專利名稱：藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含促生長素抑制素類似物的胃腸外藥物組合物和新的促生長素抑制素類似物。
促生長素抑制素是一種具有如下結(jié)構(gòu)的十四肽。
自從分離并鑒定了促生長素抑制素以來，旨在尋求更有效和更穩(wěn)定的類似物的研究工作一直在繼續(xù)著。
已經(jīng)在WO 97/25977中對促生長素抑制素類似物進行了描述。所說的促生長素抑制素類似物包含式I的氨基酸序列-(D/L)Trp-Lys-X1-X2- I其中Xl是式(a)或(b)的基團 其中R1是任選地被取代的苯基，R2是-Z1-CH2-R1、-CH2-CO-O-CH2-R1、 或 其中z1是O或S，并且X2是在Cα側(cè)鏈上具有芳基殘基的α-氨基酸，或者是選自Dab、Dpr、Dpm、His、(Bzl)HyPro、噻吩基-Ala、環(huán)己基-Ala和叔-丁基-Ala的氨基酸單元，所說序列的Lys殘基相當(dāng)于天然促生長素抑制素-14的Lys9殘基。
這里所用的促生長素抑制素類似物指的是衍生自包含式I序列的天然促生長素抑制素-14的直鏈或環(huán)狀肽，其中，有一個或多個氨基酸單元被刪除和/或被一個或多個其它氨基酸基團所代替和/或有一個或多個官能團被一個或多個其它官能團所代替和/或一個或多個基團被一個或多個其它電子等排的基團所代替。概況地講，該術(shù)語覆蓋了對下文所定義的至少一種促生長素抑制素受體亞型的結(jié)合親合力在nM范圍內(nèi)的包含以上式I序列的天然促生長素抑制素-14的所有進行了修飾的衍生物。
優(yōu)選其中在促生長素抑制素-14的8至11位上的殘基如上面所定義的式I的序列所示的促生長素抑制素類似物。
更優(yōu)選的是包含六肽單元的上面所公開的促生長素抑制素類似物，所說六肽單元的3至6位上的殘基包含式I的序列。更優(yōu)選的是，在該促生長素抑制素六肽的六肽單元的1和2位上的殘基可以是現(xiàn)有技術(shù)中已知的殘基中的任何一種，例如如A.S.Dutta在Small Peptides，第19卷，292-354，Elsevier，1993中所公開的殘基，或者是作為例如促生長素抑制素-14的Phe6和/或Phe7的取代基的那些殘基。
更優(yōu)選的是環(huán)狀促生長素抑制素六肽，例如包含編號為1至6的六肽單元并且所說六肽單元3至6位上的殘基具有上面所示式I的氨基酸序列的環(huán)狀促生長素抑制素六肽，例如式Ia的化合物 其中X1和X2如上所定義，A是選自下列的二價殘基Pro、 和-NR4a-CH2-CO-，其中R3是NR8R9-C2-6亞烷基、胍基-C2-6亞烷基或C2-6亞烷基-COOH，R3a是H、C1-4烷基或者獨立地具有R3所給出的含義中的一種，R3b是H或C1-4烷基，Ra是OH或NR5R6，Rb是-(CH2)1-3-或-CH(CH3)-，R4是H或CH3，R4a是任選地在環(huán)上被取代的芐基，R5和R6各自獨立地是H、C1-4烷基、ω-氨基-C1-4亞烷基、ω-羥基-C1-4亞烷基或?；?，R7是直連鍵或C1-6亞烷基，R8和R9各自獨立地是H、C1-4烷基、ω-羥基-C2-4亞烷基、?；駽H2OH-(CHOH)c-CH2-(其中c是0、1、2、3或4)，或者R8和R9和與其相連的氮原子一起形成可以包含另外的雜原子的雜環(huán)基團，R11是任選地在環(huán)上被取代的芐基、-(CH2)1-3-OH、CH3-CH(OH)-或-(CH2)1-5-NR5R6，ZZa是天然或非天然的α-氨基酸單元。
特別優(yōu)選的是游離形式、鹽形式或者被保護形式的式II的化合物 其中C-2上的構(gòu)型是(R)或(S)或其混合物，且其中R是NR1R2-C2-6亞烷基或胍-C2-6亞烷基，并且R1和R2各自獨立地是H或C1-4烷基。
R優(yōu)選是NR1R2-C2-6亞烷基。優(yōu)選的式II的化合物是游離形式、鹽形式或被保護形式的其中R是2-氨基-乙基的化合物，即環(huán)[{4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe](在這里被稱為化合物A)和環(huán)[{4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-DPhg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe]。Phg指的是-HN-CH(C6H5)-CO-，Bzl指的是芐基。
這些游離形式、鹽形式或被保護形式的化合物在下文被稱為“本發(fā)明的化合物”。
由于本發(fā)明的促生長素抑制素類似物的蛋白降解作用，十分理想的是將其進行全身傳遞，例如胃腸外給藥。但是，胃腸外給藥在給藥部位可能非常疼，在重復(fù)給藥時尤其如此。
現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)包含本發(fā)明化合物和酒石酸的胃腸外組合物表現(xiàn)出特別令人感興趣的性質(zhì)，例如具有良好的耐受性和很高的穩(wěn)定性。
被保護形式的本發(fā)明的化合物相當(dāng)于其中至少一個氨基被保護起來并且可以通過對其去保護，優(yōu)選在生理學(xué)條件下去保護從而得到式II的化合物的促生長素抑制素類似物。適宜的氨基保護基團有例如在“有機合成中的保護基團(Protective Groups in Organic Synthesis)”，T.W.Greene，J.Wiley & Sons NY(1981)，219-287中所述的基團，該文獻的內(nèi)容在這里被引入作為參考。該類氨基保護基團的實例有乙酰基。
本發(fā)明的化合物可以以例如游離形式或鹽形式存在。鹽包括酸加成鹽，例如與無機酸、高分子酸或有機酸形成的鹽，例如與鹽酸、乙酸、乳酸、天冬氨酸、苯甲酸、琥珀酸或雙羥萘酸成的鹽。酸加成鹽可以以單價或二價鹽的形式存在，這取決于加入的是1當(dāng)量還是2當(dāng)量的酸。優(yōu)選的鹽是乳酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、琥珀酸鹽和雙羥萘酸鹽，包括其單鹽或二鹽，更優(yōu)選天冬氨酸二鹽和雙羥萘酸單鹽。
本發(fā)明的化合物可以用常規(guī)方法來進行制備。
本發(fā)明第一方面提供了一種包含本發(fā)明化合物和酒石酸的胃腸外組合物。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明化合物在本發(fā)明組合物中的濃度典型地為每ml組合物約0.05至約1mg，特別是0.1至1mg/ml。
本發(fā)明的化合物(以游離形式的量計)與酒石酸的比例一般為約0.001至約2，優(yōu)選約0.05至約0.6(重量/重量)。
本發(fā)明的化合物在本發(fā)明組合物中的含量為該制劑總重量的約0.005％至約0.1％。
酒石酸優(yōu)選為細(xì)小結(jié)晶的形式。更優(yōu)選地使用D(-)或L(+)酒石酸結(jié)晶。酒石酸的量優(yōu)選為該制劑的約0.01％至約1.5％，優(yōu)選約0.01％至約0.3％，更優(yōu)選約0.15％w/w。酒石酸在最終組合物中的摩爾濃度優(yōu)選為約10mM。
根據(jù)本發(fā)明，除酒石酸和本發(fā)明的化合物外，所說的藥物組合物還優(yōu)選包含一種堿性組分，所述的堿性組分是以將該酒石酸緩沖的藥物組合物的pH調(diào)至約4至約4.5，優(yōu)選約4.2的方式來進行選擇和加入到所說的組合物中的。
所說的堿性組分優(yōu)選是一種堿，例如氫氧化鈉或氫氧化鉀，或者堿性鹽例如碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫鉀或碳酸鉀。優(yōu)選堿性組分的加入量可以使所得的藥物組合物具有上述被緩沖的pH值。
