專(zhuān)利名稱(chēng)：促生長(zhǎng)素抑制素類(lèi)似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及促生長(zhǎng)素抑制素肽模擬物、其生產(chǎn)方法以及含有它們的藥物制劑。
更具體地講，本發(fā)明提供了下式的化合物 也稱(chēng)為環(huán)[{4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe]，在本文中稱(chēng)為化合物A，其非對(duì)映異構(gòu)體及其混合物，其游離的形式、鹽或絡(luò)合物的形式或保護(hù)的形式。Phg表示-HN-CH(C6H5)-CO-，Bzl表示芐基。
化合物A的保護(hù)形式與上面的分子相對(duì)應(yīng)，其中至少有一個(gè)氨基被保護(hù)起來(lái)，通過(guò)脫保護(hù)可以得到化合物A，優(yōu)選生理學(xué)可除去的形式。適宜的氨基保護(hù)基是例如在“Protective Groups in Organic Synthesis”，T.W.Greene，J.Wiley & Sons NY(1981)，219-287中所公開(kāi)的基團(tuán)，其內(nèi)容在此引入作為參考。該類(lèi)氨基保護(hù)基的實(shí)例是乙酰基。
當(dāng)化合物A以絡(luò)合物形式存在時(shí)，其一般是在Pro的側(cè)鏈氨基上帶有螯合基團(tuán)并且與可檢測(cè)的元素或放射性治療的元素絡(luò)合的化合物A。帶有螯合基團(tuán)的化合物A在這里被稱(chēng)為偶聯(lián)的化合物A。
螯合基團(tuán)的實(shí)例包括例如那些從多氨基多羧酸或酸酐衍生的基團(tuán)，例如那些從非環(huán)狀配體例如二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、乙二醇-O，O′-二(2-氨基乙基)-N，N，N′，N′-四乙酸(EGTA)、N，N′-二(羥基芐基)乙二胺-N，N′-二乙酸(HBED)和三亞乙基四胺六乙酸(TTHA)衍生的基團(tuán)、那些從取代的DTPA例如對(duì)-異硫氰酸根合-芐基-DTPA衍生的基團(tuán)、那些從大環(huán)配體例如1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-N，N′，N″，N-四乙酸(DOTA)和1，4，8，11-四氮雜環(huán)十四烷-N，N′，N″，N-四乙酸(TETA)或1，4，7，10-四氮雜環(huán)十三烷-N，N ′，N″，N-四乙酸(TITRA)衍生的基團(tuán)。
螯合基團(tuán)可以直接連接在Pro的側(cè)鏈氨基上，或者可以通過(guò)一個(gè)間隔基連接在其上。適宜的間隔基包括本領(lǐng)域已知的那些，例如在GB-A-2,225,579中所公開(kāi)的那些，例如氨基羧酸的二價(jià)殘基，例如β-Ala或從6-氨基-己酸衍生的二價(jià)殘基。
優(yōu)選的螯合基團(tuán)是從DTPA、DOTA或TETA衍生的基團(tuán)。首選從DTPA或DOTA衍生的螯合基團(tuán)。
可檢測(cè)的元素指的是在體內(nèi)診斷技術(shù)中能表現(xiàn)出可檢測(cè)的性質(zhì)的任何元素，優(yōu)選金屬離子，例如能發(fā)出可檢測(cè)的放射線的金屬離子或能影響NMR馳豫特性的金屬離子。放射性治療的元素指的是可以發(fā)出對(duì)所治療的病癥具有有益作用的放射線的任何元素。
適宜的元素的包括例如重元素或稀土離子，例如用于CAT掃描(計(jì)算機(jī)控制軸向X線斷層照相術(shù))中的離子、順磁離子，例如Gd3+、Fe3+、Mn2+和Cr2+、熒光金屬離子，例如Eu3+、以及放射性核素例如放射性鑭系元素，特別是發(fā)射γ-射線的放射性核素、發(fā)射β謝線的放射性核素、發(fā)射α-射線的放射性核素、發(fā)射Auger-e-的放射性核素或發(fā)射正電子的放射性核素，例如68Ga、18F或86Y。
適宜的發(fā)射γ-射線的放射性核素包括診斷技術(shù)中所用的那些。該發(fā)射γ-射線的放射性核素有利的具有1小時(shí)至40天、優(yōu)選5小時(shí)至4天、更優(yōu)選12小時(shí)至3天的半衰期。其實(shí)例有放射性同位素鎵、銦、锝、鐿、錸、鋱、镥、鉈和釤，例如67Ga、111In、99mTc、161Tb、169Yb、186Re或177Lu。
適宜的發(fā)射β-射線的放射性核素包括放射性治療中所用的那些，例如90Y、67Cu、186Re、188Re、169Er、121Sn、127Te、177Lu、143Pr、198Au、109Pd、165Dy、142Pr或153Sm。
適宜的發(fā)射α-射線的放射性核素是治療用的那些，例如211At、212Bi或201Tl。
化合物A可以以例如游離形式或鹽的形式存在。鹽包括酸加成鹽，例如與無(wú)機(jī)酸、高分子酸或有機(jī)酸形成的鹽，例如與鹽酸、乙酸、乳酸、天冬氨酸、苯甲酸、琥珀酸或雙羥萘酸成的鹽。酸加成鹽可以以單價(jià)或二價(jià)鹽的形式存在，這取決于向游離堿形式的化合物A中加入的是1當(dāng)量還是2當(dāng)量的酸。優(yōu)選的鹽是乳酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、琥珀酸鹽和雙羥萘酸鹽，包括其單鹽或二鹽，更優(yōu)選天冬氨酸二鹽和雙羥萘酸單鹽。
當(dāng)螯合基團(tuán)中存在羧酸基團(tuán)時(shí)，偶聯(lián)的化合物A還可以以例如堿金屬鹽如鈉或鉀鹽或取代或未取代的銨鹽的形式存在。
本發(fā)明還包括一種生產(chǎn)化合物A的方法。其可以用類(lèi)似于已知方法的方法來(lái)生產(chǎn)，例如a)將保護(hù)了的、與聚合物結(jié)合的或未保護(hù)形式的直鏈的肽以能夠得到化合物A的方式進(jìn)行環(huán)合，然后任選地除去保護(hù)基，b)為了生產(chǎn)偶聯(lián)的化合物A，將螯合基團(tuán)與保護(hù)了的或未保護(hù)形式的化合物A連接在一起，然后任選地除去保護(hù)基，然后回收所形成的游離形式、鹽形式或任選地與可檢測(cè)的元素或放射性治療的元素相絡(luò)合的化合物A或偶聯(lián)的化合物A。
一般而言，選擇哪種氨基酸在C末端位置上作為肽鏈的開(kāi)始并不是關(guān)鍵，因?yàn)橹辨湹碾膶⒈画h(huán)合，只要直鏈肽中的氨基酸序列與化合物A中的相對(duì)應(yīng)即可。但可能會(huì)有一些其它的因素導(dǎo)致一種起始氨基酸比另一種更優(yōu)選。當(dāng)化合物A是通過(guò)固相合成進(jìn)行制備時(shí)，優(yōu)選通過(guò)適宜的連接基將第一個(gè)氨基酸連接到樹(shù)脂、例如可購(gòu)買(mǎi)到的以聚苯乙烯為基礎(chǔ)的樹(shù)脂上，其中所說(shuō)的連接基是例如可在溫和條件下裂解以使側(cè)鏈保持完整的連接基，例如SASRIN或取代或未取代的基于三苯甲基的連接基，例如4-(羥基-二苯基-甲基)-苯甲酸，其中的一個(gè)苯基可任選地被取代，例如被Cl所取代。所需肽鏈的建立可以通過(guò)常規(guī)的方法來(lái)完成，例如，可以使用其中的末端氨基被Fmoc-保護(hù)了的氨基酸單元，所存在的側(cè)鏈氨基用不同的氨基保護(hù)基例如Boc或CBO進(jìn)行保護(hù)。優(yōu)選將直鏈的肽以能夠在Tyr(4-Bzl)-OH和Phe之間形成鍵的方式進(jìn)行環(huán)合，例如Phe-{4-(NHR1-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp(R2)-Lys(ε-NHR3)-Tyr(4-Bzl)-OH或其官能衍生物，其中R1、R2和R3分別是氨基保護(hù)基。環(huán)合步驟a)可方便的用已知方法來(lái)完成，例如經(jīng)由疊氮化合物、活潑酯、混合酸酐或碳二亞胺來(lái)完成。然后除去保護(hù)基，例如通過(guò)用三氟乙酸裂解或通過(guò)氫化作用除去。
