專利名稱：：抑生長素的環(huán)肽類似物的制作方法天然抑生長素具有一個14-氨基酸同工型(抑生長素-14)和18-氨基酸同工型(抑生長素-28)。Heiman等人，“神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)”(Neuroendocrinology)，45429-436(1987)。由于天然抑生長素具有短的半衰期，已研制出各種抑生長素類似物，例如，用于治療肢端肥大癥。Raynor等人，“分子藥理學(xué)”(MolecularPharmacol.)，43438(1993)。已鑒定并描述5種不同的抑生長素受體。Hoyer等人，“Naunyn-Schimiedeberg藥理學(xué)文獻(xiàn)”(Naunyn-Schjmiedeberg′sArch.Pharmacol.)，350441(1994)。抑生長素產(chǎn)生多種效果，包括激素釋放的調(diào)節(jié)，例如，調(diào)節(jié)生長激素、胰高血糖素、胰島素、糊精和神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。已將一些這樣的效果和其結(jié)合到特異的抑生長素受體聯(lián)系起來。例如，生長激素的抑制已被歸因于抑生長素2-型受體(“SSTR-2”)(Raynor等人，“分子藥理學(xué)”(MolecularPharmacol.)，43438(1993)；Lloyd等人，“美國生理學(xué)雜志”(Am.J.Physiol.)，268G102(1995))，而胰島素的抑制已被歸因于抑生長素5-型受體(“SSTR-5”)(Coy等人，197366-371(1993))。最好是有一種對決定所需要的生物學(xué)反應(yīng)的專一抑生長素受體亞型有選擇性的類似物，從而減少可能引起不希望有的副反應(yīng)的與其它受體亞型之間的相互作用。本發(fā)明涉及由以下通式包括的肽其中，A1是Cys或Mpa的D-或L-異構(gòu)體；A2是Asn、Gln、一種脂肪族氨基酸、一種芳香族氨基酸，或缺失；A3是一種芳香族氨基酸；A4是His或一種芳香族氨基酸；A7是Thr、Ser或一種脂肪族氨基酸；A8是一種芳香簇氨基酸；A9是Cys的D-或L-異構(gòu)體；每一R1和R2獨立地為H、C1-12烷基、C7-20苯烷基、C11-20萘烷基、C1-12羥基烷基、C7-20羥苯基烷基、C11-20羥萘基烷基或COE1，其中E1是C1-12烷基、C7-20苯烷基、C11-20萘烷基、C1-12羥基烷基、C7-20羥苯基烷基或C11-20羥萘基烷基；以及R3是NH2或NH·Y·CH2·Z，其中Y是一個C1-12烴的部分(二價，例如，直鏈或支鏈的烷基)，并且Z是H、OH、CO2H或CONH2；以及一個二硫鍵連接著A1和A9殘基的側(cè)鏈；或其藥學(xué)可接受的鹽。在一個實施方案中，每一A3和A8獨立地是Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、鄰-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、吡啶基-Ala、Trp、β-Nal、2，4-二氯-Phe、Tyr(I)或F5-Phe，A4是His、Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、鄰-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、吡啶基-Ala、Trp、β-Nal、2，4-二氯-Phe、Tyr(I)或F5-Phe，A2是Asn、Gln、Ala、Aib、Val、Leu、Ile、Nle、Nva、Abu、Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、鄰-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、吡啶基-Ala、Trp、β-Nal、2，4-二氯-Phe、Tyr(I)、或F5-Phe，或者缺失，并且A7是Thr、Ser、Ala、Aib、Val、Leu、Ile、Nle、Nva或Abu。在另一個實施方案中，A9是Cys，每一A3和A8獨立地是Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH或CH3)、Tyr(I)或Trp，A4是His、Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH、或CH3)、Tyr(I)或Trp，A2是Asn、Gln，或缺失，并且A7是Thr或Ser。