本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選是以水為基礎(chǔ)的。
本發(fā)明的組合物還可以包含張力調(diào)節(jié)劑如甘露醇、氯化鈉、葡萄糖、右旋糖、蔗糖或甘油。該張力調(diào)節(jié)劑優(yōu)選是甘露醇。
對張力調(diào)節(jié)劑的量進行選擇以對本發(fā)明組合物的等滲性進行調(diào)節(jié)，例如，甘露醇可以優(yōu)選地為所說組合物重量的約1％至約5％重量，優(yōu)選為約4.95％重量。甘露醇的存在比例一般為甘露醇酒石酸為約20至約40，優(yōu)選約33。
本發(fā)明的組合物可以包含胃腸外組合物中常用的另外的賦形劑以提供所需的穩(wěn)定性和療效。所說的賦形劑可包括例如抗氧劑或防腐劑。
可以用抗氧劑保護活性劑不發(fā)生氧化分解，特別是在熱滅菌的加速條件下?？寡鮿┛梢赃x自現(xiàn)有技術(shù)中已知化合物中的任何一種。同樣，可以用常規(guī)試驗來確定所用抗氧劑的量。本發(fā)明的組合物優(yōu)選不包含抗氧劑。
當(dāng)被制備成多劑量小瓶、注射用藥筒或注射器時，可以向所說的組合物中加入防腐劑例如苯酚。本發(fā)明的組合物優(yōu)選不包含防腐劑。
關(guān)于這里所提到的這些以及其它的賦形劑和方法可以參考大量文獻，特別是可參見藥物賦形劑手冊(Handbook of Pharmaceutical Excipients)，第二版，Ainley Wade和Paul J.Weller主編，American PharmaceuticalAssociation，華盛頓，USA和Pharmaceutical Press，倫敦；和Lexikon derHilfsstoffe für Pharmazie，Kosmetik and angrenzende Gebiete，H.P.Fiedler主編，第4版，Editio Cantor，Aulendorf以及較早的版本，其在這里被引入作為參考。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選僅包含本發(fā)明的化合物，例如式II的化合物，例如化合物A作為活性成分。
用于制備本發(fā)明組合物的方法可以是本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法或者以該類方法為基礎(chǔ)，例如L.Lachman等人，工業(yè)藥學(xué)的理論和實踐(TheTheory and Practice of Industrial Pharmacy)，第3版，1986，H.Sucker等人，Pharmazeutische Technologie，Thieme，1991，Hager’s Handbuch derpharmazeutischen Praxis，第4版(Springer Verlag，1971)和Remington’sPharmaceutical Sciences，第13版，(Mack Publ.，Co.，1970)或更新的版本中所述的方法。
典型地是，以所需用量將本發(fā)明的化合物、酒石酸和所述任選的其它成分溶解于水性溶劑(優(yōu)選注射用水)中，并用堿對其pH進行調(diào)節(jié)。然后，用水將所得的溶液稀釋至所需的終體積。可以用無菌濾器例如Millipak過濾器對所得的溶液進行過濾。在上述制備過程中，優(yōu)選置換掉氧氣(空氣)以避免其與本發(fā)明化合物的溶液進行接觸。這一點通常是通過用例如氮氣對盛放該溶液的容器進行凈化來進行的?？梢栽诙趸蓟蚱渌栊詺怏w下對該藥物組合物進行包裝以防止降解，優(yōu)選在二氧化碳下進行包裝，例如將其裝填到小瓶例如玻璃小瓶、安瓿，例如玻璃安瓿、或注射器例如預(yù)填充注射器中，并對其進行蒸汽滅菌或熱滅菌。
可以用常規(guī)方法在無菌條件下將該溶液冷凍干燥，從而得到一種注射用粉末，在臨給藥前可以通過將該粉末與所需量的溶劑例如注射用水混合而將其重組成所需的用于胃腸外給藥的溶液。
此外，本發(fā)明另一方面還提供了一種被緩沖至約4至約4.5，優(yōu)選約4.2的pH的胃腸外給藥的組合物，其包含作為活性成分的化合物A或其可藥用的鹽，例如乳酸鹽、單-或二-天冬氨酸鹽、琥珀酸鹽，優(yōu)選天冬氨酸二鹽。
這些組合物可以包含與上述包含酒石酸的組合物所包含的組分相同的組分，其中用另外的緩沖液如乙酸鹽/乙酸、乳酸鹽/乳酸、Glycin/HCl代替所說的酒石酸/酒石酸鹽。
本發(fā)明的化合物可用于a)預(yù)防或治療其病因包括或與GH過度分泌和/或IGF-1過高有關(guān)的病癥，例如可用于治療肢端肥大癥以及I型或II型糖尿病，尤其是其并發(fā)癥，例如血管病、糖尿病性增生性視網(wǎng)膜病、糖尿病性黃斑水腫、腎病、神經(jīng)病和黎明現(xiàn)象，以及其他與胰島素或胰高血糖素釋放有關(guān)的代謝病癥，例如肥胖，例如病態(tài)肥胖癥或丘腦下部性肥胖或胰島素過多性(hyperinsulinemic)肥胖，b)治療腸皮膚瘺和胰管皮膚瘺、過敏性腸綜合征、炎性疾病，例如格雷夫斯病、炎性腸病、牛皮癬或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多囊腎病、傾倒綜合征、水瀉綜合征、與AIDS有關(guān)的腹瀉、化療引起的腹瀉、急性或慢性胰腺炎和分泌胃腸激素的腫瘤(例如GEP腫瘤，例如舒血管腸肽瘤、胰高血糖素瘤、胰島素瘤、良性腫瘤等)、淋巴細(xì)胞惡性腫瘤，例如淋巴瘤或白血病、肝細(xì)胞癌和胃腸道出血，例如靜脈曲張性食管出血，c)預(yù)防或治療血管生成、上述炎性疾病，包括炎性眼病、黃斑水腫，例如囊樣黃斑水腫、自發(fā)性囊樣黃斑水腫、與年齡有關(guān)的溢出性黃斑變性、與脈絡(luò)膜新生血管有關(guān)的病癥和增生性視網(wǎng)膜病，d)預(yù)防或?qū)寡芤浦布膊?，例如同種異體移植或異種移植血管病變，例如移植血管動脈粥樣硬化，例如器官移植，例如心、肺、心-肺聯(lián)合、肝、腎或胰腺移植中的移植血管動脈粥樣硬化，或用于預(yù)防或治療靜脈移植物狹窄、血管損傷后的再狹窄和/或血管閉塞，所說的血管損傷例如由導(dǎo)管操作或血管刮除術(shù)操作如經(jīng)皮經(jīng)腔血管成形術(shù)、激光治療或破壞血管內(nèi)膜或內(nèi)皮的完整性的其它侵入性操作造成的血管損傷，e)治療表達或者積聚促生長素抑制素受體的腫瘤如垂體瘤，例如庫興氏病、胃-腸胰腺腫瘤、良性腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、乳房、前列腺腫瘤(包括晚期的激素頑固性前列腺癌)、卵巢或結(jié)腸腫瘤、小細(xì)胞肺癌、惡性腸梗阻、副神經(jīng)節(jié)瘤、腎癌、皮膚癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、甲狀腺髓狀瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤、骨腫瘤以及其轉(zhuǎn)移瘤、以及自身免疫性或炎性病癥，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、格雷夫斯病或其它炎性眼病。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選用于治療肢端肥大癥和癌癥，例如庫興氏病。
可以在標(biāo)準(zhǔn)臨床或動物試驗中證實本發(fā)明組合物的活性和特性。