肽的環(huán)化也可以直接在固體載體上進(jìn)行，第一個(gè)氨基酸是Nα-和C-末端保護(hù)的形式，并通過(guò)一個(gè)側(cè)鏈(例如Lys的ε-氨基官能團(tuán))或通過(guò)骨架固定連接到其上。然后，可以按照標(biāo)準(zhǔn)的固相合成(SPPS)過(guò)程來(lái)合成直鏈的序列。在將C-末端保護(hù)基裂解后，將肽按照例如以上的描述環(huán)合。然后，將環(huán)狀的肽從樹(shù)脂上裂解下來(lái)并脫保護(hù)。
如果需要的話，存在于Pro上的側(cè)鏈可在肽環(huán)合步驟a)之前或之后引入到該氨基酸上。因此，作為起始氨基酸或起始的直鏈肽或環(huán)肽的Pro(其中，在各種情況中的Pro均在環(huán)上被OH取代)可以分別轉(zhuǎn)化成其中Pro被NHR1-C2H4-NH-CO-O-取代的化合物A或所需的Pro單元或相應(yīng)的直鏈肽。
偶聯(lián)的化合物A的絡(luò)合作用可以通過(guò)將偶聯(lián)的化合物A與相應(yīng)的可以產(chǎn)生可檢測(cè)的元素或放射性治療的元素的化合物、例如金屬鹽、優(yōu)選水溶性的鹽反應(yīng)來(lái)進(jìn)行。該反應(yīng)可以按照與已知方法類(lèi)似的方法來(lái)完成，例如在Perrin，Organic Ligand，Chemical Data Series 22.NY Pergamon Press(1982)中所公開(kāi)的方法；在Krejcarit和Tucker，Biophys.Biochem.Res.Com.77581(1977)以及Wagner和Welch，J.Nucl.Med.20428(1979)中所公開(kāi)的方法。
用下面的實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明。所有的溫度都是℃。
縮寫(xiě)AcOH＝乙酸Boc ＝叔丁氧基羰基Bzl ＝芐基CBO ＝芐氧羰基DIPCI ＝N，N’-二異丙基碳二亞胺DIPEA ＝二異丙基乙基胺DMF ＝二甲基甲酰胺DPPA＝二苯基磷?；B氮化物Fmoc＝芴基甲氧羰基HOBT＝1-羥基苯并三唑Osu ＝N-羥基琥珀酰亞胺TFA ＝三氟乙酸THF ＝四氫呋喃為了進(jìn)行脫保護(hù)，將殘余物在0℃下溶解于95∶5的TFA/H2O(約50mM)中，并在冷卻下攪拌30分鐘。然后將該產(chǎn)物用含有約10當(dāng)量HCl的乙醚進(jìn)行沉淀，過(guò)濾，用乙醚洗滌并干燥。為了使剩余的吲哚-N-氨基carbaminicacid完全分解，將該產(chǎn)物溶于5％的AcOH中并在15小時(shí)后在約5℃下冷凍干燥。在C-18 10μm STAGROMA柱(5-25cm)上進(jìn)行制備型RP-HPLC，用0.5％TFA至0.5％TFA的70％乙腈溶液進(jìn)行梯度洗脫。合并含有純的標(biāo)題化合物的級(jí)分，用水稀釋然后將其冷凍干燥。將該冷凍干燥物溶于水中，然后用10％的Na2CO3水溶液進(jìn)行沉淀。濾出固體游離堿，用水洗滌并在真空中在室溫下進(jìn)行干燥。將所得的白色粉末直接用于形成不同的鹽。
二-天冬氨酸鹽還可以通過(guò)將實(shí)施例1的化合物溶解于4∶1的水/乙腈中，過(guò)濾，將其上樣到離子交換樹(shù)脂例如BioRad AG4X4柱上然后用4∶1的水/乙腈洗脫來(lái)進(jìn)行。將洗脫液濃縮，冷凍并將其凍干。[α]D20＝-47.5°，在甲醇中，c＝2.5mg/ml。c.苯甲酸鹽轉(zhuǎn)化成苯甲酸鹽可以通過(guò)將實(shí)施例1的化合物和2當(dāng)量的苯甲酸一起溶解于1∶2的乙腈/水混合物中來(lái)完成。將所得混合物冷凍并將其凍干。d.雙羥萘酸鹽將1當(dāng)量實(shí)施例1的化合物和1當(dāng)量雙羥萘酸一起溶解于2∶2∶1的乙腈/THF/水的混合物中。將所得的混合物冷凍并將其凍干。實(shí)施例3環(huán)[{4-(DOTA-NH-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phea)環(huán)[-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH2)-Phg-DTrp-Lys(Cbo)-Tyr(Bzl)-Phe-]，三氟乙酸鹽該化合物按照與合成[-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH2)-Phg-DTrp-Lys(Cbo)-Tyr(Bzl)-Phe-]，三氟乙酸鹽的方法相同的方法合成，只是用Fmoc-Lys(Cbo)-OH替代其中的Fmoc-Lys(Boc)-OH。b)將400mg可購(gòu)買(mǎi)到的DOTA x 2H2O(SYMAFEX-法國(guó))溶于20ml水中。在向其中加入20ml DMF后，將170mg環(huán)[-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH2)-Phg-DTrp-Lys(CBO)-Tyr(BzD-Phe-]和190mg DCCI以及60mg N-羥基琥珀酰亞胺一起加入其中。將所得的混懸液在室溫下保持72小時(shí)。過(guò)濾后，減壓蒸除溶劑并將剩余的粗品在硅膠上進(jìn)行純化(用DCM/MeOH/HOAc50％8/2/0.25→7/3/1作為流動(dòng)相)。c)為了進(jìn)行脫保護(hù)，將上述DOTA-偶聯(lián)物用5ml三氟乙酸/茴香硫醚(9/1)在室溫下處理2小時(shí)。將該溶液倒入到100ml乙醚+5ml 3N HCl/乙醚的混合物中，然后將形成的沉淀通過(guò)過(guò)濾分離出來(lái)。用DCM/MeOH/HOAc50％7/4/2→7/5/4作為流動(dòng)相在硅膠上進(jìn)行純化。用0.1％TFA至0.1％TFA的90％CH3CN溶液的梯度在RP18-HPLC柱(Spherisorb 250×4.6mm)上完成脫鹽步驟后，得到分析純的終產(chǎn)物。MH+1434.7。
游離形式的化合物A或可藥用鹽和絡(luò)合物形式的化合物A在體外和體內(nèi)試驗(yàn)中表現(xiàn)出有價(jià)值的藥理學(xué)性質(zhì)，因此表明可用于治療。
更具體地講，化合物A對(duì)于人促生長(zhǎng)素抑制素受體(hsst)、特別是hsst1、hsst2、hsst3和hsst5表現(xiàn)出值得注意的結(jié)合特性。已經(jīng)對(duì)5種促生長(zhǎng)素抑制素受體亞型(sst1、sst2、sst3、sst4和sst5)進(jìn)行了克隆和鑒定。Y.Yamada等人在Proc.Nat.Acad.Sci.，89，251-255(1992)中公開(kāi)了hsst1、hsst2和hsst3以及它們的序列。L.Rohrer等人在Proc.Acad.Sci.，90，4196-4200(1993)中公開(kāi)了hsst4及其序列。R.Panetta等人在Mol.Pharmacol.45，417-427，1993中公開(kāi)了hsst5及其序列。