在更進(jìn)一步的實施方案中，A2是Asn，或者缺失，A3是Phe，A4是Phe、His、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH或CH3)、、Tyr(I)或Trp，A8是Phe或?qū)?x-Phe(其中x是鹵素、OH或CH3)，并且每一R1和R2獨立地是H，而R3是NH2。以下為由上式包括的本發(fā)明的肽的例子H2-c[Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2(類似物I)，H2-c[D-Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2(類似物II)，H2-c[Cys-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-His-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-His-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2(類似物TV)，H2-c[D-Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2(類似物III)，H2-c[D-Cys-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-His-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-His-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2(類似物VIII)，H2-c[D-Cys-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2(類似物V)，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-His-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-His-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-His-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-His-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2(類似物VI)，H2-c[Cys-Phe-6-Nal-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2(類似物VII)，H2-c[Cys-Phe-Cpa-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2(類似物IX)，H2-c[Mpa-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2(類似物X)，H2-c[Cys-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Cys]-NH2(類似物XI)，H2-c[Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Tyr-Cys]-NH2(類似物XII)，H2-c[Cys-Phe-His-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2(類似物XIII)，除開N-末端氨基酸，本公開中所有的氨基酸簡稱(例如，Ala或A2)表示-NH-CH(R)-CO-結(jié)構(gòu)，其中R是一個氨酸鍘鏈(如，CH3是Ala的側(cè)鏈)。對于N-末端氨基酸，如果是Cys的D-或L-異構(gòu)體，則簡稱表示＝N-CH(CH2SH)-CO-，或者，如果是Mpa的D-或L-異構(gòu)體，則簡稱表示＝C(-CH2SH)-CO-，其中R是一個氨基酸側(cè)鏈。Nle、Nva、吡啶基-Ala、F5-Phe、2，4-二氯-Phe、β-Nal、Abu、Mpa、Cpa和Aib分別是以下α-氨基酸的簡稱正亮氨酸、纈氨酸、β-吡啶基-丙氨酸、五氟-苯基丙氨酸、2，4-二氯苯基丙氨酸、β-萘基丙氨酸、α-氨基丁酸、巰基丙酸、對-氯苯基丙氨酸和α-氨基丁酸。Tyr(I)指碘化的酪氨酸殘基(例如，3-I-Tyr、5-I-Tyr和3，5-I-Tyr)，其中碘可以是放射性同位素，例如I125、I127或I131。脂肪族氨基酸是一具有1或2個側(cè)鏈的α-氨基酸，側(cè)鏈獨立地為烴，如1-6個碳原子的直鏈或支鏈。脂肪族氨基酸的例子包括Ala、Aib、Val、Leu、Ile、Nle、Nva或Abu。