本發(fā)明組合物的適宜劑量當(dāng)然將根據(jù)例如被治療的病癥(例如疾病類型或耐藥性)、所用的藥物、所需的作用以及給藥方式而進行變化。
當(dāng)被連續(xù)給藥時，化合物的有效量可以在一段時間內(nèi)分兩或三次給予，如通過胃腸外給藥例如靜脈內(nèi)滴注、肌內(nèi)或皮下注射、或皮下輸入例如連續(xù)皮下輸入被給予，優(yōu)選通過皮下注射或輸入進行給藥，總的日劑量可以分布在整個給藥期間或其一部分時間內(nèi)。當(dāng)通過皮下注射給藥時，最優(yōu)選每周給藥三次至每天給藥三次，優(yōu)選每周兩次到高至每天一次或兩次。本發(fā)明的化合物還可以以例如皮下推注的形式給藥。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選適于皮下給藥。
在注射后，本發(fā)明組合物的局部耐受性很好。具體地講，本發(fā)明組合物的胃腸外給藥，例如皮下注射在注射部位僅產(chǎn)生輕微灼燒感或無灼燒感的感覺。
在注射后，除良好的局部耐受性外，本發(fā)明的組合物還表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。例如，在60℃下儲存4周后，產(chǎn)品的降解小于2.5％。例如，如果在避光條件下在2℃至8℃下進行儲存時，本發(fā)明的組合物在24個月內(nèi)是穩(wěn)定的。用化合物A的二天冬氨酸鹽可以觀察到特別良好的穩(wěn)定性。
通常，可以通過每次注射約0.01至約1.2mg，優(yōu)選約0.1至約0.6mg本發(fā)明的化合物，或以約0.001至約0.009mg/kg動物體重/天的劑量每天給藥一次或者以高至每天四次的分割劑量形式進行給藥，例如皮下給藥，可以獲得令人滿意的結(jié)果。因此，對于患者而言，適宜的日劑量為約0.1mg至約0.6mg本發(fā)明的化合物，例如式II的化合物，例如化合物A。
用下面的實施例來對本發(fā)明的組合物進行說明。
實施例1至7將酒石酸和甘露醇溶解于注射用水中，同時用氮氣對該溶液進行凈化。然后，向其中加入化合物A的二天冬氨酸鹽，用氫氧化鈉將該溶液的pH調(diào)至4.20并向其中加入注射用水至1.0ml。在無菌條件下，將該溶液用孔徑≤0.22μm的Millipak-200無菌濾器過濾，將其填充到安瓿中并用高壓滅菌器對其進行滅菌。
本發(fā)明另一方面提供了游離形式、鹽或絡(luò)合物形式、或者被保護形式的式III的新化合物 其中R是NR1R2-C2-6亞烷基或胍-C2-6亞烷基，且R1和R2各自獨立地是H或C1-4烷基。
R優(yōu)選地是NR1R2-C2-6亞烷基。一種優(yōu)選的式III的化合物是其中R是2-氨基-乙基的游離形式、鹽或絡(luò)合物形式或被保護形式的化合物，也被稱為環(huán)[{4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-DPhg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe]，并且在這里被稱為化合物B。Phg和Bzl如上所定義。
這些游離形式、鹽或絡(luò)合物形式、或被保護形式的化合物在下文被稱為“本發(fā)明的新化合物”。
被保護形式的式III的化合物，例如化合物B相當(dāng)于其中至少一個氨基被保護起來并且可以通過去保護，優(yōu)選在生理學(xué)條件下去保護而產(chǎn)生式III的化合物的上面的分子。適宜的氨基保護基團是例如在“有機合成中的保護基團”，T.W.Greene，J.Wiley&Sons NY(1981)，219-287中所公開的基團，該文獻的內(nèi)容在這里被引入作為參考。該類氨基保護基團的實例有乙?；?br> 當(dāng)式III的化合物，例如化合物B以絡(luò)合物形式存在時，其方便地是在Pro的側(cè)鏈氨基上帶有一種螯合基團并且與可檢測的元素或放射性治療元素絡(luò)合的式III的化合物。帶有螯合基團的化合物B在這里被稱為軛合的化合物B。
螯合基團的實例包括例如得自多-氨基多羧酸或酸酐的基團，例如得自非環(huán)狀配體例如二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、乙二醇-0，0′-二(2-氨基乙基)-N，N，N′，N′-四乙酸(EGTA)、N，N′-二(羥基芐基)乙二胺-N，N′-二乙酸(HBED)和三亞乙基四胺六乙酸(TTHA)的基團、得自被取代的DTPA，例如對-異硫氰酸根合-芐基-DTPA的基團、得自大環(huán)配體，例如1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-N，N′，N″，N-四乙酸(DOTA)、1，4，8，11-四氮雜環(huán)十四烷-N，N′，N″，N-四乙酸(TETA)或1，4，7，10-四氮雜環(huán)十三烷-N，N′，N″，N-四乙酸(TITRA)的基團。
該螯合基團可以直接連接到Pro的側(cè)鏈氨基上或者通過一種間隔基連接于其上。適宜的間隔基包括本領(lǐng)域已知的間隔基，例如GB-A-2,225,579中所公開的間隔基，例如氨基羧酸例如β-Ala的二價殘基，或者得自6-氨基-己酸的二價殘基。
優(yōu)選的螯合基團是得自DTPA、DOTA或TETA的基團。最優(yōu)選得自DTPA或DOTA的螯合基團。
可檢測的元素指的是表現(xiàn)出可通過體內(nèi)診斷技術(shù)檢測到的性質(zhì)的任何元素，優(yōu)選金屬離子，例如發(fā)射可檢測射線的金屬離子或者能影響NMR馳豫性的金屬離子。放射性治療元素指的是發(fā)射對被治療的病癥具有有益作用的射線的任何元素。
適宜的元素包括例如重元素或稀土離子，例如CAT掃描(計算機控制軸向X線斷層照相術(shù))所用的元素、順磁離子，例如Gd3+、Fe3+、Mn2+和Cr2+、熒光金屬離子，例如Eu3+，和放射性核素，例如放射性鑭系元素，特別是發(fā)射γ射線的放射性核素、發(fā)射β射線的放射性核素、發(fā)射α射線的放射性核素、發(fā)射Auger-e-射線的放射性核素或發(fā)射正電子的放射性核素，例如68Ga、18F或86Y。
適宜的發(fā)射γ射線的放射性核素包括用于診斷技術(shù)的核素。發(fā)射γ射線的放射性核素有利地具有1小時至40天，優(yōu)選5小時至4天，更優(yōu)選12小時至3天的半衰期。其實例有鎵、銦、锝、鐿、錸、鋱、镥、鉈和釤的放射性同位素例如67Ga、111In、99mTc、161Tb、169Yb、186Re或177Lu。
適宜的發(fā)射β射線的放射性核素包括用于放射性治療應(yīng)用的核素，例如90Y、67Cu、186Re、188Re、169Er、121S n、127Te、177Lu、143Pr、198Au、109Pd、165Dy、142Pr或153Sm。
適宜的發(fā)射α射線的放射性核素是用于治療的核素，例如211At、212Bi或201Tl。
式III的化合物，例如化合物B可以以例如游離或鹽形式存在。鹽包括與無機酸、高分子酸或有機酸形成的酸加成鹽，例如與鹽酸、乙酸、乳酸、天冬氨酸、苯甲酸、琥珀酸或雙羥萘酸成的鹽。酸加成鹽可以以單價或二價鹽的形式存在，這取決于向游離堿形式的化合物B中加入的是1當(dāng)量還是2當(dāng)量的酸。優(yōu)選的鹽是乳酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、琥珀酸鹽和雙羥萘酸鹽，包括其單鹽和二鹽，更優(yōu)選天冬氨酸二鹽和雙羥萘酸單鹽。
當(dāng)螯合基團中存在羧酸基團時，軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B還可以以例如堿金屬鹽如鈉或鉀鹽或取代或未取代的銨鹽的形式存在。
