專利名稱：具有抗病毒作用的次黃苷和胸苷衍生物鹽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及下列化合物的高水溶性、穩(wěn)定的、結(jié)晶型抗病毒的鹽、特別是它們的鈉鹽。所述化合物包括2′，3′-二脫氧次黃苷，2′，3′-二脫氧-2′，3′-二去氫胸苷，和2′，3′-脫氧-2′-氟代次黃苷。
據(jù)認(rèn)為病毒感染疾病是一個重要的醫(yī)學(xué)難題。隨著病毒感染疾病治療學(xué)的進步，要求開發(fā)出具有選擇性抗病毒作用的藥物，同時又不損害正常的細(xì)胞系。目前正在進行廣泛研究的似乎具有一定選擇性的眾多抗病毒劑是核苷同系物。一般這些化合物的結(jié)構(gòu)類似天然存在的核苷類。無論是對嘌噙或嘧啶堿基，還是(或同時)對糖體部分進行結(jié)構(gòu)修飾均可得到合成修飾的核苷衍生物，當(dāng)后者參于病毒的核苷酸形成過程時，即起到干擾病毒核酸進一步合成的作用。
這些抗病毒劑的有效性在于病毒酶(而不是宿主酶)將其選擇性地轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的核苷酸同系物，然后將后者轉(zhuǎn)化為三磷酸酯，繼之摻入病毒核苷酸。這種抗病毒作用過程的問題是只有在某些病毒株的酶幾乎不能促進所述核苷同系物的磷?；瘯r，它們對這類病毒才有效。為有效地解決這一問題，使完整的核酸同系物作為摻入病毒核的抗病毒體似乎具有十分重要的潛在意義。
Mitsuya和Broder在PCT申請WO87101284中介紹了將2′，3′-二脫氧次黃苷用于對抗愛滋病。
Lin和Prusoff在EP273，277中介紹了將2′，3′-二脫氧-2′，3′-二去氫胸苷用于治療由后病毒感染的病人。
在“PotentialDrugsfortheTreatmentofAIDS”(JournalofAntimicrobialChemotherapy，23，Suppl.A，35-46.(1989)一文中，ErikDeClercp.介紹了采用二脫氧核苷同系物抑制人類免疫缺陷病毒(HIV)感染的作用和細(xì)胞吞噬作用。
EP287，313介紹了2′，3′-二脫氧-2′-氟代次黃苷(F-ddI)和其抗HIV作用。
本發(fā)明涉及下述化合物的水溶性很高的、穩(wěn)定的結(jié)晶鹽2′，3′-二脫氧-2′，3′-二去氫胸苷(“D4T”)鹽 2′，3′-二脫氧次黃苷(“DDI”)鹽 和2′，3′-二脫氧-2′-氟代次黃苷(F-ddI)鹽
式中X是陽離子，例如Na，K或Mg。
本發(fā)明還涉及含有抗病毒有效量的上述鹽和生理上可以接受的固體、液體或氣體稀釋劑的藥用組合物。
另外，本發(fā)明還涉及治療溫血動物(例如，人)的方法，該方法包括給這類溫血動物施用抗病毒有效量的上述鹽之一。


圖1是2′，3′-二脫氧次黃苷鈉的IR，圖2是2′，3′-二脫氧次黃苷鈉的TGA。
圖3是2′，3′-二脫氧次黃苷鈉的DSC。
圖4是2′，3′-二脫氧次黃苷鈉的NMR。
圖5是2′，3′-二脫氧-2′，3′-二去氫胸芏鈉的IR。
圖6是2′，3′-二脫氧-2′，3′-二去氫胸苷鈉的TGA。
圖7是2′，3′-二脫氧-2′，3′-二去氫胸苷鈉的DSC。
圖8是2′，3′-二脫氧-2′，3′-二去氫胸苷鈉的X光衍射數(shù)據(jù)。
圖9是2′，3′-二脫氧-2′，3′-二去氫胸苷鈉的NMR。
圖10是2′，3′-二脫氧-2′，3′-氟代次黃苷鈉的IR。