結(jié)合試驗(yàn)可以用如下所公開(kāi)的方法，用得自選擇性和穩(wěn)定表達(dá)hsst1、hsst2、hsst3、hsst4或hsst5的細(xì)胞系例如CHO或COS細(xì)胞的膜來(lái)進(jìn)行。
膜是根據(jù)已知的方法制備的，例如C.Bruns等人在Biochem.J.，1990，65，第39-44頁(yè)中所公開(kāi)的方法。將用穩(wěn)定表達(dá)hsst1或hsst2或hsst3或hsst4或hsst5的hsst選擇性細(xì)胞系、例如CHO或COS細(xì)胞所制備的膜在22℃下，用濃度遞增的[125I-Tyr11]-SRIF-14在含有0.5％BSA的10mmol/lHepes緩沖液(pH7.6)中以300μl的總體積一式三份的進(jìn)行培養(yǎng)。通過(guò)快速過(guò)濾來(lái)終止培養(yǎng)，將過(guò)濾器在計(jì)數(shù)器中進(jìn)行計(jì)數(shù)。特異性結(jié)合等于總結(jié)合減去在存在1μmol/l促生長(zhǎng)素抑制素-14的情況下的非特異性結(jié)合。該實(shí)驗(yàn)是一式三份的進(jìn)行的。親和性常數(shù)(KD)和結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目是用適宜的統(tǒng)計(jì)學(xué)和作圖程序來(lái)計(jì)算的。
化合物A在上述結(jié)合試驗(yàn)中對(duì)hsst1、hsst2、hsst3和/或hsst5的IC50值在納摩爾的范圍內(nèi)，優(yōu)選0.1至10nM的IC50值(IC50＝在用[125I-Tyr11]-SRIF-14作為hsst1-5特異性放射性配體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)中產(chǎn)生半數(shù)最大抑制作用時(shí)的濃度)。
IC50
化合物A還能與促生長(zhǎng)激素分泌激素受體相結(jié)合。G.Muccioli等人，J.Endocrinol.1998，157，99-106，H.Ong等人，Endocrinology 1998，139，432-435和R.G.Smith等人，Horm.Res.，1999，3，1-8公開(kāi)了這些受體。對(duì)于這些受體的結(jié)合試驗(yàn)可以按照在J.Endocrinol.Invest.24RC1-RC3，2001中所公開(kāi)的方法來(lái)進(jìn)行。在該試驗(yàn)中，化合物A可以置換125I-Tyr-Ala-海沙瑞林(hexarelin)。因此，化合物A可用于調(diào)節(jié)促生長(zhǎng)激素分泌激素受體的活性，例如表現(xiàn)出可能在體重增加或代謝調(diào)節(jié)方面有作用。
此外，化合物A還表現(xiàn)出GH-釋放抑制活性，這可以通過(guò)在體外試驗(yàn)中所表現(xiàn)出的抑制GH從所培養(yǎng)的腦垂體細(xì)胞中的釋放來(lái)證實(shí)。例如，將成年雄性大鼠的前部腦垂體腺切成小片并用20mM HEPES緩沖液中的0.1％胰蛋白酶將其分散。將分散了的細(xì)胞在補(bǔ)充了5％胎牛血清、5％馬血清、1mM NaHCO3、2.5nM地塞米松、2.5mg/ml胰島素和20U/ml青霉素/鏈霉素的MEM(Gibco)中培養(yǎng)四天。在進(jìn)行試驗(yàn)的當(dāng)天將所粘附的細(xì)胞用經(jīng)20mM HEPES緩沖并用補(bǔ)充了5mM葡萄糖和0.2％BSA的Krebs-Ringer培養(yǎng)液洗滌兩次。隨后，將該細(xì)胞在存在3×10-10M生長(zhǎng)激素釋放因子的條件下與化合物A一起培養(yǎng)3小時(shí)。通過(guò)RIA來(lái)測(cè)定釋放到培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)激素的量。在該試驗(yàn)中，化合物A具有0.4nM的IC50值。
化合物能抑制大鼠體內(nèi)生長(zhǎng)激素(GH)的釋放。將化合物A皮下給藥于麻醉的大鼠。在將該化合物給藥后1小時(shí)斷頭并收集血樣。根據(jù)給藥后6小時(shí)對(duì)基礎(chǔ)GH分泌的抑制作用來(lái)估測(cè)作用的持續(xù)時(shí)間。在給藥后1小時(shí)和6小時(shí)用RIA來(lái)測(cè)定激素水平。通過(guò)作圖(log-probit)來(lái)測(cè)定各實(shí)驗(yàn)對(duì)激素分泌的抑制作用的ID50值用并將所得的值進(jìn)行對(duì)數(shù)平均。在該體內(nèi)模型中，化合物A能顯著抑制生長(zhǎng)激素的釋放并具有長(zhǎng)期的持續(xù)作用(平均基準(zhǔn)ID50＝5.5μg/kg皮下給藥6h)。在測(cè)定對(duì)胰島素的作用的類(lèi)似試驗(yàn)中，化合物A能抑制胰島素分泌。
對(duì)GH具有強(qiáng)而有效的抑制作用還可以在猴子的研究中得到證實(shí)。此外，用糖尿病猴進(jìn)行的代謝研究證明了化合物A具有有效的抗糖尿病/胰島素-敏化作用。
此外，正如在用雄性大鼠所進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中所表現(xiàn)出的那樣，化合物A抑制了體內(nèi)的IGF-1血漿水平。簡(jiǎn)要的說(shuō)，將化合物A通過(guò)皮下植入的滲透泵對(duì)Lewis品種的雄性大鼠進(jìn)行給藥。用例如異氟烷進(jìn)行短期麻醉，通過(guò)從眼球后血管取血來(lái)收集血樣。在該試驗(yàn)中，化合物A能顯著降低IGF-1的血漿水平并具有長(zhǎng)期持續(xù)的作用例如，在用10μg/kg/h的化合物A治療14天后可觀察到高于60％的抑制作用。更具體地講，接受了主動(dòng)脈或腎同種移植的大鼠在進(jìn)行了用化合物A以10μg/kg/h的劑量連續(xù)輸注長(zhǎng)達(dá)126天的連續(xù)治療后未觀察到任何脫逸現(xiàn)象，這種治療能顯著并且持續(xù)地降低IGF-1的血漿水平。
因此，化合物A能用于預(yù)防或治療其病因包括或與GH過(guò)度分泌和/或IGF-1過(guò)高有關(guān)的疾病，例如可用于治療肢端肥大癥以及I型或II型糖尿病，尤其是其并發(fā)癥，例如血管病、糖尿病增生性視網(wǎng)膜病、糖尿病斑性水腫、腎病、神經(jīng)病和黎明現(xiàn)象、以及其它與胰島素或高血糖素釋放有關(guān)的代謝障礙，例如肥胖，例如病態(tài)肥胖或下丘腦或胰島素過(guò)多性肥胖?；衔顰還可用于治療腸皮膚瘺和胰管皮膚瘺、過(guò)敏性腸綜合征、炎性疾病，例如Grave病、炎性腸病、牛皮癬或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多囊腎病、傾倒綜合征、水瀉綜合征、與AIDS有關(guān)的腹瀉、化療引起的腹瀉、急性或慢性胰腺炎和分泌胃腸激素的腫瘤(例如GEP腫瘤，例如胰腺瘤、高血糖素瘤、胰島瘤、良性腫瘤等)、淋巴細(xì)胞惡性腫瘤，例如淋巴瘤或白血病、肝細(xì)胞癌和胃腸道出血，例如靜脈曲張性食管出血。
化合物A還可用于治療促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的腫瘤，例如帶有hsst1、hsst2、hsst3和/或hsst5的腫瘤，這可以在用帶有該類(lèi)促生長(zhǎng)素抑制素受體的各種癌細(xì)胞系進(jìn)行的增殖試驗(yàn)中證實(shí)。