本發(fā)明還包括一種制備式III的化合物，例如化合物B的方法。其可以用類似于已知方法的方法來制備，例如a)將保護了的、與聚合物結(jié)合的或未保護形式的直鏈的肽以能夠得到式III的化合物，例如化合物B的方式進行環(huán)合，然后任選地除去保護基，b)為了制備軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B，將螯合基團和被保護或未被保護形式的式III的化合物，例如化合物B連接起來，然后任選地除去保護基團，然后回收所形成的游離形式、鹽形式或任選地與可檢測的元素或放射性治療元素相絡(luò)合的式III的化合物，例如化合物B、或軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B。
因為該直鏈肽將被環(huán)化，所以選擇哪種氨基酸在C末端位置上作為肽鏈的開始并不是關(guān)鍵，只要該直鏈肽中的氨基酸序列與所需的式III的化合物，例如化合物B中的序列相對應(yīng)即可。但可能會有一些其它的因素導(dǎo)致一種起始氨基酸比另一種更優(yōu)選。當(dāng)通過固相合成來制備式III的化合物，例如化合物B時，優(yōu)選通過適宜的連接基將第一個氨基酸連接到樹脂，例如可以通過商業(yè)途徑獲得的以聚苯乙烯為基礎(chǔ)的樹脂上，所說的連接基為例如可在使該側(cè)鏈保護保持完整的溫和條件下裂解的連接基，例如SASRIN或取代或未取代的基于三苯甲基的連接基，例如4-(羥基-二苯基-甲基)-苯甲酸，其中的一個苯基可任選地被取代，例如被Cl所取代?？梢杂贸Ｒ?guī)方式來完成所需肽鏈的構(gòu)建，例如，可以使用其中的末端氨基被Fmoc-保護了的氨基酸單元，所存在的側(cè)鏈氨基用不同的氨基保護基例如Boc或CBO進行保護。優(yōu)選將直鏈的肽以能夠在Tyr(4-Bzl)-OH和Phe之間形成鍵的方式進行環(huán)合，例如Phe-{4-(NHR1-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-DPhg-DTrp(R2)-Lys(ε-NHR3)-Tyr(4-Bzl)-OH或其官能衍生物，其中R1、R2和R3分別是氨基保護基。環(huán)合步驟a)可方便的用已知方法來完成，例如經(jīng)由疊氮化物、活潑酯、混合酸酐或碳二亞胺來完成。然后除去保護基，例如通過用三氟乙酸裂解或通過氫化作用除去保護基。
肽的環(huán)化也可以直接在固體載體上進行，第一個氨基酸是Nα-和C-末端保護的形式，并通過一個側(cè)鏈(例如Lys的ε-氨基官能團)或通過骨架固定連接到其上。然后，可以按照標(biāo)準(zhǔn)的固相合成(SPPS)過程來合成該直鏈的序列。在將C-末端保護基裂解后，將肽按照例如以上的描述環(huán)合。然后，將環(huán)狀的肽從樹脂上裂解下來并將其去保護。
如果需要的話，可以在所說的肽環(huán)化步驟a)之前或之后將存在于Pro上的側(cè)鏈引入到該氨基酸上。因此，可以對作為起始氨基酸或起始直鏈或環(huán)狀肽的Pro(其中各種情況中的Pro均在環(huán)上被OH環(huán)取代)進行轉(zhuǎn)化，從而分別提供其中Pro被NHR1-C2H4-NH-CO-O-取代的式III的化合物，例如化合物B或所需的Pro單元或相應(yīng)的直鏈肽。
軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B的絡(luò)合作用可以通過將軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B與相應(yīng)的可以產(chǎn)生可檢測的或放射性治療元素的化合物例如金屬鹽，優(yōu)選水溶性鹽進行反應(yīng)來完成。該反應(yīng)可以用與已知方法相似的方法來進行，例如Perrin，Organic Ligand，Chemical Data Series 22.NY Pergamon Press(1982)；Krejcarit和Tucker，Biophys.Biochem.Res.Com.77581(1977)以及Wagner和Welch，J.Nucl.Med.20428(1979)所公開的方法。
用下面的實施例來對本發(fā)明式III的新化合物進行說明。所有的溫度都是℃。
縮寫AcOH ＝乙酸Boc＝叔-丁氧基-羰基Bzl＝芐基CBO＝芐氧羰基DIPCI ＝N，N’-二異丙基碳二亞胺DIPEA ＝二異丙基乙基胺DMF＝二甲基甲酰胺DPPA ＝二苯基磷酰基疊氮化物Fmoc ＝芴基甲氧羰基HOBT ＝1-羥基苯并三唑Osu＝N-羥基琥珀酰亞胺TFA＝三氟乙酸THF＝四氫呋喃實施例8環(huán)[{4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-DPhg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe]a)Fmoc-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH-Boc)-OH的合成將鹽酸L-羥基脯氨酸甲酯與Fmoc-Osu在1.0N碳酸鈉水溶液/THF中在室溫下進行反應(yīng)。在反應(yīng)完全后，通過沉淀將Fmoc-Pro(4-OH)-Ome分離出來。然后，將Fmoc-Pro(4-OH)-Ome滴加到三光氣(0.6當(dāng)量)在THF中的溶液中，從而得到一種氯碳酸酯中間體。在1小時后，向其中加入二甲基氨基吡啶(1.0當(dāng)量)和N-Boc-二氨基乙烷(6.0當(dāng)量)并將該反應(yīng)在室溫下攪拌。反應(yīng)結(jié)束后，在真空下除去溶劑并將所得的Fmoc-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH-Boc)-Ome用乙酸乙酯/0.1M HCl的兩相系統(tǒng)進行萃取，從而得到粗品(MH+＝554)，通過用乙酸乙酯結(jié)晶對其進行純化。然后，通過用1NNaOH在二噁烷/水中進行處理而將該甲酯裂解成游離酸并將產(chǎn)物Fmoc-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH-Boc)-OH在硅膠柱上純化，[(M+Na)]+＝562)。
b)H-Phe-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH-Boc)-DPhg-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)-OH用可以通過商業(yè)途徑獲得的Fmoc-Tyr(Bzl)-O-CH2-Ph(3-OCH3)-O-CH2-聚苯乙烯樹脂(SASRIN-樹脂，2.4mM)作為起始原料并進行由Nα-脫保護(哌啶/DMF，2∶8)、用DMF反復(fù)洗滌和偶聯(lián)(DIPCI4.8mM/HOBT6mM，DMF)的重復(fù)循環(huán)所組成的標(biāo)準(zhǔn)方案。依次偶聯(lián)下面的氨基酸衍生物Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-DTrp(Boc)-OH、Fmoc-DPhg-OH、Fmoc-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH-Boc)-OH、Fmoc-Phe-OH。繼續(xù)或重復(fù)進行偶聯(lián)(2當(dāng)量氨基酸)直至完成，即直至用陰性‘Kaiser’茚三酮試驗進行檢測時發(fā)現(xiàn)殘留的氨基完全消失。在將完全組裝成的被保護的直鏈肽從其樹脂載體上裂解下來之前，從最后的殘余物上除去Nα-Fmoc保護基。