圖11是2′，3′-二脫氧-2′，3′-氟代次黃苷鈉的NMR。
圖12是2′，3′-二脫氧-2′，3′-氟代次黃苷鈉的DSC。
圖13是2′，3′-二脫氧-2′，3′-氟代次黃苷鈉的TGA。
如上所述，本發(fā)明涉及2′，3′-二脫氧次黃苷，2′，3′-二去氫胸苷，以及2′，3′-二脫氧-2′-氟代次黃苷的無毒鹽，例如，含有Na，Li，K，Ca和Mg的鹽。這類鹽可以包括有機陽離子，也可以包括其它適宜的陽離子，例如，堿金屬或堿土金屬離子，或銨或季銨離子。優(yōu)選的鹽是鈉鹽。通過金屬氫氧化物與2′，3′-二脫氧次黃苷，2′，3′-二脫氧-2′，3′-二去氫胸苷或2′，3′-二脫氧-2′-氟代次黃苷反應(yīng)，可以制得金屬鹽。通過加入適宜的金屬離子，可以使難溶性金屬鹽從易溶鹽溶液中沉淀出來。
本發(fā)明化合物具有明顯的抗病毒作用，它們對下述病毒呈現(xiàn)出對抗作用，例如，將純性皰疹病毒Ⅰ，單純性皰疹病毒Ⅱ，巨細(xì)胞病毒，水痘帶狀皰疹病毒，流感病毒，牛痘，骨髓灰質(zhì)炎，風(fēng)疹，天花，牛痘，EB病毒，麻疹病毒，人類呼吸道病毒，乳頭病病毒，Sinbis病毒，除此之外，還可以對抗后病毒，例如，人類免疫缺陷病毒(HIV)。
如上所述，本發(fā)明化合物作為人藥和獸藥的活性成分可用于治療和預(yù)防由后病毒引起的疾病。作為人藥用于與后病毒有關(guān)的適應(yīng)癥舉例如下(1)治療或預(yù)防人類后病毒感染，(2)治療或預(yù)防由HIV引起的疾病(人類免疫缺陷病毒；以前稱之為HTLVⅢ/LAV或AIDS)和與此有關(guān)的病癥，例如ARC愛滋病并發(fā)癥和LAS(淋巴結(jié)病綜合癥)以及由后病毒引起的免疫力下降和腦病。
(3)治療或預(yù)防HTLVⅠ感染或HTLVⅡ感染；(4)治療或預(yù)防愛滋病毒攜帶者(愛滋病毒傳播者)病例；和(5)治療或預(yù)防由乙肝病毒引起的疾病。
作為獸藥的適應(yīng)癥實例有(1)Maedivisna(羊和山羊)(2)漸進性肺炎病毒(PPV)(羊和山羊)(3)羊的關(guān)節(jié)炎腦炎病毒(羊和山羊)(4)Zwoegerziekte病毒(羊)(5)貧血(屬)的感染性病毒，和(6)由貓白血病病毒引起的感染。
為了用于抵抗病毒感染，可以將本發(fā)明化合物配制成藥物制劑。這類制劑由一種或多種本發(fā)明化合物和藥物上可以接受的載體組成。參考文獻Remington′spharmacenticalSciensces，17thEdition，A.R.Gennaro，editor(MackPublishingCompany，1985)公開了典型的載體和制備方法。
給溫血動物(如人)全身施用本發(fā)明化合物。全身給藥的途徑包括口服，直腸給藥，非腸道(即，肌肉，靜脈，經(jīng)皮和鼻內(nèi))給藥。一般在口服本發(fā)明化合物時，需要采用大劑量的藥物才能獲得非腸道小劑量給藥所產(chǎn)生的相同效果。根據(jù)臨床實踐經(jīng)驗，服用本發(fā)明實施例化合物的劑量最好是既不引起任何有害作用或付作用又能產(chǎn)生有效的抗病毒作用。
就治療和預(yù)防而言，通常以藥用組合物的形式給予實施例化合物，該組合物由前述抗病毒有效量的本發(fā)明化合物和一種或多種藥物上可以接受的載體組成。能產(chǎn)生這類治療作用的藥用組合物應(yīng)含有大量或少量(如100至0.5%)的至少一種本發(fā)明化合物以及藥物載體，該載體包括一種或多種無毒的，惰性的、制藥上可接受的固體、半固體、或液體稀釋劑，添充劑和配制佐劑。