芳香氨基酸是一其側(cè)鏈具中性(例如，非酸性或堿性)芳香取代基的α-氨基酸，芳香取代基例如，取代的或未取代的苯基、萘基或芳香雜環(huán)基(例如，吡啶基或吲哚基)。芳香氨基酸的例子包括Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素(例如F、Cl或I)、OH、OCH3、CH3或NO2)、鄰-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、吡啶基-丙氨酸、Trp、β-Nal、2，4-二氯-Phe、Tyr(I)、F5-Phe。氨基酸殘基任選有活性時，除非另外說明，所指的是L-異構(gòu)體。而且，在以上通式中，羥基烷基、羥基苯基烷基和羥萘烷基可具有1-4個羥基取代基，且COE1表示-C＝O·E1。-C＝O·E1的例子包括，但不限于，對-羥基苯基丙酰基(即，-C＝O·CH2-CH2-C6H4-OH)和苯基丙?；?。在文中所列出的式中，二硫鍵未標(biāo)出來，其位于A1(例如，Mpa、D-Mpa、Cys或D-Cys)殘基的側(cè)鏈上的硫羥基和A9(例如，Mpa、D-Mpa、Cys或D-Cys)殘基的側(cè)鏈上的硫羥基之間。文中也用另一種格式代表本發(fā)明的肽，例如，H2-C[Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，其兩個二硫鍵合的殘基(即Cys)置于“C”后的兩個括號之間。本發(fā)明的肽可用來抑制受治療者(諸如人類患者的哺乳動物)體內(nèi)的胰島素的釋放。因此，所述肽可用于對那些獲益于抑制胰島素的釋放的生理狀態(tài)(例如，II型糖尿病)的治療。而且，具有一個Tyr(I)殘基的本發(fā)明的肽可用來對具有抑生長素受體(例如，SSTR-5)的細(xì)胞造影。所述的本發(fā)明的肽既可用于體內(nèi)檢測具抑生長素受體的細(xì)胞(例如，癌細(xì)胞)，也可在體外抑生長素受體結(jié)合試驗中用作放射性配體。本發(fā)明的肽可以以藥學(xué)可接受的鹽的形式提供。所述鹽的例子包括，但不限于，那些與有機酸(例如，乙酸、乳酸、馬來酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、琥珀酸、苯甲酸、甲磺酸、甲苯磺酸或pamoicacid)，無機酸(例如，鹽酸、硫酸或磷酸)，聚合酸(例如，單寧酸、羧甲基纖維素、聚乳酸、聚乙二醇酸或聚乳酸-乙二醇酸的共聚物)形成的那些鹽。治療有效量的本發(fā)明的肽和藥學(xué)可接受的載體物質(zhì)(例如，碳酸鎂、乳糖或磷脂，治療化合物可與其形成膠束)一起形成用于向需要所述肽的受治療者給藥(例如，經(jīng)口、靜脈內(nèi)、經(jīng)皮、肺內(nèi)、經(jīng)陰道、皮下、鼻內(nèi)、用離子透入法或通過氣管內(nèi))的治療組合物(例如，丸劑，片劑，膠囊或液體)。丸劑、片劑或膠囊可以用一種物質(zhì)包衣，該物質(zhì)能保護(hù)所述組合物以防止受治療者胃內(nèi)的胃酸或腸酶作用并持續(xù)一段足以使組合物通過而不被消化并進(jìn)入受治療者的小腸的時間。所述治療組合物也可以是用于皮下或肌肉給藥的生物可降解或非生物降解的緩釋劑型。參見，例如，美國專利3,773,919和4,767,628以及PCT申請No.WO94/00148。用一種可植入的或體外唧筒extemalpump(例如，INFUSAIDTM唧筒)來給藥治療組合物可達(dá)到持續(xù)給藥。所述肽可以在患者就寢時間前給藥。用于治療上述疾病或紊亂的本發(fā)明的肽的劑量隨給藥方式、受治療者的年齡和體重以及待治療的受治療者的健康狀況而變化，并且最終由主治醫(yī)師或獸醫(yī)決定。文中這一由主治醫(yī)師或獸醫(yī)確定的肽的劑量被稱作“治療有效劑量”。在本發(fā)明的范圍內(nèi)還考慮到一種以上通式包括的肽，該肽既被用于治療與需要抑制胰島素釋放相關(guān)的疾病或紊亂，例如II型糖尿病，也用于檢測抑生長素受體。例如，放射造影。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點由詳細(xì)說明和權(quán)利要求書闡明。本發(fā)明的抑生長素類似物的合成和應(yīng)用完全在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。除非另外定義，文中所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語均具有與本發(fā)明所需的領(lǐng)域中的一個普通技術(shù)人員所通常理解的相同的含意。并且，文中提到的所有的公開、專利申請、專利及其它參考文獻(xiàn)均并入本發(fā)明。相信本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)文中的描述來最大限度地使用本發(fā)明。