c)H-Phe-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH-Boc)-DPhg-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)-OH在用CH2Cl2洗滌后，將該肽-樹脂轉(zhuǎn)移到柱子上或者進行著攪拌的抽濾器上并通過在1小時內(nèi)用2％TFA的CH2Cl2溶液短暫處理而對該肽片斷進行裂解和洗脫。立即用飽和NaHCO3水溶液對該洗脫液進行中和。將有機溶液分離出來并蒸發(fā)，在不對其進行進一步純化的情況下將該側(cè)鏈被保護起來的前體(MH+＝1366)直接進行環(huán)化。
d)環(huán)[-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH2)-DPhg-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe-]，三氟乙酸鹽將上述直鏈片段溶解于DMF(4mM)中，冷卻至-5℃并用2當(dāng)量DIPEA，然后用1.5當(dāng)量DPPA對其進行處理并在0-4℃下將其攪拌至反應(yīng)結(jié)束(約20小時)。在真空下將溶劑幾乎完全除去；將該濃縮物用乙酸乙酯稀釋，用NaHCO3、水進行洗滌，干燥并將其真空蒸發(fā)。
為了去保護，將該殘余物在0℃下溶解于TFA/H2O 95∶5(約50mM)中并將其在冷卻下攪拌30分鐘。然后，用包含約10當(dāng)量HCl的乙醚使產(chǎn)物沉淀，過濾，用乙醚洗滌并將其進行干燥。為了使剩余的吲哚-N-亞氨基甲酸(carbaminic acid)完全分解，將該產(chǎn)物溶解于5％AcOH中并將其在約5℃下放置15小時，然后將其冷凍干燥。用使用C-1810μm STAGROMA柱(5-25cm)的制備型RP-HPLC對其進行純化，用0.5％TFA至0.5％位于70％乙腈中的TFA進行梯度洗脫。將包含純標(biāo)題化合物的級分合并，用水稀釋并將其冷凍干燥。將該冷凍干燥物溶解于水中，然后用10％Na2CO3水溶液對其進行沉淀。將該固態(tài)游離堿濾出，用水洗滌并將其在室溫下真空干燥。直接用所得的白色粉末來制備不同的鹽。
實施例9鹽形式的環(huán)[{4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-DPhg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe]a.乙酸鹽用離子交換樹脂(例如AG 3-X4)將其轉(zhuǎn)化成乙酸鹽形式。MS(ESI)m/z 524.5[M+2H]2+[α]D20＝-41.6°；c＝0.56；AcOH 95％；T＝20C；589.3nmb.天冬氨酸鹽通過將1當(dāng)量實施例8的化合物與1或2當(dāng)量天冬氨酸在乙腈/水1∶3的混合物中進行反應(yīng)來進行向單-或二-天冬氨酸鹽的轉(zhuǎn)化。將所得的混合物冷凍并將其冷凍干燥。
二-天冬氨酸鹽還可以通過將實施例8的化合物溶解于水/乙腈4∶1中，過濾，負(fù)載到離子交換樹脂例如BioRad AG4X4柱上并用水/乙腈4∶1進行洗脫來獲得。將洗脫液濃縮，冷凍并將其冷凍干燥。
c.苯甲酸鹽通過將實施例8的化合物和2當(dāng)量苯甲酸一起溶解于乙腈/水1∶2的混合物中來進行向苯甲酸鹽的轉(zhuǎn)化。將所得的混合物冷凍并將其冷凍干燥。
d.雙羥萘酸鹽將1當(dāng)量實施例8的化合物與1當(dāng)量雙羥萘酸一起溶解于乙腈/THF/水2∶2∶1的混合物中。將所得的混合物冷凍并將其冷凍干燥。
實施例10環(huán)[{4-(DOTA-NH-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-DPhg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phea)環(huán)[-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH2)-DPhg-DTrp-Lys(Cbo)-Tyr(Bzl)-Phe-]，三氟乙酸鹽該化合物是用與合成環(huán)[-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH2)-DPhg-DTrp-Lys(Cbo)-Tyr(Bzl)-Phe-]，三氟乙酸鹽的方法相同的方法，用Fmoc-Lys(Cbo)-OH代替Fmoc-Lys(Boc)-OH來進行合成的。
b)將400mg通過商業(yè)途徑獲得的DOTA x 2H2O(SYMAFEX-法國)溶解于20ml水中。在加入20ml DMF后，向其中加入170mg環(huán)[-Pro(4-OCO-NH-CH2-CH2-NH2)-DPhg-DTrp-Lys(CBO)-Tyr(Bzl)-Phe-]、190mg DCCI和60mg N-羥基琥珀酰亞胺。將所得的混懸液在室溫下放置72小時。在過濾后，在減壓下除去溶劑并將所得的粗品用硅膠進行純化(用DCM/MeOH/HOAc50％8/2/0.25--＞7/3/1作為流動相)。
c)為了去保護，將上面的DOTA-軛合物用5ml三氟乙酸/茴香硫醚(9/1)在室溫下處理兩小時。在將該溶液傾倒到100ml乙醚+5ml 3N HCl/乙醚混合物中后，通過過濾將所產(chǎn)生的沉淀分離出來。用硅膠進行純化，用DCM/MeOH/HOAc5o％7/4/2--＞7/5/4作為流動相。將其通過在RP18-HPLC柱(Spherisorb 250x 4.6mm)上用0.1％TFA至0.1％位于90％CH3CN中的TFA梯度洗脫而進行脫鹽步驟后，得到分析純的終產(chǎn)物。MH+1434.7游離形式或可藥用鹽以及絡(luò)合物形式的式III的化合物，例如化合物B在所示的體外和體內(nèi)試驗中表現(xiàn)出有價值的藥理學(xué)性質(zhì)，因此可用于治療。
具體地講，式III的化合物，例如化合物B對人促生長素抑制素受體(hsst)表現(xiàn)出令人感興趣的結(jié)合特性。已經(jīng)對5種促生長素抑制素受體亞型(sst1、sst2、sst3、sst4和sst5)進行了克隆和鑒定。Y.Yamada等人在Proc.Nat.Acad.Sci.，89，251-255(1992)中對hsst1、hsst2和hsst3以及其序列進行了公開。L.Rohrer等人在Proc.Acad.Sci.，90，4196-4200(1993)中對hsst4以及其序列進行了公開。R.Panetta等人在Mol.Pharmacol.45，417-427，1993中對hsst5以及其序列進行了描述。
可以如下面所公開的那樣，用得自選擇性和穩(wěn)定表達hsst1、hsst2、hsst3、hsst4或hsst5的細(xì)胞系，例如CHO或COS細(xì)胞的膜來進行結(jié)合試驗。
這些膜是用已知的方法，例如C.Bruns等人在Biochem.J.，1990，65，第39-44頁中所公開的方法來進行制備的。將由穩(wěn)定表達hsst1或hsst2或hsst3或hsst4或hsst5的hsst選擇性細(xì)胞系例如CHO或COS細(xì)胞制備的膜以300μl的總體積一式三份地用濃度逐漸增加的[125I-Tyr11]-SRIF-14在10mmol/l包含0.5％BSA的Hepes緩沖液(pH 7.6)中在22℃下培養(yǎng)30分鐘。通過快速過濾來終止培養(yǎng)并在計數(shù)器上對該濾器進行計數(shù)。特異性結(jié)合等于總結(jié)合減去存在1μmol/l促生長素抑制素-14情況下的非特異性結(jié)合。這些實驗是一式三份地進行的。用適宜的統(tǒng)計和作圖程序來計算親合常數(shù)(KD)和結(jié)合位點的數(shù)目。