這類藥用組合物最好是劑量單元劑型；即，含有預(yù)定量藥物的分離的物理單體，這些物理單體中藥物的含量應(yīng)該是經(jīng)計算能產(chǎn)生所期治療效應(yīng)的劑量之分?jǐn)?shù)或倍數(shù)。同時也可以加入其他治療劑。
優(yōu)選的藥用組合物每一單元劑量應(yīng)提供約50毫克至2克的活性成分，并且，按照慣例將它們制成片劑，錠劑，膠囊，粉劑，顆粒劑，水性或油性分散體，糖漿，酏劑和水溶液。優(yōu)選的口服組合物是片劑或膠囊劑，并且可以含有賦形劑，例如粘合劑(如糖漿，阿拉伯膠，明膠，山梨醇，黃蓍膠或聚乙烯吡咯烷酮)，填充劑(如乳糖，蔗糖，玉米淀粉，磷酸鈣，山梨糖醇或甘油)，潤滑劑(如硬質(zhì)酸鎂，滑石粉，聚乙二醇或氧化硅)，崩解劑(如淀粉)，緩沖劑(有機的或無機的)，和潤濕劑(如月桂硫酸鈉)。用本發(fā)明化合物和慣用藥物載體制成的溶液或混懸液可用作非腸道給藥組合物，例如，用于靜脈注射的水溶液或用于肌肉注射的油性混懸液。采用下述方法可以制得適于非腸道使用要求的純度，穩(wěn)定性和適應(yīng)性的上述組合物，即，將0.1%至35%(重量)活性化合物溶解在水或包括多羥基脂肪醇例如甘油、丙二醇、聚乙二醇的載體中或它們的混合物中。所述聚乙二醇包括在水和有機液體中均可溶解的具有200至1500分子量的非揮發(fā)性的，通常是液體的聚乙二醇。
本發(fā)明化合物遇酸易水解。為獲得最佳生物利用度，口服的片劑，膠囊劑和顆粒劑應(yīng)該被包衣，或能強烈地緩沖胃酸，或兩種功能兼而有之。
本專利申請的鹽是穩(wěn)定的結(jié)晶體，并且具有很高的水溶性(＞300毫克/毫升)，特別適合于高濃度，小體積靜脈-肌肉注射。更重要的是這些新鹽的強堿性(PH9.5-11)使得它們本身能夠緩沖胃酸。因此，口服劑型所需的緩沖度不高。
本發(fā)明的鹽逆轉(zhuǎn)為烯醇式時“穩(wěn)定”，因此，可以把它當(dāng)作合成各種潛在生物活性衍生物。例如，烯醇酯(前體藥物)和烯醇醚的中間體。這些酯和醚也可起到保護(封閉)基的作用，以便于合成分子中的其他官能團或殘基。
考慮到本發(fā)明化合物所具有的生物活性，可以理解這些化合物具有抗病毒作用，特別適用于防治病毒感染。因此，本發(fā)明的另一方面涉及一種治療哺乳動物的病毒(包括后病毒)感染的方法，該方法包括給哺乳動物全身施以有效量的本發(fā)明化合物。
根據(jù)實驗，需要的有效劑量為約0.1至5毫克/公斤體重，優(yōu)選劑量范圍是約1至4毫克/公斤體重。顯而易見，就臨床抗病毒應(yīng)用而言，應(yīng)該參照藥物Zidorudine(AZT)相同的方法施用本發(fā)明化合物。但是，在臨床應(yīng)用的每一病例必須根據(jù)權(quán)威的專業(yè)判斷以及患者的年齡，體重，病情，給藥途徑，小心地調(diào)整劑量和劑型。一般本發(fā)明化合物的日口服劑量約為150mg至5克最好是50-1500毫克，每天1至3次。在某些病例中，以較低的劑量便可獲得充移的療效，而在其他病例中則需要較高的劑量。
下列實施例僅對本發(fā)明化合物和它們的制備方法給予更詳細(xì)的解釋，而不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。在沒有特殊說明時，溫度均為攝氏度(℃)，所有化合物均與元素分析相符。