AR42J大鼠的胰腺腫瘤細(xì)胞系是得自重氮絲氨酸誘導(dǎo)的外分泌胰腺腫瘤(Jessop和Hay，1980)。使不含支原體屬細(xì)胞的培養(yǎng)物在補(bǔ)充了10％胎牛血清(FCS)的DMEM中，在5％CO2的條件下進(jìn)行繁殖。細(xì)胞在不含抗生素或殺真菌劑的條件下進(jìn)行生長(zhǎng)。將亞融合的AR42J細(xì)胞用胰蛋白酶進(jìn)行處理，用DMEM+2.5％FCS進(jìn)行稀釋并將其接種于未覆蓋的96-孔平板中。在48小時(shí)的培養(yǎng)期后(0天)，通過(guò)用庫(kù)而特計(jì)數(shù)器進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和通過(guò)SRB比色測(cè)定來(lái)測(cè)定各對(duì)照平板中的細(xì)胞數(shù)目。然后使該細(xì)胞與各種濃度的化合物A接觸2至5天，然后進(jìn)行計(jì)數(shù)。在這些條件下，在10-12至10-6M的濃度范圍內(nèi)化合物A可以抑制腫瘤細(xì)胞的繁殖。體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)研究將重19-22g的雌性裸鼠按每組5只動(dòng)物進(jìn)行分組并使之自由進(jìn)水和進(jìn)食不含病原體的嚙齒動(dòng)物食物。皮下腫瘤是用所培養(yǎng)的AR42J細(xì)胞來(lái)進(jìn)行誘導(dǎo)的。在進(jìn)行腫瘤細(xì)胞接種2-4天后開(kāi)始進(jìn)行治療，將化合物A以連續(xù)輸注的形式進(jìn)行給藥，例如以10至50μg/kg/hr的速度進(jìn)行給藥。用卡鉗來(lái)測(cè)定腫瘤的大小。統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算采用學(xué)生氏t檢驗(yàn)。在該試驗(yàn)中，與生理鹽水對(duì)照組相比，化合物A在第11天時(shí)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用為51％。
因此，化合物A可用于治療惡性細(xì)胞增殖性疾病，例如癌，特別是帶有促生長(zhǎng)素抑制素受體型的腫瘤，化合物A對(duì)該類(lèi)受體具有結(jié)合親和力，例如在下文中關(guān)于絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A所描述的。
正如在標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)，例如在裸鼠試驗(yàn)中所表現(xiàn)出來(lái)的那樣，化合物A還具有抑制血管生成的作用。簡(jiǎn)要地說(shuō)，將腫瘤細(xì)胞(1ml中0.1至10×106個(gè))(SiHa細(xì)胞和MDA MB-231細(xì)胞，其是按照Angiogenesis(R.Steiner，P.B.Weisz和R.Langer編，1992，瑞士)中所公開(kāi)的方法制備的)皮內(nèi)接種。通常在每只小鼠兩處中腹部的位置上進(jìn)行注射，該位置遠(yuǎn)離主要的腹部皮膚血管以使背景血管計(jì)數(shù)較低。將對(duì)照組給予0.1ml在PBS中的0.02％的臺(tái)盼藍(lán)。在注射后10天，通過(guò)吸入CO2來(lái)處死進(jìn)行了麻醉的小鼠。將皮膚固定在一個(gè)塑料環(huán)上(直徑40mm)，用倒置顯微鏡(Zeiss IM)以12.5和25倍的放大率進(jìn)行評(píng)估。為了對(duì)血管生成進(jìn)行測(cè)定，對(duì)血管進(jìn)行照相，對(duì)直接與腫瘤相連的那些血管進(jìn)行計(jì)數(shù)。在對(duì)照動(dòng)物中，對(duì)那些在注射部位周?chē)c所定義的區(qū)域相連的血管進(jìn)行計(jì)數(shù)。該區(qū)域相當(dāng)于皮膚腫瘤的平均面積。后者是通過(guò)使用卡鉗，根據(jù)公式3.14×r2來(lái)進(jìn)行測(cè)定的。在腫瘤接種的當(dāng)天或在3天后將化合物A皮下給藥。將對(duì)照動(dòng)物用賦形劑進(jìn)行處理。在這一試驗(yàn)中，當(dāng)以例如0.01至1000μg/kg的劑量皮下給藥時(shí)，化合物A抑制了血管生成。
因此，化合物A可用于預(yù)防或治療血管生成、如上面所述的炎性病癥，包括炎性眼病、斑性水腫，例如囊樣斑性水腫、自發(fā)性囊樣斑性水腫、與年齡有關(guān)的滲出性黃斑變性、與脈絡(luò)膜新血管生成有關(guān)的病癥以及增生性視網(wǎng)膜病。
正如下面的試驗(yàn)所表現(xiàn)出的那樣，化合物A還具有抑制平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的作用。慢性同種移植物排斥反應(yīng)將雄性DA(RT1a)大鼠的腎正位移植到雄性Lewis(RT11)接受者體內(nèi)。總共有24只動(dòng)物接受了移植。從移植當(dāng)天開(kāi)始，將所有的動(dòng)物以7.5mg/kg/天的劑量口服環(huán)孢菌素A來(lái)處理14天，以防止急性的細(xì)胞排斥反應(yīng)。不進(jìn)行對(duì)側(cè)的腎切除術(shù)。用不同劑量的化合物A或安慰劑對(duì)各實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行處理，每組包含六只動(dòng)物。從移植后的第14天開(kāi)始，通過(guò)輸注化合物A或接受安慰劑對(duì)接受移植的動(dòng)物進(jìn)行治療達(dá)112天。在移植后的第14天，用MRI對(duì)器官灌注進(jìn)行測(cè)定。在移植后第53-64天和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)重復(fù)進(jìn)行這一操作。然后對(duì)這些動(dòng)物進(jìn)行尸體解剖。在該大鼠腎同種移植模型中，以10μg/kg/h的劑量給予化合物A可改善器官灌注并能減少與慢性排斥反應(yīng)有關(guān)的血管重構(gòu)和移植物浸潤(rùn)(細(xì)胞排斥反應(yīng))。還觀察到了顯著和持續(xù)下降的IGF-1水平。這些結(jié)果已經(jīng)在用異種的小鼠心異體移植模型所進(jìn)行的第二組實(shí)驗(yàn)中得到了證實(shí)，證明了其對(duì)血管重構(gòu)以及在移植物浸潤(rùn)中的有益作用。