式III的化合物，例如化合物B在上面的結(jié)合試驗中對hsst1、hsst2和hsst4沒有明顯的結(jié)合親合力，對hsst3有低親合力，對hsst5有良好的親合力，結(jié)果用IC50值(nM)表示(IC50＝在用[125I-Tyr11]-SRIF-14作為特異性放射配體的競爭性結(jié)合試驗中達到最大抑制作用一半時的濃度)。
IC50
如在體外抑制了GH從所培養(yǎng)的垂體細(xì)胞的釋放所表明的那樣，式III的化合物，例如化合物B表現(xiàn)出抑制GH釋放的活性。例如，將得自成年雄性大鼠的垂體腺前葉切成小塊并用0.1％位于20mM HEPES緩沖液中的胰蛋白酶將其分散。將該被分散了的細(xì)胞在補充了5％胎牛血清、5％馬血清、1mM NaHCO3、2.5nM地塞米松、2.5mg/ml胰島素和20U/mlPen/Strep的MEM(Gibco)中培養(yǎng)四天。在實驗的當(dāng)天，將所粘附的細(xì)胞用經(jīng)20mM HEPES緩沖并補充了5mM葡萄糖和0.2％BSA的Krebs-Ringer培養(yǎng)基洗滌兩次。隨后，在存在3×10-10M生長激素釋放因子的情況下將這些細(xì)胞與化合物B一起培養(yǎng)三小時。用RIA測量釋放到所說培養(yǎng)基中的生長激素的量。
式III的化合物，例如化合物B抑制了大鼠體內(nèi)生長激素(GH)的釋放。將化合物B皮下給藥于被麻醉的大鼠。在給予該化合物后1小時，斷頭取血。在治療后6小時對基礎(chǔ)GH分泌的抑制作用的基礎(chǔ)上估算其作用的持續(xù)時間。在處理后第1小時和第6小時用RIA對激素水平進行測量。通過作圖(log-probit)來測定各實驗抑制激素分泌的ID50值并將所得的值進行對數(shù)平均。在該體內(nèi)模型中，化合物B抑制了生長激素的釋放。
如在用帶有hsst3和/或hsst5的各種癌細(xì)胞系進行的增殖試驗中所表明的那樣，式III的化合物，例如化合物B還可用于治療hsst3和/或hsst5受體陽性的腫瘤。
因此，式III的化合物，例如化合物B可用于預(yù)防或治療其病因包括或與hsst3和/或hsst5的存在或活化有關(guān)的病癥，例如與GH過度分泌有關(guān)的疾病或病癥，例如可用于治療肢端肥大癥或惡性細(xì)胞增殖性疾病，例如帶有hsst3和/或hsst5的癌性腫瘤，例如下面關(guān)于絡(luò)合軛合的化合物B所公開的疾病。
對于所有上述適應(yīng)癥而言，所需的劑量當(dāng)然將隨著例如主體、給藥方式和被治療情況的嚴(yán)重程度而進行變化。但是，通過給予1μg至0.7mg/kg/天式III的化合物，例如化合物B一般就可以獲得令人滿意的結(jié)果。適宜的患者的日劑量為約2μg至約50mg，優(yōu)選約0.01至約40mg，例如約0.01至約3mg皮下給藥的化合物，這些化合物方便地是以高至一天三次的分割劑量以包含例如約0.5μg至約25mg，例如約2μg至20mg，例如2μg至1.5mg式III的化合物，例如化合物B的單元劑型的形式被給藥的。
式III的化合物，例如化合物B可以以游離形式或可藥用鹽的形式或絡(luò)合物形式被給藥。該類鹽和絡(luò)合物可以用常規(guī)方法來進行制備并且表現(xiàn)出與游離化合物的活性相同的活性。本發(fā)明還提供了包含游離堿形式或可藥用鹽形式或絡(luò)合物形式的式III的化合物，例如化合物B和一種或多種可藥用的稀釋劑或載體的藥物組合物。該類組合物可以用常規(guī)方式來進行配制。式III的化合物，例如化合物B還可以以緩釋形式，例如以包含例如可生物侵蝕的聚合物或共聚物的植入物、微囊、微球或毫微球形式、以脂質(zhì)體制劑形式、或者以自膠化凝膠，例如在與患者的體液相互作用后能形成凝膠的固體或半固體組合物的形式給藥。
式III的化合物，例如化合物B或其可藥用的鹽或絡(luò)合物可以通過任何常規(guī)途徑被給藥，例如可以被胃腸外給藥，例如以可注射的溶液或混懸液形式(包括例如上述的緩釋形式)被給藥、使用常規(guī)吸收增強劑進行口服給藥、經(jīng)鼻給藥或以栓劑形式給藥或者局部給藥，例如以眼用液體、凝膠、軟膏或混懸制劑形式被給藥，例如以脂質(zhì)體、微球或毫微球制劑的形式被給藥，例如用于滴注或結(jié)膜下或眼內(nèi)或眼周注射。
根據(jù)前面所述，本發(fā)明還提供了1.用作藥物的式III的化合物，例如化合物B或其可藥用的鹽或絡(luò)合物；2.一種預(yù)防或治療需要該類治療的個體的這里所示疾病或病癥的方法，其包括給所說的個體施用有效量式III的化合物，例如化合物B或其可藥用的鹽或絡(luò)合物；或
3.用于制備用于如上面2.下所定義的任何方法的藥物組合物的式III的化合物，例如化合物B或其可藥用的鹽或絡(luò)合物。
因此，正如通過標(biāo)準(zhǔn)試驗所證實的那樣，當(dāng)與可檢測的元素，例如發(fā)射γ-或正電子的核素、熒光金屬離子或順磁離子例如111In、161Tb、177Lu、86Y、68Ga、Eu3+、Gd3+、Fe3+、Mn2+或Cr2+絡(luò)合時，軛合的式III的化合物，例如化合物B或其可藥用的鹽可用作顯影劑，例如用于hsst3和/或hsst5受體呈陽性的組織和細(xì)胞如hsst3和/或hsst5受體呈陽性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤、表現(xiàn)出促生長素抑制素受體的炎癥或自身免疫病癥、結(jié)核或移植后的器官排斥反應(yīng)的顯影，當(dāng)與發(fā)射α-或β-射線的核素或發(fā)射Auger-e-的核素，例如90Y、161Tb、177Lu、211At、213Bi或201Tl絡(luò)合時，其可用作用于在體內(nèi)治療hsst3和/或hsst5受體呈陽性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和嚴(yán)重的炎癥狀況的放射性藥物。
具體地講，觀察到軛合的化合物A可以與促生長素抑制素受體以約8至10的pKi值進行結(jié)合。與例如111In、88Y、90Y或177Lu絡(luò)合的實施例10的化合物在nM范圍內(nèi)與各sst亞型按照化合物B的結(jié)合曲線進行結(jié)合。
軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B及其絡(luò)合物與hsst3和/或hsst5受體的親和力還可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)試驗方法，通過體內(nèi)試驗來證實，例如采用GB-A-2,225,579中所公開的方法。例如在對帶有表達hsst5受體的外分泌胰腺腫瘤的小鼠或大鼠注射后4小時，與例如111In、88Y、90Y或177Lu絡(luò)合的實施例10的化合物表現(xiàn)出明顯的腫瘤聚集。
在以1至5μg/kg的劑量給予用0.1至5mCi、優(yōu)選0.1至2mCi的放射性核素進行標(biāo)記的，例如用111In、177Lu、86Y或161Tb進行放射性標(biāo)記的絡(luò)合物形式的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B后，腫瘤部位變得可檢測。