實施例1DDI鈉單水合物的制備 MWDDI=236.14MW:NaOH=40。
(1g DDI)/236.14 = (X)/40 = (169mg NaOH)/40 = 4.3ml 1N－NaOH相當(dāng)于1gDDI,(摩爾比為1:1)1.在10-25℃溫和攪拌下，用5分鐘的時間，將1gDDI加到4.51ml1N-NaOH水溶液中。得到-溶液(PH9.5-11)或澄清溶液。
2.如果需要，使該溶液通過等量的0.2-0.45微米的GelmanHT-Tuffryn過濾材料使溶液澄清。
3.用10-15分鐘的時間，將Na-DDI溶液加到50-75ml猛烈攪拌的異丙醇(或丙酮)中。形成結(jié)晶，猛烈攪拌2小時(密閉系統(tǒng))。
4.通過適宜的減壓過濾方法收集結(jié)晶。不能抽取過量的空氣通過濾餅。減壓下輕壓結(jié)晶濾餅以除去可能形成的裂隙。不要抽取過量的空氣通過濾餅。
5.用3×15ml異丙醇洗滌濾餅，然后3×20ml丙酮洗滌。在每次洗滌之后減壓時，不要抽取過量的空氣通過濾餅。在每次洗滌時輕壓濾餅以除去任何可能形成的裂隙。
6.在24-35℃，于高真空下使結(jié)晶干燥24小時。所期收率1-1.1g。
7.如有必要，完全用丙酮代替優(yōu)選的異丙醇，并且，如有必要還可以采取反加料法，即，用半小時，將溶劑加到攪拌下的DDI水溶液中。
也可采用KOH和/或其他強堿性有機或無機堿代替NaOH形成相應(yīng)的鹽。
所得Na-DDI.HO的化學(xué)和物理性質(zhì)。
1.水溶度＞300mg/ml(PH9.5-11)，2.水溶液的穩(wěn)定性50℃，一星期，損失5%，3.固體狀態(tài)的穩(wěn)定性70℃，一星期，損失10%，4.元素分析CHNONa.HO(CHNONa)MW=276.26理論值實驗值%C43.543.18%H4.74.6%N20.320.16%Na(Ash)8.38.26%HOKF6.5(單水合物)6.575.IR見圖1
6.TGA見圖27.DSC見圖38.X-射線(膜)X-射線衍射數(shù)據(jù)DDI Na-DDI H2OdI/IodI/Io14.57-1008.75-608.39-807.82-807.46-206.21-306.60-105.81-206.00-205.28-105.50-205.00-105.14-204.65-404.79-304.22-504.46-303.89-1003.54-903.49-203.21-403.25-203.04-303.09-102.92-502.77-102.61-209.NMR見圖4(無溶劑)表ⅠHPLC測定法柱:IBM苯基,5微米,4.5×150nm
流動相:98%0.015MNHHPO(溶劑Mili-Q水),用濃NHOH/2%乙腈調(diào)到pH7.1流速:0.1mg/ml(水中)近似的滯留時間:ddI:10分鐘次黃嘌呤:3分鐘實施例2DT鈉水合物的制備 MWDT=224.2MWNaOH=40。
(1g DT)/224.2 = (X)/40 = (178.4mg NaOH)/40 = 4.46ml 1N－NaOH,按1:1的摩爾比，相當(dāng)于1gDT1.在15-25℃，溫和攪拌下，用5分鐘，將1gDT加到4.7ml1N-NaOH水溶液(1.05摩爾當(dāng)量)中。得到-溶液(PH7.5-11)或澄清液。
2.為制備Na-DDI.HO，重復(fù)實施例1所述步驟2-7。
3.DT.HO的所期收率為1-1.1g。
Na-DT.HO的化學(xué)和物理常數(shù)。