還在用B10.A(2R)(H-2h2)小鼠作為供體和用B10.BR(H-2k)小鼠作為接受者的頸動(dòng)脈環(huán)路移植模型中對(duì)化合物A進(jìn)行了試驗(yàn)。簡(jiǎn)要地說(shuō)，通過(guò)末端-旁側(cè)吻合術(shù)將供體的頸動(dòng)脈作為一個(gè)環(huán)路對(duì)位移植到接受者的頸動(dòng)脈中。在移植后立即皮下放置一臺(tái)微型泵，用該泵以50μg/kg/h的速率輸送化合物A。在移植后30天采集頸動(dòng)脈移植物以分析血管的重構(gòu)，例如通過(guò)Verhoeff彈性蛋白染色的石蠟切片的形態(tài)學(xué)分析，用計(jì)算機(jī)輔助系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行分析。在該模型中，與形成了大量新內(nèi)膜的未進(jìn)行處理的動(dòng)物相比，化合物A抑制了新內(nèi)膜的形成。血管成形術(shù)對(duì)血管成型術(shù)的研究是通過(guò)用氣囊導(dǎo)管損傷的大鼠模型來(lái)進(jìn)行的。氣囊導(dǎo)管插入術(shù)是在第0天進(jìn)行的，基本上用Powell等人(1989)所描述的方法來(lái)進(jìn)行。在用異氟醚進(jìn)行麻醉的情況下，將Fogarty 2F導(dǎo)管引入到左側(cè)的普通頸動(dòng)脈中以獲得均勻的去內(nèi)皮化。然后將該導(dǎo)管取出，在動(dòng)脈外部周?chē)M(jìn)行結(jié)扎以防止出血，使動(dòng)物恢復(fù)。用兩組12只的RoRo大鼠(400g，約24周大)進(jìn)行研究一組為對(duì)照組，一組為接受化合物A的組，將大鼠隨機(jī)進(jìn)行分組。從進(jìn)行氣囊損傷前2天(-3天)開(kāi)始直至研究結(jié)束時(shí)(氣囊損傷后14天)，用微型泵以10μg/kg/h的速率將化合物A通過(guò)連續(xù)輸注進(jìn)行給藥。然后將大鼠用異氟醚進(jìn)行麻醉，并用0.1M磷酸鹽緩沖的生理鹽水溶液(PBS，pH7.4)進(jìn)行灌注，然后再用2.5％的在磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中的戊二醛灌注15分鐘。然后將頸動(dòng)脈進(jìn)行切除，將其與周?chē)慕M織進(jìn)行分離，然后將其浸入到含有7％蔗糖的0.1M二甲胂酸鹽緩沖液(pH7.4)中，在4℃下培養(yǎng)過(guò)夜。第二天，根據(jù)制造商的建議，將該動(dòng)脈植入到Technovit 7100中。通過(guò)圖像分析系統(tǒng)(MCID，Toronto，Canada)對(duì)血管中層、新內(nèi)膜和腔的橫截面積進(jìn)行形態(tài)學(xué)評(píng)估。在該試驗(yàn)中，化合物A顯著抑制了新內(nèi)膜增厚。
因此，化合物A還能用于防止或?qū)挂浦惭艿募膊?，例如同種異體-或異種異體移植的血管病變，例如移植血管的動(dòng)脈粥樣硬化，例如在移植器官例如心、肺、合并的心-肺、肝、腎或胰腺移植物中所出現(xiàn)的動(dòng)脈粥樣硬化，或用于預(yù)防或治療靜脈移植物狹窄、血管損傷后的再狹窄和/或血管閉塞，例如由于插入導(dǎo)管的操作或由于血管刮擦操作如經(jīng)皮經(jīng)腔血管成形術(shù)、激光治療或其它的破壞血管內(nèi)膜或內(nèi)皮完整性的侵入性操作而造成的血管損傷。
化合物A具有有利的血漿半衰期。其具有15至30小時(shí)的清除半衰期。
對(duì)于所有上述適應(yīng)癥，所需劑量當(dāng)然應(yīng)隨著例如主體、給藥方式和所治療病癥的嚴(yán)重程度而變化。但是，一般而言，以1μg至0.7mg/kg/天的劑量將化合物A進(jìn)行給藥就能獲得令人滿意的結(jié)果。用于患者的指示性的日劑量為約2μg至約50mg、優(yōu)選約0.01至約40mg、例如約0.01至約3mg的化合物皮下給藥，該劑量可以方便的以單元?jiǎng)┝康男问揭远嘀烈惶?次的分割劑量進(jìn)行給藥，其中所說(shuō)的單元?jiǎng)┝堪缂s0.5μg至約25mg、例如約2μg至20mg、例如約2μg至1.5mg的化合物A。
化合物A可以以游離形式或以可藥用鹽或絡(luò)合物的形式進(jìn)行給藥。所述鹽和絡(luò)合物可以用一般方法進(jìn)行制備并表現(xiàn)出與游離化合物相同等級(jí)的活性。本發(fā)明還提供了一種包含游離堿形式或可藥用鹽形式或絡(luò)合物形式的化合物A和一種或多種可藥用稀釋劑或載體的藥物組合物。該組合物可以用常規(guī)的方法進(jìn)行制備?；衔顰還可以以緩釋的形式進(jìn)行給藥，例如以包含例如可生物降解的聚合物或共聚物的植入物、微囊、微球或納米球的形式給藥、以脂質(zhì)體制劑的形式給藥、或以自凝膠化的形式(例如在與患者的體液相互作用后能形成凝膠的固體或半固體組合物)進(jìn)行給藥。
化合物A或其可藥用鹽或絡(luò)合物可以以任何常規(guī)的途徑進(jìn)行給藥，例如以可注射的溶液或混懸液的形式(包括例如如上所述的緩釋形式)胃腸外給藥、用常規(guī)的吸收促進(jìn)劑口服給藥、經(jīng)鼻給藥或以栓劑的形式給藥、或以例如眼用液體、凝膠、軟膏或混懸制劑例如脂質(zhì)體、微球或納米球制劑的形式局部給藥，例如用于滴注或結(jié)膜下或眼內(nèi)或眼周注射。
根據(jù)前面所述的內(nèi)容，本發(fā)明還提供了1.用作藥物的化合物A或其可藥用的鹽或絡(luò)合物；2.在需要治療的個(gè)體中預(yù)防或治療如上所述的疾病或病癥的方法，該方法包括向所述患者施用有效量的化合物A或其可藥用的鹽或絡(luò)合物；或3.化合物A或其可藥用的鹽或絡(luò)合物用于制備用于如上面2中所定義的方法的藥物組合物。
因此，正如通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)所證實(shí)的那樣，當(dāng)與可檢測(cè)的元素，例如發(fā)射γ-或正電子的核素、熒光金屬離子或順磁離子例如111In、161Tb、177Lu、86Y、68Ga、Eu3+、Gd3+、Fe3+、Mn2+或Cr2+絡(luò)合時(shí)，偶聯(lián)的化合物A或其可藥用的鹽可用作顯影劑，例如用于促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的組織和細(xì)胞如促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤、顯示促生長(zhǎng)素抑制素受體的炎癥或自身免疫病癥、結(jié)核或移植后的器官排斥反應(yīng)的顯影，當(dāng)與發(fā)射α-或β-射線的核素或發(fā)射Auger-e-的核素，例如90Y、161Tb、177Lu、211At、213Bi或201Tl絡(luò)合時(shí)，其可用作用于在體內(nèi)治療促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和嚴(yán)重的炎癥狀況的放射性藥物。
具體地講，觀察到偶聯(lián)的化合物A可以與促生長(zhǎng)素抑制素受體以約8至10的pKi值進(jìn)行結(jié)合。與例如111In、88Y、90Y或177Lu絡(luò)合的實(shí)施例3的化合物在nM范圍內(nèi)與各sst亞型按照化合物A的結(jié)合曲線進(jìn)行結(jié)合。
偶聯(lián)的化合物A及其絡(luò)合物與促生長(zhǎng)素抑制素受體的親和力還可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法，通過(guò)體內(nèi)試驗(yàn)來(lái)證實(shí)，例如用GB-A-2,225,579中所公開(kāi)的方法。例如在對(duì)帶有表達(dá)hsst2受體的外分泌胰腺腫瘤的小鼠或大鼠注射后4小時(shí)，與例如111In、88Y、90Y或177Lu絡(luò)合的實(shí)施例3的化合物表現(xiàn)出明顯的腫瘤聚集。
在以1至5μg/kg的劑量給予用0.1至5mCi、優(yōu)選0.1至2mCi的放射性核素進(jìn)行標(biāo)記的絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A后，例如給予與111In、177Lu、86Y或161Tb絡(luò)合的化合物A后，腫瘤部位變得可檢測(cè)。