當(dāng)用發(fā)射α-或β-射線的放射性核素或發(fā)射Auger-e-的核素進行放射性標(biāo)記時，軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B對帶有hsst3和/或hsst5受體的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出抗增殖和/或細(xì)胞毒性作用，例如在裸鼠試驗中所表現(xiàn)出來的那樣。
將裸鼠用帶有hsst5的腫瘤細(xì)胞進行接種。當(dāng)腫瘤達到1至2cm3的體積時，將動物隨機分成對照組和治療組。通過腹膜內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射將絡(luò)合物形式的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B進行給藥。每只小鼠的給藥劑量高達40mCi/kg。如上面所公開的那樣用卡鉗對腫瘤的大小進行測量。統(tǒng)計學(xué)計算采用學(xué)生氏t檢驗。在該試驗中，在單次給藥與90Y或177Lu絡(luò)合的實施例10的化合物后，在一星期后可觀察到短暫的腫瘤縮小并且腫瘤的生長被延遲了兩個星期。與之相反，對照組表現(xiàn)出連續(xù)的腫瘤生長，其體積加倍的時間約為七天。
因此，在一系列特定的或供選擇的實施方案中，本發(fā)明還提供了4.與可檢測的元素絡(luò)合的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B用于在個體體內(nèi)探測hsst3和/或hsst5呈陽性的細(xì)胞和組織，例如hsst3或hsst5呈陽性的呈陽性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤并記錄所說絡(luò)合物靶向的受體的位置的應(yīng)用；5.一種用于在個體中體內(nèi)探測hsst3和/或hsst5呈陽性的組織和細(xì)胞，例如hsst3或hsst5呈陽性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤的方法，該方法包括給所說的個體施用與可檢測的元素絡(luò)合的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B或其可藥用的鹽，并記錄所述絡(luò)合物靶向的受體的位置。
用作顯影劑的絡(luò)合物形式的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B可以被例如靜脈內(nèi)給藥，例如以可注射溶液或混懸液的形式給藥，優(yōu)選以單次注射的形式給藥。優(yōu)選在臨向個體給藥前進行放射性標(biāo)記。
對于動物而言，指示的劑量范圍可以為0.01至1μg/kg與0.02至0.5mCi發(fā)射γ-射線的放射性核素絡(luò)合的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B。對于較大的動物例如人而言，所示的劑量范圍可以為1至100μg/m2與例如1至100mCi/m2可檢測元素例如111In、86Y或177Lu絡(luò)合的軛合的化合物B。
6.與發(fā)射α-或β-射線的核素或發(fā)射Auger-e-的核素絡(luò)合的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B用于hsst3和/或hsst5呈陽性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤的體內(nèi)治療的應(yīng)用。
7.一種用于在需要治療的個體中體內(nèi)治療hsst3和/或hsst5呈陽性的腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤，例如治療所述腫瘤的侵入或與該類腫瘤的生長有關(guān)的癥狀的方法，該方法包括給所說的個體施用治療有效量的與發(fā)射α-或β-射線的核素或發(fā)射Auger-e-的核素絡(luò)合的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B。
8.軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B或其可藥用的鹽在制造顯影劑或放射性藥物組合物中的應(yīng)用。
在進行本發(fā)明的放射性治療應(yīng)用時所用的劑量當(dāng)然將隨著例如所治療的具體病癥例如已知的對表達hsst5的正常器官的放射毒性、腫瘤的體積和所需治療而變化。一般而言，該劑量是根據(jù)用健康器官所獲得的藥物動力學(xué)和放射活性分布數(shù)據(jù)而計算出來的，并以所觀察到的靶攝取為基礎(chǔ)。發(fā)射β-射線的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B的絡(luò)合物可以被重復(fù)進行給藥，例如在1至3個月的時期內(nèi)重復(fù)給藥。
對于動物而言，劑量范圍可以為20至100μg/kg與15至70mCi發(fā)射α-或β-射線的核素或發(fā)射Auger-e-的核素例如90Y、177Lu或161Tb相絡(luò)合的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B。對于較大的動物例如人而言，劑量范圍可以為1至100μg/m2與例如1至100mCi/m2發(fā)射α-或β-射線的核素或發(fā)射Auger-e-的核素例如90Y、177Lu或161Tb相絡(luò)合的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B。
用作放射性治療物質(zhì)的絡(luò)合物形式的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B可以通過任何常規(guī)的給藥途徑來進行給藥，例如靜脈內(nèi)給藥，例如以可注射的溶液的形式進行靜脈內(nèi)給藥。還可以有利的通過輸注的形式來進行給藥，例如在15至60分鐘內(nèi)進行輸注。根據(jù)腫瘤所處的部位，還可以盡可能靠近該腫瘤部位地來進行給藥，例如通過導(dǎo)管來進行給藥。本發(fā)明還提供了一種包含游離堿形式或可藥用鹽的形式或與可檢測的或放射性治療劑相絡(luò)合的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B以及一種或多種可藥用的稀釋劑或載體的藥物組合物。
絡(luò)合物形式的式III的化合物或軛合的式III的化合物，例如化合物B或軛合的化合物B可用于成像或治療表達或聚集hsst3和/或hsst5的腫瘤如腦垂體腫瘤，例如腺瘤或催乳素瘤、胃-腸胰腺腫瘤、良性腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、乳腺腫瘤、前列腺腫瘤(包括晚期的激素頑固性前列腺癌)、卵巢或結(jié)腸腫瘤、小細(xì)胞肺癌、惡性腸梗阻、副神經(jīng)節(jié)瘤、腎癌、皮膚癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、甲狀腺髓狀瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤、骨腫瘤以及其轉(zhuǎn)移瘤、以及自身免疫性或炎性病癥，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、格雷夫斯病或其它炎性眼病。
