專利名稱：：雷藤素乙的制備方法及抗生育用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及雷藤素乙的制備方法及抗生育用途。從植物雷公藤[TripterygiumWilfordiiHook.f.]的根莖葉中提取出的化合物雷藤素乙(tripdiolide)，其化學結(jié)構(gòu)已在《TheJournolofAmericaChemicalscience》，197294(20)7194上發(fā)表，結(jié)構(gòu)式如下但其制備方法麻煩且得率低，它的抗腫瘤作用有過報道，但報道中未涉及其抗生育作用?，F(xiàn)有的雄性抗生育藥物棉酚，有一定的毒副作用;在抗生育劑量下，全部服用者均可引起血鉀降低，其中1-10%服藥者在半年內(nèi)可發(fā)生低血鉀癥及癱瘓;1/4服藥者生育力改變?yōu)椴豢赡?可引起30%服藥者不同程度腎小管損害，病理亦有同樣表現(xiàn)，在國際上基本否定其作為雄性抗生育藥物的應(yīng)用。因此，研制新的雄性抗生育化合物已成為當務(wù)之急。本發(fā)明的目的是提供出雷藤素乙新的制備方法及它在雄性抗生育方面的新用途。其制法如下將雷公藤根或莖葉用乙醇(或氯仿)提取，提取物用柱層析分離，或?qū)⒗坠僭嫌盟螅笠涸儆寐确螺腿?，濃縮氯仿液，濃縮液用柱層析分離，以有機溶劑洗脫，收集含雷藤素乙的部分，再次層析分離，然后重結(jié)晶，即可得雷藤素乙純品。以上有機溶劑可以是氯仿，乙醚，環(huán)乙烷-丙酮，石油醚-丙酮，丙酮-苯，甲醇-氯仿，丙酮-氯仿，乙醇-氯仿，乙酸乙酯-氯仿，乙酸乙酯-石油醚，環(huán)乙烷-氯仿，苯-甲醇等。以上柱層析所用填料為硅膠或氧化鋁。該化合物的藥理作用如下1、初篩昆明種健康雄性小鼠，27.6±0.5克，每組10只，每日灌胃給藥0.56、0.28、0.14mg/kg一次，連續(xù)32天，第26天與正常成年雌性小鼠1∶1合籠，第33天解剖雄鼠取一側(cè)輸精管全長，用0.5ml生理鹽水沖洗精子于試管內(nèi)，在白細胞計數(shù)板上觀察精子活力及作精子相對計數(shù)。分籠后8天解剖雌鼠，觀察胚胎數(shù)(活胎及吸收胎)。結(jié)果表明三個給藥組均使睪丸減重、精子計數(shù)減少及活力降低，呈量效關(guān)系，并皆導致不育(見表1)。表1、藥物對小鼠生殖參數(shù)的影響(X±SE)</tables>＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.0012、復(fù)篩在雄性成熟SD大鼠，每日經(jīng)口灌服雷藤素乙0.025mg/kg，每周6次，6-7周后交配試驗表明，所有大鼠均不育，附睪尾精子數(shù)和活率也顯著下降，詳見表2。此劑量對體重、性行為、血清睪酮、各種副性腺重量均無明顯影響。用藥組僅1(1/10)鼠見少數(shù)脫落精子細胞，偶見脫落精母細胞，余無明顯改變。附睪上皮正常，管腔見少量脫落精子細胞而精子量略減少。心、肝、肺、脾、腎等臟器均與對照無異。共進行兩批實驗，每批20鼠(給藥及對照各半)，結(jié)果基本一致。還表明，雷藤素乙明顯降低大鼠附睪頭、尾肉毒堿含量，提示作用于附睪。表2、雷藤素乙對大鼠生育的影響(X±S、D)附睪尾精子交配雌鼠組別(N)密度活率106/ml0/0懷孕率活胎仔/孕鼠死胎仔/孕鼠對照(10)108±582±210/1013.2±2.1給藥(10)78±5＊0＊0/10＊0＊＊P＜0.001，與對照組相比本發(fā)明所提供的化合物具有明確的雄性抗生育作用，同時，在抗生育劑量下沒有明顯的細胞毒性，沒有其他副作用，有較好的藥用前景。本發(fā)明提供的制備方法，得率較現(xiàn)有文獻的方法高，易于實施。以下為制備實施例。實施例1，將雷公藤原料(根或莖或葉)以酒精(70-95%乙醇)浸取對浸取液濃縮后的濃縮物100g進行硅膠柱層析以1%-10%乙醇-氯仿梯度洗脫，收集合并含雷藤素乙的組分。將上述含雷藤素乙的組分再進行一次柱層析，以乙醚為洗脫劑，以100ml小瓶收集，將含雷藤素乙的部分合并濃縮，以乙醚或二氯甲烷-乙醚重結(jié)晶兩次得純雷藤素乙。實施例2，取雷公藤原料(根或莖葉)水煮去渣，氯仿萃取后濃縮，然后按實施例1的方法進行制備。柱層析洗脫溶劑亦可用苯-丙酮，苯-甲醇，環(huán)乙烷-丙酮，乙醚-甲醇，乙酸乙酯-石油醚等，柱層析填料也可使用氧化鋁。權(quán)利要求1.雷藤素乙的制備方法，其特征是對直接用酒精或氯仿提取雷公藤原料的提取物或用水煮雷公藤原料再以氯仿萃取的物質(zhì)進行層析分離，以有機溶劑或復(fù)合有機溶機進行洗脫，收集合并含有雷藤素乙的組分，然后結(jié)晶。2.由權(quán)利要求1規(guī)定的雷藤素乙制備方法，其特征是所說的有機溶劑或復(fù)合有機溶劑指氯仿、乙醚、甲醇-氯仿，丙酮-氯仿，乙醇-氯仿，乙酸乙酯-氯仿，環(huán)乙烷-氯仿，環(huán)乙烷-丙酮，石油醚-丙酮，丙酮-苯，乙酸乙酯-石油醚或乙醚-甲醇，苯-甲醇。3.雷藤素乙的用途，其特征是將該化合物作為雄性抗生育藥物，由口服或注射用藥。全文摘要本發(fā)明提供化合物雷藤素乙的制備方法與抗生育用途。其方法為，將植物雷公藤用溶劑提取，再將提取物進行層析，以有機溶劑進行洗脫，然后結(jié)晶。所得到的雷藤素乙具有顯著的雄性抗生育功效，沒有明顯的毒副作用。其抗生育作用是明確和可逆的，是一種有前景的雄性抗生育化合物。文檔編號C07D493/22GK1061601SQ9010597公開日1992年6月3日申請日期1990年11月15日優(yōu)先權(quán)日1990年11月15日發(fā)明者張正行,盛龍生,安登魁,錢紹楨,許燁,張崇璞,鄭家潤,呂燮余,張永剛申請人:中國醫(yī)學科學院皮膚病研究所,江蘇省計劃生育科學技術(shù)研究所,中國藥科大學