當(dāng)用發(fā)射α-或β-射線的放射性核素或發(fā)射Auger-e-的核素進(jìn)行放射性標(biāo)記時(shí)，偶聯(lián)的化合物A對(duì)促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出抗增殖和/或細(xì)胞毒性作用，例如在裸鼠試驗(yàn)中所表現(xiàn)出來(lái)的那樣。
將裸鼠如上所述用AR42J大鼠胰腺腫瘤細(xì)胞或NCI-H69人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞進(jìn)行接種。當(dāng)腫瘤達(dá)到1至2cm3的體積時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)分成對(duì)照組和治療組。通過(guò)腹膜內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射將絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A進(jìn)行給藥。每只小鼠的給藥劑量最高為40mCi/kg。如上所述用卡鉗對(duì)腫瘤的大小進(jìn)行測(cè)量。統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算采用學(xué)生氏t檢驗(yàn)。在該試驗(yàn)中，在單次給藥與90Y絡(luò)合的實(shí)施例3的化合物后，在一星期后可觀察到短暫的腫瘤縮小，其可達(dá)到最初體積的50％，并且腫瘤的生長(zhǎng)被延遲了兩個(gè)星期。與之相反，對(duì)照組表現(xiàn)出連續(xù)的腫瘤生長(zhǎng)，其體積加倍的時(shí)間約為七天。
因此，在一系列特定的或供選擇的實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了4.與可檢測(cè)的元素相絡(luò)合的偶聯(lián)的化合物A用于在個(gè)體體內(nèi)檢測(cè)促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的細(xì)胞和組織、例如促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤并記錄所述絡(luò)合物靶向的受體的位置的應(yīng)用；5.用于在個(gè)體中體內(nèi)檢測(cè)促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的組織和細(xì)胞、例如促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤的方法，該方法包括給所述個(gè)體施用與可檢測(cè)的元素絡(luò)合的偶聯(lián)的化合物A或其可藥用的鹽，并記錄所述絡(luò)合物靶向的受體的位置。
用作顯影劑的絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A可以被例如靜脈內(nèi)給藥，例如以可注射溶液或混懸液的形式給藥，優(yōu)選以單次注射的形式給藥。優(yōu)選在臨向個(gè)體給藥前進(jìn)行放射性標(biāo)記。
對(duì)于動(dòng)物而言，指示的劑量范圍可以為0.01至1μg/kg與0.02至0.5mCi發(fā)射γ-射線的放射性核素絡(luò)合的偶聯(lián)的化合物A。對(duì)于較大的動(dòng)物例如人而言，劑量范圍可以為1至100μg/m2與例如1至100mCi/m2可檢測(cè)元素例如111In、86Y或177Lu絡(luò)合的偶聯(lián)的化合物A。
6.與發(fā)射α-或β-射線的核素或發(fā)射Auger-e-的核素絡(luò)合的偶聯(lián)的化合物A用于在體內(nèi)治療促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤的應(yīng)用。
7.用于在需要治療的個(gè)體中體內(nèi)治療促生長(zhǎng)素抑制素受體呈陽(yáng)性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤、例如治療所述腫瘤的侵入或與該類(lèi)腫瘤的生長(zhǎng)有關(guān)的癥狀的方法，該方法包括向所述個(gè)體施用治療有效量的與發(fā)射α-或β-射線的核素或發(fā)射Auger-e-的核素絡(luò)合的偶聯(lián)的化合物A。
8.偶聯(lián)的化合物A或其可藥用的鹽在制造顯影劑或放射性藥物組合物中的應(yīng)用。
在進(jìn)行本發(fā)明的放射性治療應(yīng)用時(shí)所用的劑量當(dāng)然可以隨著例如所治療的具體病癥例如已知的對(duì)表達(dá)促生長(zhǎng)素抑制素受體的正常器官的放射毒性、腫瘤的體積和所需治療而變化。一般而言，該劑量是根據(jù)用健康器官所獲得的藥物動(dòng)力學(xué)和放射活性分布數(shù)據(jù)而計(jì)算出來(lái)的，并以所觀察到的靶吸收為基礎(chǔ)。發(fā)生β-射線的偶聯(lián)的化合物A的絡(luò)合物可以被重復(fù)進(jìn)行給藥，例如在1至3個(gè)月的時(shí)期內(nèi)重復(fù)給藥。
對(duì)于動(dòng)物而言，劑量范圍可以為20至100μg/kg與15至70mCi發(fā)射α-或β-射線的核素或發(fā)射Auger-e-的核素例如90Y、177Lu或161Tb相絡(luò)合的偶聯(lián)的化合物A。對(duì)于較大的動(dòng)物例如人而言，劑量范圍可以為1至100μg/m2與例如100mCi/m2發(fā)射α-或β-射線的核素或發(fā)射Auger-e-的核素例如90Y、177Lu或161Tb相絡(luò)合的偶聯(lián)的化合物A。
用作放射性治療物質(zhì)的絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A可以通過(guò)任何常規(guī)的給藥途徑來(lái)進(jìn)行給藥，例如靜脈內(nèi)給藥，例如以可注射的溶液的形式進(jìn)行靜脈內(nèi)給藥。還可以有利的通過(guò)輸注的形式來(lái)進(jìn)行給藥，例如在15至60分鐘內(nèi)進(jìn)行輸注。取決于腫瘤所處的部位，還可以盡可能的靠近該腫瘤部位來(lái)進(jìn)行給藥，例如通過(guò)導(dǎo)管來(lái)進(jìn)行給藥。本發(fā)明還提供了一種包含游離堿形式或可藥用鹽的形式或與可檢測(cè)的或放射性治療劑相絡(luò)合的偶聯(lián)的化合物A以及一種或多種可藥用的稀釋劑或載體的藥物組合物。
化合物A或絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A可用于成像或治療表達(dá)或聚集促生長(zhǎng)素抑制素受體的腫瘤如腦垂體腫瘤、胃-腸胰腺腫瘤、良性腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、乳腺腫瘤、前列腺腫瘤(包括老年的激素性頑固前列腺癌)、卵巢腫瘤或結(jié)腸腫瘤、小細(xì)胞肺癌、惡性腸梗阻、副神經(jīng)節(jié)瘤、腎癌、皮膚癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、髓質(zhì)甲狀腺癌、骨髓瘤、淋巴瘤、何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤、骨腫瘤及其轉(zhuǎn)移瘤、以及自身免疫和炎性病癥，例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、Graves病或其它的眼部炎性疾病。