本發(fā)明的另一方面還提供了一種包含軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B或其絡(luò)合物以及一種或多種可藥用的載體或稀釋劑的藥物組合物。所述藥物組合物可以用常規(guī)的方法進行制備，并可以以試劑盒的形式提供以用于成像，所述試劑盒含有兩種獨立的試劑，一種是放射性核素，另一種是軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B，并且含有用于說明將其混合的指導(dǎo)說明。對于放射性治療而言，該絡(luò)合物形式的軛合的式III的化合物，例如軛合的化合物B優(yōu)選是熱的液體制劑的形式。
絡(luò)合物形式的任選地被軛合的式III的化合物，例如化合物B或軛合的化合物B可以作為唯一的活性成分進行給藥，或例如作為輔藥和其它藥物聯(lián)合給藥。例如，式III的化合物，例如化合物B可以與免疫抑制劑，例如鈣調(diào)磷酸酶抑制劑，例如環(huán)孢菌素A、Isa Tx247或FK 506；mTOR抑制劑，例如雷帕霉素、CCI779、ABT578或40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素；具有免疫抑制性質(zhì)的子囊霉素，例如ABT-281、ASM981等等；皮質(zhì)類固醇；環(huán)磷酰胺；咪唑硫嘌呤；甲氨蝶呤；來氟米特；咪唑立賓；霉酚酸或其鹽，例如MyforticR；霉酚酸莫酯；15-脫氧精胍菌素(spergualine)或其免疫抑制同系物、類似物或衍生物；S1P受體激動劑，例如FTY720；免疫抑制性單克隆抗體，例如白細(xì)胞受體的單克隆抗體，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD25、CD28、CD40、CD45、CD58、CD80、CD86或其配體的單克隆抗體；其它免疫調(diào)節(jié)化合物，例如具有至少一部分CTLA4的細(xì)胞外區(qū)域的重組結(jié)合分子或其突變體，例如與非-CTLA4蛋白序列連接的至少CTLA4的細(xì)胞外部分或其突變體，例如CTLA4Ig(例如被稱為ATCC 68629)或其突變體，例如LEA29Y；粘附分子抑制劑，例如LFA-1拮抗劑、ICAM-1或-3拮抗劑、VCAM-4拮抗劑或VLA-4拮抗劑聯(lián)用。式III的化合物，例如化合物B還可以與抗炎劑、GH促分泌素受體調(diào)節(jié)劑，例如ghrelin或海沙瑞林(hexarelin)、GH受體拮抗劑，例如培維索孟聯(lián)用。
絡(luò)合物形式的任選地軛合的式III的化合物例如化合物B或軛合的化合物B還可以與抗增殖劑聯(lián)用，例如與化療藥物，例如紫杉醇、吉西他濱、順鉑、阿霉素、5-氟尿嘧啶或紫杉酚聯(lián)用，與激素類物質(zhì)或拮抗劑，例如抗雄激素或米托蒽醌(尤其是在前列腺癌的情況中)、或抗雌激素如來曲唑(尤其是在乳腺癌的情況中)、抗代謝物、植物生物堿、生物響應(yīng)改性劑，優(yōu)選淋巴因子或干擾素、蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑和/或絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑或具有其它或未知的作用機理的物質(zhì)，例如各種埃坡霉素(epothilone)或埃坡霉素衍生物、或mTOR抑制劑，例如上面所述的物質(zhì)聯(lián)用。
當(dāng)絡(luò)合物形式的任選地軛合的式III的化合物例如化合物B或軛合的化合物B與其它藥物聯(lián)合給藥時，共同給藥的藥物的劑量當(dāng)然應(yīng)該隨著所用的共同給藥的藥物的類型、所使用的具體藥物、所治療的病癥等而變化。術(shù)語“共同給藥”或“聯(lián)合給藥”或這里所用的類似術(shù)語指的是將所選擇的治療劑向單一的病人進行給藥，并且包括其中的藥物不一定以相同的給藥途徑或在相同的時間進行給藥的治療方案。
根據(jù)前面所述，本發(fā)明還包括9.一種藥物組合，其包含a)第一種物質(zhì)，其是絡(luò)合物形式的任選地軛合的式III的化合物例如化合物B或軛合的化合物B和b)共同給藥的物質(zhì)，例如如上所定義的物質(zhì)。
10.一種如上所定義的方法，該方法包括將治療有效量的絡(luò)合物形式的任選地軛合的式III的化合物例如化合物B或軛合的化合物B和第二種藥物聯(lián)合給藥，例如同時或依次給藥，其中所說的第二種藥物是例如如上所定義的物質(zhì)。
權(quán)利要求
1.一種用于胃腸外給藥的藥物組合物，其包含游離形式、鹽形式或被保護形式的含有式I的氨基酸序列的促生長素抑制素類似物和酒石酸-(D/L)Trp-LYs-X1-X2- I其中X1是式(a)或(b)的基團 其中R1是任選地被取代的苯基，R2是-Z1-CH2-R1、-CH2-CO-O-CH2-R1、 或 其中Z1是O或S，且X2是在Cα側(cè)鏈上具有芳基殘基的α-氨基酸或者選自Dab、Dpr、Dpm、His、(Bzl)HyPro、噻吩基-Ala、環(huán)己基-Ala和叔-丁基-Ala的氨基酸單元，所說序列的Lys殘基相當(dāng)于天然促生長素抑制素-14的Lys9殘基。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所說的促生長素抑制素類似物是游離形式、鹽形式或被保護形式的式II的化合物 其中C-2上的構(gòu)型是(R)或(S)構(gòu)型或其混合物，且其中R是NR1R2-C2-6亞烷基或胍-C2-6亞烷基，并且R1和R2各自獨立地是H或C1-4烷基。
3.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中所說的促生長素抑制素類似物化合物是天冬氨酸鹽二鹽形式。
4.如前面任意一項權(quán)利要求所述的組合物，其中所說組合物的pH被調(diào)至約4至約4.5。
5.一種被緩沖至約4至約4.5的pH并包含作為活性成分的環(huán)[{4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-Phg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe]或其可藥用的鹽的胃腸外給藥的組合物。
6.如權(quán)利要求5所述的組合物，其中所說的組合物是用乙酸鹽/乙酸、乳酸鹽/乳酸、或Glycin/HCl緩沖劑來進行緩沖的。
7.如權(quán)利要求1至6中任意一項所述的藥物組合物用于制備治療肢端肥大癥或癌癥的藥物的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其是用于制備治療庫興氏病的藥物。
9.一種治療需要該類治療的個體的肢端肥大癥或癌癥的方法，其包括給所說的個體施用如權(quán)利要求1至7中任意一項所述的藥物組合物。
10.游離形式、鹽形式或絡(luò)合物形式、或被保護形式的式III的化合物 其中R是NR1R2-C2-6亞烷基或胍-C2-6亞烷基，且R1和R2各自獨立地是H或C1-4烷基，例如環(huán)[{4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro}-DPhg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe]。
全文摘要
本發(fā)明描述了包含促生長素抑制素類似物的胃腸外藥物組合物以及新的促生長素抑制素類似物。
文檔編號C07K7/00GK1812997SQ200480017884
公開日2006年8月2日 申請日期2004年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月24日
發(fā)明者O·蘭伯特, K·莫澤 申請人:諾瓦提斯公司