1.水溶度＞300mg/ml(PH9.5-11)，2.水溶液的穩(wěn)定性50℃，一周，20%剩余。
3.固體狀態(tài)的穩(wěn)定性70℃，一周，無損失。
4.元素分析CHNONa.HO(CHNONa)MW=264.22理論值實驗值%C45.545.05%H5.04.89%N10.610.37%Na(Ash)8.78.43%HOKF6.8(單水合物)6.95.IR見圖56.TGA見圖67.DSC見圖78.X-射線見圖8HPLC測定法柱IBM苯基，5微米，4.5×15nm流動相98%0.015MNHHPO(于Mili-Q水中)，用濃NHOH/2%乙腈調(diào)到PH7.1流速0.1mg/分注入體積25微升跑柱時間20分鐘波長254nm溫度常溫，20-30℃樣品濃度約0.1mg/毫升水近似的滯留時間dt8分鐘胸腺嘧啶3分鐘實施例3F-ddI鈉半水合物的制備 MWFDDI=254.24MW:NaOH=40。
(436mg FDDI)/254.24 = (X)/40 = (68.6mg NaOH)/40 = 1.72ml NaOH,按1:1摩爾比，相當(dāng)于436mgFDDI1.將FDDI(426mg)混懸于1.8ml1NNaOH中，制成漿液(256mg/mlNaFDDI)。2分鐘內(nèi)得到-PH為9.9的溶液。
2.加入2毫升異丙醇，使溶液澄清。
3.慢加入異丙醇使之漿化，在加入15ml異丙醇時，開始出現(xiàn)大量的針狀結(jié)晶，使該混合物漿化10分鐘。
4.加入15ml丙酮，使該混合物再漿化15分鐘。
5.減壓過濾除去結(jié)晶，用15ml丙酮和20ml醚洗滌，真空干燥(PO，50℃，2小時，然后在24℃干燥24小時)。
得量430mg。
21mg樣品很容易溶于0.05ml水中(≈400mg/ml;PH10.0)，元素分析CHNFONa理論值實驗值%C42.041.19%H3.93.73%N19.618.8%F6.66.13%Na8.08.11%HOKF3.23(半水合物)3.23X-射線(膜)X-射線衍射數(shù)據(jù)dI/IO16.20509.40506.91505.81505.40100NMR見圖11，數(shù)據(jù)符合所期結(jié)構(gòu)，無丙酮或醚存在，無α-異構(gòu)體存在。
IR見圖10TGA見圖13DSC見圖12顯而易見，通過解釋法(而不是很)陳述了本說明書及權(quán)利要求書，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍之前提下，可以作出各種修改和變化。
權(quán)利要求
1.一種制備組合物的方法，該方法包括將下式鹽之一與稀釋劑充分混合成片劑，膠囊或粉劑，所述鹽的結(jié)構(gòu)式為 式中X是堿金屬或堿土金屬陽離子。
全文摘要
制備下述化合物的高水溶性，穩(wěn)定的結(jié)晶鹽的方法，所述化合物包括2′，3′-二脫氧-2′，3′-二去氫胸苷，2′，3′-二脫氧次黃苷，2′，3′-二脫氧-2′-氟代次黃苷。
文檔編號C07H19/16GK1109755SQ94116469
公開日1995年10月11日 申請日期1994年8月23日 優(yōu)先權(quán)日1989年5月15日
發(fā)明者默里·阿瑟·卡普蘭, 羅伯特·凱文·佩隆, 約瑟夫·巴拉德·博加達(dá)斯 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司