因而以下特定的熟練實施方案無論如何應(yīng)被理解為只是說明性的，而不是要限制本公開的其余部分。在肽領(lǐng)域中，短肽的合成已得到了充分的研究。例如，參見Stewart等人，“固相肽合成”(SolidPhasePeptideSynthesis)(PierceChemicalCo.，第二版，1984)。以下為類似物I的合成。本發(fā)明的其它肽可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員以類似的方式制備。將以氯離子形式的芐基胲-聚苯乙烯樹脂(Benzylhydrylamine-polystyreneresin)(AdvancedChemtech，Inc.，Louisville，KY)(1.1克(g)，0.5毫摩爾(mmole))置于一個編程了的AdvancdChemTechACT200肽合成儀的反應(yīng)池中，以加入以下反應(yīng)劑/溶劑(a)二氯甲烷；(b)33％的于二氯甲烷中的三氟乙酸(二次，各持續(xù)1和25分鐘)；(c)二氯甲烷；(d)乙醇；(e)二氯甲烷；以及(f)10％的于氯仿中的三乙胺。在二氯甲烷中把中和了的樹脂與叔丁氧羰基-S-4-甲基芐基-Cys和二異丙基碳二亞胺(各1.5mmole)攪拌1小時，然后將得到的氨基酸樹脂由以上洗滌程序中步驟(a)循環(huán)至(f)。然后以同樣的方法依次將以下氨基酸(1.5mmole)偶聯(lián)叔丁氧羰基-Phe，叔丁氧羰基-O-芐基-Thr，叔丁氧羰基-N-芐氧羰基-Lys，叔丁氧羰基-D-Trp，叔丁氧羰基-Phe，叔丁氧羰基-Phe和叔丁氧羰基-S-甲基芐基-Cys。洗滌并干燥后，完成的樹重得1.6g。然后于0℃下把樹脂(1.6g，0.5mmole)與苯甲醚(5ml)、二硫蘇糖醇(100mg)和無水氟化氫(25ml)混合并攪拌45分鐘。在干燥氮氣流中將過量的氟化氫快速蒸發(fā)，沉淀游離的肽并用乙醚洗滌。再將粗制的肽溶于500ml90％的乙酸中，向其加入濃縮的I2/甲醇溶液至觀察到持久的棕色。通過加入抗壞血酸來除去過量的I2，并將溶液蒸發(fā)至有一小的體積，溶液上SEPHADEXTMG-25柱(2.5×90cm)，有50％乙酸洗脫。然后通過紫外(UV)吸收和薄層層析匯集含主要成份的級分，蒸發(fā)至一小的體積，并上VYDACTM十八烷基硅烷二氧化硅柱(1.5×70cm)(10-15μm)。此柱用80％A+20％B至40％A+60％B的線性梯度洗脫，其中A是0.1％的于水中的三氟乙酸，B為79.9％乙腈、20％水和0.1％TFA。通過薄層層析(tlc)和分析的高效液相層析(hplc)檢驗各級分并匯集以達(dá)到最大純度。溶液從水中反復(fù)冷凍干燥，產(chǎn)生95mg白色松散粉末的產(chǎn)物。通過hplc和tlc發(fā)現(xiàn)該產(chǎn)物是均一的。酸性水解物的氨基酸分析和基體輔助激光解吸電離質(zhì)譜(MALDIMS)證實了環(huán)狀八肽組成(計算的分子量，1077；實測分子量，1080)。以下為類似物V的合成。把以氯離子形式的芐基胲-聚苯乙烯樹脂置于一個編程的AdvancedChemTechACT200肽合成儀的反應(yīng)池中，以加入以下反應(yīng)劑/溶劑(a)二氯甲烷；(b)33％的于二氯甲烷中的三氟乙酸(2次，各1和25分鐘)；(c)二氯甲烷；(d)乙醇；(e)二氯甲烷；及(f)10％的于氯仿中的三乙胺。把中和的樹脂和叔丁氧羰基-S-甲基芐基-Cys和二異丙基碳二亞胺(各1.5mmole)于二氯甲烷中攪拌1小時，再把得到的氨基酸樹脂由以上洗滌程序中的步驟(a)循環(huán)至(g)。然后通過同樣的方法依次偶聯(lián)以下氨基酸叔丁氧羰基-Phe，叔丁氧羰基-O-芐基Thr，叔丁氧羰基-N-芐氧羰基-Lys，叔丁氧羰基-D-Trp，叔丁氧羰基-Phe，叔丁氧羰基-Phe，叔丁氧羰基-Asn和叔丁氧羰基-S-甲基芐基-Cys。洗滌并干燥后，完成的樹脂重1.2g。如上述使肽的樹脂受到HF裂解和I2環(huán)化作用。如上述柱純化產(chǎn)生21mg環(huán)九肽，通過hplc和tlc發(fā)現(xiàn)其是均一的。酸水解物的氨基酸分析和MALDIMS證實其環(huán)九肽組成(計算分子量，1192；實測分子量，1192)。有許多資料報道了在酪氨酸殘基處碘化的抑生長素類似物的合成(即，氯胺-T方法)，其在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。參見，例如，Czernick等人，“生物化學(xué)雜志”(J.Biol.Chem.)2585525(1993)和歐洲專利No.389，180B1。