在上面的被分析物洗脫下來(lái)并直接進(jìn)入分析柱分離，反向沖洗的好處是在 樣品進(jìn)入分析柱前使其被壓縮成一個(gè)很窄的條帶，防止樣品擴(kuò)散稀釋，從而 起到防止色譜峰拖尾的作用。洗脫過(guò)程完成后，再把閥位扳回"上樣位"狀 態(tài)，準(zhǔn)備下次富集上樣。通過(guò)這種方法，得出該高分子聚合物的富集倍數(shù)為 364 (同樣濃度在線富集得到的峰面積與直接進(jìn)樣得到的峰面積的比)。
實(shí)施例2:
(1) .準(zhǔn)確量取四氫呋喃30mL、 537uL的4-乙烯吡啶、9456uL的乙二醇二 甲基丙烯酸酯置于玻璃安培瓶中，超聲處理8min，得到預(yù)聚溶液；
(2) .將預(yù)聚溶液混勻后加入引發(fā)劑偶氮二丁腈(AIBN)150mg，超聲10min， 沖氮脫氧10min，密封，置于恒溫水浴鍋中在6(TC下反應(yīng)24小時(shí)后，制得塊 狀聚合物；
其它同實(shí)施例l。 測(cè)定實(shí)例2:
操作步驟與應(yīng)用實(shí)施例l相同，最終測(cè)得該高分子聚合物的富集倍數(shù)為
359。
權(quán)利要求
1.一種富集痕量氯霉素的高分子聚合物的制備方法，其特征在于制備方法的步驟是(1).將功能單體4-乙烯吡啶、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯溶解在致孔劑四氫呋喃中，超聲處理5～10min，得到預(yù)聚溶液；(2).將預(yù)聚溶液混勻后加入引發(fā)劑偶氮二丁腈，超聲8～12min，充氮脫氧6～12min，密封于容器中，置于恒溫水浴鍋中在50～70℃下反應(yīng)20～25h，制得塊狀聚合物；(3).將制得的塊狀聚合物用甲醇與冰乙酸的抽提液在索氏提取器中抽提12～18h，以去除未反應(yīng)的試劑，然后在70～90℃溫度條件下真空干燥7～9h，取出后研缽磨碎，分級(jí)篩分級(jí)，即可得到各種粒徑的高分子聚合物成品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富集痕量氯霉素的高分子聚合物的制備方 法，其特征在于所述4-乙烯吡啶、乙二醇二甲基丙烯酸酯的摩爾比例為 1:2. 5 3。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富集痕量氯霉素的高分子聚合物的制備方 法，其特征在于所述引發(fā)劑偶氮二異丁腈的加入量為功能單體4-乙烯吡啶、 交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯及致孔劑四氫呋喃的總質(zhì)量的0.8 1.2%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富集痕量氯霉素的高分子聚合物的制備方法，其特征在于所述甲醇與冰乙酸抽提液中甲醇冰乙酸的體積比為4: 1。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種富集痕量氯霉素的高分子聚合物的制備方法，致孔劑采用四氫呋喃，功能單體采用4-乙烯吡啶，交聯(lián)劑采用乙二醇二甲基丙烯酸酯，其中功能單體和交聯(lián)劑的摩爾比例1∶2.5～3；將4-乙烯吡啶和乙二醇二甲基丙烯酸酯溶解到四氫呋喃中，混勻后加入引發(fā)劑偶氮乙二丁腈，經(jīng)過(guò)超聲作用、吹氮脫氧、恒溫水浴反應(yīng)、索氏抽提和真空干燥過(guò)程后即可得到可富集痕量氯霉素的高分子聚合物。本發(fā)明制得的高分子聚合物經(jīng)濟(jì)實(shí)用且合成過(guò)程簡(jiǎn)單，可應(yīng)用于檢測(cè)食品中氯霉素的前處理，為檢測(cè)領(lǐng)域提供了新型的富集材料，在實(shí)際應(yīng)用中有很大的利用價(jià)值。
文檔編號(hào)C08F222/14GK101353440SQ20081015132
公開日2009年1月28日 申請(qǐng)日期2008年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月16日
發(fā)明者燕 張, 方國(guó)臻, 碩 王, 王俊平, 趙立杰 申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)