本發(fā)明的另一方面還提供了一種包含偶聯(lián)的化合物A或其絡(luò)合物以及一種或多種可藥用的載體或稀釋劑的藥物組合物。這種藥物組合物可以用常規(guī)的方法進(jìn)行制備，并可以以試劑盒的形式提供以用于成像，所述試劑盒含有兩種獨(dú)立的試劑，一種是放射性核素，另一種是偶聯(lián)的化合物A，并且含有用于說(shuō)明將其混合的指導(dǎo)說(shuō)明。對(duì)于放射性治療而言，該絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A優(yōu)選是熱的液體制劑的形式。
化合物A或絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A可以作為唯一的活性成分進(jìn)行給藥，或例如作為輔藥和其它藥物聯(lián)合給藥。例如，化合物A可以與如下物質(zhì)聯(lián)合給藥免疫抑制劑，例如鈣神經(jīng)素抑制劑，例如環(huán)孢菌素A或FK 506；具有免疫抑制性質(zhì)的大環(huán)內(nèi)酯，例如雷怕霉素或40-O-(2-羥基乙基)-雷怕霉素(RAD)；具有免疫抑制性質(zhì)的子囊霉素，例如ABT-281、ASM981等等；皮質(zhì)類(lèi)固醇；環(huán)磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；來(lái)氟米特；咪唑立賓；霉酚酸或其鹽，例如MyforticR；霉酚酸莫非替克(mycophenolatemofetil)；15-脫氧精胍菌素或免疫抑制同系物、類(lèi)似物或其衍生物；加速淋巴細(xì)胞回流的物質(zhì)，例如FTY720；免疫抑制的單克隆抗體，例如白細(xì)胞受體的單科隆抗體，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD25、CD28、CD40、CD45、CD58、CD80、CD86或其配體的單科隆抗體；其它的免疫調(diào)節(jié)化合物，例如具有至少一部分CTLA4的細(xì)胞外區(qū)域的重組結(jié)合分子或其突變體，例如與非-CTLA4蛋白序列連接的至少CTLA4的細(xì)胞外部分及其突變體，例如CTLA4Ig(例如被稱(chēng)為ATCC 68629)或其突變體，例如LEA29Y；粘連分子抑制劑，例如LFA-1拮抗劑、ICAM-1或-3拮抗劑、VCAM-4拮抗劑或VLA-4拮抗劑?；衔顰還可以與下列物質(zhì)合用抗炎劑、GH促分泌素受體調(diào)節(jié)劑，例如ghrelin或海沙瑞林、GH受體拮抗劑，例如pegvisomant、胰島素促分泌劑或胰島素分泌增強(qiáng)劑，例如磺酰脲，例如甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、妥拉磺脲、醋磺環(huán)己脲、4-氯-N-[(1-吡咯烷基氨基)羰基]-苯磺胺(glycopyramide)、格列本脲(優(yōu)降糖)、格列齊特、1-丁基-3-間氨基苯磺酰脲、氨磺丁脲、格列波脲、格列吡嗪、格列喹酮、格列派特、格列噻唑、格列丁唑、格列己脲、格列嘧啶、格列平脲、苯磺丁脲或tolylcyclamide、短效的非磺酰脲、口服的促胰島素劑衍生物，例如短效的胰島素增強(qiáng)劑，例如氯茴苯酸、瑞格列奈、苯基乙酸衍生物，例如nateglinide、DPP IV抑制劑，例如1-{2-[(5-氰基吡啶-2-基)氨基]乙基氨基}乙?；?(2S)-氰基-吡咯烷二鹽酸鹽、LAF237、GLP-1或GLP-1激動(dòng)劑模擬物、胰島素敏化劑，例如過(guò)氧物酶體增殖因子激活的受體γ激動(dòng)劑(PPARγ)，例如格列酮類(lèi)，例如(S)-((3，4-二氫-2-(苯基-甲基)-2H-1-苯并吡喃-6-基)甲基-噻唑烷-2，4-二酮(恩格列酮)、5-{[4-(3-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-1-氧代丙基)-苯基]-甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(達(dá)格列酮)、5-{[4-(1-甲基-環(huán)己基)甲氧基]-苯基}甲基)-噻唑烷-2，4-二酮(環(huán)格列酮)、5-{[4-(2-(1-吲哚基)乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(DRF2189)、5-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-乙氧基]}芐基)-噻唑烷-2，4-二酮(BM-13.1246)、5-(2-萘基磺酰基)-噻唑烷-2，4-二酮(AY-31637)、二{4-[(2，4-二氧代-5-噻唑烷基)-甲基]苯基}甲烷(YM268)、5-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-2-羥基乙氧基]芐基}-噻唑烷-2，4-二酮(AD-5075)、5-[4-(1-苯基-1-環(huán)丙烷-羰基氨基)-芐基]-噻唑烷-2，4-二酮(DN-108)、5-{[4-(2-(2，3-二氫吲哚-1-基)乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(4-氯-苯基)]-2-丙炔基]-5-苯基磺酰基)噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(4-氯苯基)]-2-丙炔基]-5-(4-氟苯基-磺?；?噻唑烷-2，4-二酮、5-{[4-(2-(甲基-2-吡啶基-氨基)-乙氧基)苯基]甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(rosiglitazone)、5-{[4-(2-(5-乙基-2-吡啶基)乙氧基)苯基]-甲基}噻唑烷-2，4-二酮(吡格列酮)、5-{[4-((3，4-二氫-6-羥基-2，5，7，8-四甲基-2H-1-苯并吡喃-2-基)甲氧基)-苯基]-甲基}-噻唑烷-2，4-二酮(曲格列酮)、5-[6-(2-氟-芐氧基)萘-2-基甲基]-噻唑烷-2，4-二酮(MCC555)、5-{[2-(2-萘基)-苯并噁唑-5-基]-甲基}噻唑烷-2，4-二酮(T-174)或5-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-2-甲氧基-N-(4-三氟甲基-芐基)苯甲酰胺(KRP297)、非格列酮型如N-(2-苯甲?；交?