抑生長素受體結(jié)合實驗(1)人SSTR-2結(jié)合實驗CHO-K1(中國倉鼠卵巢)細(xì)胞由美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)(Rockville，MD)(ATCCNo.CCL61)獲得，并且分子生物學(xué)領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于Yamada等人，“美國國家科學(xué)院院刊”(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，89251-255中所述的且也獲自ATCC(ATCCNo.79046)的人SSTR-2cDNA轉(zhuǎn)染。參見，例如，Patel等人“生物化學(xué)和生物物理研究通訊”(Biochem.Biophys.Res.Commun.)198605(1994)。通過于裝置6中用POLYTRONTM勻漿器(BrinkmannInstruments，Westbury，NY)于20ml冰冷的50mMTris-HCl(緩沖液A)勻漿人SSTR-2轉(zhuǎn)染的CHO-K1細(xì)胞15秒，來制備粗制膜。另外加入緩沖液A以達(dá)到終體積為40ml，并在0-4℃下于SORVALTMSS-34轉(zhuǎn)頭(DuPont，Newtown，CT)中于39,000g將勻漿物離心10分鐘。傾析并棄去上清液。如前將沉淀在冰冷的緩沖液A中再勻漿、稀釋并離心。最后的沉淀重懸于10mMTrisHCl，并置于冰上以用于受體結(jié)合實驗。于25℃下將膜制備物的各等份與以下物質(zhì)溫育90分鐘0.05nM的于含不同濃度(例如，10-11-10-6M)的試驗肽的50mM的N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)(pH7.4)的[125I-Tyr]MK-678(2000居埃/毫摩爾；CN-甲基-Ala-Tyr(I125)-D-Trp-Lys-Val-Phe])，10mg/ml牛血清白蛋白(級分V，SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)，MgCl2(5mM)，胰Kunitz胰蛋白酶抑制劑(Trasylol)(200KIU/ml)，桿菌肽(0.02mg/ml)和苯甲基磺酰氟(0.02mg/ml)。最終的實驗體積為0.3ml。以用多支管過濾裝置(Brandel，Gaithersburg，MD)通過GF/C濾膜(在0.3％聚乙烯亞胺預(yù)先浸泡30分鐘)快速過濾來終止溫育。然后用5ml份冰冷的緩沖液A洗滌各管和濾膜3次。特異結(jié)合等于結(jié)合的總[125I-Tyr]MK-678減去有200mM抑生長素-14存在下結(jié)合的總[125I-Tyr]MK-678。測試了以下試驗肽抑生長素-14，抑生長素28，類似物I，類似物II，類似物III，類似物IV和類似物V。類似物I-V的結(jié)構(gòu)如上所示。通過用下式計算試驗肽的Ki值Ki＝IC50/[1+(LC/LEC)]，其中IC50為抑制50％的放射配體[125I-Tyr]MK-678的特異結(jié)合所需的試驗肽的濃度，LC為放射配體的濃度(0.05nM)，并且LEC為放射配體的平衡解離常數(shù)(0.155nM)。計算的各試驗肽的Ki值如表I中標(biāo)題“SSTR-2”下的一欄中如示。(2)人SSTR-5結(jié)合實驗采用分子生物學(xué)領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用Yamada等人，“生物化學(xué)和生物物理研究通訊”(Biochem.Biophys.Res.Commun.)中所述的人SSTR-5cDNA轉(zhuǎn)染CHO-K1細(xì)胞。參見，例如，Patel等人，“生物化學(xué)和生物物理研究通訊”(Biochem.Biophys.Res.Comm.)198605(1994)。以用POLYTRONTM勻漿器(Setting6，15秒)于20ml冰冷的50mMTris-HCl中勻漿人SSTR-5轉(zhuǎn)染的CHO-K1細(xì)胞制備粗制的膜。加入緩沖液以達(dá)到終體積為40ml，在0-4℃下，在SORVALTMSS-34轉(zhuǎn)頭中于39,000g離心勻漿物。傾析并棄去得到的上清液。將沉淀在冰冷的緩沖液中再勻漿、稀釋并如前離心。最后的沉淀再懸于10mMTrisHCl中并在冰上存放以用于受體結(jié)合實驗。于30℃下把膜制備物的各等份與以下物質(zhì)溫育30分鐘0.05nM的于含不同濃度(例如，10-11-10-6M)的試驗肽的50mMHEPES(pH7.4)中的[125I-Tyr11]抑生長素-14(2000居埃/毫摩爾；AmershamCorp.，ArlingtonHeights，IL)，10mg/ml牛血清白蛋白(級分V)，MgCl2(5mM)，胰Kunitz胰蛋白酶抑制劑(200KIU/ml)，桿菌肽(0.02mg/ml)和苯甲基-磺酰氟(0.02mg/ml)。最后的實驗體積為0.3ml。以用Brandel多支管過濾裝置通過GF/C濾膜在0.3％聚乙烯亞胺預(yù)先浸泡30分鐘)快速過濾來終止溫育。用5ml的冰冷的緩沖液等份洗滌各管和濾膜3次。特異結(jié)合等于結(jié)合的總[125I-Tyr11]抑生長素-14減去有1000nM的抑生長素5-型受體BIM-23052(H2-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lrs-Thr-Phe-Thr-NH2)存在下結(jié)合的[125I-Tyr11]抑生長素-14。采用下式計算各試驗肽的Ki值IC50/[1+(LC/LEC)]，其中IC50是抑制50％的放射配體[125I-Tyr11]抑生長素-14的結(jié)合所需的試驗肽的濃度，LC是放射配體的濃度(0.05nM)，并且LEC為放射配體的平衡解離常數(shù)(0.16nM)。所計算的各試驗肽的Ki值示于表I中的標(biāo)題“SSTR-5”下的一欄中。表I還表示人SSTR-2和人SSTR-5的Ki的各個比值。本發(fā)明的肽(如類似物I-V)的比值意想不到地大于1，因而對SSTR-5的選擇性比對SSTR-2的選擇性大。表1</tables>其它實施方案要理解的是雖然已結(jié)合其詳細(xì)描述來描述本發(fā)明，前面的描述是意欲說明而不是限制由附上的權(quán)利要求書限定的本發(fā)明的范圍。其他方面、優(yōu)點和修改在權(quán)利要求書的范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.下式的肽或其藥學(xué)可接受的鹽其中，A1是Cys或Mpa的D-或L-異構(gòu)體；A2是Asn、Gln、一種脂肪族氨基酸、一種芳香族氨基酸，或缺失；A3是一種芳香族氨基酸；A4是His或一種芳香族氨基酸；A7是Thr、Ser或一種脂肪族氨基酸；A8是一種芳香簇氨基酸；A9是Cys的D-或L-異構(gòu)體；每一R1和R2獨立地為H、C1-12烷基、C7-20苯烷基、C11-20萘烷基、C1-12羥烷基、C7-20羥基苯基烷基、C11-20羥基萘烷基或COE1，其中E1是C1-12烷基、C7-20苯烷基、C11-20萘烷基、C1-12羥烷基、C7-20羥基苯基烷基或C11-20羥基萘烷基；以及R3是NH2或NH·Y·CH2·Z，其中Y是一個C1-12烴的部分，且Z是H、OH、CO2H或CONH2；以及一個二硫鍵連結(jié)著A1和A9殘基的側(cè)鏈。2.權(quán)利要求1的肽，其中每一A3和A8獨立地是Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、o-X-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、吡啶基-Ala、Trp、β-Nal、2，4-二氯-Phe、Tyr(I)或F5-Phe，且A4是His、Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、o-X-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、吡啶基-Ala、Trp、β-Nal、2，4-二氯-Phe、Tyr(I)或F5-Phe。3.權(quán)利要求2的肽，其中A2缺失，且A7是Thr、Ser、Ala、Aib、Val、Leu、Ile、Nva或Abu。4.權(quán)利要求3的肽，其中A9是Cys。5.權(quán)利要求4的肽，其中每一A3和A8獨立地是Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH或CH3)、Tyr(I)或Trp，且A4是His、Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH、或CH3)、Tyr(I)或Trp。6.權(quán)利要求5的肽，其中A7是Thr或Ser。7.權(quán)利要求6的肽，其中A3是Phe，A4是Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、His、Tyr(I)或Trp，并且A8是Phe或?qū)?x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)。8.權(quán)利要求6的肽，其中A3是Phe，A4是Phe、Tyr、Tyr(I)或Trp，且A8是Phe。9.權(quán)利要求8的肽，其中每一R1和R2獨立地是H，且R3是NH2。10.