-L-酪氨酸類(lèi)似物，例如GI-262570、或oxolidinedione，例如JTT501、雙重PPARγ/PPARα激動(dòng)劑，例如DRF-554158、NC-2100或NN-622、視黃醛X受體激動(dòng)劑或rexinoid，例如2-[1-(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘基)-環(huán)丙基]-吡啶-5-甲酸、4-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘基)-2-羰基]-苯甲酸、9-順式視黃酸或其類(lèi)似物、衍生物或可藥用鹽、蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酯酶激酶1B、糖原合酶激酶-3抑制劑、非肽類(lèi)小分子胰島素模擬化合物，例如L-783,281或CLX-901，或低劑量的胰島素、谷酰胺果糖-6-磷酸酯酰氨基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、葡萄糖-6-磷酸酯酶抑制劑、雙胍類(lèi)，例如甲福明、果糖-1，6-二磷酸酯酶抑制劑、糖原磷酸化酶抑制劑，例如CP-91149、高血糖素受體拮抗劑，例如CP-99711、NNC 92-1687、L-168,049或BAY27-9955、磷酸烯醇丙酮酸酯羧基激酶、丙酮酸酯脫氫酶激酶抑制劑、α-葡萄糖甙酶抑制劑，例如4”，6”-二脫氧-4”-[(1S)-(1，4，6/5)-4，5，6-三羥基-3-羥基甲基-2-環(huán)-己烯基氨基]麥芽三糖或O-4，6-二脫氧-4-{[1S，4R，5S，6S]-4，5，6-三羥基-3-(羥基甲基)-2-環(huán)己烯-1-基}-氨基}-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-α-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-D-吡喃葡萄糖(阿卡波糖)、N-(1，3-二羥基-2-丙基)纈胺醇(伏格列波糖)或米格列醇、或胃排空抑制劑，例如GLP-1、CCK-8和糊精(例如Pramlintide)、具有抗血管生成作用的物質(zhì)，例如苯并卟啉，例如verteporfin、midostaurin或4-吡啶基甲基-酞嗪。
化合物A或絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A還可以與抗增殖的物質(zhì)合用，例如化療藥物，例如紫杉醇、吉西他濱、順鉑、阿霉素、5-氟尿嘧啶或紫杉酚合用，與激素類(lèi)物質(zhì)或拮抗劑，例如抗雄激素或米托蒽醌(尤其是在前列腺癌的情況中)、或抗雌激素如來(lái)曲唑(尤其是在乳腺癌的情況中)、抗代謝物、植物生物堿、生物響應(yīng)改性劑，優(yōu)選淋巴因子或干擾素、蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑和/或絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑或具有其它或未知的作用機(jī)理的物質(zhì)，例如各種epothilone或epothilone衍生物，或大環(huán)內(nèi)酯，例如雷怕霉素、RAD或CCI779合用。
當(dāng)化合物A或絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A與其它藥物聯(lián)合給藥時(shí)，共同給藥的藥物的劑量當(dāng)然應(yīng)該隨著所用的共同給藥的藥物的類(lèi)型、所使用的具體藥物、所治療的病癥等而變化?！肮餐o藥”或“聯(lián)合給藥”或這里所用的類(lèi)似術(shù)語(yǔ)指的是將所選擇的治療劑向單一的病人進(jìn)行給藥，并且包括其中的藥物不一定以相同的給藥途徑或在相同的時(shí)間進(jìn)行給藥的治療方案。
根據(jù)前面所述，本發(fā)明還包括另一個(gè)方面9.一種藥物聯(lián)合形式，其包含a)第一種物質(zhì)，其是化合物A或絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A和b)共同給藥的物質(zhì)，例如如上所定義的物質(zhì)。
10.如上所定義的方法，該方法包括將治療有效量的化合物A或絡(luò)合物形式的偶聯(lián)的化合物A和第二種藥物聯(lián)合給藥，例如同時(shí)或依次給藥，其中所說(shuō)的第二種藥物是例如如上所定義的物質(zhì)。
本發(fā)明具體的聯(lián)合形式的選擇取決于所預(yù)防或治療的疾病或病癥；例如與免疫抑制劑聯(lián)合用于例如預(yù)防或治療慢性的移植物排斥反應(yīng)，與胰島素促分泌劑、胰島素分泌增強(qiáng)劑、胰島素敏化劑或低劑量的胰島素聯(lián)合用于治療糖尿病或其并發(fā)癥，與抗炎劑聯(lián)合用于預(yù)防或治療炎性疾病或病癥，與具有抗血管生成作用的物質(zhì)聯(lián)合用于預(yù)防或治療例如斑性水腫和黃斑變性，或與化療劑聯(lián)合用于癌癥。
權(quán)利要求
1.下式所示的化合物或其鹽或絡(luò)合物 其中的一個(gè)氨基可以是保護(hù)的形式或是未保護(hù)的形式。
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其是未保護(hù)的鹽的形式。
3.權(quán)利要求2所述的化合物，為單鹽或二鹽的形式。
4.權(quán)利要求3所述的化合物，為醋酸鹽、苯甲酸鹽、天冬氨酸鹽或雙羥萘酸鹽的形式。
5.生產(chǎn)權(quán)利要求1所述化合物的方法，該方法包括，將保護(hù)了的、與聚合物結(jié)合的或未保護(hù)形式的直鏈的肽以能夠得到所需化合物的方式進(jìn)行環(huán)合，然后任選地除去保護(hù)基并回收所生成的游離或鹽形式的所需化合物。
6.權(quán)利要求1所述的化合物，其中Pro的側(cè)鏈氨基與螯合劑偶聯(lián)，任選地與可檢測(cè)的元素或放射性治療的元素絡(luò)合。
7.一種藥物組合物，該組合物含有權(quán)利要求1所述的化合物或其可藥用鹽以及一種或多種可藥用的稀釋劑或載體。
8.權(quán)利要求7所述的藥物組合物，為緩釋形式或局部應(yīng)用的形式。
9.權(quán)利要求7所述的藥物組合物，該藥物組合物用于和免疫抑制劑、抗炎劑、GH促分泌素受體調(diào)節(jié)劑、GH受體拮抗劑、胰島素促分泌劑、胰島素分泌增強(qiáng)劑、胰島素敏化劑、低劑量的胰島素、具有抗血管生成作用的物質(zhì)或化療劑聯(lián)合應(yīng)用。
10.在個(gè)體中預(yù)防或治療疾病的方法，其中所述的疾病是其病因包括或與GH過(guò)度分泌和/或IGF-1過(guò)高有關(guān)的疾病，以及與胰島素或高血糖素釋放有關(guān)的其它代謝障礙、腸皮膚瘺和胰管皮膚瘺、過(guò)敏性腸綜合征、炎性病癥和疾病、多囊腎病、傾倒綜合征、水瀉綜合征、與AIDS有關(guān)的腹瀉、化療引起的腹瀉、急性或慢性胰腺炎、胃腸出血、腫瘤和惡性腫瘤、血管生成、斑性水腫、與脈絡(luò)膜新血管生成有關(guān)的病癥、增生性視網(wǎng)膜病、移植血管疾病、靜脈移植物狹窄、血管損傷后的再狹窄和/或血管閉塞，該方法包括給需要所述治療的個(gè)體施用有效量的權(quán)利要求1所述的化合物或其可藥用鹽或絡(luò)合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了環(huán)[{4－(NH
文檔編號(hào)A61P31/00GK1446229SQ01813686
公開(kāi)日2003年10月1日 申請(qǐng)日期2001年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月1日
發(fā)明者R·阿爾貝特, W·鮑爾, D·博德默爾, C·布倫斯, I·費(fèi)爾納, H·赫爾斯特恩, I·劉易斯, M·邁森巴赫, G·韋克貝克, B·維特費(fèi)爾特 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司