下式的權(quán)利要求9的肽H2-c[Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，或H2-c[Cys-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2。11.下式的權(quán)利要求7的肽H2-c[Cys-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-His-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-His-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-His-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-His-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，或H2-c[D-Cys-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2。12.權(quán)利要求2的肽，其中A2是Asn、Gln、Ala、Aib、Val、Leu、Ile、Nle、Nva、Abu、Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、鄰-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、吡啶基-Ala、Trp、β-Nal、2，4-二氯-Phe、Tyr(I)或F5-Phe，且A7是Thr、Ser、Ala、Aib、Val、Leu、Ile、Nle、Nva或Abu。13.權(quán)利要求12的肽，其中A9是Cys。14.權(quán)利要求13的肽，其中第一A3、A4和A8獨立地是Phe，、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH或CH3)、Tyr(I)或Trp，且A4是His、Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH或CH3)、Tyr(I)或Trp。15.權(quán)利要求14的肽，其中A2是Asn或Gln，且A7是Thr或Ser。16.權(quán)利要求15的肽，其中A3是Phe、A4是Phe、對-x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)、His、Tyr(I)或Trp，以及A8是Phe或?qū)?x-Phe(其中x是鹵素、OH、OCH3、CH3或NO2)。17.權(quán)利要求16的肽，其中A3是Phe、A4是Phe、Tyr、Tyr(I)或Trp，且A8是Phe。18.權(quán)利要求17的肽，其中A2是Asn，每一R1和R2獨立是為H，且R3是NH2。19.下式的權(quán)利要求18的肽H2-c[Cys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2。20.下式的權(quán)利要求16的肽H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-His-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-His-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-His-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-His-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[D-Cys-Asn-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2，H2-c[Cys-Asn-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2，orH2-c[D-Cys-Asn-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys]-NH2。21.下式的權(quán)利要求1的肽H2-C[Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys]-NH2。全文摘要抑生長素的環(huán)肽類似物,其中一個二硫鍵連結(jié)著N－末端殘基和C－末端殘基。文檔編號C07KGK1197460SQ96197177公開日1998年10月28日申請日期1996年9月4日優(yōu)先權(quán)日1995年9月29日發(fā)明者戴維·H·科伊,約翰·E·泰勒申請人:生物測量公司,圖蘭教育基金管理委員會